CerTest-VIDITEST Strep A Blister Jednokrokový blisterový test pro detekci antigenu Streptokoka A ve výtěru z krku Návod k použití soupravy Výrobce: CerTest, E-500 18 Zaragoza, Spain Distributor: VIDIA spol.s r.o., Nad Safinou II č. 365, Vestec, 252 42 Jesenice, ČR, tel: +420 261 090 565 POUŽITÍ CerTest-VIDITEST Strep A Blister je jednokrokový chromatografický test pro kvalitativní detekci antigenu Streptokoka A. Může být použit pro krční výtěry, nebo pro potvrzení pravděpodobného nálezu kolonií Streptokoka A v kultuře. ÚVOD Streptokokové infekce typu A jsou způsobeny Streptokokem A, bakterií zodpovědnou za širokou škálu zdravotních problémů. Tyto infekce se mohou projevovat od lehkého kožního zánětu nebo bolesti v krku až po závažné život ohrožující stavy, jako je syndrom toxického šoku a nekrotizující fascitis (postižení měkké tkáně). Většina lidí zná streptokokovou krční infekci, která je vedle méně závažné kožní infekce nejčastější formou nákazy. Zdravotní experti odhadují, že se každý rok objeví více než 10 milionů mírných infekcí krku a kůže tohoto typu. Běžný způsob identifikace Streptokoka typu A z krčních výtěrů zahrnuje izolaci a následnou identifikaci živých patogenů technikou trvající 24 až 48 hodin, někdy i více. CerTest Strep A Test detekuje živé i neživé organismy přímo z krčního výtěru. Výsledky poskytuje do 5 minut. PRINCIP TESTU CerTest-VIDITEST Strep A Blister je kvalitativní imunochromatografický test pro stanovení antigenů Streptokoka typu A. Na testovací zóně membrány blisteru jsou navázány myší monoklonální protilátky. Během testování vzorek reaguje s imobilizovaným barevným konjugátem (anti Strep A protilátky červená mikrosféra). Směs pak kapilárním efektem vzlíná vzhůru po membráně. V případě pozitivního výsledku je barevný konjugát zachycen specifickými protilátkami, což se ve výsledkové zóně projeví jako červená linka. Směs pak vzlíná dále po membráně k imobilizovaným protilátkám v kontrolní zóně, kde se vždy na konci testu objeví modrá linka. Přítomnost modré linky ověřuje: 1) že se použil dostatečný objem vzorku, 2) že došlo ke správné vzlínavosti vzorku, 3) interní kontrolu reagencií. - 1 -
OBSAH SOUPRAVY - Testovací blistery - Reagencie A (2M dusitan sodný) a Reagencie B (0,15M kyselina octová) - Testovací zkumavky - Sterilní odběrové tampony - Jednorázové pipety - Manuál POTŘEBNÝ MATERIÁL NEDODÁVANÝ SE SOUPRAVOU - Jednorázové rukavice - Stopky SBĚR A PŘÍPRAVA VZORKŮ Vzorky odebírejte sterilním odběrovým tamponem z mandlí a zadní části hrtanu. Buďte opatrní, aby stěrka nepřišla do styku se zuby, dásněmi, jazykem a vnitřní stěnou tváří. Zpracujte co nejdříve po odebrání vzorku. Pokud vaše laboratoř vyžaduje kromě CerTest Strep A Testu i výsledky bakteriální kultury, potřete odběrovým tamponem se vzorkem kultivační misku ještě před začátkem testu. Působením extrakčních reagencií testu vzorek odumírá. Vzorky mohou být před testováním skladovány při laboratorní teplotě, nebo v chladničce (2-4 C) maximálně po dobu 24 hodin. Vzorky a testovací sada musí být před použitím temperovány na laboratorní teplotu. POTVRZENÍ KULTURY CerTest Strep A Test může být použit také k potvrzení identifikace Streptokoku typu A na miskách s krevním agarem. Misky nesmí být starší než 72 hodin. Lehce se dotkněte 1-3 předpokládaných kolonií Streptokoku A (ty které vykazují charakteristickou beta hemolýzu) sterilním vatovým tamponem. Vzorek pak dále testujte podle návodu. PRACOVNÍ POSTUP PŘI PROVEDENÍ KONTROLY KVALITY TESTU Před testováním nechte součásti soupravy i vzorky vytemperovat na laboratorní teplotu (15 30 C). Neotvírejte obal, dokud nebudete připraveni test provést. Temperujte pouze tolik testovacích souprav, kolik právě potřebujete. - Do testovací zkumavky přidejte pět kapek reagencie A (růžová) (1) a 5 kapek reagencie B (2) (výsledný roztok by měl být světle žlutý). - Okamžitě vložte do zkumavky sterilní vatový tampon. - Rotačním pohybem intenzivně třete vatový tampon o stěnu zkumavky. Rotační pohyb proveďte nejméně 10x. (3) - Nechte 1 minutu ustát. - Otíráním odběrového tamponu o okraje zkumavky vytlačte z vaty co nejvíce tekutiny. - Odběrový tampon vyhoďte. - 2 -
A) Použití blisteru formou kazetového testu: (1) Vložte 5 kapek reagencie A (2) Vložte 5 kapek reagencie B (3) Vložte tampon do zkumavky, 10x s ním otočte a vytlačte přebytečnou tekutinu. (4) Naneste 4 kapky V místě perforace odstřihněte jeden blister ze sady. Uchopte hliníkový obal za nezatavené konce a tahem nahoru jej otevřete. Nerozbalujte blister, dokud nejste připraveni provést test. Položte blister na rovnou podložku. Pro každé měření použijte novou pipetu i blister. Pipetou naneste na bílý okraj přesně 4 kapky (125μl) roztoku z testovací zkumavky (4). Výsledky odečtěte po 10 minutách. B) Použití blisteru formou Strip testu (ponořením) V místě perforace odstřihněte jeden blister ze sady. Uchopte hliníkový obal za nezatavené konce a tahem nahoru jej otevřete. Nerozbalujte blister, dokud nejste připraveni provést test. Blister ponořte bílým okrajem vertikálně do testovací zkumavky s roztokem. Dejte pozor aby hladina testovaného roztoku nepřesáhla přes šipky, označující testovací zónu blisteru. Výsledky odečtěte po 10 minutách. INTERPRETACE VÝSLEDKŮ Kontrolní zóna Výsledková zóna modrá červená červená Testovací zóna StrepA Test Pozitivní Negativní Neplatný - 3 -
Negativní: V bílé kontrolní zóně se objeví pouze jedna modrá linka. Pozitivní: Kromě modré linky v kontrolní zóně se ve výsledkové zóně objeví také jedna červená linka. Neplatné: Výsledky jsou neplatné při úplné absenci modré linky v kontrolní zóně bez ohledu na přítomnost červené linky. Nejčastějšími příčinami selhání testu jsou: nedostatečná koncentrace vzorku, nesprávný pracovní postup nebo poškození reagencií. Zkontrolujte pracovní postup a opakujte test s novou testovací sadou. Pokud potíže přetrvávají, kontaktujte svého lokálního dodavatele. POZNÁMKY K INTERPRETACI VÝSLEDKŮ Intenzita červeného zbarvení linky ve výsledkové zóně bude kolísat v závislosti na koncentraci antigenů v testovaném vzorku. Každopádně, tento je test je pouze kvalitativní, proto z něj nelze určit kvantitu, ani nárůst koncentrace antigenů. KONTROLA KVALITY Kontrolní body pracovního postupu jsou zahrnuty v testu: - Přítomnost modré linky v kontrolní zóně potvrzuje dostatečnou koncentraci vzorku a správný pracovní postup. - Při přípravě extrakčního roztoku se po přidání reagencie B změní barva z růžové na žlutou. Tato barevná změna potvrzuje, že byly reagencie smíšeny správně a že jsou funkční. OMEZENÍ - Test musí proběhnout do 2 hodin od otevření zataveného obalu. - Tento test slouží pouze k pravděpodobné diagnóze streptokokové infekce. Potvrzení infekce musí být provedeno lékařem poté, co byly vyhodnoceny všechny klinické a laboratorní nálezy. - CerTest-VIDITEST Strep A Blister může být použit pouze pro krční výtěry nebo kolonie odebrané přímo z kultivační misky. Výsledky při použití výtěrů z jiných částí těla nebo při použití jiných vzorků, jako jsou sliny, hlen nebo moč, nemohou být uznány platnými. Kvalita testu záleží na kvalitě odebraného vzorku. Vzorky proto odebírejte s náležitou přesností. - Pomocí tohoto testu nelze rozlišit akutní a chronickou infekci. Pharyngitida může být způsobena i jinými organismy, než je Streptokok typu A. - Negativní výsledky mohou být získány i z nevhodných vzorků nebo ze vzorků s nízkou koncentrací antigenu. Doporučujeme potvrdit negativitu testu kultivační metodou. - 4 -
OČEKÁVANÉ VÝSLEDKY Ačkoliv se může Streptokoková krční infekce objevit v jakémkoliv věku a v kterémkoliv ročním období, postihuje zejména děti ve školním věku v zimním a jarním období. ÚČINNOST Citlivost V souladu s instrukcemi k použití této sady byly testovány různé inaktivované kultury Streptokoku typu A v rozličných ředěních. Detekční limit: 1,9 x 10 4 CFU/mL Detekce Streptokoka typu A CerTest-VIDITEST Strep A Blister vykazovala ve srovnání s jinými komerčními rychlými testy >99% citlivost. Specifita Detekce Streptokoka typu A CerTest-VIDITEST Strep A Blister vykazovala ve srovnání s jinými komerčními rychlými testy >99% specifitu. USKLADNĚNÍ A STABILITA Skladujte v původním zataveném obalu při teplotě +2 až +30 C. Test je funkční do data exspirace uvedeného na obalu. Nezmrazujte. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ CerTest Strep A Test je určen pro profesionální diagnostické využití in vitro. Nepoužívejte po datu exspirace. Nepoužívejte součásti testu, pokud byl během skladování poškozen hliníkový obal. Všechny preparáty musí být brány jako potenciálně nebezpečné a musí s nimi být nakládáno jako s infekčním materiálem. Pro každý vzorek použijte nový odběrový tampon, abyste zamezili chybám způsobeným kontaminací. Po použití musí být test vyhozen do příslušného kontejneru s nebezpečným odpadem. Roztok A obsahuje 2M dusitan sodný tato složka soupravy je označena symbolem T toxický. Vyvarujte se kontaktu tohoto přípravku s kůží a očima. Přípravek nepožívejte ani nevdechujte, je toxický při požití a zdraví škodlivý při vdechnutí a kontaktu s pokožkou. Může způsobit vážné podráždění očí. REFERENCE 1. Dos Santos, Ana Gabriele P., Berezin, Fitan N.; Comparative analysis of clinical and laboratory methods for diagnosing Streptococcal sore throat. J. Pediatr. (Rio J.) 2005; 81 (1): 23-8 2. Borbeau, Paul P. and Heither, Barbara J.; Use of swab without Transport media for the Gen-Probe Group A Strep Direct Test. Journal of Clinical Microbiology, July 2004, p. 3207-3211 3. Petts, D.N.; Evaluation of a modified nitrous acid extraction latex agglutination kit for grouping betahemolytic Streptococci and Enterococci. Journal of Clinical Microbiology, Apr. 1995, p.1016-1018. 4. Sheeler, Robert P. et al., Accuracy of Rapid Strep testing in patients who have had recent Streptococcal Pharyngitis. JABFP, July-August 2002, Vol 15 No 4, p. 261-265. - 5 -
POUŽITÉ SYMBOLY Určeno pro diagnostiku in vitro Čtěte návod k použití Uchovejte v suchu Teplotní omezení Datum exspirace Číslo šarže (LOT) Katalogové číslo Obsahuje dostatečné množství surovin pro <n> testů Výrobce Pouze pro ověření Poslední revize tohoto návodu: 03/2009-6 -