INFEKČNÍ SÉROLOGIE Virologie IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE INFEKČNÍ MONONUKLEÓZY EBV VCA EBV EBNA-1 EBV EA-D ELISA soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy IgA, IgG a IgM v lidském séru, plazmě nebo mozkomíšním moku
Úvod Virus Epstein Barrové (EBV) patří do skupiny herpetických virů (4. lidský herpetický virus HHV4). Zdrojem infekce je nakažený člověk, přenos se děje kapénkovou infekcí nebo přímým kontaktem. Inkubační doba je 1 2 měsíce, 90 % nákaz proběhne v dětském věku. Infekce vyvolané EB virem způsobují onemocnění charakterizované horečkou, faryngitidou, generalizovaným zvětšením lymfatických uzlin. Projevy EB virózy jsou ovlivněny věkem a stavem imunitního systému organismu. EBV nevymizí z organizmu úplně, přetrvává v latentním stavu a může se reaktivovat. Klinické projevy infekce EBV: Inaparentní průběh Primoinfekce Nespecifické horečnaté onemocnění Infekční mononukleóza (angína, lymfadenopatie, splenomegalie, horečka) Latentní chronická infekce Asymptomatické vylučování viru slinami Zpravidla asymptomatická Reaktivace U imunodeficitu: maligní lymfoproliferace, leukoplakie jazyka, lymfocytická intersticiální pneumonie atd.) V určitých geografických oblastech: Burkittův lymfom, nazofaryngeální karcinom Diagnostika onemocnění Pro diagnostiku onemocnění je důležitá anamnéza, klinický obraz a výsledky laboratorních testů. Vhodnou možností průkazu infekce a její fáze je stanovení specifických protilátek třídy IgA, IgG a IgM proti jednotlivým antigenům EBV v séru nebo plazmě metodou ELISA. Důležité EBV antigeny Kapsidový antigen (VCA) Protilátky třídy IgA a IgM jsou markery akutní infekce. Protilátky třídy IgM dosahují vysokých hladin v akutní a rekonvalescenční fázi infekční mononukleózy. U reaktivací dosahují protilátky třídy IgM obvykle nižších hladin než IgA. Obě třídy protilátek mohou perzistovat několik týdnů až měsíců. Protilátky třídy IgG mají anamnestický charakter a perzistují po celý život u většiny infikovaných osob. Sérokonverze IgG může být detekována v časné fázi primoinfekce, signifikantní vzestup doprovází i reinfekci a reaktivaci. Stanovení avidity IgG umožňuje rozlišit primární a dříve prodělanou infekci. Nukleární antigen (EBNA-1) IgM protilátky jsou detekovatelné v průběhu akutní fáze primoinfekce. Protilátky třídy IgG se objevují s větším časovým odstupem a jsou detekovatelné po celý život. Dlouhodobá absence IgG protilátek u infikovaných osob může indikovat imunodeficit. Časný antigen (EA-D, diffuse) Protilátky třídy IgM a IgG jsou tvořeny během primoinfekce, velmi časně kulminují a po několika měsících jsou již často nedekovatelné.
Protilátková odpověď nízká avidita anti-vca IgG vysoká avidita anti-vca IgG Koncentrace protilátek anti-ebna -1 IgM anti-vca IgM anti-ea-d IgM anti-vca IgA anti-ea-d IgG anti-vca IgG anti-ebna -1 IgG Akutní infekce (dny) Rekonvalescence (měsíce) Dříve prodělaná infekce (roky) Čas Použití souprav Antigeny Vyhledávací test k průkazu EBV infekce u člověka Diagnostika fáze onemocnění Rekombinantní antigeny s vysoce specifickými imunodominantními epitopy Princip testu Soupravy jsou založeny na sendvičovém typu ELISA metody. Sandwich ELISA Anti-Hu IgG Anti-Hu IgM Anti-Hu IgA Uživatelský komfort Komponenty v pracovním ředění Barevně odlišené reagencie Zaměnitelnost komponent Barevně značené stripy s odlamovacími jamkami CUT-OFF kontrola a kalibrátory Semikvantitativní hodnocení výsledků (Index pozitivity-ip) nebo kvantitativní vyhodnocení výsledků (U/ml) IgG IgM IgA Mikrotitrační destička
Pracovní postup Charakteristiky souprav Krok č. 1 2 Kroky testu Ředění vzorků séra/plazmy (1+100) mozkomíšní moky (1+2) Dávkování kontrol a ředěných vzorků 100 µl blank = prázdná jamka ELISA Diagnostická citlivost Diagnostická specifita EIA EBV EA-D IgG 92,6 % 97,3 % EIA EBV EA-D IgM 95,9 % 97,7 % 3 Inkubace 30 min. při 37 C 4 Odsátí a promytí jamek 5 krát 5 Dávkování Konjugátu 100 μl blank = prázdná jamka 6 Inkubace 30 min. při 37 C EIA EBV EBNA-1 IgG 96,9 % 98,9 % EIA EBV EBNA-1 IgM 97,8 % 97,7 % EIA EBV VCA IgA 97,7 % 97,9 % EIA EBV VCA IgG 99,0 % 98,4 % EIA EBV VCA IgM 98,4 % 98,6 % 7 Odsátí a promytí jamek 5 krát 8 Dávkování substrátu (TMB-Complete) 100 μl včetně blanku 9 Inkubace 30 min. při 37 C 10 Dávkování Zastavovacího roztoku 100 μl včetně blanku 11 Fotometrické měření při 450 nm Interpretace výsledků Modelové situace při vyhodnocování výsledků VCA EA-D EBNA-1 IgM IgA IgG IgM IgG IgM IgG Hodnocení Výhody souprav Vysoká diagnostická účinnost Dobrá reprodukovatelnost Vysoká dynamika testů Identický pracovní postup Celková doba vyšetření 1,5 hodiny Možnost kvantitativního stanovení Vhodné pro otevřené automatické systémy Expirace 15 měsíců od data výroby Stanovení v mozkomíšním moku (EIA EBV VCA) Možnost nezávislé verifikace (CKS) Komplexní zákaznický servis Seronegativita + + + + + + + (+) + + + + + (+) Primární infekce + (+) + (+) (+) + (+) + Postakutní stádium + + Dříve prodělaná infekce + (+) + (+) (+) (+) + Reaktivace
INFEKČNÍ SÉROLOGIE Objednací údaje Kód Název soupravy Počet testů EAG096 EIA EBV EA-D IgG 96 EAM096 EIA EBV EA-D IgM 96 EBG096 EIA EBV EBNA-1 IgG 96 EBG192 EIA EBV EBNA-1 IgG (192) 192 EBM096 EIA EBV EBNA-1 IgM 96 VCA096 EIA EBV VCA IgA 96 VCG096 EIA EBV VCA IgG 96 VCG192 EIA EBV VCA IgG (192) 192 VCM096 EIA EBV VCA IgM 96 VCM192 EIA EBV VCA IgM (192) 192 xxxtln CKS negativní (dle seznamu na www.testlinecd.cz) 3,5 ml xxxtlp CKS pozitivní (dle seznamu na www.testlinecd.cz) 3,5 ml Kontakt TestLine Clinical Diagnostics s.r.o. Křižíkova 68 612 00 Brno, Česká republika Tel.: +420 549 121 205 (237, 238) Fax: +420 541 243 390 E-mail: trade@testlinecd.com www.testlinecd.cz TestLine Clinical Diagnostics s.r.o. je držitelem certifikátů ISO 9001:2008 a ISO 13485:2003