Novinky VIDIA v di agnost ce Lymeské borreliózy

Rozměr: px

Začít zobrazení ze stránky:

Download "Novinky VIDIA v di agnost ce Lymeské borreliózy"

Jiřina Müllerová
před 7 lety
Počet zobrazení:

1 Novinky VIDIA v diagnostice i Lymeské borreliózy Marie Šteinbachová

2 ELISA testy VIDIA pro diagnostiku LB testy III. generace vysoce specifické rekombinantní antigeny (IgG verze obsahuje VlsE) vysoká specifita a citlivost rekombinantní antigeny jsou odvozené zkmenů borelií izolovaných na území ČR vysoká shoda ELISA testů s WB (IgM 97% IgG vysoká shoda ELISA testů s WB (IgM 97%, IgG 94%)

3 Princip a uspořádání testu Nepřímý ELISA test směs specifických antigenů se naváže na povrch mikrotitrační destičky antigen pokud jsou ve vzorku přítomny protilátky, navážou se na antigen Pozitivní vzorek na tyto protilátky se naváží sekundární protilátky, značené křenovou peroxidázou pokud se konjugát nemá na co navázat, vyplaví se při promývání po přidání barviva s obsahem H 2 O 2 katalyzuje peroxidáza barevnou reakci Negativní vzorek změna barvy indikuje přítomnost konjugátu s peroxidázou a tím i přítomnost protilátek ve vzorku

4 Spektrum ELISA testů VIDIA 1) testy bez druhového rozlišení specifických protilátek IgM/IgG kombinance antigenů borelie afzelii, garinii a burgdorferi sensu stricto 2) prototypy testů rozlišující druhově specifické protilátky IgM/IgG proti antigenům borelie afzelii a garinii NOVINKA

5 1) TESTY BEZ DRUHOVÉHO ROZLIŠENÍ ELISA-VIDITEST anti-borrelia recombinant IgM a IgG - detekce specifických protilátek IgM a IgG proti antigenům hlavních patogenních kmenů borelie (B.afzelii, f B.garinii iia B.burgdorferi sensu stricto) 3 varianty Kvantitativní verze Semikvantitativní verze Kvalitativní verze

6 ELISA-VIDITEST anti-borrelia recombinant IgM a IgG - kvantitativní

7 ELISA-VIDITEST anti-borrelia recombinant IgM a IgG - semikvantitativní

8 ELISA-VIDITEST anti-borrelia recombinant IgM a IgG kvalitativní - NOVINKA

9 vzorek NOVINKA kvantitativní semikvantitativní kvalitativní sérum, mozkomíšní mok, synoviální tekutina sérum sérum stripy barevně odlišené ANO IgM červené, IgG ANO IgM červené, IgG ANO IgM červené, IgG odlamovací modré, 96 jamek modré, 96 jamek modré, 96 jamek ředicí roztok kontroly počet jamek nutný pro aplikaci kontrol jednotný pro ředění všech druhů vzorků, různý pro verzi IgM a IgG různý pro verzi IgM a IgG jednotný pro verzi IgM a IgG 5 ks r.t.u. 2 ks r.t.u. 3 ks r.t.u. standard A E 5 bodová kalibrační křivka ST A (NKS), ST D (KAL+PKS) NKS, PKS, COKS blank blank blank konjugát anti IgM/IgG Px 101x konc. 101x konc. r.t.u. hodnocení rozsah šedé zóny v indexech pozitivity jednotky AU/ml korekční faktor index pozitivity, hodnocení na křížky OD COKS index pozitivity IgM/IgG : 1,0 1,3/1,0 1,2 IgM/IgG: 0,9 1,1 stanovení intrathekální syntézy specifických protilátek inkubační časy a teplota ANO NE NE 60 /60 /10 laboratorní teplota 60 /60 /10 laboratorní teplota C/ C / 10 labor.t.

10 2) PROTOTYPY TESTŮ ROZLIŠUJÍCÍ DRUHOVĚ SPECIFICKÉ PROTILÁTKY- NOVINKA ELISA-VIDITEST anti-borrelia afzelii IgM a IgG - detekcespecifických protilátek IgM a IgG proti antigenům B.afzelii ELISA-VIDITEST anti-borrelia garinii IgM a IgG - detekcespecifických protilátek IgM a IgG proti antigenům B.garinii 1 varianta Semikvantitativní verze

11 bez druhového rozlišení semikvantitativní druhově specifické semikvantitativní vzorek sérum sérum stripy barevně odlišené odlamovací ANO IgM červené, IgG modré, 96 ANO IgM červené, IgG jamek modré, 96 jamek ředicí roztok různý pro verzi IgM a IgG různý pro verzi IgM a IgG kontroly 2 ks rtu r.t.u. 2 ks rtu r.t.u. ST A (NKS), ST D (KAL+PKS) NKS, KAL počet jamek nutný pro aplikaci kontrol blank blank konjugát anti IgM/IgG Px 101x konc. 101x konc. hodnocení korekční faktor index pozitivity, hodnocení na křížky korekční faktor index pozitivity, hodnocení na křížky rozsah šedé zóny v indexech pozitivity IgM/IgG : ,0 1,3/1,0 3/ ,2 IgM/IgG : ,0 1,3 stanovení intrathekální syntézy specifických protilátek inkubační časy a teplota NE 60 /60 /10 laboratorní teplota NE 60 /60 /10 laboratorní teplota

12 Připravujeme: NOVINKA Konfirmační test III. generace: IMMUNOLINE-VIDITEST anti-borrelia recombinant IgM, IgG Obdoba WB rozdílem je způsob imobilizace antigenů na nitrocelulosovou membránu antigeny přímonanášeny na membránu vhodnou technikou Hlavní výhoda tohoto testu III.generace využití vysoce specifických rekombinantních antigenů, které poskytují testu vysokou specifitu a citlivost x WB jsou většinou testy nižší generace, které využívají převážně antigeny nativní a vyznačují se nižší specifitou.

13 Princip testu Sekundární protilátka značená enzymem Membránový strip Proužky rekombinantních antigenů Antigeny borrelia afzelii + garinii, popř. burgdorferii sensu stricto Druhově specifické Ag A/G Kontrolní proužky substrát

14 Verze IgM Antigeny borrelie afzelii + garinii: OspC, FlaB 190 (p41i), BmpA (p39), DbpA (Osp17), p30 Druhově specifické antigeny: OspC, p31 (OspA),..dle výsledků sekvenční analýzy Kontrolní proužky: human IgM, EBV, anaplasma Verze IgG Antigeny borrelie afzelii + garinii: VlsE, BmpA (p39), DbpA (Osp17), BBK32, p83, p35(ospb), p58, OspC, p30, OspE, p31 (OspA) Druhově specifické antigeny: DbpA (Osp17),..dle výsledků sekvenční analýzy Kontrolní proužky: human IgG, (EBV), anaplasma

15 Výhody immunoline testu Test III.generace vysoká specifita a citlivost Jednoduché provedení obdobné klasickým WB Možnost odlišit druhově specifické protilátky v jednom testu Široké spektrum vysoce specifických rekombinantních antigenů Kontrolní proužky možnost sledovat křížové reaktivity sérových protilátek Diagnostika anaplasmosy

16 Děkuji za pozornost

Podobné dokumenty

ELISA-VIDITEST anti-borrelia recombinant IgG + VlsE (CSF)

ELISA-VIDITEST anti-borrelia recombinant IgG+VlsE (CSF) OD-335 Návod k použití soupravy VÝROBCE: VIDIA spol.s r.o., Nad Safinou II č. 365, Vestec, 252 42 Jesenice, www.vidia.cz, tel.: +420 261 090 565