ECFS 2012 2013 (European Consensus Finding Study, Autoantibodies in Rheumatic Diseases) alias Evropský konsenzus kolektiv autorů XVII. ČASOMIL Český A Slovenský Odborný Meeting Imunologických Laboratoří 12. 14. 6. 2013 v Kutné Hoře
Serum No. 1 Test Result FP1 FP2 FP3 Conjugate Final Result ANA (IIFT) 3 b2 IgG 3 Centromere (IIFT) 0 0 Fluorescence pattern not listed in the pull-down menu ELISA FARR-assay Crith. Other Method Test Final Result Result IU Result IU IIFT Method Result IU ds-dna 2 2 Test ELISA ELISAc IB ID CIE ALBIA Other method Method Result natural / recombin antigen Final Result Ratio: specific result/cut-off value assay SS-A/Ro - SS-A/Ro 52 - SS-A/Ro 60 SS-B/La U1-snRNP - U1-70K - U1-A - U1-C Sm - Sm B'B - SmD Ribosomes P0, P1, P2 PCNA SL/Ki C1q Histones Nucleosomes CENP A CENP B CENP C Scl-70/Topo I PM/Scl - PM/Scl-75 - PM/Scl-100 Fibrillarin Coilin p80 Th/To (RNase P) NOR-90 RNA polymerases Ku - Ku 70 - Ku 80 Mi-2 His-tRNA synthetase (Jo1) Ala-tRNA synthetase (PL12) Ileu-tRNA synthetase (OJ) Thr-tRNA synthetase (PL7) Gly-tRNA synthetase (EJ) Tryp-tRNA synthetase Asp-tRNA synthetase Signal recognition particle C-ANCA P-ANCA atypical ANCA PR3-ANCA MPO-ANCA GBM Cardiolipin IgG Cardiolipin IgM Cardiolipin IgA β2-glycoprotein IgG β2-glycoprotein IgM Phospathidylserin IgG Phospathidylserin IgM Prothrombin IgG Prothrombin IgM Annexin IgG Annexin IgM Citrulline (ACPA) RF-IgM RF-IgG RF-IgA RF non-isotype RA-33 Mitochondria type M2 Nuclear pore complex gp210 Sp 100 Other antigens
Použité metody a diagnostické soupravy ANA IgG IFA Euroimmun (HEp-2) ANA IgG IB Euroimmun (ANA 3b) Innogenetics (INNO-LIA ANA) Myositis IgG IB Euroimmun Anti-dsDNA IgG IFA (CLIA) Inova (C. luciliae) Anti-Nukleozómy IgG ELISA Euroimmun (test 2. generace) ANCA IgG IFA Euroimmun (Granulocyty fixace EtOH, CHOH, HEp-2, opičí játra) ANCA IgG ELISA OrgenTec (MPO, PR3, Cathepsin G, Elastáza, Lactoferin, BPI, Lysozym) Anti-GBM IgG IFA Euroimmun (krysí játra) APLA IgG, IgM ELISA OrgenTec (ACLA, b-2-gpi, fosfatidylserin, fosfatidylinositol, protrombin, annexin V) Anti-CCP IgG (test 3. generace) Abbott (Ag Eurodiagnostica) RF IgGAM INf Siemens AMA IgG IFA Bio-Rad (L/K/S krysí) Liver antigens IB Euroimmun AIFA IgG ELISA Euroimmun APCA IgG ELISA Euroimmun
Membranous nuclear patterns Spindle apparatus patterns a1 Smooth membranous d1 Centriole a2 Punctate membranous d2 Spindle pole (NuMa) d3 Spindle fibre Nucleoplasmic patterns d4 Midbody (MSA-2) b1 Homogeneous/positive nucleoli d5 CENP-F (NSp-II, MSA-3) b2 Homogeneous/negative nucleoli b3 Large speckled (nuclear matrix) Cytoplasmic fluorescence patterns b4 Coarse speckled e1 Fine speckled cytoplasmic b5 Fine speckled e2 Diffuse cytoplasmic b6 Grainy Scl-70-like e3 Mitochondrial-like b7 Pleomorphic speckled (PCNA) e4 Lysosomal-like b8 Centromere e5 Golgi-like b9 Multiple nuclear dots (NSp-I) e6 Actin-like b10 Coiled body e7 Vimentin-like Nucleolar patterns f1 Negative c1 Homogeneous nucleolar g1 Unknown c2 Clumpy nucleolar c3 Punctate nucleolar Anti-GBM disease Rheumatoid arthritis Antiphospholipid Syndrome, primary Scleroderma, diffuse Antiphospholipid Syndrome, secondary Scleroderma, limited Anti-Synthetase Syndrome Scleroderma /Myositis overlap Churg-Strauss Syndrome Similar to limited scleroderma Dermatomyositis Sjögren Syndrome, primary Drug induced lupus Sjögren Syndrome, secondary Granulomatosis with polyangiitis (former Wegener granulomatosis) Subacute cutanous lupus erythematosus Inflammatory bowel disease Systemic lupus erythematosus Microscopic polyangiitis Vasculitis, systemic Mixed connective tissue disease Polymyositis Primary biliary cirrhosis
Vzorek 1 SLE/PM - overlap Homogenní, neg. jadérka - 3 CLIA - 2 Jo-1 3, Ro52-2 SmB 2, ANuA - 0
Vzorek 1 ECFS ZU UL 1:80 ZU UL 1:10
Vzorek 1 v KČS skvrnitá nukleolární homogenní Ku-like SCL70-like 25 (73,5%) 17 (50%) 1 (2,9%) 5 (14,7%) 2 (5,9%) Vzkazy: obrázok chabej kvality Vzkaz pro přátele: vím, že jsou tam zatím hlouposti, prosím, zatím vydržte.
Vzorek 2 SLE Homogenní, poz. jadérka clumpy 4 Ro52 3, SS-A 3, SS-B 3 CLIA 2 RF 0 Histony 1, ANuA 3
Vzorek 2 ECFS ZU UL 1:10 ZU UL 1:80
Vzorek 2 v KČS skvrnitá homogenní nukleolární SCL70-like 10 (29,4%) 15 (44,1%) 24 (70,5%) 6 (17,6%) Vzkazy: Hook effect? jiný vz? titre nie sú z tej istej vzorky, fluorescenčné obrazy sú rozdielne zámena séra pri riedení
Vzorek 3 SLE Homogenní, neg. jadérka 4, hrubá zrnitá PCNA 1, histony 3, ANuA 4 CLIA 2 ACL-M 1, b2gpi-m 1, ACLG/b2GPIG 0
Vzorek 3 ZU UL 1:10 ECFS ZU UL 1:80
Vzorek 3 v KČS Jemná skvrnitá Hrubá skvrnitá (jaderná matrix) homogenní 18 (52,9%) 16 (47,1%) 2 (5,9%) Vzkazy: chromatínová platnička v metafáze sa mi javí pozit. poškodený preparát stlačený substrát
Vzorek 4 SjS Zrnitá, Scl70-like 2 Ro52 3, SS-A 3, SS-B 3 CLIA 0 Histony 0, ANuA 1, RF 0
Vzorek 4 ZU UL 1:10 ECFS ZU UL 1:80
Vzorek 4 v KČS skvrnitá homogenní Ku-like SCL70-like negativní 20 (58,8%) 5 (14,7%) 1 (2,9%) 1 (2,9%) 4 (11,8%) Vzkazy: nevidím tam buňky v metafázi chýba bunka v mitóze nezachytená mitóza
Vzorek 5 SLE Homogenní, neg. jadérka 4 Histony 0, ANuA 4 CLIA 2 RF screen 2
Vzorek 5 ZU UL 1:10 ECFS ZU UL 1:80
Vzorek 5 v KČS SCL70-like Ku-like Homogenní Nukleolární Hrubá skvrnitá (jaderná matrix) Jemná skvrnitá 20 (58,8%) 8 (23,5%) 18 (52,9%) 1 (2,9%) 5 (14,7%) 2 (5,9%) Vzkazy: obrázok chabej kvality Vzkaz pro přátele: vím, že jsou tam zatím hlouposti, prosím, zatím vydržte.
Vzorek 6 PM Difúzní cytoplazma 1 SRP 4
Vzorek 6 ECFS ZU UL 1:10 ZU ZU UL UL 1:80 1:80
Vzorek 6 v KČS negativní cytoplazmatická Jaderná membrána Neznámý typ 24 (70,6%) 7 (20,6%) 1 (2,9%) 1 (2,9%) Vzkazy: potrebný nižší titer riedenia treba pozrieť v nižšom riedení zlý kontakt so sérom zaschnuté
Vzorek 7 Chronická atrof. gastritida Difúzní cytoplazma 4 Scl70 0, ACPA 0 ALE: UL: APCA 3, H+/K+ ATPase 3
Vzorek 7 ECFS ZU UL 1:10 ZU UL 1:80
Vzorek 7 v KČS SCL70-like Ku-like Homogenní Nukleolární Hrubá skvrnitá (jaderná matrix) Skvrnitá/ jemná skvrnitá 17 (50%) 8 (23,5%) 16 (47,1%) 1 (2,9%) 5 (14,7%) 2 (5,9%) Vzkazy: obrázok chabej kvality Vzkaz pro přátele: vím, že jsou tam zatím hlouposti, prosím, zatím vydržte.
Vzorek 8 PM PL-7 3, Ro52 2 Difúzní cytoplazma 2 APLA 0
Vzorek 8 ZU UL 1:10 ECFS ZU UL 1:80
Vzorek 8 v KČS Negativní Golgi-like Cytoplazma - SRP-like Difúzní cytoplazma Jemně zrnitá cytoplazma 14 (41,2%) 6 (17,6%) 5 (14,7%) 1 (2,9%) 5 (14,7%) Vzkazy: obtížně hodnotitelné, nestejnoměrně - fading od předchozího readera. Opakovat. doplniť mozaiku tkanív chýba mitóza a hepar obrázok chabej kvality
Vzorek 9 PBC, SjS Sp100 3 Multiple nuclear dots 1 Ro52 3, SS-A 3, SS-B 3
Vzorek 9 ECFS ZU UL 1:10 ZU UL 1:80
Vzorek 9 v KČS Ojedinělé jaderné tečky Četné jaderné tečky Jaderné tečky (atyp., nedef.) Negativní Lysozómy 14 7 4 6 1 Vzkazy: negatívne celkovo ide asi o nekvalitné (konkurenčné) sklíčka alebo robené amatérom
Vzorek 10 Sklerodermie, difúzní, CREST Centroméra 3, tečkovaná jaderná membrána CenpB 3
Vzorek 10 ECFS ZU UL 1:10 ZU UL 1:80
Vzorek 10 v KČS Pleomorfní Mitotický aparát Centroméra Jaderná membrána Nukleolární Hrubá skvrnitá (jaderná matrix) Jemná skvrnitá 15 (44,1%) 13 (38,2%) 1 (2,9%) 3 (8,8%) 2 (5,9%) 1 (2,9%) 1 (2,9%) Vzkazy: k posouzení chybí více b. v mitose vprostriedku stlačené; celkovo ide asi o nekvalitné (konkurenčné) sklíčka alebo robe
Poučení? I zdánlivě nevýznamná fluorescence může být rozhodující pro stanovení/potvrzení diagnózy Osobní: Pro fotodokumentaci mikroskopických preparátů si vždy udělám dostatek času, nejlépe si přizvu na pomoc kolegu (nikdy nevím, pro co budou obrázky použity )
Děkuji za pozornost