LABORATORNÍ PŘÍRUČKA

Transkript

1 LABORATOŘ ALERGOLOGIE A KLINICKÉ IMUNOLOGIE KNTB LABORATORNÍ PŘÍRUČKA Verze č. 5 Vlastník procesu: Plicní oddělení KNTB, a. s. Účinnost od: Jméno Funkce Datum Podpis Zpracoval: Mgr. Martina Ščuglíková JOP VŠ Přezkoumal: MUDr. Vladimír Řihák Primář plicního oddělení Uvolnil do systému řízení kvality: MUDr. Martin Metelka, MBA Představitel vedení pro kvalitu Schválil: Ing. Pavel Calábek Předseda představenstva Schválil: MUDr Marcel Guřan, Ph.D. Člen představenstva

2 Obsah: 1. ÚVOD INFORMACE O LABORATOŘI Identifikace laboratoře Základní informace o laboratoři Základní členění laboratoře Provozní doba laboratoře Zaměření laboratoře Spektrum služeb laboratoře Úroveň a stav akreditace pracoviště MANUÁL PRO ODBĚRY PRIMÁRNÍCH VZORKŮ Základní informace Žádanky (požadavkové listy) Požadavky na urgentní vyšetření Dodatečné požadavky na vyšetření Používaný odběrový systém Vydávání odběrového materiálu laboratoří Příprava pacienta před odběrem Množství vzorku Identifikace pacienta na žádance a na vzorku Stabilita vyšetřovaných vzorků Svoz biologického materiálu a rozvoz výsledků PREANALYTICKÁ FÁZE V LABORATOŘI Příjem materiálu Důvody pro odmítnutí vzorku laboratoří Vyšetřování jinými laboratořemi Vyšetřování ve smluvních laboratořích Základní informace k bezpečnosti při práci se vzorky VYDÁVANÍ VÝSLEDKŮ A KOMUNIKACE S LABORATOŘÍ Hlášení výsledků v kritických intervalech Vydávání výsledků laboratoří Intervaly od dodání vzorku k vydání výsledku Konzultační činnost Řešení stížností Změny výsledků a nálezů Archivace výsledků vyšetření POKYNY PRO PACIENTY A ZDRAVOTNICKÁ ZAŘÍZENÍ PŘÍLOHY SEZNAM POUŽITÝCH DOKUMENTŮ Stránka 2 z 30

3 1. ÚVOD Vážené kolegyně, vážení kolegové, vážení pacienti, dovolujeme si Vám předložit tuto laboratorní příručku, která má za úkol představit a informovat Vás o činnosti a spektru nabízených služeb naší laboratoře, která nabízí svým zákazníkům vyšetření z oblasti klinické imunologie a alergologie. Věříme, že tato laboratorní příručka Vám bude nápomocna v lepší orientaci a naleznete v ní vše, co potřebujete pro naši vzájemnou spolupráci. MUDr. Vladimír Řihák, primář plicního oddělení 2. INFORMACE O LABORATOŘI 2.1 Identifikace laboratoře Laboratoř alergologie a klinické imunologie (LAKI) je součástí zdravotnického zařízení Krajská nemocnice T. Bati, a. s. Zlín (dále jen KNTB). Název organizace: Krajská nemocnice T. Bati, a. s. Identifikační údaje: IČO: , IČP , nákladové středisko 9951 Typ organizace: Statutární zástupce organizace: Sídlo společnosti: akciová společnost Ing. Pavel Calábek, předseda představenstva MUDr. Marcel Guřan, Ph.D., člen představenstva MUDr. Roman Kučera, člen představenstva Havlíčkovo nábřeží 600, Zlín Umístění: Plicní oddělení, pavilon č. 20 Vedoucí laboratoře: MUDr. Vladimír Řihák 2.2 Základní informace o laboratoři Umístění laboratoře: LAKI se nachází v areálu KNTB v plicním oddělení budova č. 20. Základní kontakty a spojení: Kontakt Jméno Telefon Vedoucí laboratoře MUDr. Vladimír Řihák rihak@bnzlin.cz Vedoucí administrativy Eva Sedláčková Laboratoř Základní členění laboratoře Stránka 3 z 30

4 Laboratoř je členěna na tyto úseky: Průtoková cytometrie, diagnostika alergií, vyšetření autoprotilátek, pneumologická cytodiagnostika Provozní doba laboratoře Provozní doba: Po Pá 6.00 h h Příjem biologického materiálu: Po Pá 6.30 h h Quantiferon: Po Čt 6.30 h h Neodebírat den před státním svátkem nebo volným dnem! Odběrové místo: Odběry biologického materiálu laboratoř neprovádí, odběrové místo pro pacienty mimo nemocnici se nachází v hematologické ambulanci KNTB budova číslo Zaměření laboratoře Laboratoř pracuje pro všechna oddělení KNTB i jiné nemocnice, pro privátní lékaře i ambulantní specialisty. LAKI je zaměřena zejména na primární diagnostiku v oblasti alergologie, klinické imunologie a primární pneumologické péče. Pokrývá také požadavky na dořešení hematologických diagnóz do rozhodnutí o určení místa léčby. Poskytuje laboratorní vyšetření v oboru Spektrum služeb laboratoře Laboratoř alergologie a klinické imunologie poskytuje laboratorní a konzultační služby v oblasti alergologie a klinické imunologie. Komplexní spektrum laboratorních vyšetření viz Abecední seznam vyšetření (příloha č. 2), 2.7 Úroveň a stav akreditace pracoviště Každoročně se laboratoř účastní systému externího hodnocení kvality prováděné firmou SEKK spol. s.r.o. O úspěšném absolvování svědčí udělené certifikáty. Tato externí kontrola je prováděna u všech našich vyšetření, která SEKK nabízí a zprostředkovává. Alternativou pro vyšetření, která nejsou v nabídce SEKK je využití služeb zahraniční společnosti Referenzinstitut für Bioanalytik. Laboratoř je součástí nemocnice, která splnila požadavky certifikace podle normy ISO Laboratoř respektuje požadavky normy ISO 15189, v roce 2011 absolvovala audit NASKL I a v roce 2013 uděleno osvědčení audit NASKL II. Dokumentace podléhá směrnici - Směrnice - řízení dokumentů. 3. MANUÁL PRO ODBĚRY PRIMÁRNÍCH VZORKŮ 3.1 Základní informace V této kapitole uvádíme obecné informace o tzv. preanalytické fázi laboratorních vyšetření, která předchází dodání vzorků do laboratoře. Jedná se především o přípravu pacientů před odběrem materiálu v ordinaci ošetřujícího lékaře, o vlastní odběr, možné typy interferencí, o typ odběrového materiálu, o žádanku a její správné vyplnění a další obecně platné záležitosti. Pokud některá vyšetření, včetně funkčních testů, vyžadují speciální přípravu pacienta, speciální odběr, případně splnění dalších požadavků, je to uvedeno u konkrétních vyšetření viz Abecední seznam vyšetření. 3.2 Žádanky (požadavkové listy) Požadovaná vyšetření klinickými odděleními jsou laboratoři předávána ve formě žádanekv současné době je preferována elektronická žádanka, ale laboratoř příjímá i tištěné žádanky laboratoře a i jiné typy žádanek, pokud splňují potřebné požadavky. Stránka 4 z 30

5 Elektronická žádanka: Elektronické zadávání požadavků na vyšetření se provádí v softwaru AKORD (součást NIS), jde o rychlé zadávání požadavků s minimálním množstvím chyb. Laboratoř žádá oddělení o přednostní používání elektronické žádanky. Písemné žádanky LAKI: Žádanka pro imunologická vyšetření Žádost o vyšetření krve testem QuantiRERON TB Gold Minimální požadavky žádanky (průvodního listu): příjmení a jméno pacienta kód pojišťovny pojištěnce (pacienta) číslo pojištěnce - pacienta (rodné číslo, číslo pojistky u cizinců) základní a další diagnózy pacienta věk v letech a pohlaví pacienta v situacích, kdy nejsou jednoznačně určena číslem pojištěnce datum a čas odběru, datum a čas přijetí vzorku laboratoří je automaticky evidován laboratorním informačním systémem po přijetí žádanky identifikace objednavatele (podpis a razítko, které musí obsahovat údaje - ústav, oddělení, jméno lékaře, IČP, IČZ, odbornost, včetně kontaktu na něj), nejsou-li tyto údaje vyplněny v horní části žádanky urgentnost dodání, pokud je vyšetřování požadováno ve statimovém režimu (požadavek se vyznačí slovem STATIM ) požadovaná vyšetření (vázaná k dodanému vzorku nebo k dodaným vzorkům) Poznámky V rubrice Sdělení je možné uvést klinické informace týkající se pacienta a vyžadovaného zaměření vyšetření (pro interpretační účely), tento údaj není povinný. V případě samoplátce nemusí žádanka (průvodní list) obsahovat: kód pojišťovny jméno lékaře nebo jiné osoby legálně oprávněné požadovat vyšetření 3.3 Požadavky na urgentní vyšetření Pokud ordinující lékař požaduje některá vyšetření urgentně, vyznačí tento požadavek viditelně na žádance slovem STATIM. Laboratoř pak provede tato vyšetření přednostně a výsledek nahlásí ordinujícímu lékaři telefonicky a následně písemně. Tento postup se uplatňuje v případech závažných diagnóz. 3.4 Dodatečné požadavky na vyšetření Na základě dodatečného požadavku (ústní nebo telefonický) ordinujícího lékaře provede laboratoř další vyšetření z již dodaného vzorku materiálu. Tyto požadavky musí být zadány ordinujícím lékařem, který je současně povinen sdělit zaměstnanci laboratoře identifikační údaje o pacientovi (jméno a rodné číslo). Zaměstnanec laboratoře tento dodatečný požadavek zaznamená jako dohlášený požadavek do OpenLIms, dále se zaznamená jméno dohlašující osoby. Provedení dodatečného vyšetření závisí na dostatečném množství vzorku a časovém odstupu od odběru. O nemožnosti provést dodatečné vyšetření je žadatel informován. 3.5 Používaný odběrový systém V laboratoři je akceptován jakýkoli odběrový materiál, který je v souladu s požadavky na odběrový materiál. Rozhodující je použití správného typu aditiva ve zkumavce Stránka 5 z 30

6 Srážlivá žilní krev (bez aditiv) Typ odběrového materiálu Plastová zkumavka se separačním gelem Příklad použití Autoprotilátky, celkové IgE, sp. IgE Nesrážlivá žilní krev (K 3 EDTA) Nesrážlivá žilní krev (heparin) Typ odběrového materiálu Plastová zkumavka + kalium + EDTA Plastová zkumavka + heparin lithný Příklad použití Průtoková cytometrie Test aktivace bazofilů Kostní dřeň Výpotek (K 3 EDTA) BAL, likvor Speciální Qantiferon TB Gold Typ odběrového materiálu Plastová zkumavka s médiem RPMI s heparinem Typ odběrového materiálu Plastová zkumavka + kalium + EDTA Typ odběrového materiálu Plastová zkumavka bez úpravy Typ odběrového materiálu 3 speciální odběrové zkumavky s antigeny v lyofilizované podobě na stěnách zkumavky Příklad použití Průtoková cytometrie Příklad použití Průtoková cytometrie Příklad použití Průtoková cytometrie Příklad použití Quantiferon 3.6 Vydávání odběrového materiálu laboratoří Spolupracujícím pracovištím vydává zkumavky na quantiferon a zkumavky s mediem na kostní dřeň. 3.7 Příprava pacienta před odběrem Při odběru vzorku k vyšetření imunofenotypizace leukocytů, IgE, specifických IgE, autoprotilátek nejsou nutná žádná režimová opatření. Před plánovaným testem aktivace bazofilů je nutná úprava léčebné terapie - pacient musí 48 hod před odběrem vysadit léky typu antagonistů leukotrienů a 2 týdny před odběrem systémové kortikosteroidy. 3.8 Množství vzorku Doporučené minimální množství materiálu při primárním odběru: Základní alergologické a sérologické vyšetření 2-3 ml sražené krve Buněčná imunita - krev Buněčná imunita kostní dřeň Buněčná imunita - BAL Stránka 6 z 30 3 ml nesrážlivé krve (EDTA nebo heparin) 1 ml kostní dřeně v 4 ml RPMI médiu 40 ml laváže

7 Quantiferon 1 ml krve do tří speciálních odběrových zkumavek Při použití vakuových systémů je správný objem zajištěn, při odběru pístovým způsobem je nutné dodržet pokyn výrobce o množství vzorku na zkumavce je ryska, po kterou má být naplněna. 3.9 Identifikace pacienta na žádance a na vzorku Do laboratoře se příjmají vzorky s jednoznačnou identifikací pacienta, která musí být shodná s údaji na žádance. Po kontrole materiálu a žádanky jsou identifikační znaky pacienta zadány do laboratorního informačního systému (LIS). Každá žádanka o vyšetření musí obsahovat všechny údaje nezbytné pro jednoznačnou identifikaci pacienta, tj. jméno, příjmení a číslo pojištěnce, číslo zdravotní pojišťovny, u níž je pacient pojištěn, razítko ordinujícího lékaře, datum, případně hodinu odběru vzorku, diagnózu základní a nebo sledovanou, případně další informace nezbytné pro spolehlivé provedení vyšetření a nebo interpretaci výsledku. Požadovaná vyšetření se u elektronické žádanky automaticky načtou pomocí čtečky čárového kódu do laboratorního informačního systému OpenLims. Každému vzorku je automaticky přiřazeno laboratorní číslo. Je vytištěn identifikační štítek pro žádanku a pro primární zkumavku, (popř. štítky pro alikvoty). Tak je zajištěna návaznost identifikovaného jedince na žádance a označení primární zkumavky. Vyšetřované vzorky biologického materiálu musí mít na štítku jednoznačnou identifikaci pacienta, minimálně jméno, příjmení a rok narození nebo číslo pojištěnce pacienta, vše musí souhlasit se žádankou. Pokud žádanka a biologický materiál jsou v rozporu s jednoznačnou identifikací pacienta, jsou vyřazeny z dalšího zpracování. Ordinující lékař je o tomto kroku zaměstnance laboratoře informován telefonicky Stabilita vyšetřovaných vzorků Odebraný materiál by měl být co nejdříve odeslán do laboratoře, pokud nelze, je nutno uchovávat materiál podle doporučení pro jednotlivý biologický materiál. Srážlivou žilní krev nechat srážet 1-2 hod při pokojové teplotě, vzorek je stabilní 48 hod při 4-8 C Nesrážlivá krev na imunofenotypizaci stabilita 24 hod při pokojové teplotě Nesrážlivá krev na test aktivace basofilů (BAT) nutno doručit do laboratoře do 2 hod po odběru Speciální biologický materiál: kostní dřeň, punktát stabilita 24 hod při laboratorní teplotě, BAL stabilita 2-4 hod při pokojové teplotě Odběr na Quantiferon se doručuje do laboratoře co nejdříve, nejdéle však do 16 hod po odběru. Do doby transportu se vzorky skladují při pokojové teplotě ve svislé poloze. Následně se vzorek inkubuje při 37 C hod Transport a svoz biologického materiálu, nezbytné operace se vzorkem Transport vzorků do laboratoře v areálu nemocnice je zajištěn potrubní poštou, donáškovou službou nebo osobním předáním v místě příjmu materiálu. Vzorky pro průtokovou cytometrii se skladují aspoň dva dny při laboratorní teplotě, ostatní vyšetření při teplotě 2-8 C. Vzorky určené k odeslání do spolupracující laboratoře jsou po centrifugaci odděleny od séra a spolu se žádankou uloženy do lednice, odkud jsou vydávány svozové službě smluvní laboratoře. Likvidace probíhá podle směrnice KNTB. Stránka 7 z 30

8 4. PREANALYTICKÁ FÁZE V LABORATOŘI 4.1 Příjem materiálu Materiál je doručován do laboratoře pracovníky nemocnice, potrubní poštou nebo dopravou nezávislou na laboratoři. Pracovník přejímající vzorky přezkoumá fyzicky úplnost žádanky, označení vzorku, stav vzorku a elektronicky zapíše do laboratorního informačního systému OpenLims. Po provedení vyšetření je odběrový materiál likvidován dle interní směrnice pro nakládání s odpady. V případě nečitelných nebo chybějících údajů na žádance, se pracovník na příjmu spojí se zadavatelem vyšetření a zajistí chybějící informace, popřípadě požádá o vyplnění nové žádanky. Pokud je dodán materiál bez žádanky a jedná se o nenahraditelný vzorek, laboratoř tento vzorek vyšetří, ale výsledek bude uvolněn, až zadavatel doplní identifikační údaje, tedy žádanku. Pokud je dodán neoznačený vzorek a jedná se o nenahraditelný vzorek (likvor, laváž apod.) se žádankou, tak laboratoř tento vzorek vyšetří, ale výsledky uvolní, až zadavatel převezme odpovědnost za identifikaci a přijetí vzorku nebo za poskytnutí informace, nebo za všechno současně. 4.2 Důvody pro odmítnutí vzorku laboratoří Důvody k odmítnutí: Nesouhlasí identifikace pacienta na žádance s identifikací na vzorku nebo materiál není označen vůbec Žádanka nebo zkumavka je znečištěná, je poškozený odběrový materiál Chybný odběr (zjevné nedodržení postupu při odběru). Jestliže nastane výše uvedený případ, vzorky jsou označené jako neshodné a jsou evidovány v LIS, blok NESHODY. O této situaci je informováno zasílající oddělení (telefonicky, následně i písemně). 4.3 Vyšetřování jinými laboratořemi Laboratorní vyšetření, určená pro jiné laboratoře v rámci nemocnice, která se nedopatřením dostanou na naše pracoviště, automaticky odesíláme do příslušné laboratoře. 4.4 Vyšetřování ve smluvních laboratořích Laboratoř využívá smluvní laboratoř IFCOR 99 pro raritní stanovení, které je vysoce neekonomické provádět v KNTB a nejsou urgentní. Vzorky určené k odeslání do spolupracující laboratoře jsou po centrifugaci odděleny od séra aspolu se žádankou uloženy do lednice, odkud jsou vydávány svozové službě smluvní laboratoře. Stanovení, jeho kvalita a dodání výsledku jsou v gesci smluvní laboratoře. 4.5 Základní informace k bezpečnosti při práci se vzorky Obecné zásady strategie bezpečnosti práce s biologickým materiálem jsou obsaženy ve Vyhlášce Ministerstva zdravotnictví č. 306/2012 Sb., o podmínkách předcházení vzniku a šíření infekčních onemocnění a o hygienických požadavcích na provoz zdravotnických zařízení a ústavů sociální péče. Na základě této vyhlášky byly stanoveny tyto zásady pro bezpečnost práce s biologickým materiálem: Každý vzorek biologického materiálu je nutné považovat za potenciálně infekční. Žádanky ani vnější strana zkumavky nesmí být kontaminovány biologickým materiálem toto je důvodem k odmítnutí vzorku. Vzorky od pacientů s přenosným virovým onemocněním či multirezistentní nosokomiální nákazou musí být viditelně označeny. Vzorky jsou přepravovány v uzavřených zkumavkách, které jsou vloženy do stojánku nebo přepravního kontejneru tak, aby během přepravy vzorku do laboratoře nemohlo dojít k rozlití, potřísnění biologickým materiálem nebo jinému znehodnocení vzorku. Stránka 8 z 30

9 Detailní problematika bezpečnosti práce je řešena interními směrnicemi nemocnice, směrnice: Nakládání s odpady; Pro stanovení organizace zabezpečení požární ochrany v KNTB, Zajištění školení a výcviku zaměstnanců KNTB v oblasti BOZP ; Pracovní úrazy; Směrnice pro nakládání s nebezpečnými chemickými látkami a přípravky 5. VYDÁVANÍ VÝSLEDKŮ A KOMUNIKACE S LABORATOŘÍ 5.1 Hlášení výsledků v kritických intervalech Výsledky analýz, které se výrazně liší od fyziologických hodnot, jsou telefonicky hlášeny ordinujícímu lékaři a to bez ohledu na to, zda bylo vyšetření provedeno ve statimovém nebo rutinním režimu. Seznam metod a podmínky, kdy je nutno výsledek hlásit telefonicky jsou uvedeny níže v tabulce. Za nálezy v kritických intervalech považujeme podezřelé nálezy krevních malignit či imunodeficity. Informace o hlášení zaznamená pracovník do informačního systému OpenLims (viz. nahlášený výsledek, kde se uvede jméno osoby, které byly výsledky nahlášeny). Tabulka kritických hodnot Metoda Kritická hodnota Povinné hlášení Anti-ANA > 1:100 titr >1:1280 Anti-dsDNA >1:10 titr >1:640 ANCA >1:20 titr Ano Anti-PR3+anti-MPO Pozitivita Ano ANA/ENA Pozitivita Ne CD19+ >23% >50% CD34+ - blasty periferie Nález Ano CD34+-blasty kost. dřeně >2% >5% 5.2 Vydávání výsledků laboratoří Výsledkové zprávy, jejich obsah, formát a náležitosti vydávání musí splňovat náležitosti ČSN EN ISO Výsledková zpráva laboratoře obsahuje: Identifikaci a adresu zdravotnického zařízení název vyšetření, výsledek vyšetření, jednotky vyšetření, biologický referenční interval, kde to připadá v úvahu jednoznačnou identifikaci pacienta (jméno, příjmení, číslo pojištěnce, pojišťovna), diagnózu pacienta jméno a další jednoznačné identifikační označení žadatele a jeho adresu pracoviště datum a čas odběru primárního vzorku, pokud jsou dostupné, a datum a čas přijetí vzorku laboratoří datum a čas aktuálního vytištění zprávy typ primárního vzorku další poznámky (např. nesplněné vstupní parametry např. málo materiálu, chybný odběr) identifikaci oprávněného pracovníka uvolnit zprávu Stránka 9 z 30

10 Laboratoř vydává výsledky vyšetření v tištěné formě a současně jsou výsledky uvolňovány do nemocničního informačního systému. Zadávání výsledků je v kompetenci laboranta, VŠ pracovníka, výsledky uvolňuje VŠ pracovník s atestací v oboru Telefonicky se hlásí výsledky s kritickými hodnotami. Pacientovi a nezdravotnickým pracovníkům se výsledky nesdělují! Telefonicky předané výsledky se vždy vydávají také v písemné podobě. 5.3 Intervaly od dodání vzorku k vydání výsledku Laboratoř má stanoveny doby odezvy laboratoře (turn around times) pro každé vyšetření viz Abecední seznam vyšetření. Tato doba vyhovuje klinickým potřebám. 5.4 Konzultační činnost Konzultační činnost provádí MUDr. Vladimír Řihák. 5.5 Řešení stížností Telefonické a písemné stížnosti může podat kterýkoli z žadatelů a jsou vždy řešeny vedením laboratoře, případně osobami pověřenými vedením. Záznam je veden v knize připomínek a neshod. O výsledku šetření je žadatel vždy informován písemně. Problematika neshod je řešena směrnicí - Řízení neshod; Směrnice o řešení podnětů veřejnosti a vyřizování stížností 5.6 Změny výsledků a nálezů Opravy výsledkových listů pořízených laboratorním informačním systémem se provádí pro: identifikaci pacienta výsledkovou část Oprava identifikace pacienta Opravou identifikace pacienta se rozumí oprava rodného čísla a změna nebo významná oprava příjmení a jména pacientů před odesláním protokolu (výsledkového listu). Vzhledem k tomu, že laboratorní informační systém nepořizuje údaj o rodném příjmení, týká se oprava také všech změn příjmení (vdané ženy, osvojené děti, změna příjmení po rozvodu a podobně). Pod pojem oprava identifikace nepatří změna generovaného rodného čísla na korektní, oprava titulu,spojení záznamů korektního rodného čísla a nekorektního rodného čísla po verifikaci, oprava interpunkce. Oprava identifikace (rodného čísla nebo příjmení a jména) se provádí buď při zadávání požadavků, nebo v rámci oprav databáze na základě sdělení klienta. Oprava výsledkové části Byl-li klientovi vydán výsledek, který byl na základě jeho upozornění nebo na základě vnitřního podnětu v laboratoři znovu analyzován a byl-li odhalen rozpor mezi již vydaným výsledkem a novým stanovením, je vždy proveden záznam o neshodě. Postup pro odstranění neshody je následující:k záznamu o neshodě je připojen výtisk s původním výsledkem, záznam o neshodě musí obsahovat zdroj odhalení neshody, původní výsledek, nový výsledek a osobu zodpovídající za opravu výsledku. Výsledek je vydán znovu se správnou hodnotou a do komentáře výsledku je uvedeno, že se jedná o opravu výsledku číslo/datum/čas a jméno osoby, zodpovědné za změnu. Veškeré kroky týkající se opravy výsledku koná pouze jedna osoba, záznam o neshodě pořizuje manažer kvality, kontrolu opatření vždy jiná osoba než ta, která provedla opravu. Při distribuci opraveného výsledku obdrží klient vždy související výtisky výsledků. Je-li nutné zjistit původní hodnotu před opravou, poskytne takovouto informaci laboratoř na základě odpovídajícího záznamu o neshodě. Dojde-li ke změně výsledku, je o ní vždy lékař resp. klient informován. Souběžně s informací, která probíhá ústně, je vždy klientovi doručen opravený výsledek. Stránka 10 z 30

11 5.7 Archivace výsledků vyšetření Výsledky vyšetření jsou automaticky archivovány na příslušných servrech KNTB. V papírové podobě jsou uchovávány výstupní data zpracovaných vzorků z analyzátoru. Výsledky externích a interních kontrol jsou uchovávány v papírové podobě. Všechna data jsou uchovávána po dobu pěti let. 6. POKYNY PRO PACIENTY A ZDRAVOTNICKÁ ZAŘÍZENÍ Laboratoř nemá pro pacienty ani zdravotnická zařízení žádné zvláštní pokyny. 7. PŘÍLOHY Příloha č. 1 Žádanky Příloha č. 2 Seznam vyšetření Příloha č. 3 Seznam alergenů pro metodu RISA 8. SEZNAM POUŽITÝCH DOKUMENTŮ Směrnice Nakládání s odpady Směrnice Řízení neshod Směrnice Pro stanovení organizace zabezpečení požární ochrany v KNTB Směrnice Zajištění školení a výcviku zaměstnanců KNTB v oblasti BOZP Směrnice Pracovní úrazy Směrnice Řízení dokumentů Směrnice Směrnice pro nakládání s nebezpečnými chemickými látkami a přípravky Směrnice Směrnice o řešení podnětů veřejnosti a vyřizování stížností Stránka 11 z 30

12 Příloha č. 1 Žádanky Krajská nemocnice T. Bati, a. s., Havlíčkovo nábř. 600, Zlín Laboratoř alergologie a klinické imunologie, plicní odd., 20. pav., tel.: ŽÁDANKA PRO IMUNOLOGICKÁ VYŠETŘENÍ Pacient: Č. pojištěnce: Pojišťovna: Diagnóza: Oddělení: IČP: Odbornost: Datum a čas odběru: Materiál: periferní krev, kostní dřeň, BAL, mozkomíšní mok, výpotek, uzlina, jiné Odběr: - periferní krev: nesrážlivá (EDTA, heparin): cytoflow, zároveň odběr na KO srážlivá: autoimunita, CIK, komplement - kostní dřeň, uzlina: zkumavka s EDTA nebo heparinem, výpotek: zkumavka s EDTA CYTOMETRIE CD14 CD45 CD3 T-ly CD4 T-ly CD8 T-ly CD19 B-ly Základní panel CD16+56 NK buňky Aktivace buněk HLA DR CD38 CD25 CD71 jiné Funkční testy fagocytární aktivita a metabolické vzplanutí neutrofilů (odběr pouze do zkumavky s heparinem po domluvě) aktivace basofilů (CD203c/CD63) s alergeny..... Jiné: exprese HLA DR na monocytech (sepse) HLA B27 HLA B27/B 7 (konfirmace) Leukoproliferace Vyloučení klonálního hematologického onemocnění AUTOIMUNITA ANA ds DNA ENA screen ANCA konfirmace typu ANCA ENA blot - pro positivní ENA screen ANA blot CIK - PEG IKEM KOMPLEMENT Komplement screen - funkční test (klasická, alternativní a mananová dráha) SPECIFICKÉ IgE Soubory: Inhalační Pediatrický inhalační Potravinový Jiný Jednotlivé specif. IgE: Informace, důvod vyšetření: Razítko, podpis lékaře Stránka 12 z 30

13 Žádost o vyšetření krve testem QuantiFERON -TB Gold In-Tube Pacient: Jméno a příjmení: Diagnosa: Číslo pojištěnce: Pojišťovna: Důvod provedení testu: kontakt s aktivní TBC: rodinný pracovní jiný: biologická léčba suspektní TBC (podle rtg nálezu): ANO NE suspektní TBC (podle symptomů): ANO NE TBC v osobní anamnéze: ne bakteriologicky ověřená: jen mikroskopicky kultivačně (M. tuberculosis, M. bovis) mykobakterióza (M. kansasii, M. marinum, M. szulgai) průkaz DNA/RNA komplexu M. tuberculosis bakteriologicky neověřená histologicky ověřená Terapie základními antituberkulotiky: ANO NE Pokud ano, od kdy (datum): její trvání: Imunodeficience, terapie léky s imunodef. účinkem: ne Přípravek: od do BCG vakcinace: ANO NE Pokud šlo o mimořádnou vakcinaci (mimo pravidelné očkování): Datum: Důvod: Test Mantoux II: ANO NE V minulosti (není myšleno provedení testu v rámci pravidelného očkování podle očkovacího kalendáře) Datum: V posledním roce datum:.. hodnota:.. Další informace důležité pro hodnocení výsledku testu: (např. jiná onemocnění, pracovní anamnéza riziko TBC, TBC v rodinné anamnéze atp.) Žadatel: Lékař: IČP: Pracoviště: Odběr provedl: Odbornost: Razítko a podpis: Datum a čas odběru: NELZE ODEBÍRAT V PÁTEK A DEN PŘED STÁTNÍM SVÁTKEM Výsledek testu: pozitivní negativní neurčeno Stránka 13 z 30

14 Příloha č. 2 Seznam vyšetření ANA Autoimunita IgG protilátky proti jádru buňky Antinukleární protilátky jsou autoprotilátky proti orgánově nespecifickým buněčným antigenům, zahrnují protilátky proti antigenům jádra (DNA, RNA, histony, nukleoproteiny) rozpoznáváme i protilátky proti organelám cytoplasmy (mitochondrie, mikrozomy, lysozomy, peroxizomy, Golgiho aparát). Diagnostika systémových a orgánově specifických autoimunitních onemocnění. Vyšetřovaný materiál: srážlivá krev (sérum), plazma Stabilita vzorku: 2 8 C 14 dní Metoda: nepřímá imunofluorescence Ředění: 1:10 Titrace: 1:80,1:160,1:320, 1:640, 1:280, 1:2560 Substrát: Hep 2 buňky Minimální požadované množství materiálu: 2 ml krve Hodnocení: kvalitativní s popisem fluorescenčního obrazu, negativní, hraniční, slabě pozitivní, pozitivní, silně pozitivní ANA imunoblot Konfirmační test pro diagnostiku sporných, hraničních a nejasných výsledků ANA (ENA, ds DNA). Testem potvrdíme tyto konkrétní autoprotilátky: Mi-2, Ku, nrnp, Sm, SS-A, Ro-52, SS-B, Scl-70, PM-Scl 100, Jo-1, CENP B, PCNA, ds DNA, nukleozomy, histony, ribozomální P-protein, AMA M2. Vyšetřovaný materiál: srážlivá krev (sérum), plazma Stabilita vzorku: 2 8 C 14 dní Metoda: westernblot Minimální požadované množství materiálu: 2 ml krve Hodnocení: kvalitativní, negativní, hraniční, slabě pozitivní, pozitivní, silně pozitivní ANA detect Kvalitativní stanovení IgG protilátek proti SS-A-52 (Ro-52), SS-A-60 (Ro-60), SS-B, RNP/sm, RNP- 70, RNP-A, RNP-C, Sm-BB, Sm-D, Sm-E, Sm-F,, Sm-G, Scl-70, Jo-1, dsdna, ssdna, polynukleosomům, mononukleosomům, histonům H1, histonům H2A, histonům H2B, histonům 3, histonům 4, Pm-Scl-100, centromeře B v lidském séru nebo plazmě na principu ELISA metody. Vyšetřovaný materiál: srážlivá krev (sérum), plazma Stabilita vzorku: 2 8 C 14 dní Metoda: EIA Minimální požadované množství materiálu: 2 ml krve Druh veličiny: Hodnocení: dle indexu pozitivity : < 1,0 negativní 1,0-1,2 hraniční > 1,2 pozitivní ENA screen IgG protilátky proti extrahovatelným antigenům jádra buňky (nrnp, Sm, SS-A, SS-B, Scl-70, Jo-1) Extrahovatelné nukleární antigeny jsou rozpustné jaderné a cytoplazmatické komponenty, které jsou namířeny proti ribonukleoproteinům a enzymům. Vyšetření se provádí při podezření na Stránka 14 z 30

15 systémové autoimunitní onemocnění (Sharpův syndrom,sle, Sjögrenův syndrom, progresivní systémová skleróza, polymyositis, dermatomyositis, CREST syndrom). Vyšetřovaný materiál: srážlivá krev (sérum) Stabilita vzorku: 2 8 C 14 dní Metoda: ELISA Druh veličiny: ku/l Hodnocení: < 20,0 negativní 20,0 pozitivní a-ds DNA IgG protilátky proti dvouvláknové DNA Kvalitativní stanovení anti - dsdna proti nativní dvouvláknové DNA. Jsou přítomny asi u 60% pacientů se SLE. Silně pozitivní nález je typický pro neléčený SLE. Vyšetřovaný materiál: srážlivá krev (sérum), plazma Stabilita vzorku: 2 8 C 14 dní Metoda: nepřímá imunofluorescence ředění: 1:10 titrace: 1:20, 1:40, 1:80, 1:160, 1:320 substrát: Crithidia luciliae Minimální požadované množství materiálu: 5 ml krve Hodnocení: kvalitativní, negativní, hraniční, slabě pozitivní, pozitivní, silně pozitivní a-ds DNA IgG protilátky proti dvouvláknové DNA Kvantitativní stanovení anti - dsdna proti nativní dvouvláknové DNA. Jsou přítomny asi u 60% pacientů se SLE. Silně pozitivní nález je typický pro neléčený SLE. Vyšetřovaný materiál: srážlivá krev (sérum), plazma Stabilita vzorku: 2 8 C 14 dní Metoda: EIA Minimální požadované množství materiálu: 2 ml krve Druh veličiny: ku/l Hodnocení: < 20,0 negativní 20,0 pozitivní ANCA IgG protilátky proti antigenům cytoplasmy lidských granulocytů ANCA jsou autoprotilátky namířeny proti antigenům v cytoplasmě neutrofilních granulocytů, fluorescenčně rozlišujeme 3 typy obrazů: tzv. c-anca, p-anca a atypická ANCA, jejich přítomnost je spojena s autoimunitními onemocněními např. Wegenerova granulomatóza, Churg- Strauss syndrom, vaskulitida malých cév. Vyšetřovaný materiál: srážlivá krev (sérum), plazma Stabilita vzorku: 2 8 C 14 dní Metoda: nepřímá imunofluorescence ředění: 1:20 substrát: lidské granulocyty fixované etanolem a formaldehydem, Hep-2 buňky a opičí játra Minimální požadované množství materiálu: 5 ml krve Hodnocení: kvalitativní, negativní, hraniční, slabě pozitivní, pozitivní, silně pozitivní Stránka 15 z 30

16 Kritická hodnota: viz. tabulka kritických hodnot MPO (p-anca) IgG protilátky proti myeloperoxidáze Kvalitativní stanovení IgG autoprotilátek proti myeloperoxidáze je konfirmační metoda pro pozitivní fluorescenční obraz typu p-anca. Tyto protilátky jsou spojeny s onemocněními jako non-wg vaskulitidam a Goodpasteurovým syndromem a u dalších autoimunit Stabilita vzorku: 2 8 C 14 dní Metoda: ELISA Hodnocení: kvalitativní, negativní, hraniční, slabě pozitivní, pozitivní, silně pozitivní PR3 (c-anca) IgG protilátky proti proteináze 3 Kvalitativní stanovení IgG autoprotilátek proti proteináze3 metodou je onfirmační metoda pro pozitivní fluorescenční obraz typu c-anca. Tyto protilátky jsou diagnostické pro Wegenerovu granulomatózu. Stabilita vzorku: 2 8 C 14 dní Metoda: ELISA Hodnocení: kvalitativní, negativní, hraniční, slabě pozitivní, pozitivní, silně pozitivní ANCA profil Konfirmační test pro pozitivní fluorescenční obraz tzv. atypická ANCA. Testem lze prokázat 6 typů protilátek MPO, PR3, laktoferin, neutrofilní elastáza, katepsin G a BPI. Stabilita vzorku: 2 8 C 7 dní Metoda: ELISA Hodnocení: kvalitativní, negativní, hraniční, slabě pozitivní, pozitivní, silně pozitivní AMA protilátky proti mitochondriím Protilátky proti mitochondriím jsou namířeny proti antigenům vnější nebo vnitřní mitochondriální mitochondriální membrány. Rozlišuje se 9 typů (M1-M9). Jejich stanovení lze využít k diferenciální diagnostice různých hepatopatií, protilátky bývají přítomny u 85-98% pacientů s primární biliární cirhózou (PBC), dále u pacientů s chronickou aktivní hepatitidou (CAH) a kryptogenní cirhózou. Stabilita vzorku: 2 8 C 7 dní Metoda: nepřímá imunofluorescence ředění: 1:100 substrát: Krysí ledvina, krysí žaludek, opičí játra, krysí játra Hodnocení: kvalitativní, negativní, hraniční, slabě pozitivní, pozitivní, silně pozitivní LKM protilátky proti mikrozomálnímu antigenu jater s ledvin LKM se vyskytují u pacientů s rúznými typy autoimunitních hepatitid. Existují 3 typy LKM protilátek Stránka 16 z 30

17 Stabilita vzorku: 2 8 C 7 dní Metoda: nepřímá imunofluorescence ředění: 1:100 substrát: Krysí ledvina, krysí žaludek, opičí játra, krysí játra Hodnocení: kvalitativní, negativní, hraniční, slabě pozitivní, pozitivní, silně pozitivní ASMA protilátky proti hladkému svalu Proitlátky proti hladkému svalu jsou tvořeny heterogenní skupinou protilátek, které reagují s antigeny cytoskeletu (např. aktinem, vimetinem, desminem nebo tropomyosinem). Vyskytují se u pacientů s chorobami jater různé etiologie, u infekčních nemocí, zánětlivých střevních onemocnění a i u systémových imunopatologických onemocnění. Mohou být přítomny i u pacientů s infekční mononukleózou, PBC a chronickou aktivní hepatitidou. Stabilita vzorku: 2 8 C 7 dní Metoda: nepřímá imunofluorescence ředění: 1:100 substrát: Krysí ledvina, krysí žaludek, opičí játra, krysí játra Hodnocení: kvalitativní, negativní, hraniční, slabě pozitivní, pozitivní, silně pozitivní AMA-M2, LKM-1, SLA/LP, LC1 protilátky proti jaterním antigenům Kvalitativní stanovení autoprotilátek, dle přítomnosti určitých protilátek lze usuzovat na konkrétní hepatopatii. AMA-M2: pozitivita konfirmuje pozitivní fluorescenční obraz AMA protilátek, podporují diagnózu PBC. LKM-1: jsou asociovány s AIH 2.typu a jsou považovány za její hlavní imunologický marker SLA/LP: je diagnostický marker pro AIH LC-1 : jsou také specifické pro diagnostiku AIH, mohou se vyskytovat i s jinými autoprotilátkami při AIH. Metoda: imunoblot Stabilita vzorku: 2 8 C 7 dní Hodnocení: kvalitativní, negativní, hraniční, slabě pozitivní, pozitivní, silně pozitivní EMA IgA IgA protilátky proti endomziu Stanovení protilátek proti endomysiu (EMA) ve třídě IgA je pro svou vysokou senzitivitu a specifitu vhodný marker pro diagnózu celiakie (gluten-senzitivní enteropatie). Protilátky rychle reagují na dietu a jsou vhodné pro monitorování úspěšnosti a dodržování dietního režimu. Toto vyšetření se indikuje při celiakii, u dif. diagnostiky enteropatií, Duhringovy dermatitis herpetiformis, malnutrice apd. Stabilita vzorku: 2 8 C 7 dní Metoda: nepřímá imunofluorescence ředění: 1:10 substrát: opičí játra Stránka 17 z 30

18 Hodnocení: kvalitativní, negativní, hraniční, slabě pozitivní, pozitivní, silně pozitivní a-ttg IgA protilátky proti tkáňové transglutamináze Tkáňová transglutamináza je enzym, který je hlavním autoantigenem endomysia. Hraje hlavní roli v patogenezi celiakie. Stanovení protilátek proti tkáňové transglutamináze ve třídě IgA je moderní dignostický marker celiakie. Stabilita vzorku: 2 8 C 14 dní Metoda: ELISA Druh veličiny: ku/l Hodnocení: < 20,0 negativní 20,0 pozitivní a-ttg IgG protilátky proti tkáňové transglutamináze Vyšetření protilátek proti tkáňové transglutamináze ve třídě IgG má diagnostický význam u pacientů s celiakií, kteří zároveň trpí selektivním deficitem IgA. Stabilita vzorku: 2 8 C 14 dní Metoda: ELISA Hodnocení: kvalitativní, < 10 U/ml negativní 10 U/ml pozitivní a-dgp IgG protilátky proti deaminovanému gliadinu Stabilita vzorku: 2 8 C 14 dní Metoda: ELISA Druh veličiny: ku/l Hodnocení: < 10 ku/l negativní 10 ku/l pozitivní ASCA IgA, IgG protilátky proti Saccharomyces cerevisiae Protilátky proti fosfopeptidomannanu kvasinek Saccharomyces cerevisiaese se využívají v diferenciální diagnostice nespecifických střevních zánětů (IBD). Přítomnost protilátek je asociována s Crohnovou chorobou. Stabilita vzorku: 2 8 C 7 dní Metoda: nepřímá imunofluorescence ředění: 1:100, 1:1000 substrát: kvasinka Saccharomyces cerevisiae Hodnocení: kvalitativní, negativní, hraniční, slabě pozitivní, pozitivní, silně pozitivní APCA protilátky proti parietálním buňkám Stanovení se využívá se při diagnostice perniciózní anémie, vyznačuje se vysokou citlivostí. V okamžiku stanovení diagnózy má tyto protilátky 80-90% pacientů. Vyšetření je indikováno také Stránka 18 z 30

19 při karcinomu žaludku, vředové chorobě a chronické atrofické gastritidě, protilátky se rovněž vyskytují u pacientů s autoimunitními endokrinními poruchami. Stabilita vzorku: 2 8 C 7 dní Metoda: nepřímá imunofluorescence ředění: 1:10 substrát: Krysí žaludek Hodnocení: kvalitativní, negativní, hraniční, slabě pozitivní, pozitivní, silně pozitivní a-if protilátky proti intrinsic faktoru (vnitřnímu faktoru) Intrinsic faktor je glykoprotein, který se podílí na transportu vitaminu B12 přes střevní sliznici, umožňuje absorpci vitaminu B12 do krevního řečiště. A při jeho deficitu se rozvíjí anémie. Stanovení přítomnosti protilátek pomáhá rozlišit mezi autoimunitní perniciózní anémií, nonautoimunitní pern. anémií. Stabilita vzorku: 2 8 C 7 dní Metoda: nepřímá imunofluorescence ředění: 1:10 substrát: intrinsic faktor - biočipy Hodnocení: kvalitativní, negativní, hraniční, slabě pozitivní, pozitivní, silně pozitivní ACLA screen IgA/G/M protilátky proti kardiolipinu Vyšetření protilátek proti kardiolipinu, v komplexu s kofaktory (beta-2-glykoprotein I) jsou charakteristické pro antifosofolipidový syndrom, systémový lupus, často se vyskytují u pacientů s trombózami, trombocytopeniemi či opakovaných potratech. Stabilita vzorku: 2 8 C 7 dní Metoda: ELISA Doba odezvy: 14 dní Druh veličiny: ku/l Hodnocení: < 10 negativní 10 pozitivní a-beta2-glykoprotein I IgG, IgM Pro protilátky proti beta-2-glykoproteinu platí totéž co pro ACLA, detekujeme je u antifosfofolipidového syndromu, u trombocytopenií,u opakovaných abortů plodu a u systémových autoimunitních onemocnění, často se vykytují současně s ACLA. Stabilita vzorku: 2 8 C 7 dní Metoda: ELISA Druh veličiny: ku/l Hodnocení: < 5 negativní 5-8 hraniční > 8 pozitivní CIK cirkulující imunokomplexy Stránka 19 z 30

20 Stanovuje se hladina cirkulujících imunokomplexů, které se tvoří v přítomnosti nadbytku protilátky. CIK mohou být přítomny u různých infekčních (především bakteriálních ) onemocnění. Vyšší hodnoty jsou u onemocnění doprovázející poškození tkání v důsledku ukládání imunokomplexů (SLE, systémová onemocnění, revmatoidní artritida, glomerulonefritida, vaskulitida). Metoda je nespecifická a kromě cirkulujících imunokomplexů může detekovat také přítomnost dalších patologických proteinů, např. paraproteiny, kryoglobuliny atd.). Stanovení CIK má v klinice podpůrný význam. Vyšetřovaný materiál: srážlivá krev (sérum), plazma Stabilita vzorku: 2 8 C 24h Metoda: precipitace polyethylenglykolem a turbidimetrie Minimální požadované množství materiálu: 1 ml krve Druh veličiny: bezrozměrné Hodnocení: arbitrární jednotky negativní < 50j. pozitivní 50j. Celkové IgE Alergologie IgE U zdravých lidí se v séru vyskytuje v nepatrných koncentracích. Uplatňuje se v patogenezi přecitlivělosti 1. typu a v obraně proti parazitárním infekcím. Zvýšené hladiny jsou nalézány u atopických onemocnění (alergická rýma, astma, urtukárie, ekzém), některých imunodeficiencí a parazitárních infekcích. Hodnoty celkového a specifického IgE nemusí korelovat, normální hodnoty IgE nevylučují alergii. Stabilita vzorku: 2 8 C Metoda: FEIA Minimální požadované množství materiálu: 1 ml krve Druh veličiny: ku/l Hodnocení: věk IgE 0-1 rok let let let a více Specifické IgE proti potravinovým alergenům Semikvantitativní stanovení souboru specifických IgE protilátek proti potravinovým alergenům metodou imunoblot. Kód alergenu f1 f75 f2 f45 f4 f5 f9 Název alergenu Vaječný bílek Vaječný žloutek Kravské mléko Kvasnice Pšeničná mouka Žitná mouka Rýže Stránka 20 z 30

21 f14 Sojové boby f13 Podzemnice olejná f17 Líska f20 Mandle f49 Jablko f84 Kiwi f237 Meruňka f25 Rajče f31 Mrkev f35 Brambora f85 Celer f3 Treska f23 Krab Stabilita vzorku: při 2-8 C 14 dní Metoda: imunoblot Minimální požadované množství materiálu: 2 ml krve pro panel alergenů Druh veličiny: třída pozitivity Hodnocení: výsledky se vydávají v RAST třídách Třída pozitivity (RAST) Výsledek vyšetření v ku/l 0 < 0,35 Negativní 1 0,5-0,7 Hraniční 2 0,7-3,5 Slabě pozitivní 3 3,5-17,5 Pozitivní 4 17,5-50 Silně pozitivní Velmi silně pozitivní 6 > 100 Velmi silně pozitivní Specifické IgE proti inhalačním alergenům Semikvantitativní stanovení souboru specifických IgE protilátek proti inhalačním alergenům. Alternativou u dětských pacientů je pediatrický inhalační soubor, kterým nelze vyšetřit specifické IgE proti g1, g3, t7 a w1, ty jsou nahrazeny w8, e6, e82 a e84. Inhalační soubor Kód alergenu g1 g3 g6 g12 t2 t3 t4 t7 w1 w6 w9 d1 d2 e1 Název alergenu Tomka vonná Srha Bojínek luční Šlechtěné žito Olše Bříza Líska Dub Ambrosie Pelyněk černobýl Jitrocel Dermatophagoides pteronyssinus Dermatophagoides farinae Kočka Stránka 21 z 30

22 e2 Pes e3 Kůň m1 Penicillium notatum m2 Cladosporium herbarum m3 Asperillus fumigatus m6 Alternaria alternata Pediatrický inhalační soubor Kód alergenu Název alergenu g1 Tomka vonná g12 Šlechtěné žito t2 Olše t3 Bříza t4 Líska w6 Pelyněk černobýl w8 Pampeliška w9 Jitrocel d1 Dermatophagoides pteronyssinus d2 Dermatophagoides farinae e1 Kočka e2 Pes e3 Kůň e6 Morče e82 Králík e84 Křeček m1 Penicillium notatum m2 Cladosporium herbarum m3 Asperillus fumigatus m6 Alternaria alternata Stabilita vzorku: při 2-8 C 14 dní Metoda: imunoblot Minimální požadované množství materiálu: 2 ml krve pro panel alergenů Druh veličiny: třída pozitivity Hodnocení: výsledky se vydávají v RAST třídách Třída pozitivity (RAST) Výsledek vyšetření v ku/l 0 < 0,35 Negativní 1 0,5-0,7 Hraniční 2 0,7-3,5 Slabě pozitivní 3 3,5-17,5 Pozitivní 4 17,5-50 Silně pozitivní Velmi silně pozitivní 6 > 100 Velmi silně pozitivní Specifické IgE proti konkrétním alergenům Stanovení koncentrace specifických IgE protilátek v periferní krvi je nejpoužívanějším in vitro testem pro diagnostiku alergií zprostředkovaných IgE. Interpretace výsledků je vždy nutno provést společně s posouzením klinického stavu pacienta, případně i s posouzením výsledků kožních testů. Seznam alergenů, které lze vyšetřit je v elektronické žádance, viz Příloha 3. Stránka 22 z 30

23 Stabilita vzorku: při 2 8 C 7 dní, pro dlouhodobé skladování zamrazit Metoda: RISA, CAP Minimální požadované množství materiálu: 50 µl pro jeden alergen Doba odezvy: 1 měsíc Druh veličiny: třída pozitivity Hodnocení: výsledky se vydávají v RAST třídách Třída pozitivity (RAST) Výsledek vyšetření v ku/l 0 < 0,35 Negativní 1 0,5-0,7 Hraniční 2 0,7-3,5 Slabě pozitivní 3 3,5-17,5 Pozitivní 4 17,5-50 Silně pozitivní Velmi silně pozitivní 6 > 100 Velmi silně pozitivní QUANTIFERON Genetickou analýzou byly identifikovány proteiny ESAT 6, CFP 10, a TB7.7., které jsou specifické pro patogenní druhy komplexu Mycobacterium tuberculosis a nevyskytují se ve vakcinačních kmenech BCG a ani v netuberkulózních mykobakteriích (s výjimkou M. kansassi, M. szulgai a M. marinum). V případě infekce M. tuberculosis má pacient v krvi efektorové Th 1 T lymfocyty, které po stimulaci těmito antigeny in vitro produkují interferon γ. Test je založený na vyšetření specifické buněčné odpovědi, kde se imunochemicky měří hladina INFγ. Vyšetřovaný materiál: nesrážlivá krev, odběr do 3 speciálních odběrových zkumavek, které laboratoř zasílá na vyžádání Stabilita vzorku: naplněné zkumavky skladovat při pokojové teplotě, do laboratoře zaslat nejpozději do 6 hod po odběru, následně zkumavky umístit do 37 C inkubátoru na 24 hod, stažená plazma při 2-8 C 3 měsíce Minimální požadované množství materiálu: 3 x 1 ml heparinizované krve ve spec. zkumavkách Doba odezvy: 14 dní Hodnocení: pozitivní, negativní, neurčeno negativní < 0,35 index, negativní, nepravděpodobná infekce M. tuberculosis pozitivní > 0.35 index, pozitivní, pravděpodobná infekce M. tuberculosis Buněčná imunita HLA B27, HLA-B7 Test je určen pro kvantifikaci buněčných populací exprimující antigen HLA-B27, který je přítomen až u 90% pacientů postižených ankylózující spondylartritidou (AS). Myší monoklonální protilátka HLA-ABC-m3rozpoznává antigen HLA-B27, může však zkříženě reagovat HLA-B7, jeho stanovení se automaticky provádí u všech pozitivních nálezů HLA-B27. Vyšetřovaný materiál: nesrážlivá krev (EDTA). Stabilita vzorku: C 6 hodin Metoda: průtoková cytometrie Minimální požadované množství materiálu: 2 ml Doba odezvy: 2 týdny Druh veličiny: bezrorměrné Hodnocení: kvalitativní Stránka 23 z 30

24 IMUNOFENOTYPIZACE buněčných subpopulací lymfocytů Základní fenotypizace periferní krve: metoda slouží ke stanovení relativního zastoupení leukocytárních populací v periferní krvi na základě exprese povrchových markerů metodou průtokové cytometrie s využitím fluorescenčně značených monoklonálních protilátek proti povrchovým znakům leukocytů (CD3, CD4, CD8, CD14, CD16/56, CD19). Imunofenotypizace krevních malignit: lze stanovit přítomnost, liniovou příslušnost a případně i diferenciační stupěň nádorových buněk hematopoetického původu. Fenotypizace bronchoalveolární laváže: metoda doplňuje diagnostiku intersticiálních plicních onemocnění (CD 45, CD14, CD3, CD4, CD8) Vyšetřovaný materiál: nesrážlivá krev (heparin,edta), kostní dřeň, punktát, mozkomíšní mok Stabilita vzorku: C 6 hodin Kritická hodnota: viz. tabulka kritických hodnot Doba odezvy: 5 dení Druh veličiny: relativní počty v % Hodnocení: Normální hodnoty periferní krve: věk % abs. počet (x 10 3 ) WBC 0-1 6,5-12, ,0-10, ,5-10, ,0-10,0 dospělí 4,0-10,0 CD ,0-75,0 1,70-5, ,0 1,50-4, ,0-80,0 1,20-3,50 dospělí 60,0-80,0 0,90-2,50 CD ,0-60,0 1,60-4, ,0-55,0 0,9-2, ,0-55,0 0,65-2,50 dospělí 30,0-55,0 0,40-1,60 CD ,0-35,0 0,70-3, ,0-38,0 0,55-1, ,0-35,0 0,35-1,30 dospělí 15,0-35,0 0,25-1,00 CD ,0-39,0 0,60-3, ,0-35,0 0,40-2, ,0-25,0 0,25-0,60 dospělí 7,0-18,0 0,10-0,35 CD ,0-25,0 0,30-1, ,0-20,0 0,10-0, ,0-20,0 0,10-0,50 dospělí 6,0-20,0 0,10-0,40 Test aktivace basofilů Stránka 24 z 30 CD63 Test aktivace basofilů (BAT) je metoda in vitro diagnostiky IgE zprostředkované alergické reakce (reakce I. typu). Detekce basofilů z plné krve pomocí průtokové cytometrie využívá značení CD203c a aktivačního znaku CD63 pomocí monoklonální protilátky. Bylo prokázáno, že lidské bastily aktivované in vitro (alergenem nebo anti IgE protilátkami) prostřednictvím jejich vysokoafinitního receptoru pro IgE exprimují znak CD63 na své membráně. Exprese CD63 na povrchu basofilů dobře koreluje s jejich degranulací.

25 Vyšetřovaný materiál: nesrážlivá krev (heparin) Stabilita vzorku: materiál dopraven do laboratoře nejpozději do 2 hod od odběru, pacient by měl 48 hod před odběrem vysadit léky typu antagonistů leukotrienů a 2 týdny před odběrem systémové kortikosteroidy. Doba odezvy: 2 dny Druh veličiny: relativní počty v % Hodnocení: hodnotí se % CD63 pozitivních basofilů Pro různé druhy alegenů stanoveny odlišné meze pozitivity: Inhalační + potravinové alergeny >15% Hmyzí jedy, latex >10% Léky >5% Pro interpretaci výsledků jsou nezbytnou součástí analýzy negativní a pozitivní kontrola. Po stimulaci basofilů anti IgE protilátkou musí být alespoň 15% basofilů CD63+ (pozitivní kontrola). V opačném případě je pacient považován za non-respondera a výsledek testu nelze hodnotit. Negativní kontrola slouží k vyloučení spontánní aktivace basofilů (neměla by překročit 5%). Stránka 25 z 30

26 Příloha č. 3 Seznam vyšetřovaných alergenů B20 IgE/vlna ovčí zprac. B21 IgE/vlna ovčí nezpr. B35 IgE/latex B52 IgE/glutamová kyselina B60 IgE/nikl B101 IgE/kyselina benzoová B103 IgE/kyselina sorbová B109 IgE/chrom B112 IgE/kobalt B112 IgE/stříbro B113 IgE/zlato B116 IgE/zinek B118 IgE/chinolinová žluť B119 IgE/potravinářská žluť B122 IgE/Tartrazin C5 IgE/smrk ztepilý C6 IgE/borovice C14 IgE/jedle bílá D1 IgE/D.pteronyssinus D2. IgE/D.farinae E1... IgE/kočka-srst + epitelie E2... IgE/pes-srst + epitelie E3... IgE/kůň-srst + epitelie E6 IgE/morče-srst E7 IgE/holub - trus E10 IgE/papoušek peří E11 IgE/holub - peří E18 IgE/morče-trus E24 IgE/ krysa - trus E25 IgE/ myš - trus E62 IgE/zlatý křeček-srst E63. IgE/králík-srst E64 IgE/ovce-srst E66 IgE/kuře - peří E67 IgE/husa-peří E68 IgE/andulka-peří E69 IgE/andulka-trus E73 IgE/krysa E86 IgE/kachna-peří E92 IgE/papoušek-trus F1 IgE/bílek z kuřecích vajec F2 IgE/mléko kravské F3.. IgE/treska obecná F4 IgE/pšeničná mouka F5.. IgE/žitná mouka F6 IgE/ječná mouka F7... IgE/ovesná mouka F8... IgE/kukuřičná mouka F9.. IgE/rýže F10 IgE/meruňka F11 IgE/pohanková mouka F12. IgE/hrách setý F13.. IgE/podzemnice olejná F14. IgE/sojové boby Stránka 26 z 30

27 F15.. IgE/bílé fazole F16. IgE/vlašský ořech F17.. IgE/lískový ořech F18 IgE/para ořech F19 IgE/jedlý kaštan F20.. IgE/mandle F22 IgE/pstruh F23 IgE/krab/garnát F24 IgE/kreveta F25.. IgE/rajské jablko F27. IgE/celer F28. IgE/zelené jablko F29 IgE/banán F30. IgE/hruška F31.. IgE/grapefruit F32. IgE/citron F33.. IgE/pomeranč F34. IgE/mandarinka F35. IgE/brambor F36 IgE/kokosový ořech F37.. IgE/slávka F38 IgE/špenát F40 IgE/tuňák F41 IgE/losos F43. IgE/petržel F44.. IgE/jahoda F45. IgE/droždí F47 IgE/česnek F48 IgE/cibule F49 IgE/broskev F50 IgE/hroznové víno F51 IgE/kasein F52 IgE/laktalbumin F53 IgE/laktoglobulin F54 IgE/lepek F55 IgE/úhoř F60 IgE/hovězí syrové F61 IgE/květák vařený F63. IgE/mrkev F65. IgE/čočka F66 IgE/pór F67 IgE/ovalbumin F71 IgE/langusta F72 IgE/ananas F73 IgE/třešeň ptačí F75.. IgE/vaječný žloutek F77 IgE/kakao F78 IgE/čokoláda F83... IgE/kuřecí maso F84. IgE/kiwi F86 IgE/sezamový šrot F87 IgE/sojový šrot F88 IgE/šrot ze lněných semen F89 IgE/slunečnicová jádra F91 IgE/brokolice F93 IgE/eidam Stránka 27 z 30

28 F94.. IgE/okurka F97 IgE/kedlubna F98 IgE/makrela F99 IgE/mango F100 IgE/hlávkový salát F101 IgE/mák F102 IgE/borůvky F103 IgE/pistácie F112 IgE/švestka F113 IgE/vařené vepřové F114 IgE/vařené hovězí F119 IgE/malina F120 IgE/sepie obecná F124 IgE/ústřice F127 IgE/kešu-jádra F128 IgE/rybíz červený F130 IgE/pekanový ořech F134 IgE/datle F135 IgE/červená řepa F138 IgE/kukuřice (zelenina) F144 IgE/Sardinka F154 IgE/kapr F155 IgE/králičí maso (syrové) F157 IgE/treska tmavá F158 IgE/kozí mléko F172 IgE/štika obecná F173 IgE/treska jednoskvrnná F179 IgE/kefír F186 IgE/ředkvička G1. IgE/tomka vonná G3. IgE/srha laločnatá G6. IgE/bojínek luční G12 IgE/žito I1 IgE/včela medonosná I3 IgE/vosa I6 IgE/šváb I7 IgE/americká vosa I16 IgE/sršeň M4 IgE/Aspergil.fumigatus M1 IgE/Alternaria tenuis M15 IgE/Cladosp.herbarum M29 IgE/Penic.notatatum P5 IgE/Penicilloyl V+HSA P6 IgE/Penicilloyl G+HSA P7 IgE/Anoxicillin + HSA P8 IgE/Ampicillin + HSA P9 IgE/Tetracyclin + HSA P10 IgE/Trimethoprim + HSA P11 IgE/Cephalosporin+HSA P12 IgE/Doxycyclin + HSA P13 IgE/Paracetamol + HSA P14. IgE/Acetylsal.k.+HSA P18 IgE/Sulfomethoxazol + HSA P22 IgE/Streptomycin P61 IgE/Erythromycin P78 IgE/Ibuprofen Stránka 28 z 30