recomline Yersinia IgG 2.0 recomline Yersinia IgA (IgM) 2.0

Podobné dokumenty
recomline Yersinia IgG recomline Yersinia IgA (IgM)

BlueWell Intrinsic Factor IgG ELISA Cat.. IF01-96

Objednací číslo Určení Třída IgG Substrát Formát EI G Parainfluenza viry typu 1. Ag-potažené mikrotitrační jamky

BlueDot Milk Intolerance IgG Cat.. BSD-24

MASTAZYME TM Cardiolipin

Návod a protokol k praktickým cvičením z lékařské biochemie

BlueDot ANA+DFS-70 IgG Cat.. RLH12D-24

CHORUS MUMPS IgG (36 testů)

Yersinia sp. Imunoenzymatické soupravy k diagnostice yersiniových infekcí

MASTABLOT BORRELIA. Western Blot pro detekci IgG / IgM protilátek proti Boreliím ze séra a plazmy. Návod na použití

ELISA-VIDITEST anti-hsv 1+2 IgA

CHORUS HSV 1 SCREEN (36 testů)

recomline Toxoplasma IgG [Avidity] recomline Toxoplasma IgM recomline Toxoplasma IgA

ProFlow Rotavirus-Adenovirus Combi

MASTAZYME YERSINIA. Enzymatická imunoesej pro detekci a kvantifikaci lidských protilátek IgG/IgM a IgA proti Yersinia enterocolitica v séru a plasmě

ELISA-VIDITEST anti-chlamydia pneumoniae IgM

Rapid-VIDITEST. H. pylori. (Jednokrokový kazetový test pro in vitro diagnostiku Helicobacter pylori ve stolici ) Návod k použití soupravy

Objednací číslo Určení Ig-třída Substrát Formát DP E Inhalační a potravinové alergeny

SeroPertussis TM IgA/IgM

HbA1c. Axis - Shield. Společnost je zapsána v obchodním rejstříku Městského soudu v Praze, odd. C vložka 1299

DIAQUICK Mononukleóza kazeta z plné krve, séra nebo plazmy

Dodává: GALI spol. s r.o., Ke Stadionu 179, Semily tel fax

Rapid-VIDITEST. H. pylori. (Jednokrokový blisterový test pro in vitro diagnostiku Helicobacter pylori ve stolici) Návod k použití soupravy

recomblot HEV IgG/IgM

Proflow Adenovirus. KATALOGOVÉ ČÍSLO: PL.3011 (20 testů)

CRP. Axis - Shield. SINGLE TESTS CRP kvantitativní stanovení pomocí přístroje NycoCard Reader II

Rapid-VIDITEST RSV. (Jednokrokový kazetový test pro in vitro diagnostiku Respiračního syncytiálního viru z nosních výtěrů, výplachů a aspirátů)

PSA ELISA test pro kvantitativní stanovení celkového prostatického specifického antigenu (PSA) v lidském séru

IMMUVIEW L. PNEUMOPHILA AND L. LONGBEACHE URINARY ANTIGEN TEST

Mycoplasma pneumoniae IgM ELISA

DEMEDITEC Bordetella pertussis IgA ELISA

PIGTYPE YOPSCREEN. Verze /5 (5 x 96 testů)

CHORUS COPROCOLLECT. Výrobce: DIESSE Diagnostica Senese Via delle Rose Monteriggioni (Siena) Itálie

Rapid-VIDITEST Adenovirus Resp.

SD Rapid test TnI/Myo Duo

Návod k použití Informace o produktech jsou dostupné na internetových stránkách:

Protilátky proti Helicobacter pylori (IgG) Návod na použití ELISA testu

Rapid-VIDITEST RSV-Adenovirus Resp.

Progesteron ELISA test pro kvantitativní stanovení progesteronu v lidském séru nebo plazmě

CHORUS. CHLAMYDOPHILA PNEUMONIAE IgA

ELISA-VIDITEST anti-vca EBV IgM

Návod k použití. Yersinia IgA ELISA

Protilátky proti ovariu ELISA

ELISA-VIDITEST anti-toxo IgA

CHORUS. MYCOPLASMA PNEUMONIAE IgA

Serologické vyšetřovací metody

CHORUS. MYCOPLASMA PNEUMONIAE IgM

Treponema pallidum. Imunoenzymatické soupravy k diagnostice syfilis

Objednací číslo Protilátky proti Třída Ig Substrát Formát EI M Chřipka A IgM Ag-potažené mikrotitrační jamky

CHORUS a-tpo (36 testů)

Protilátky proti virulentním faktorům Yersinia enterocolitica (IgA) Návod na provedení WESTERNBLOTU. Objednací číslo Určení Ig-Třída Substrát Formát

Objednací číslo Protilátky proti Třída Ig Substrát Formát EI G Chřipka A IgG Ag-potažené mikrotitrační jamky

Rapid-VIDITEST Influenza A+B

MASTAFLUOR TM Toxoplasma

Návod k použití. Yersinia IgM ELISA. ELISA test. pro detekci a kvantifikaci lidských protilátek IgM proti Yersinia enterocolitica

CEA ELISA test pro kvantitativní stanovení karcinoembryonického antigenu (CEA) v lidském séru

MASTAZYME TETANUS - ANTITOXIN

CHORUS BETA 2-GLYCOPROTEIN-M

CHORUS. MYCOPLASMA PNEUMONIAE IgG

CHORUS INSULIN (36 testů)

Varizella-Zoster Virus IgA ELISA

IMUNOENZYMATICKÁ CAPTURE SOUPRAVA KE KVALITATIVNÍMU STANOVENÍ PROTILÁTEK TŘÍDY

CHORUS ASCA-A (36 testů)

Objednací číslo Určení Ig-třída Substrát Formát EI M Chlamydia pneumoniae IgM Ag-potažené mikrotitrační jamky

PYLORITOP Ag+ Kat.č.: 5539 Pouze pro in vitro diagnostiku

GanglioCombi. se směsí enzymů značených IgG a IgM. anti-ganglioside protilátky ELISA (GA1, GM1, GM2, GD1a, GD1b a GQ1b)

Rapid-VIDITEST Listeria Card (Jednokrokový kazetový test pro detekci Listeria monocytogenes.)

MASTAZYME TM ANCA. PR3 (c-anca) MPO (p-anca)

AESKULISA. Crohn s-check. Objednací kód: 3509

IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE CYTOMEGALOVIROVÉ INFEKCE

Rapid-VIDITEST RSV. (Jednokrokový kazetový test pro in vitro diagnostiku Respiračního syncytiálního viru z nosních výtěrů, výplachů a aspirátů)

PŘÍUŠNICE IgM ELISA test na stanovení protilátek IgM proti viru příušnic v lidském séru.

AESKULISA. Objednací kód: 3601

Rapid-VIDITEST. Rota-Adeno Card. (Jednokrokový kazetový test pro in vitro diagnostiku rotavirů a adenovirů) Návod k použití soupravy

ELISA-VIDITEST PAU ve vodě

VZV IgM ELISA test na stanovení protilátek IgM proti VIRU PLANÝCH NEŠTOVIC (Varicella zoster virus-vzv) v lidském séru

ELISA-VIDITEST anti-toxo IgM capture

CHORUS GLIADIN-G (36 testů)

ELISA-VIDITEST anti-mycoplasma pneumoniae IgA OD-139

Varizella-Zoster Virus IgG ELISA

AESKULISA. Objednací kód: BioVendor - Laboratorní medicína a.s. Tel: Fax: Tel:

CHORUS dsdna-g (36 testů)

HSV IgM ELISA test firmy Human na stanovení protilátek IgM proti Herpes simplex viru (HSV)

CHORUS AMA-M (36 testů)

MagPurix Viral Nucleic Acid Extraction Kit

MONO - Rychlý test na mononukleózu (plná krev/sérum/plazma) Příbalová informace

Sérologický kardiolipinový a netreponemový test určený pro rychlou detekci Syphilisu KATALOGOVÉ ČÍSLO: RPRL-0100 (100 testů)

AESKULISA. Objednací kód: BioVendor - Laboratorní medicína a.s. Tel: Fax: Tel:

ELISA-VIDITEST anti-mycoplasma pneumoniae IgG. Návod k použití soupravy

EBV VCA EBV EBNA-1 EBV EA-D

Objednací číslo Určení Třída IgG Substrát Formát EI G Tetanus toxoid IgG Ag-potažené mikrotitrační jamky

CA15-3 IRMA Souprava CA15-3 IRMA umožňuje přímé in-vitro kvantitativní stanovení s tumorem asociovaného antigenu CA15-3 v lidském séru

α-globin StripAssay Kat. číslo testů 2-8 C

Toxoplasma gondii. Imunoenzymatické soupravy k diagnostice toxoplazmózy

CHORUS SS-A (36 testů)

Objednací číslo Protilátky proti Třída Ig Substrát Formát DY M DY M

AESKULISA. Gliadin-A. Objednací kód: BioVendor - Laboratorní medicína a.s. Tel: Fax: Tel:

CHORUS ANA-Screen (36 testů)

Aglutinace Mgr. Jana Nechvátalová

ZARDĚNKY IgG. ELISA test na stanovení protilátek IgG proti viru zarděnek v lidském séru. Balení Kat.č. : testů kompletní souprava

Transkript:

recomline Yersinia IgG 2.0 recomline Yersinia IgA (IgM) 2.0 recomline Yersinia IgG 2.0 katalogové číslo: 5121 recomline Yersinia IgA (IgM) 2.0 - katalogové číslo: 5122 Pouze pro diagnostiku in vitro 1. ÚVOD RecomLine Yersinia IgG, IgA, (IgM) je kvalitativní in vitro test ke stanovení protilátek IgG, IgA, (IgM) proti Yersinia enterocolitica a Yersinia pseudotuberculosis v lidském séru nebo plasmě. 2. POUŢITÍ RecomLine Yersinia IgG, IgA, (IgM) může být použit jako skreeningový nebo konfirmační test. RecomLine Yersinia IgG, IgA, (IgM) je imunoblot. Díky jednotlivě řazeným antigenům tento test umožňuje na rozdíl od ELISA testů stanovení specifických protilátek proti jednotlivým antigenům Yersinia enterocolitica a Yersinia pseudotuberculosis. V testu jsou použity rekombinantní antigeny: Vnější proteiny yersinií Yersinia Outer Proteins (YOP-M, YOP-D, YOP-E), V-AG, PsaA a MyfA. Díky použití druhově specifických antigenů, jako je PsaA (specifický pro Y. pseudotuberculosis) a MyfA (specifický pro Y. enterocolitica), je také možné rozlišit infekci Y. enterocolitica nebo Y. pseudotuberculosis. 3. PRINCIP TESTU Vysoce purifikované rekombinantní antigeny jsou navázány na nitrocelulózovou membránu. 1. Testovací stripy jsou inkubovány se zředěnými vzorky séra nebo plazmy. Během inkubace se protilátky přítomné v testovaných vzorcích váží k antigenům na proužcích. 2. Nenavázané protilátky jsou odstraněny promytím. 3. V dalším kroku jsou stripy ikubovány s anti-lidskými IgG, IgM a/nebo IgA protilátkami konjugovanými s křenovou peroxidázou (HRP). 4. Nenavázané konjugované protilátky jsou odstraněny promytím. 5. Specificky navázané protilátky jsou detekovány při barevné reakci katalyzované křenovou peroxidázou. Došlo-li k vazbě protilátky na antigen, objeví se na odpovídajícím místě testovacího proužku tmavý band. Na horním konci testovacího proužku jsou umístěny kontrolní bandy: a) Kontrola reakce - umístěna těsně pod číslem stripu, tento band se musí objevit při každé reakci s jakýmkoli testovaným sérem či plasmou. b) Kontrolní bandy reakce konjugátu - IgG/IgM/IgA slouží jako kontrola reakce odpovídající třídy protilátek. Pokud je proužek použit např. k detekci IgG protilátek, objeví se u kontroly IgG konjugátu zřetelný band. Totéž platí pro IgM a IgA protilátky. c) Cut-off kontrola intenzita zbarvení tohoto bandu umožňuje posouzení reaktivity bandů pro jednotlivé antigeny (viz 9.2. Hodnocení). 4. REAGENCIE 4.1. Obsah soupravy Souprava obsahuje reagencie v množství potřebném pro 20 vyšetření. Každá souprava obsahuje: Promývací pufr A 10 x 100 ml Promývací pufr A (10x koncentrovaný): obsahuje fosfátový pufr, NaCl, KCl, detergent a konzervant MIT (0.1%) a Oxypyrion (0.2%) Substrát TMB 40 ml Roztok substrátu TMB (tetramethylbenzidin, přímo k použití) Mléčný prášek 5 g Sušený mléčný prášek Inkubační vaničky 2 Inkubační vaničky Návod k pouţití 1 Návod k použití Vyhodnocovací formulář 1 Vyhodnocovací formulář Pinzeta 1 Zelená pinzeta 4.1.1. recomline Yersinia IgG Mimo reagencie uvedené v bodu 4.1. souprava dále obsahuje: Testovací stripy 2 zkumavky Zkumavky s 10 očíslovanými testovacími stripy. Konjugát IgG 500 μl IgG konjugát: králičí anti-lidské protilátky (100x koncentrovaný), obsahuje NaN 3 (< 0.1%), MIT (< 0.1%) a Chloracetamide (<0.1%), zelený vršek LABOSERV s.r.o., Hudcova 78b, 612 00 Brno 1/8 PM, 16. 5. 2014

4.1.2. recomline Yersinia IgA Mimo reagencie uvedené v bodu 4.1. souprava dále obsahuje: Testovací stripy 2 zkumavky Zkumavky s 10 očíslovanými testovacími stripy. Konjugát IgA 500 μl IgA konjugát: králičí anti-lidské protilátky (100x koncentrovaný), obsahuje NaN 3 (< 0.1%), MIT (< 0.1%) a Chloracetamide (<0.1%), bezbarvý vršek Pro stanovení IgM protilátek je také možné objednat k soupravě recomline Yersinia IgA: Konjugát IgM Kat. č.: 5132 500 μl 4.2. Další potřebný materiál, který není součástí dodávky Inkubační vaničky Deionizovaná voda (vysoké kvality) Plastové pinzety Horizontální třepačka Vortex Odsávačka nebo podobné zařízení Odměrné válce, 50 ml a 1000 ml Mikropipety a špičky, 20 µl a 1000 µl 10 ml pipeta nebo dispenzor Stopky Savé papírové ručníky Jednorázové ochranné rukavice Plastový kontejner na biohazard materiál IgM konjugát: králičí anti-lidské protilátky (100x koncentrovaný), obsahuje NaN 3 (< 0.1%), MIT (< 0.1%) a Chloracetamide (<0.1%), fialový vršek 4.3. Další reagencie a příslušenství pro kontrolu kvality Externí kontroly nejsou součástí soupravy. Doporučují se s každou novou šarží či dodávkou. Každá laboratoř si stanovuje vlastní plánování kontrol. IgG + kontrola Pozitivní kontrolní sérum lidského původu, červený vršek, anti 200 μl Kat.č.: 5121C+ HIV 1 / 2, anti-hcv a HBS-Ag negativní IgA + kontrola Pozitivní kontrolní sérum lidského původu, žlutý vršek, anti 200 μl Kat.č.: 5122C+ HIV 1 / 2, anti-hcv a HBS-Ag negativní IgG/IgA kontrola Negativní kontrolní sérum lidského původu, modrý vršek, anti 200 μl Kat.č.: 5121/5122C- HIV 1 / 2, anti-hcv a HBS-Ag negativní 5. SKLADOVÁNÍ A MANIPULACE SE SOUPRAVOU Reagencie skladujte při teplotě 2 8 o C, nezmrazujte. Před provedením testu temperujte všechny komponenty soupravy minimálně 30 minut při 18 25 o C (laboratorní teplota). Samotný test se provádí při laboratorní teplotě. Shodující se reagencie (dle tištěných symbolů) mohou být použity u různých imunoblotů odpovídající šarže. Dodržujte prosím dobu expirace jednotlivých komponent soupravy. Před použitím důkladně promíchejte koncentrované reagencie a vzorky. Vyhněte se tvorbě pěny. Zkumavku obsahující testovací proužky otevírejte až těsně před použitím, aby nedocházelo ke kondenzaci vody uvnitř zkumavky. Nepoužité proužky musí být skladovány ve zkumavce při 2-8 o C. Zkumavku pevně uzavřete, proužky nesmí před provedením testu navlhnout! Jednotlivé proužky jsou vzestupně očíslovány a označeny zkratkou daného testu. Po uplynutí doby exspirace uvedené na obalu soupravy nelze zaručit kvalitu výsledků. Chraňte všechny komponenty soupravy před přímým slunečním světlem. Obzvlášť roztok substrátu (TMB) je citlivý na světlo. Test musí být proveden pouze zaškolenými a kvalifikovanými pracovníky. Dodatečné modifikace soupravy nebo metodiky testu mohou vést k chybným výsledkům. Křížové kontaminace vzorků pacientů nebo konjugátů může vést k nepřesným výsledkům testů. Přidávejte vzorky od pacientů, testovací proužky a roztoky konjugátu opatrně. Ujistěte se, že inkubační roztoky nepřetékají do jiných jamek. Opatrně odstraňujte kapaliny. Stripy musí být zcela mokré a ponořené během celého procesu. Test je vhodný i pro zpracování na automatu. Bližší informace žádejte u svého dodavatele. LABOSERV s.r.o., Hudcova 78b, 612 00 Brno 2/8 PM, 16. 5. 2014

6. UPOZORNĚNÍ A ZVLÁŠTNÍ OPATŘENÍ Pouze pro in vitro diagnostiku. Všechny krevní produkty musí být považovány za potenciálně infekční Testovací stripy byly připraveny z inaktivovaných celobuněčných lyzátů, bakteriálních nebo virových antigenů. Po přidání vzorků pacienta nebo kontrol, musí být testovaný strip považován za infekční a podle toho s ním musí být zacházeno. Pracujte v ochranných rukavicích. Reagencie obsahují antimikrobiální látky a konzervanty - azid sodný, MIT (Methylisothiazolone), oxypyrion, chloracetamid a hydroxid vodíku. Vyvarujte se proto kontaktu s kůží a sliznicemi. Azid sodný může po kontaktu s těžkými kovy tvořit explozivní azidy (měď a olovo). Všechny odsáté kapaliny musí být shromažďovány. Všechny sběrné kontejnery musí obsahovat vhodné dezinfekční prostředky pro inaktivaci lidských patogenů. Všechny reagencie a materiály kontaminované potenciálně infekčním vzorkem musí být vydesinfikovány nebo zlikvidovány podle daných hygienických předpisů. Koncentrace a inkubační doby uvedené výrobcem musí být dodrženy. Inkubační misky nepoužívejte opakovaně. S testovacími proužky zacházejte opatrně pomocí plastové pinzety. Nenahrazujte nebo nemíchejte reagencie s reagenciemi od jiných výrobců. Přečtěte si pozorně návod k použití před vlastním testováním a potom postupujte podle jednotlivých kroků. Odchylka od zkušebního protokolu popsanému v návodu k použití může vést k chybným výsledkům. 7. ODBĚR VZORKŮ A PŘÍPRAVA REAGENCIÍ 7.1. Vzorky Jako vzorek lze použít krevní sérum nebo plazmu (citrát, EDTA, heparin, CPD), které byly co nejdříve po odebrání separovány od koagula, abychom zabránili hemolýze. Předcházejte mikrobiální kontaminaci vzorků. Nerozpustné částice je nutné ze vzorků odstranit ještě před jejich inkubací. Použití tepelně inaktivovaných, lipemických, ikterických, hemolytických nebo zakalených vzorků není doporučeno. Upozornění! Nemůžete-li test provést okamžitě, mohou být vzorky skladovány při teplotě 2-8 o C až 2 týdny. Dlouhodoběji je lze skladovat při minimální teplotě -20 o C. Opakované zmrazování a rozmrazování vzorků není doporučováno, neboť se tím ovlivňuje kvalita výsledků. 7.2. Příprava roztoků 7.2.1. Příprava pracovního ředění promývacího pufru A Pufr je používán nejen k promývání, ale i k ředění vzorků séra a konjugátu. Podle počtu testovaných stripů připravte odpovídající objem promývacího pufru A (viz tabulka). Nejprve rozpusťte mléčný prášek v koncentrátu promývacího pufru A a pak ke směsi přilijte deionizovanou vodu (ředění 1+9). Množství požadované pro definovaný počet testovacích proužků je třeba vypočítat pomocí následujícího vzorce (není počítáno s mrtvým objemem ). Reagencie vzorec Příklad: 5 stripů mléčný prášek (g) = počet stripů x 0,1 g = 5 x 0,1 g = 0,5 g koncentrovaný promývací pufr A (ml) = počet stripů x 2 ml = 5 x 2 ml = 10 ml deionizovaná voda (ml) = počet stripů x 18 ml = 5 x 18 ml = 90 ml pracovní ředění promývacího pufru A (ml) = počet stripů x 20 ml = 5 x 20 ml = 100 ml Pracovní ředění promývacího pufru A může být při 2-8 C skladováno 4 týdny. Pracovní ředění promývacího pufru A je mírně zakalené a bez zápachu. 7.2.2. Příprava roztoku konjugátu Roztok konjugátu musí být připraven těsně před použitím. Pracovní ředění roztoku konjugátu není možné dále skladovat. 1 díl koncentrovaného konjugátu se ředí se 100 díly pracovního ředění promývacího pufru A (1+100). Množství požadované pro určitý počet proužků se vypočítá podle následujícího vzorce: Reagencie* vzorec Příklad: 5 stripů koncentrovaný konjugát IgG/IgA/IgM (µl) = počet stripů x 20 µl = 5 x 20 µl = 100 µl pracovní ředění promývacího pufru A (ml) = počet stripů x 2 ml = 5 x 2 ml = 10 ml *Objemy jsou počítány bez mrtvého objemu. Připravujte proto roztok konjugátu pro 1-3 proužky navíc v závislosti na způsobu zpracovávání testu (ručně nebo na automatu). LABOSERV s.r.o., Hudcova 78b, 612 00 Brno 3/8 PM, 16. 5. 2014

7.2.3. Roztok substrátu Roztok substrátu je připraven k přímému použití. Před použitím jej vytemperujte na laboratorní teplotu (18-25 C). Je nutné vyvarovat se kontaminaci roztoku substrátu, např. použitím kontaminované špičky, neboť by se tak ovlivnila citlivost testu. 8. PRACOVNÍ POSTUP Provedení 1. Minimálně 30 min. před zahájením testování vytemperujte všechny reagencie na laboratorní teplotu (18 25 C). 2 Příprava testovacích stripů Vložte stripy do 2 ml pracovního ředění promývacího pufru A. 3. a) b) 4. c) d) Inkubace vzorků Pipetujte 20 µl neředěného vzorku (lidské sérum nebo plasma). (Ředění 1 + 100) Inkubujte 1 hodinu při laboratorní teplotě za jemného třepání. Promývání Opatrně odejměte platové víčko z inkubační vaničky. Zředěné sérum z jednotlivých žlábků opatrně odsajte. e) Pipetujte 2 ml pracovního ředění promývacího pufru A do každého žlábku a za jemného třepání 5 minut inkubujte. Poté pufr odsajte. 5. Inkubace s konjugátem Přidejte 2 ml připraveného roztoku konjugátu. Za jemného třepání 45 minut inkubujte. 6. Promývání viz bod 8.4. 7. Reakce se substrátem Přidejte 1.5 ml roztoku substrátu a za jemného třepání inkubujte 8 minut. 8. Zastavení reakce Odstraňte roztok substrátu. Promyjte nejméně třikrát krátce deionizovanou vodou. 9. Sušení stripů Stripy sušte mezi dvěma vrstvami absorbčního papíru 2 hodiny při laboratorní teplotě nebo 15 minut v inkubátoru při 37 C, před analýzou. Poznámka Test provádějte při laboratorní teplotě. Při manipulaci se stripy používejte pinzetu. Číslo proužku musí směřovat vzhůru. Každý strip má samostatný žlábek v inkubační vaničce. Strip musí být v pufru zcela ponořen. Dbejte na to, abyste vzorek přidávali u konce proužku ponořeného v promývacím pufru A a co možná nejdříve opatrně promíchali. Inkubační vaničku přikryjte plastovým víčkem a dejte na třepačku. Promytí podle bodu 8.4a-8.4c opakujte třikrát. Zabraňte křížové kontaminaci. Pokyny výrobce musí být dodrženy i při automatickém zpracování. Inkubační vaničku přikryjte plastovým víčkem a dejte na třepačku. Promytí opakujte třikrát dle bodu 8.4a-8.4c. Stripy opatrně vyjměte pomocí plastové pinzety. Stripy uchovávejte na temném místě. Upozornění! Inkubační roztoky nesmí téct do dalších jamek. Rozstřikování je třeba zabránit zejména při otevírání a zavírání víka. 9. VÝSLEDKY Upozornění: Prosím, přečtěte si informace o interpretaci testu, před použitím automatické interpretace. 9.1. Validace kontrola kvality Analýza test může být provedena v případě, že jsou splněna tato kritéria: 1. Kontrolní proužek reakce (horní band) musí být jasně zbarvený, tmavý proužek. 2. Třídy protilátek (druhý, třetí a čtvrtý band): kontrolní band konjugátu IgG, IgA a/nebo IgM musí být jasně zbarvený. 3. Kontrola cut-off (pátý band): slabý, ale viditelně zbarvený proužek. LABOSERV s.r.o., Hudcova 78b, 612 00 Brno 4/8 PM, 16. 5. 2014

4. Externí kontroly nejsou součástí soupravy. Doporučují se s každou novou šarží či dodávkou. Každá laboratoř si stanovuje vlastní plánování kontrol. 9.2. Hodnocení Hodnocení testovaných stripů může být provedeno vizuálně nebo pomocí přístroje (recomscan software). RecomScan software je určen pro podporu vyhodnocení testovacích stripů. Další informace a pokyny pro vyhodnocení za pomoci počítače si vyžádejte u Vašeho dodavatele. Následující informace se vztahují k vizuálnímu odečítání. 9.2.1. Posouzení intenzity bandů 1. Do přiložené vyhodnocovací tabulky zapište datum, šarži a detekovanou třídu protilátek. 2. Dále zapište identifikační čísla vzorků. 3. Přilepte jednotlivé stripy na odpovídající pole vyhodnocovací tabulky tak, aby band kontroly reakce byl na vyznačené linii. Strip poté transparentní lepicí páskou nalevo od této linie zafixujte (nelepte pásku přes kontrolní band reakce). Pokud byste proužek přilepili lepidlem nebo lepicí páskou po celé délce, zbarvení jednotlivých bandů by se mohlo změnit. 4. Nyní odečtěte bandy, které se vytvořily na testovaných stripech, pomocí předtištěného kontrolního stripu na vyhodnocovacím formuláři a zapište výsledek do formuláře hodnocení. Proveďte hodnocení intenzity výsledného bandu zvlášť pro každou třídu imunoglobulinů a použijte k tomu následující tabulku 1. Tab. 1: Intenzita bandů v porovnání s intenzitou zbarvení cut-off bandu Intenzita barvy bandů Zhodnocení Interpretace Žádná reaktivita - Negativní Nízká intenzita (slabší než u cut-off) +/- Negativní Stejná intenzita jako u cut-off + Pozitivní Silná intenzita (silnější než u cut-off) ++ Pozitivní Velmi intenzivní zbarvení +++ Pozitivní 9.3. Interpretace výsledků testu Výsledek testu je stanoven přiřazením bodů za jednotlivé bandy ve vztahu ke Cut-off podle tabulky 2 (tj. s hodnocením minimálně na jeden +). Jednotlivé body poté sečtěte a výsledný součet zapište do sloupce se symbolem sumy. Pozitivní, hraniční nebo negativní hodnocení vzorku, pak může být přímo stanoveno podle tabulky 3 a zapsáno ve sloupci pro vyhodnocení. Tab. 2: Bodové hodnocení antigenů Antigen Body Yop M 1 V-AG 1 PsaA 1 Yop D 3 MyfA 1 Yop E 1 Tab. 3: Interpretace testu Celkový počet bodů Posouzení 0-1 negativní 2 hraniční 3 pozitivní Druhy jsou rozlišeny pomocí antigenů PsaA a MyfA, ale pouze u pozitivního výsledku testu (tab. 3 a tab. 4) a pouze u třídy protilátek IgG. Tab. 4: Rozlišení Rozlišení Kritéria Y. pseudotuberculosis výsledek testu je pozitivní a reakce PsaA cut-off a reakce MyfA < cut off Y. enterocolitica výsledek testu je pozitivní a reakce MyfA cut-off a reakce PsaA < cut off LABOSERV s.r.o., Hudcova 78b, 612 00 Brno 5/8 PM, 16. 5. 2014

rozlišení není možné výsledek testu je pozitivní a není platné žádné z kritérií pro Y. pseudotuberculosis a Y. enterocolitica 10. LIMITACE METODY - OMEZENÍ Výsledky sérologických testů je vždy nutné posuzovat v souvislosti s klinickými příznaky. Po časné infekci dochází k vymizení IgM a IgA protilátek obvykle do tří až šesti měsíců, IgG protilátky přetrvávají roky. U chronické yersiniosy s imunopatologickými komplikacemi reaktivita IgG a titr IgA přetrvává několik let. Pro interpretaci IgA reaktivity je velmi důležité do výsledků zahrnout stav IgG a případně také IgM protilátek. Sporné výsledky je nutno po třech až pěti týdnech opakovat, v závislosti na klinické situaci. Samostatný pozitivní výsledek u IgA protilátek je nutno správně interpretovat. Je nutno zvážit, zda je o infekci časnou nebo dlouhodobě persistentní. S Yersiniemi spjatá reaktivní artritida se typicky odráží ve vysokém titru IgG a IgA, zatímco titr IgM je velmi nízký nebo žádný. Tmavě zbarvené testovací stripy: Séra některých pacientů (např. s alergií na mléčné proteiny) mohou vytvářet tmavé zbarvení celého nitrocelulózového pásu. Tento efekt je vyvolán mnoha různými faktory v séru pacienta. Vyhodnocení těchto stripů je pak obvykle možné pouze s určitou restrikcí. Např. inverzní bandy (bílé bandy na tmavém pozadí) by měly být hodnoceny jako negativní. Dané sérum však musí být v každém případě testováno znovu jinými sérologickými metodami. 11. VÝKONNOST TESTU 11.1. Diagnostická senzitivita RecomLine Yersinia Dřívější pozitivní nálezy ze dvou referenčních testů IgG (n=122) IgA (n=68) IgM (n=61) negativní 0 2 0 hraniční 0 0 0 pozitivní 122 66 61 senzitivita 100 % 97 % 100 % 11.2. Rozlišení mezi Y. enterocolitica a Y. pseudotuberculosis pomocí stanovení druhově specifických IgG protilátek RecomLine Yersinia Yersinia enterocolitica * (n=59) Yersinia pseudouberculosis ** (n=63) pozitivní nález Y. enterocolitica (MyfA antigen) 41 0 pozitivní nález Y. pseudotuberculosis (PsaA antigen) 0 51 Rozlišení moţné v % vzorků 69 % 81 % * Klasifikováno jako Y. enterocolitica díky pozitivnímu výsledku Widal testu ** Klasifikováno jako Y. pseudotuberculosis díky pozitivní kultivaci a PCR 11.3. Diagnostická specificita Dřívější negativní nálezy ze dvou referenčních testů recomline Yersinia IgG (n=95) IgA (n=134) IgM (n=109) negativní 95 134 108 hraniční 0 0 0 pozitivní 0 0 1 specificita 100 % 100 % 99 % 11.4. Míra detekce recomline Yersinia n IgG pozitivní IgA pozitivní IgM pozitivní Séra dárců krve 114 47 (41,2 %) 13 (11,4 %) 2 (1,8 %) Rozlišení IgG pozitivních vzorků (n=47): 7/47 bylo spojeno s infekcí Y. enterocolitica 4/47 bylo spojeno s infekcí Y. pseudotuberculosis Diferenciace nebyla u zbylých vzorků možná, protože tyto vzorky krve - většinou infekce z dávné minulosti - prokázaly pouze YOP D reaktivitu. LABOSERV s.r.o., Hudcova 78b, 612 00 Brno 6/8 PM, 16. 5. 2014

11.5. Analytická specificita Analytická specificita je definována jako schopnost testu pracovat analyticky přesně v přítomnosti možných rušivých faktorů v matrici vzorku (např. antikoagulans, hemolýza, následky manipulace se vzorky) nebo křížové reakce s potenciálními interferujícími protilátkami. a) Interference: Kontrolní studie potenciálně interferujících faktorů ukázaly, že výkonnost testu nebyla ovlivněna přítomností antikoagulans (citrát sodný, EDTA, heparin, CPD), hemolýzy, lipémie, bilirubinémie nebo hlubokého mrazení a rozmrazování vzorku. b) Křížové reakce: V kontrolní studii byla testována případná interference protilátek proti jiným organismům (Treponema sp.). Navíc, byly testovány faktory, které jsou přičítány atypické aktivitě imunitního systému (antinukleární autoprotilátky, revmatoidní faktor, těhotenství, čerstvá virová infekce herpes simplex). Nebyly zjištěny křížové reakce. 12. LITERATURA 1. Hammer, M.et al. Postenteritische reaktive Arthritiden and Spondarthritiden. Deutsches Ärzteblatt 1995, 92(41):2738-2749 2. Cremer J. et al. Immunoblotting of Yersinia plasmid-encoded released proteins: A tool for serodiagnosis. Electrophoresis 1993, 14:952-959 3. Larsen J. H. et al. The determination of specific IgA-Antibodies to Yersinia Enterocolitica and their role in enteric infections and their complications. Acta Pathol Microbiol Immunol Scand B. 1985, 93(5):331-9 4. Sieper J. Disease Mechanisms in reacitive Arthrirtis. Current Rheumatology Reports 2004, 6:110-116 5. Sieper J. et al: Diagnosing reactive Arthritis. Arthritis and Rheumatism 2002, 46(2):19-327 6. Perdikogianni, C. et al. Yersinia enterocolitica infection mimicking surgical conditions. Ped. Surgery. 2006, 22:589-592 7. Zheng H. et al. Yersinia enterocolitica infection in diarrheal patients. Eur J Clin Microbiol Infect Dis 2008, 27(8):741-52 8. Antonopoulos et al. An emergency diagnostic dilemma: a case of Yersinia enterocolitica colitis mimicking acute appendicitis in a ß-thalassemia major patient: the role of CT and literature review. Emerg Radiol 2008, 15(2):123-6 9. Jalava K, et al. An outbreak of gastrointestinal illness and erythema nodosum from grated carrots contaminated with Yersinia pseudotuberculosis. J Infect Dis 2006, 94(9):1209-16 13. VYSVĚTLIVKY SYMBOLŮ Počet testů v soupravě Vyhodnocovací formulář Návod k použití Podívejte se do pracovního postupu Obsah soupravy In vitro diagnostická souprava Číslo šarže Nezmrazujte Katalogové číslo Použitelné do uvedené doby expirace Teplotní limitace. Skladujte při x-y C LABOSERV s.r.o., Hudcova 78b, 612 00 Brno 7/8 PM, 16. 5. 2014

14. KONTAKTY Výrobce: ALL.DIAG 10, rue Ettore Bugatti BP6 67038 Strasbourg Cedex 2 tel: 03 88 78 80 88, fax: 03 88 78 76 78 www.alldiag.com, info@alldiag.com Dodavatel: LABOSERV s.r.o. Hudcova 78b, 612 00 Brno Tel: +420 541 243 113, Fax: +420 541 243 114 email: laboserv@laboserv.cz http://www.laboserv.cz LABOSERV s.r.o., Hudcova 78b, 612 00 Brno 8/8 PM, 16. 5. 2014