NOVINKY V NEPRIAMEJ DIAGNOSTIKE INTERPRETÁCIA VÝSLEDKOV Šantavá S., Kos S. OKM FNsP Skalica, a.s. 28.1.2015
Prečo nemôžeme stáť na mieste? MUSÍME: BYŤ NÁPOMOCNÍ PRI PROCESE STANOVENIA DIAGNÓZY /SVaLZ/ Sledovať vývojové trendy mikrobiologickej laboratórnej diagnostiky Vyšetrovať bežné parametre najmodernejšími možnými metódami Reflektovať na požiadavky objednávateľov laboratórnych vyšetrení Prihliadať na ekonomickú situáciu v zdravotníctve CHCEME: DRŽAŤ KROK S INÝMI LABORATÓRIAMI BYŤ MAXIMÁLNE OTVORENÍ SPOLUPRÁCI S LEKÁRMI FNsP AJ EXTERNÝCH AMBULANCIÍ ROZŠIROVAŤ SPEKTRUM PONÚKANÝCH VYŠETRENÍ
Čo nového na úseku sérologie OKM FNsP? PRIPRAVUJEME: 1. Komplement-fixačná reakcia /KFR/ v diagnostike toxoplazmózy 2.Diagnostika Bordetella pertussis pomocou ELISA a Westernblotu TestLine PONÚKAME: 3. Vyšetrovanie anti-hiv, anti-hcv a HBsAg enzymatickou fluorescenčnou analýzou VIDAS biomérieux 4. Diagnostika chlamýdiových ochorení pomocou metodiky Immunoblot Chlamycheck AllDiag
1. Komplement-fixačná reakcia v diagnostike Toxoplasma gondii Odporúčaná algoritmami pre OKM v SR ako skríningová metóda Stabilita výsledkov Celkové protilátky IgM a IgG Eliminácia prípadných nešpecificky pozitívnych nálezov získaných ELISA Ab detekovateľné od 2. týždňa infekcie Nízka cena Vhodne doplní Dgt toxoplazmózy
2. Diagnostika Bordetella pertussis Pôvodca čierneho kašľa KEDY A PREČO ROBIŤ VYŠETRENIE Ab? U starších detí a dospelých, ktorí žijú v jednej domácnosti s,,podozrivými,, pacientmi protektívny účinok vakcinácie trvá 5-10 rokov zvýšený výskyt, stúpajúci trend v SR od r. 2008 ELISA: špecifické IgA a IgG protilátky proti pertusovému toxínu /PT/ - súčasť vakcín Westernblot IgG a IgA
3. minividas biomérieux Automatizovaný systém Detekcia špecifických protilátok pomocou ELFA /enzymatická fluorescenčná analýza / - citlivejšia ako ELISA Stanovenie po jednotlivých pacientoch /netreba čakať na naplnenie cyklu/ - kvázi-statimové vyšetrenia Rýchle stanovenie: 40-80 min - ELISA: 180-240 min Využiteľné minimálne množstvo vzorky Finančne veľmi náročné Uzatvorený systém Výrobca nemá v ponuke všetky pre nás potrebné metodiky Nevhodné na veľké série vyšetrení Interpretácia výsledkov nezmenená
4. Diagnostika Chlamydia sp. pomocou Imunoblotu Ch. pneumoniae - gramnegatívna baktéria LPS Ch. pneumoniae - intracelulárny parazit - neschopnosť rastu na umelých kultivačných pôdach Ch. pneumoniae - unikátny vývojový cyklus - schopnosť dlhodobej perzistencie v hostiteľských bunkách primárne ochorenia - infekcie horných a dolných DC /atypické pneumónie/ sekundárne ochorenia - asociácia s civilizačnými chorobami PROBLÉM: DIAGNOSTIKA!!!!!
ŽIVOTNÝ CYKLUS CHLAMÝDIÍ PĽÚCA INFIKOVANEJ OSOBY: ELEMENTÁRNE TELIESKA /ET/ infekčné, metabolicky neaktívne RETIKULÁRNE TELIESKA /RT/ neinfekčné, metabolicky aktívne ABERANTNÉ CHLAMÝDIE /AT/ - kryptické telieska /atypické RT/ ANTIGÉNNE ODLIŠNÉ!!!!!!! ODLIŠNÁ IMUNITNÁ ODPOVEĎ AKÚTNA FORMA OCHORENIA LATENTNÁ AKTÍVNA FORMA OCH. CHRONICKÁ PERZISTENCIA INFEKČNÉHO AGENS V TELE: LATENTNÁ PASÍVNA FORMA OCH. kryptická forma ochorenia - spiaca forma patogénu
Odlišná imunitná odpoveď ET: imunitná odpoveď makroorganizmu na MOMP, OMPs AT: imunitná odpoveď makroorganizmu na LPS zabudovaný do membrány perzistentne infikovanej hostiteľskej bunky RT:???
Ch. pneumoniae a civilizačné ochorenia POTVRDENÁ SÚVISLOSŤ Ch. pneumoniae : s poškodením kardiovaskulárneho traktu s degeneratívnymi ochoreniami CNS so systémovými imunopatologickými prejavmi??? Alzheimerova chororba??? reumatoidná artritída prenos prostredníctvom monocytov DIAGNOSTIKA : EM, PCR, kultivácia na BK Príznaky sa manifestujú po rokoch
Dynamika tvorby protilátok anti-chlamydia pneumoniae IgM akútne štádium 2-4 týždne po objavení príznakov, pretrvávanie 2-6 mesiacov včš. úplné vymiznutie IgG oneskorená odpoveď 6-8 týždňov po infekcii pomalé stúpanie aj klesanie izolovaná prítomnosť IgG bez známok ochorenia - prekonaná infekcia IgA nástup v skorom štádiu infekcie pretrvávanie 3 mesiace perzistencia viac ako 6 mesiacov - znak chronickej /latentnej/ infekcie?!?!?
Problémy pri diagnostike Ch. pneumoniae PRIMOINFEKCIE: včš. len u detí, izolované IgM - spoľahlivý marker akútnej infekcie - ELISA DLHODOBÉ PRETRVÁVANIE IgA VO VYSOKÝCH HLADINÁCH v ELISA s klinickými príznakmi: chronická infekcia - latentná aktívna forma - IMUNOBLOT!!!!! DLHODOBÉ PRETRVÁVANIE IgA V ELISA bez klinických príznakov: latentná pasívna forma- kryptická infekcia alebo nešpecificita - IMUNOBLOT!!!! REAKTIVÁCIA latentnej pasívnej formy /exacerbácia/: prudký nárast IgG a IgA bez tvorby IgM IZOLOVANÉ IgG bez známok ochorenia: v minulosti prekonaná infekcia - ELISA NEGATÍVNY NÁLEZ Ab v ELISA pri klinických príznakoch: príliš včasná fáza infekcie, opakovať odber, neskorší nástup tvorby Ab Ch. pneumoniae monocytmi zanesené do endotelu ciev, do synovií, do CNS nepriama Dgt nedostatočná EM, PCR???? REINFEKCIE U DOSPELÝCH: nevytvárajú sa IgM
ELISA anti-chlamydia pneumoniae IgM, IgA, IgG celotelový purifikovaný Ag bunkový lyzát : LPS - rodovošpecifický MOMP, OMPs, HSPs - druhovošpecifické pretrvávajúca pozitivita IgA v ELISA : môže byť známkou chronickej latentnej aktívnej infekcie môže byť odpoveďou IS na expresiu LPS na povrchu perzistentne infikovanej bunky v prípade latentnej pasívnej formy ochorenia môže znamenať nešpecificitu TREBA POUŽIŤ IMUNOBLOT!!!
IMUNOBLOT CHLAMYCHECK vybrané rekombinantné antigény Ch. pneumoniae MOMP, OMP2, OMP4, OMP5 druhovošpecifické Neobsahuje LPS ŠPECIFIKÁCIA IgA: ak tu potvrdená pozitivita IgA - latentná aktívna forma ochorenia - treba riešiť ATB!!!! MODIFIKOVANÝ WESTERNBLOT - Kombinácia s Ch. trachomatis a Ch. psittaci na jednom stripe!!! Kvalitatívny test
Výsledkový list Imunoblot Chlamycheck Chlamydia trachomatis IgG pozit + Chlamydia pneumoniae IgG pozit + Chlamydia psittaci IgG negat
Kedy robiť Imunoblot? Dlhodobé pretrvávanie anti-chlamydia pneumoniae IgA vo vysokých hladinách v ELISA - s klinickými príznakmi - bez klinických príznakov Potvrdenie infekcie Ch. trachomatis /konfirmačné vyšetrenie/ Podozrenie na infekciu Ch. psittaci ZÁVER: IMUNOBLOT JE PRÍNOSOM K INTERPRETÁCII SÉROLOGICKÉHO NÁLEZU!!!!
ĎAKUJEM ZA POZORNOSŤ