Interpretace sérologických nálezů u chlamýdií

Rozměr: px

Začít zobrazení ze stránky:

Download "Interpretace sérologických nálezů u chlamýdií"

Michal Mašek
před 8 lety
Počet zobrazení:

1 Interpretace sérologických nálezů u chlamýdií MUDr. Dana Hrubá VIDIA-DIAGNOSTIKA Poliklinika Černý Most, Praha 9 hruba@vidia-diagnostika.cz

2 Onemocnění u lidí způsobovaná chlamydiemi Druh chlamydií Sérotypy Onemocnění Ch. trachomatis A, B, Ba, C trachom D, Da, E, F, G, uretritis, epididymitis, prostatitis H, I, Ia, H, K cervicitis, endometritis, salpingitis konjunktivitis Reitrův syndrom, reaktivní artritis perihepatitis proktitis pharyngitis, pneumonie bartolinitis, chorioamniotitis L1, L2, L2a, L3 LGV Ch. psittaci ornitosa-psitakosa potraty Ch. pneumoniae pharyngitis, sinusutis bronchitis, pneumonie, asthma, CHOPN, onem. mimo respirační trakt

salpingitis konjunktivitis Reitrův syndrom, reaktivní artritis perihepatitis proktitis pharyngitis, pneumonie bartolinitis,

3 % Séroprevalence chlamydiových genus a species specifických IgG v populaci ČR věková skupina Sodja I., 1998: Zprávy CEM 7: 34-36

5 Antigeny zevní membrány buněčné stěny chlamydií LPS - rodově specifický antigen MOMP (40kDa) - druhově specifický antigen OMP2 (56 kda), OMP3 (12,5 kda) na cystein bohaté proteiny, rodově specif. Proteiny o mol.váze kda (CP a Cps) chsp prozánětlivě působící protein

(56 kda), OMP3 (12,5 kda) na cystein bohaté proteiny, rodově specif.

6 Sérologická dg chlam. infekcí Elisa testy (rodově specifický LPS antigen, časnější tvorba protilátek, dříve mizí). MIF, Elisa testy (druhově specifický MOMP antigen, pozdější tvorba protil., přetrvávají déle). Doporučené odběrové schema: 1. sérum v době počátečních příznaků 2. sérum za 2-3 týdny (3. sérum za 6-8 týdnů) Detekce anti-chsp60 IgG U infekcí Ch. pneumoniae v současné době téměř jediná možnost diagnostiky. U infekcí Ch. trachomatis doplňkové vyšetření, na prvním místě by měla být detekce Ag, DNA (vyjímkou jsou sterility), negativita Ab nevylučuje akutní infekci

sérum v době počátečních příznaků 2. sérum za 2-3 týdny (3. sérum za 6-8 týdnů) Detekce anti-chsp60 IgG U infekcí Ch.

7 Hodnocení sérol.nálezů a DNA Ch.trachomatis (CT) Pacient DNA CT Anti-Ch.trachomatis IgG Anti-Ch.trachomatis IgA Č.1 negativní negativní negativní Č.2 negativní poz. ++ 2,74 negativní Č.3 negativní poz. ++ 3,32 poz. + 1,65 Č.4 pozitivní negativní negativní Č.5 pozitivní poz. ++ 3,21 negativní Č.6 pozitivní poz ,35 poz. ++ 3,26

2 negativní poz. ++ 2,74 negativní Č.3 negativní poz. ++ 3,32 poz. + 1,65 Č.

8 Anti-cHSP60 IgG Heat shock proteiny (HSP) jsou vysoce konzervované buněčné stresové proteiny, které se vyskytují ve všech buňkách, prokaryotických i eukaryotických, a mají pozoruhodně vysokou homologii (homologie HSP mezi člověkem a myší je 99,9%, mezi člověkem a bakteriemi cca 60%). Mikrobiální HSP jsou silné imunogeny a v průběhu infekce jejich syntéza silně narůstá. Současně se exprimují i lidské HSP, aby ochránily humánní buňky. Vzhledem k vysoké homologii mezi proteiny může docházet ke zkříženým reakcím, což v konečném důsledku může vyústit v autoimunitní reakce. Test chsp60 IgG Elisa (medac) používá jako antigen rekombinantní protein tepelného šoku 60 (chsp60) z Ch.trachomatis. I když tento test zachytává převážně protilátky proti HSP60 Ch.trachomatis, tak vzhledem k velmi vysoké homologii mezi druhy chlamýdií na úrovni proteinů (95%) je možný záchyt protilátek i proti Ch.pneumoniae. Nelze i vyloučit, že pozitivita těchto protilátek je odrazem buněčného stresu, který má jinou příčinu, než chlamydiovou infekci.

Současně se exprimují i lidské HSP, aby ochránily humánní buňky.

9 LGV v ČR 11 laboratorně potvrzených případů převážně u HIV + pacientů (NRL pro chlamydie, Seegene, kapilární elektroforéza) 1.pacient r.2010 CT (susp.lgv) bilat.inq.lympadenopatie s perforací 2.,3.,4., pacient 5/2011 epid. souvislost proktitidy 5. pacient 6/2011 bilat.inq.lympadenopatie s perforací 6 případů proktitid (během února a března 2012) sérologicky LGV nelze odlišit, vždy přímý průkaz

,4., pacient 5/2011 epid. souvislost proktitidy 5. pacient 6/2011 bilat.inq.

10 Vyšetřovaný materiál (Ch.pneumoniae) sérum cca 5 ml srážlivé krve protilátky nesrážlivá krev (cca 5-10ml) DNA CP (PCR) z periferních leukocytů BAL, sputum DNA CP (PCR), antigen CP (IF) (nasofaryngeální stěry) konjunktivální výtěr

11 Sérologická kritéria infekcí (Ch. pneumoniae) Primoinfekce: IgM za 2-3 týdny (přetrv. 2-6 měsíců) IgG za 6-8 týdnů Reinfekce: (IgM), IgG vzestup za 1-2 týdny Akutní infekce Sérokonverze druhových protilátek 4x vzestup IgG a/nebo IgM mezi akutním a rekonvalescentním sérem Chronické infekce?? polyklonální aktivace

2-6 měsíců) IgG za 6-8 týdnů Reinfekce: (IgM), IgG vzestup za 1-2 týdny Akutní

12 V roce vyš. na DNA CP 2x pozit. M 2007 J anti-chlam IgG ++ 3,34 IgA ++ 2,16 IgM +++ 3,77 anti-cp IgG 1:32 ++ IgA neg. IgM 1: DNA CP pozitivní (BAL) anti-chlam IgG +++ 4,41 IgA ++ 1,83 IgM +++ 3,75 anti-cp IgG 1:32 + IgA neg. IgM 1:20 +/-

13 Kazuistika (M 2000) 12/08 2/09 3/09 5/09 10/09 anti-chlam IgM + 1,41/ ++ 2, (4.12. dtto) anti-chlam IgG +/- 1,00 IgA +++5,03 IgM +++ 4,51 anti-cp IgG neg. IgA neg. IgM 1: anti-chlam IgG +++ 5,39 IgA +++8,48 IgM +++ 5,42 anti-cp IgG 1:16 + IgA 1:16 ++ IgM 1: anti-chlam IgG + 1,41 IgA +/- 1,01 IgM ++ 3,08 anti-cp IgG 1:16 ++ IgA neg. IgM 1: /10 6/10 9/10 anti-chlam IgG neg. IgA neg. IgM ++ 2,24/2,48 anti-cp IgG 1:16 + IgA neg. IgM 1:10 +

2009 anti-chlam IgG +++ 5,39 IgA +++8,48 IgM +++ 5,42 anti-cp IgG 1:16 + IgA 1:16 ++ IgM 1:10 +++ 5.2. 2010 anti-chlam IgG + 1,41 IgA +/- 1,01 IgM ++ 3,08 anti-cp IgG 1:16 ++ IgA neg.

14 MOMP OMP2 hsp60 MIP MOMP OMP2 OMP4 OMP5 MOMP recomline Chlamydia - Interpretation Chlamydia trachomatis pneumoniae psittaci IgG / /4 IgA points if Chl. Trachomatis is negative, otherwise 4 points Interpretation positive borderline negativ Points

6/4 3 3 6/4 IgA 6 3 3 3 6 4 4 4 6 6 points if Chl.

15 Immunoblot recomline Chlamydia IgG / IgA (Mikrogen)

16 Vyšetření protilátek pomocí WB testu recomline Chlamydia Vyšetřeno 21 sér (dlouhodobá pozitivita pouze anti-lps protilátek) - anti-ch.trachomatis IgG u 8 sér - anti-ch.pneumoniae IgG u 7 sér - anti-ch.pneumoniae IgA u 3 sér

17 Chlamydia pneumoniae IgG/IgA/IgM Immunoblot (GenID) 54 kd, 35 kd, 60 kd (HSP) zvýšené riziko aterosklerozy

18 Chlamydia trachomatis IgG/IgA Immunoblot (GenID) HSP 60 kd, 70 kd (sterility, záněty pánve) 57 kd (reaktivní artritidy)

19 Sérol. nálezy u kontrolní skup. pacientů (grant IGA NS 10064) Serological markers anti-cp NEG anti-cp IgG anti-cp IgA/IgM anti-chl IgA/IgM Total anti-chsp60 IgG NEG 20 (2x CT) 25 (3x CT) 10 (0x CT) 55 (5x CT) anti-chsp60 IgG +- / + 3 (1x CT) 8 (1x CT) 11 (2x CT) 22 (4x CT) anti-chsp60 IgG ++ / (5x CT) 2 (1x CT) 13 (9x CT) 23 (15x CT) Total

anti-chl IgA/IgM Total anti-chsp60 IgG NEG 20 (2x CT) 25 (3x CT) 10 (0x CT) 55 (5x CT)

20 Standardizing C.pneumoniae Assays: Recommendations from the Centers for Disease Control and Prevention (USA) and the Laboratory Centre for Disease Control (Canada) (Dowell et al. 2001) Sérologie: MIF test (druhové protilátky) akutní infekce - párová séra, detekce IgG a IgM persistentní/chronická infekce IgG, IgA (vysoké hladiny) často používáno, ale není validováno! Kultivace: materiál (stěry z nasofaryngu nebo orofaryngu, sputum, BAL) spec. kontaminace dakronové tampony, transp.médium, transport do 24 hod při 4 C, buněčné kultury, podmínky zpracování, barvení monokl. protilátkami, testování na PCR: z 18 doposud publikovaných postupů pouze 4 splňují validační kriteria (extrakce, kontroly, interní kontroly)

validováno! Kultivace: materiál (stěry z nasofaryngu nebo orofaryngu, sputum, BAL) spec. kontaminace dakronové tampony, transp.

21 Acute Respiratory Infection Due to C.pneumoniae: Current Status of Diagnostic Methods (Kumar et Hammerschlag, 2007) v publikovaných studiích trvá vysoká heterogenita v sérol. metodách a kritériích pro akutní nebo chronické infekce (studie obtížně srovnatelné) slabá korelace sérologie s kultivačními nálezy a PCR (zejména u dětí) není validovaný sérologický marker pro persistentní chlam.infekce (mnozí používají trvale zvýšené IgA a IgG) od roku 2001 publikováno dalších 13 PCR testů, ale doposud není dostupný komerční standardizovaný test nesrovnatelná a často si odporující data prospektivní, kontrolovaná, slepá multicentrická studie, dg v souladu s CDC doporučeními pokud nebudou k dispozici standardizované a validované dg metody, zůstane úloha CP u akutních a chronických infekcí nejasná

22 Doporučený postup SIL a ČLS JEP Chlamýdiové infekce diagnostika a léčba MUDr. Jan Galský, Ph.D., MBA MUDr. Jiřina Hobstová, CSc.

23 Děkuji za pozornost.

Podobné dokumenty

Chlamýdiové infekce klinické příznaky a diagnostika

Chlamýdiové infekce klinické příznaky a diagnostika MUDr. Dana Hrubá hruba@vidia-diagnostika.cz Onemocnění u lidí způsobovaná chlamýdiemi Druh chlamydií Sérotypy Onemocnění Ch. trachomatis A, B, Ba, C