LABORATORNÍ DIAGNOSTIKA ABÚZU ALKOHOLU II.část chronický abúzus Mgr. Jozefína Provalilová 15. září 2016
ÚVOD Nejčastěji zneužívaná omamná a psychotropní látka Dlouholetá zvýšená spotřeba může způsobit poškození jater a dalších orgánů Hraniční hodnota: u mužů asi 60 g (3 piva, 6 dcl vína nebo 0,1-0,5 dcl tvrdého alkoholu), u žen 30 g
Změny fyziologických funkcí Změny klinicko-biochemických a hematologických parametrů Anamnestická data o spotřebě alkoholu záměrně zkreslována
ALT zvýšená aktivita nejcitlivější marker i jaterní steatózy až 100 násobné zvýšení u toxické hepatitidy setrvalé zvýšení 3-10 násobek normy cirhóza AST zvýšená aktivita
AST/ALT alkohol-toxická hepatitis, alkohol-toxická cirhóza de Ritisův index přínosný především u alkoholického poškození jater vyšší než 2 - specifický test pro alkoholové jaterní choroby > 1 nekróza nižší hodnota ALT u alkoholových poškození souvisí pravděpodobně s deficitem pyridoxinu
muži: 0,17 1,92 μkat/l ženy: 0,17 1,25 μkat/l GGT gama-glutamyltransferáza ethanol indukuje jeho tvorbu senzitivita: 60 90 % specifita: 55 100 % při abstinenci klesá o 50 % za 2 týdny fyziolog. hodnoty dosáhne po 5 týdnech
Amoniak zvýšená hladina terminální fáze jaterní cirhózy nebo hepatitidy Bilirubin - zvýšená hladina způsobená sníženou glukuronidací v játrech, nespecifický marker při ethylismu, hyperbilirubinémie klinicky významná je patrná až při značném poškození jaterní tkáně
KO + koagulace Odchylky velikosti erytrocytů MCV Odchylky tvarů erytrocytů stomatocyty Inkluze v erytrocytech: bazofilní tečkování, Howell-Jollyho tělíska Prodloužení koagulačních časů především APTT
MCV zvýšení je patrné po 6 týdnech abúzu pokles po 2 až 3 měsících abstinence zvyšuje se také u: deficitu B12, kyseliny listové hypothyreózy retikulocytózy užívání antiepileptik u kuřáků
Glykoprotein transportující Fe CDT karbohydrát deficientní transferin Syntetizován a metabolizován v játrech Polypeptidový řetězec s dvěma oligosacharidovými řetězci připojených n- glykosidickou vazbou Oligosacharidové řetězce jsou zakončeny variabilním množstvím negativně nabitých zbytků kyseliny sialové
počet zbytků kyseliny sialové (0 až 5) určuje jednotlivé izoformy transferinu (negativní náboj umožňuje jejich separaci) u zdravého jedince převažuje tetrasialotransferin (cca 80%), a disialo izoforma tvoří jen okolo 1% při chronickém abúzu alkoholu převažují asialo-, monosialo-, disialoizoformy
CDT Užívání alkoholu nejméně 60g za den během 14 dnů zvýšená hladina CDT Při abstinenci pokles zpět na normální hladinu během 2-4 týdnů (závisí na stupni zvýšení) Samotný alkohol není účinnou látkou, která způsobuje nárůst CDT v séru, ale pravděpodobnou příčinou je acetaldehyd vznikající v játrech při metabolizaci ethanolu. Acetaldehyd snižuje aktivitu enzymů, účastnících se výstavby karbohydrátových řetězců transferinu, až na 20 % celkové aktivity.
Nástřik 50 µl Gradient MF A, B, C UV detektor - 460 nm Teplota termostatu kolony 35 Průtok: 1,5 ml/min Doba analýzy: 20 min HPLC Shimadzu příprava vzorku: 50 µl vzorku + 25 µl roztoku firmy Chromsystems vortex inkubace 30 minut při 4 C centrifugace 50 µl supernatantu + 100 µl HPLC vody
CDT záznam cut off 1,7% negativní pozitivní
Hodnocení CDT 1,7 % - negativní nález 1,7 2,49 % - suspektní nález kontrolní vyšetření s časovým odstupem 6 8 týdnů 2,5 % - patologický nález
Interference ikterické vzorky koncentrace bilirubinu do 3 mg/dl - nemají vliv vyšší koncentrace bilirubinu - interference lipemické vzorky koncentrace triglyceridů do 6000 mg/dl - nemají vliv úprava pomocí lipoclearu hemolytické vzorky interference
Falešné zvýšení CDT u pacientů s jater. cirhózou virové etiologie (asi u 40 %) u hepatocelulárního karcinomu u primární biliární cirhózy chronická nebo akutní hepatitida syndrom karbohydrát-deficitních glykoproteinů (CDG I, CDG II) u vzácných genetických D variant transferinu
marker zvýšení po abúzu normalizace při abstinenci GGT 5 týdnů 5 týdnů CDT 2 týdny 2-3 týdny MCV 6 týdnů 2 týdny
marker Senzitivita Specifita AST 33-55 % více než 90 % ALT 20-50 % 80 % GGT 60-90 % 55-100 % MCV 40-50 % 64-100 % CDT 65-95 % více než 90 %
hodnota CDT nekoreluje s aktivitou GGT CDT - vypovídá o frekvenci a kvantitě požívání alkoholu GGT - vypovídá o jaterní indukci při vysoké intenzitě požívání alkoholu
kombinace CDT + GGT: diagnostická senzitivita u celé populace je kolem 60 70 % specifita kolem 100 % trojkombinace CDT + GGT+ MCV: ještě vyšší senzitivita i specifita
Muž 61 let CDT 16,34 % GGT 5,97 µkal/l MCV 100,2 ft Žena 59 let CDT 4,17% GGT 5,30 µkal/l MCV 88,6 ft
ETHYLGLUKURONID Přímým metabolitem ethanolu Vzniká konjugací ethanolu s glukuronovu kyselinou Vylučování probíha kinetikou 1. řádu V krvi je detekován po 8 hodinách V moči po 75-80 hodinách Parametr s nejdelším biologickým poločasem
ethylglukuronid Vysoká stabilita Falešně pozitivní bakteriální kontaminace vzorku (E.coli) moči obsahující jednoduché sacharidy vhodné současné stanovení ethylsulfátu jeho koncentrace v čase se dále nemění
dávka detekce 0,1 g.kg -1 6 24 hodin 0,5 g.kg -1 48 hodin těžká intoxikace až 100 a více hodin
Detekční okno ethylglukuronidu chronických konzumentů ethanolu Helander A., Bötcher M., Fehr C., Dahmen N., Beck O.: Detection Times for Urinary Ethyl Glucuronide and Ethyl Sulfate in Heavy Drinkers during Alcohol Detoxification. Alcohol & Alcoholism 2009, 44, 55-61
Indikace Především kontrola abstinence Průkaz u novorozenců (ethylismus matky)
STANOVENÍ ethylglukuronidu/ethylsulfátu v moči pomocí UHPLC/MS/MS Gradient MF A,B Kolona: Synergi Hydro-RP 80A (100x4,6 mm, 4um) Teplota termostatu kolony 35 Průtok: 0,8ml/min Doba analýzy: 7 min příprava vzorku: 50 µl vzorku + 20 µl IS + 430 µl HPLC vody vortex centrifugace 100 µl supernatantu
ethylglukuronid/ethylsulfát ethylglukuronid ethylsulfát
Děkuji za pozornost