BIOMYCOX KOMPLETNÍ ŘEŠENÍ PROTI MYKOPLAZMĚ Baranova 1802/21, Praha 3, CZ 130 00, Česká republika www.pragostem.cz, e-mail: info@pragostem.cz, Tel: +420 725 930 929, Fax: +420 466 414 176 [텍스트 입력]
Mycoplasma Baktérie, třída Mollicutes Velikost (0.1 ~ 0.8μm) Malý genom: - neumí vytvářet buněčnou stěnu - neumí syntetizovat nukleotidy a aminokyseliny Striktní parasité lidí, zvířat, hmyzu a rostlin Generační čas 1-9 hodin Hrozby kontaminace buněčných kultur mykoplazmou 1. Laboratoře pro buněčnou biologii Mykoplazma se váže na buněčnou membránu hostitelských buněk a způsobuje problemy při provádění experimentů spojených s buněčnou membranou, např. interakce membránových receptorů a membránová fúze 1) Transfekce 2) Buněčná signalizace 3) Imunitní odpověď 4) Kmenové buňky a jejich výzkum 5) Primární buněčné kultury Kvůli těmto problémům s kontaminací buněčných kultur mykoplazmaty mohou oponenti vědeckých prací požádat o dodatečná data k Vašemu výzkumu, která prokazují, že autoři pracovali se vzorky a kulturami, které nebyly kontaminované mykoplazmou. Příklady referencí, které reportují o vedlejších efektech mycoplazmou kontaminovaných buněčný kultur. Cell biology - Microbiological contamination in cell culture: a potential role for hydrogen peroxide vapour (HPV), Otter, J A. Cell Biology International Volume: 32 Issue: 2 (2008-02-01) p. 326-327. Cancer biology - Impact of Mycoplasma hyorhinis infection on L-arginine metabolism: differential regulation of the human and murine inos gene Biol Chem. 2005 Oct;386(10):1055-63. Immunology - Mycoplasma-mediated alterations of in vitro generation and functions of human dendritic cells. J Biomed Sci. 2005;12(1):31-46. 2
Neurobiology - Amyloid-beta peptide degradation in cell cultures by mycoplasma contaminants. Haitian Zhao, BMC Research Notes 2008, 1:38 Pathology - Production of prostaglandin E2 in monocytes stimulated in vitro by Chlamydia trachomatis, Chlamydophila pneumoniae, and Mycoplasma fermentans. Microb Pathog. 2004 Sep;37(3):155-61. Toxicilogy - Falsification of tetrazolium dye (MTT) based cytotoxicity assay results due to mycoplasma contamination of cell cultures. Anticancer Res. 1999 Mar-Apr;19(2A):1245-8. Mykoplazma se silně váže na buněčnou membránu a indukuje nespecifické signály prostřednictvím membránových receptorů kultivované buňky. Tyto nespecifické signály pak vedou k falešným výsledkům a jejich špatné interpretaci. 2. Laboratoře pro výzkum léků 1) Testy cytotoxicity - častá fluktuace dat 2) In vitro buněčné odpovědi - obtížné vyhodnocení účinku léku 3) Podání léků s využitím buňek - bez smysluplných dat 3. R&D centra 1) Ztráta produktivity 2) Diskvalifikace produtků 3) Zvýšení nákladů 4) Diskreditace kontroly na pracovišti 4. Produkce hybridomů a protilátek 1) Inhibice fúze buněk 2) Vliv na selekci spojených produktů 3) Interference při screeningu reactivity monoklonální protilátky 4) Monoklonální protilátka proti mykoplazmě místo cílového antigenu 5) Redukce výtěžnosti monoklonální protilátky 6) Ochrana hybridomu 3
Co dělat v případě kontaminace buněčné kultury mykoplazmou? 1. Výměna nakažené buněčné kultury za nové a ověřené kultury autoklávovat infikované kultury a tím předejít dalšímu šíření kontaminace 2. Velmi často nelze nahradit buněčné linie za nové (bez mykoplazmy) Eliminovat mykoplazmu z takových kultur Jak eliminovat mykoplazmata z buněčné kultury? Typy produktů na eliminaci mykoplazmy na trhu: 1. Antibiotický typ Dlouhodobé používání antibiotik v oblasti výzkumu buněčných kultur indukuje vysoké riziko rezistence na antibiotika a může vest k šíření kontaminace na další buněčné linie. Také akumulace antibiotik v buňce může vest ke změně fenotypu buňky. Proto je důležité redukovat ve výzkumu buněčné biologie využití přípravků na bázi antibiotik. 2. Neantibiotický typ BioMycoX Mycoplasma Elimination Reagent (CellSafe) Nejlepší a nejrychlejší cesta jak eliminovat mykoplazmu v kontaminovaných buněčných kulturách BioMycoX Mycoplasma Elimination Kit BioMycoX - Neantibiotický (bio činitel) - Selektivní inhibice mycoplasmy - Není cytotoxický Mechanismus účinku Mykoplazmata nemají buněčnou stěnu, ale jsou ohraničeny cytoplasmatickou membránou. BioMycoX je biologické činidlo, které vniká do membrány mykoplazmy a narušuje její soudržnost. Výsledkem je pak osmotický influx, který vede ke kompletnímu kolapsu membrány. S eliminací mykoplazmy se savčí buňka okamžitě vrací do jejího původního stavu. BioMycoX se používá pro eliminaci rodů Mycoplasma a Acholeplasma v buněčných a virových kulturách. 4
Popis produktu The BioMycoX Mycoplasma Elimination Reagent byl vyvinut za účelem rychlé a účinné eliminace mykoplazmatické kontaminace z buněčných kultur. Možné efekty, které může zasažená kultura mykoplazmou způsobit jsou hrozbou pro výzkum, diagnostiku a celou oblast biotechnologického průmyslu. Účinky mykoplazmy se snižují v závislosti na kvantitě produktů, kvalitě produktů nebo vlastní ztrátě konzistence a schopnosti se dale množit. Současné a nejpoužívanější metody inaktivace nebo eliminace mykoplazmy v buněčných kulturách jsou na bázi antibiotik. Eliminace antibiotiky nepřínáši vždy uspokojivé výsledky a naopak antibiotika mohou cytotoxicky ovlivňit metabolismus eukaryotických buněk či se podílet na rezistenci mykoplazmat. BioMycoX Mycoplasma Elimination Reagent je biologické činidlo, který kompletně eliminuje kontaminaci mykoplazmaty. V porovnání s ostatními produkty na eliminaci, inaktivaci a supresy mykoplasmy je BioMycoX vice efektivní and nezpůsobuje žádné změny v buňkách (Obr. 1). BioMycoX je vhodný k eliminaci Mollicutes a příbuzných organizmů (Mycoplasma, Acholeplasma, Spiroplasma, a Entomoplasma) v buněčných a virových kulturách. M. 100bp DNA ladder 1. Pozitivní kontrola (mycoplasma control DNA) 2. Negativní kontrola (DW) 3. Buňka kontaminovaná mykoplazmou/ před léčbou 4. Buňka kontaminovaná mykoplazmou / po léčbě, 1 passage 5. Buňka kontaminovaná mykoplazmou / po léčbě, 10 passages 6. Buňka kontaminovaná mykoplazmou/ před léčbou 7. Buňka kontaminovaná mykoplazmou / po léčbě, 1 passage 8. Buňka kontaminovaná mykoplazmou / po léčbě, 10 passage Obr. 1 Výsledky léčby pomocí BioMycoX Mycoplasam Elimination Kit Nejlepší a nejrychlejší cesta k detekci mykoplazmy v kontaminovaných buněčných kulturách BioMycoX Mycoplasma Detection Kit BioMycoX Mycoplasma Detection kit je určen pro PCR, což je metoda s největší sensitivitou pro detekci mykoplazmy v buněčných kulturách. Sestava primerů je specifická k vysoce konzervované oblasti kódování v genomu mykoplazmy. To umožňuje detekci druhů M. orale, M. hyorhinis, M. arginini, M. fermentans, Acholeplasma laidlawii, M. hominis, které jsou nejčastějšími kontaminanty buněčných kultur. Víceméně, tento kit může detekovat M. pneumoniae, M. salivarium, M. synoviae a druhy rodu Ureaplasma. 5
1. Výhody: Detekuje vice jak 50 druhů mykoplazmat. Umožňuje validaci výsledků testů interní kontrolou. Ready-to-use, optimalizovaný typ PCR premixu. 2. Kit obsahuje: Primer mix s interní DNA, 50μl (červené víčko) 2xPCR Premix with loading dye, 250μl (modré víčko) Mycoplasma control DNA, 25μl (žluté víčko) DNase Free Water, 150 μl (bílé víčko) CellSafe s Products BioMycoX Mycoplasma Elimination Kit Cat. No. CS-E-01 Cat. No. CS-E-03 Cat. No. CS-E-05 BioMycoX Mycoplasma PCR Detection Kit Cat. No. CS-D-025 Cat. No. CS-D-050 Cat. No. CS-D-100 BioMycoX Mycoplasma Prevention Spray Cat. No. CS-P-1000 Spray bottle (1 L) Cat. No. CS-P-10000 Spray bottles (10 L) BioMycoX Mycoplasma Free Maintain Reagent Cat. No. CS-F-100 6