Praktický manuál in vitro produkce embryí u skotu
|
|
- Nela Slavíková
- před 5 lety
- Počet zobrazení:
Transkript
1 VETERINÁRNÍ A FARMACEUTICKÁ UNIVERZITA BRNO FAKULTA VETERINÁRNÍHO LÉKAŘSTVÍ Klinika chorob přežvýkavců a prasat Praktický manuál in vitro produkce embryí u skotu M. Andrlíková a kolektiv BRNO 2018
2 Praktický manuál in vitro produkce embryí u skotu MVDr. Michaela Andrlíková Mgr. Zuzana Čierniková MVDr. Vojtěch Kos prof. MVDr. Miloslava Lopatářová, CSc. MVDr. Beáta Marková MVC. Veronika Stařecká Mgr. Lenka Vránová doc. MVDr. Svatopluk Čech, PhD. Manuál byl vytvořen za finanční podpory projektu IVA, 2018FVL/1680/24.
3 OBSAH 1. Úvod 4 2. Základní pojmy 5 3. Schéma produkce embryí in vitro 6 4. Postup produkce embryí in vitro 7
4 Seznam použitých zkratek COC s ET IVC IVF IVM IVP OPU cumulus oocyte complexes embryo transfer in vitro kultivace in vitro fertilizace in vitro maturace in vitro produkce embryí ovum pick-up 3
5 1. Úvod Pojem produkce embryí in vitro (IVP) obecně označuje proces získávání embryí mimo tělo matky. Zahrnuje in vitro maturaci (IVM) a in vitro fertilizaci (IVF) oocytů a in vitro kultivaci (IVC) embryí. Metoda produkce embryí in vitro byla původně u skotu prováděna za účelem výzkumu a využívala oocyty získané po superstimulaci. Oocyty získávané z preovulačních folikulů nebo vejcovodu hodin po začátku říje, které již prodělaly maturaci in vivo, jsou přímo připraveny k IVF a IVC. Oocyty se také získávají z jatečných vaječníků, avšak tyto vyžadují navíc maturaci in vitro. První tele vyprodukované ze systému IVM-IVF-IVC se narodilo V dnešní době má metoda IVP velký význam v oblasti výzkumu, kde jsou jako zdroj oocytů využívány především jatečné vaječníky. V zahraničí je IVP v poslední době nedílnou součástí šlechtitelských programů v chovu skotu a je běžně využívána v komerční sféře společně s transferem embryí. Zde jsou přednostně využívány oocyty odebírané od živých dárců. V našich podmínkách se IVP běžně v praxi neprovádí. 4
6 Vysvětlení základních pojmů 2. Základní pojmy COC s: oocyty s kumulárními buňkami (cumulus oocyte complexes) IETS: International Embryo Technology Society IFOT: Intrafollicular oocyte transfer, speciální technika transferu maturovaných oocytů do preovulačního folikulu. Mikromanipulátor: Speciální manipulátor, který se s nasazenou skleněnou kapilárou používá k manipulaci s oocyty a embryi. OPU: Ovum pick-up, způsob získávání oocytů z folikulů od živých dárců. Provádí se transvaginální aspirací folikulů pod ultrazvukovou kontrolou. Slicing: Jeden ze způsobů získávání oocytů z jatečných vaječníků. Principem je rozřezání povrchu vaječníků pomocí žiletkového nože sestaveného z několika žiletek. Swim-up: Způsob přípravy spermií pro IVF. Principem metody je vycestování pohyblivých spermií do média. 4-well: čtyřjamková kultivační miska Kultivační média Pro IVP produkci embryí je možno použít média komerčně vyrobená, anebo připravená ve vlastní laboratoři dle přesných receptů. Z důvodu finanční náročnosti komerčních médií uvádíme použití médií připravených ve vlastní laboratoři. Návod počítá s oběma způsoby zisku oocytů: z jatečných vaječníků (slicing) a od živých dárců (ovum pick-up, OPU). Seznam použitých médií Dulbecco s PBS: Pufrovaný roztok používaný k aspiraci oocytů metodou OPU. Slicing médium: Pufrovaný roztok používaný při slicingu ovarií. Wash médium: Promývací roztok používaný k oplachu oocytů a embryí mezi jednotlivými kroky IVP. Maturační médium: Médium, v němž dochází ke zrání oocytů, které se stávají kompetentní pro fertilizaci. Fertilizační médium: Médium, v němž probíhá oplození oocytů. Kultivační médium: Médium používané pro zrání embryí. Kapacitační médium: Médium, v němž probíhá kapacitace spermií a swim-up. 5
7 3. Schéma produkce embryí in vitro. Zdroj oocytů Plemenice Vaječníky z jatek OPU Slicing / aspirace IVM IVF IFOT IVC EMBRYO Kryokonzervace Mikromanipulace - genotypizace - sexace - půlení ET 6
8 4. Postup produkce embryí in vitro. DEN -2, PŘÍPRAVA ROZTOKŮ Příprava zásobních roztoků Říjové sérum krav (OCS) (Připravit dostatečně dopředu.) - Pro výrobu OCS ( oestrus cow serum ) se odebere krev od minimálně 3 říjících se krav do zkumavek na sérum. - Inkubace odebrané krve ve vodní lázni (39 C, 60 min). - Další inkubace (4 C, 60 min). - Centrifugace 20 min při 500G. - Přepipetování séra do zkumavek a inaktivace ve vodní lázni (30 min, 56 C). - Získané OCS rozpipetovat do 2 ml mikrozkumavek a skladovat při -20 C. Každá šarže OCS se otestuje v procesu IVP na oocytech z ovárií získaných z jatek. Pouze šarže s prokázanou účinností se dále využívá v procesu IVP. Gentamycin zásobní roztok Gentamycin mg NaCl 0,9 %... 1 ml Neomezená doba skladování při teplotě 4 C. FSH zásobní roztok Stimufol (pfsh = 500 µg)... 1 NaCl 0,9 % dávka ml V 10 ml NaCl 0,9 % rozpustíme 1 dávku prášku Stimufol. Rozpipetujeme po 100 µl do mikrozkumavek a skladujeme při teplotě -20 C. Používáme vždy nově rozmrazenou mikrozkumavku. Na pyruvát zásobní roztok Na-pyruvát mg NaCl 0,9 %... 5 ml Rozpipetujeme po 330 µl do mikrozkumavek a skladujeme při teplotě -20 C. Používáme vždy nově rozmrazenou mikrozkumavku. 7
9 Média pro odběr oocytů: Transportní médium - převoz vaječníků z jatek (NaCl 0,9 % + Penicilin a Streptomycin) 1L H2Obidest. 5L H2Obidest. NaCl 9,000 g 45,000 g Penicilin G 0,060 g 0,300 g Streptomycin sulphate 0,131 g 0,655 g Média pro slicing: PBS stock solution zásobní roztok (100x) 500 ml H2Obidest ml H2Obidest. Na-pyruvate 1,80 g 3,60 g Streptomycin sulphate 2,37 g 4,74 g D-glucose x H2O 54,99 g 109,98 g CaCl2 x 2 H2O 6,65 g 13,30 g Penicilin G 3,00 g 6,00 g Rozpustit každé zvlášť. Uchovávat při -20 C. Spotřebovat v průběhu 3 měsíců. Ideálně je rozpipetovat po 10 ml do 15 ml falkonek. PBS prášek (příprava na 1L) PBS prášek (Applichem A0964) možno zakoupit. NaCl... 8,00 g KCl... 0,20 g Na2HPO4... 1,15 g KH2PO4... 0,20 g celkem... 9,55 g PBS slicing solution čerstvé 1L H2Obidest. 5L H2Obidest. H2Obidest. 990,00 ml 4 950,00 ml PBS prášek 9,55 g 47,75 g Stock solution (100x) 10,00 ml 50,00 ml Rozpustit PBS a stock solution zvlášť v dostatečném množství H2O, smíchat dohromady, uchovávat při 4 C, spotřebovat během jednoho týdne. V den slicingu přidat 5,3 mg Heparinu prášku (nebo roztok 2 IU/ml => 0,2 ml / 500 ml roztoku) a 0,5 g BSA (Fraction V) do 500 ml slicing solution. Před použitím nahřát na 38 C 39 C. 8
10 Média pro ovum pick-up: DULBECCO S PBS (složení roztoku na 1 litr) Roztok A: NaCl... 8,00 g KCl... 0,20 g Na2HPO4. 12H2O... 2,90 g (nebo bezvodý Na2HPO4...1,15 g) KH2PO4... 0,20 g Red. H2O... ad 791,40 ml Roztok B: CaCL2 bezvodý... 0,10 g MgCL2. 6H2O... 0,10 g (nebo bezvodý MgCl2... 0,047 g) Red. H2O... ad 200,00 ml Roztok C: Glukóza... Red. H2O... Roztok D: Na pyruvát... Red. H2O... 20,00 g ad 100,00 ml = 20 % glukóza 1,00 g ad 100,00 ml Míchání finálního roztoku před použitím: 791,4 ml roztok A ml roztok B + 5 ml roztok C + 3,6 ml roztok D = 1000 ml Každý roztok sterilizujeme zvlášť v autoklávu 20 minut při 120 C. Uchováváme v lednici při 4 C, roztoky smícháme až před použitím v den provádění OPU. 9
11 Modifikované Parkerovo médium MPM zásobní roztok roztok 1: Ca-laktát mg H2Obidest.... ad 10 ml roztok 2: MPM: L-glutamin mg NaHCO mg HEPES mg Na-pyruvát mg Gentamycin zásobní roztok µl TCM 199 (Gibco)... ad 100 ml roztok ml roztok ml Ca-laktát rozpouštíme zvlášť. Změřit osmolaritu ( mosm), každý roztok sterilně přefiltrovat a skladovat při 4 C po dobu max. 4 týdnů. DEN -1 (IVM), DEN ZISKU OOCYTŮ Média pro promytí a maturaci oocytů: Wash médium čerstvé MPM... OCS... 9 ml 1 ml Sterilně filtrovat do 15 ml falkonu. Maturační médium (IVM-médium) čerstvé MPM... 9 ml OCS... 1 ml FSH zásobní roztok µl Sterilně filtrovat do 15 ml falkonu. 10
12 Chronologický postup činnosti: - Připravit aspirační, wash a maturační médium. - Finální příprava aspiračního média (Dulbecco s PBS) pro OPU. o Potřebný objem média závisí na počtu dárkyň (100 ml/zvíře). o Do média přidat heparin (400 IU/100 ml) a nahřát ve vodní lázni na 38 C. o Přelít do 50 ml falkonu (potřebný pro vlastní aspiraci, 1 falkon vystačí na 4 zvířata). o Zbytek roztoku nechat ve vodní lázni, bude použit pro zpracování aspirátu z OPU. - Příprava wash média a IVM-média (50 ml a 15 ml zkumavka). o Preinkubovat minimálně hodinu při 38,8 C, 5,5 6 % CO2 a atmosférické koncentraci kyslíku. o OPU: Připravit malou Petriho misku s Dulbecco s PBS (2 ml), dát na vyhřívanou podložku. Připravit velkou Petriho misku (kapky média PBS, wash a maturačního, počet kapek podle počtu dárců oocytů, obr. 1) a nechat v inkubátoru. PBS Wash médium Maturační médium Obrázek 1: Uspořádání kapek (200 μl) k proplachování COC s. Šipky znázorňují směr přesunu oocytů mezi kapkami. 11
13 o Slicing: Připravit malou Petriho misku s 2 ml wash média a dát do inkubátoru. Připravit velkou Petriho misku dle obr. 2 (kapky média wash a maturačního, počet kapek podle počtu získaných oocytů) a nechat v inkubátoru. Wash médium Maturační médium Obrázek 2: Uspořádání kapek (200 μl) k proplachování COC s. Šipky znázorňují směr přenosu COC s mezi kapkami. - 4-well destičky popsat IVM a datem. Každou jamku naplnit 400 μl maturačního média, médium převrstvit 400 μl parafínovým olejem. Nechat preinkubovat. - Připravit filtry pro vyhledání COC s získaných z OPU, Petriho misky velké a malé, injekční stříkačku 20 ml. - Připravit vybavení pro slicing (miska, žiletkový nůž, pean, 800 ml kádinka, sítko, konické zkumavky 15 ml, stříkačka Janette 150 ml) (obr. 3). Obrázek 3: Pomůcky pro slicing 12
14 Zpracování vaječníků (slicing) Transport vaječníků z jatek do laboratoře probíhá v termosce v temperovaném (25 30 C) 0,9 % NaCl s přídavkem Pen/Strep (obr. 4). - V laboratoři vaječníky dvakrát omýt v 0,9 % NaCl s Pen/Strep. - Následně provést slicing v misce obsahující PBS slicing-solution. o Vaječník uchopit peanem a ponořit do média. Povrch ze všech stran (mimo výrazné corpus luteum) rozřezat žiletkovým nožem (obr. 5). o Opakovat s každým vaječníkem. o Po zpracování každých cca 10 vaječníků oplachový roztok obsahující tkáňovou drť a oocyty přelít přes sítko do kádinky (500 ml) (obr. 6). o Vypláchnout misku médiem a slít do kádinky. - Oplachový roztok ponechat v kádince minut sedimentovat (obr. 7). - Supernatant odsát, tak aby zbylo přibližně 100 ml tekutiny. Krouživým pohybem rozvířit tekutinu a rozdělit do 8 10 konických zkumavek (15 ml) (obr. 8 a, 8 b, 9). Kádinku ještě vypláchnout cca 15 ml slicing média a dolít do konických zkumavek. - Zkumavky ponechat 5 10 minut sedimentovat. - Sediment ze zkumavky napipetovat Pasteurovou pipetou do velké Petriho misky a naředit PBS slicing-médiem 1:1 (obr. 10, 11). - Pod stereomikroskopem vyhledat oocyty odpovídající kvality (COC s grade 1 a COC s grade 2) a přenést do připravené Petriho misky s wash médiem (obr. 12). - Vyhledané oocyty přenést do promývacích kapek (20 30 COC s/kapka) a 2x promýt (obr. 2). - COC s přenést do 4-well s IVM-médiem a inkubovat hodin (38,8 C, 5,5 6 % CO2, 100% vlhkost) (obr. 13). Obrázek 4: Vaječníky v termosce pro transport 13
15 Obrázek 5: Rozřezání povrchu vaječníku Obrázek 6: Přelití roztoku do kádinky Obrázek 7: Sedimentace roztoku 14
16 Obrázek 8 b: Roztok před rozlitím do zkumavek Obrázek 8 a: Odsátí supernatantu Obrázek 9: Rozlití roztoku do zkumavek 15
17 Obrázek 10: Pipetování sedimentu ze zkumavky na Petriho misku Obrázek 11: Rozředění roztoku Obrázek 12: Vyhledání COC s Obrázek 13: Připravený 4-well s maturačním médiem 16
18 Ovum pick-up Příprava instrumentária: - Následující vybavení umístěno v přenosném kufru pro snadnou manipulaci. o desinfekční přípravek na kůži o lokální anestetikum (procain) o injekční jehly (18G) a stříkačky (5 ml, 20 ml) o rektální rukavice o sonografický gel o buničitá vata o fyziologický roztok na oplach o provázek na fixaci ocasu - Na vozík nachystat: o podtlakovou pumpu o vyhřívací kontejner s falkony 50 ml (1 x OPU médium, 1 x nový pro každou dárkyni) o sonografický přístroj o držák s ultrazvukovou sondou (před použitím krýt rektální rukavicí viz obr. 14) o vodič jehly o aspirační jehly o stojan s 50 ml falkony na proplach aspiračního systému (1 x prázdný, 1 x líh) Příprava zvířete: - Fixovat dárkyni ve fixačním zařízení. - Vyholit a desinfikovat místo pro aplikaci epidurální anestezie (3,5 ml, 2 % procain). - Vyvázat ocas tenkým provázkem. - Vyprázdnit rektum. - Očistit a desinfikovat perineální oblast. 17
19 Aspirace oocytů: - Falkon označit ušním číslem zvířete. - Před vlastní aspirací folikulů aspirovat na dno falkonu malé množství OPU média. - Zasunout držák sondy do pochvy, druhou rukou fixovat vaječník per rectum (obr. 15). - Aspirovat všechny folikuly >3 mm. - Označit falkon počtem aspirovaných folikulů. - Po aspiraci co nejrychleji přepravit falkon do laboratoře pro vyhledání a zpracování COC s. Obrázek 15: Schématické znázornění umístění ultrazvukové sondy proti fornix vaginae s manuální fixací vaječníku per rectum (autor V. Mlejnková) Zpracování punktátu z OPU: - Aspirát přelít přes filtr na velkou Petriho misku, filtrát (v sítku) promýt PBS médiem (obr. 16). Falkon propláchnout PBS médiem a přelít přes filtr. - Filtr přemístit do malé Petriho misky a prolít PBS médiem (obr. 17). - Vyhledat COC s na filtru a přenést do malé Petriho misky s PBS médiem. Klasifikovat kvalitu COC s. - Promýt COC s ve čtyřech kapkách (PBS, wash médium, maturační médium) (obr. 1). - COC s přemístit do 4-well a jamku popsat číslem zvířete (obr. 18). 18
20 Obrázek 16: Filtrace aspirátu s COC s Obrázek 17: Promytý aspirát na filtru Obrázek 18: Označený 4-well s COC s 19
21 Klasifikace kumulus-oocytárních-komplexů (COC s) Vyhledané COC s rozdělit podle morfologických kritérií do čtyř kvalitativních tříd (tab. 1 a obr. 19). Pro IVP se použijí pouze COC s třídy I a II z vaječníků poražených zvířat, z ex vivo punkcí třídy I až III. Tab. 1: Klasifikace COC s modifikovaná podle LEIBFRIEDA a FIRSTA (1979) Třída Vlastnosti oocytu Vlastnosti kumulárních buněk I tmavá, rovnoměrně jemně granulovaná, kompaktní ooplasma kompaktní, celý oocyt obklopující minimálně pětivrstevný kumulus II tmavá, rovnoměrně jemně granulovaná, kompaktní ooplasma kompaktní, celý oocyt obklopující méně než pětivrstevný kumulus III rovnoměrně, kompaktně jemně granulovaná ooplasma, ale obsahující i větší granula kumulární buňky obklopují minimálně polovinu zony pellucidy IV abnormálně velké či malé oocyty; silně deformované oocyty; ooplasma s velkými granuly; výrazné rozdíly v kompaktnosti ooplasmy kumulus bez kumulárních buněk ( nahý ) či s částečně nebo úplně expandovaným kumulem III IV II I III Obr. 19 Třídy COC s 20
22 DEN 0, In vitro fertilizace Média pro fertilizaci oocytů: Sperm Tyrode s laktát zásobní roztok (Sperm TL zásobní roztok) NaCl ,0 mg NaHCO ,0 mg NaH2PO4. H2O... 4,0 mg HEPES ,0 mg MgCl2. 6 H2O... 31,0 mg CaCl2. 2 H2O... 38,4 mg Phenol Red... 1,0 mg Na-laktát (Sirup 60%) ,0 μl H2Obidest.... ad 100,0 ml Po nastavení ph = 7,4 (HCl) a kontrole osmolarity (300 mosm) zásobní roztok sterilně přefiltrovat a uchovávat při 4 C po dobu max. 4 týdnů. Tyrode s laktát zásobní roztok (TL zásobní roztok) NaCl ,0 mg KCl... 23,5 mg NaHCO ,3 mg NaH2PO4. H2O... 4,7 mg Penicillin... 6,5 mg MgCl2. 6 H2O... 10,0 mg CaCl2. 2 H2O... 39,7 mg Phenol Red... 1,0 mg Na-laktát (Sirup 60 %) ,0 μl H2Obidest.... ad 100,0 ml Po kontrole osmolarity ( mosm) roztok sterilně přefiltrovat a uchovávat při 4 C po dobu max. 2 týdnů. Následující média připravit čerstvá. Sterilně filtrovat do 15 ml falkonu. Kapacitační médium (Hodnotu ph nastavit na 7,35 7,40 (HCl).) Na-pyruvát... 1,1 mg BSA... 60,0 mg Gentamycin zásobní roztok... 10,0 μl Sperm TL zásobní roztok... 10,0 ml Fertilizační médium BSA... 60,0 mg Na pyruvát zásobní roztok ,0 μl TL zásobní roztok... 10,0 ml Heparinové médium Heparin... 1,0 mg Fertilizační médium... 5,0 ml 21
23 Chronologický postup činnosti: - Připravit kapacitační, fertilizační a heparinové médium. - Připravit 2 ml ependorfky: na 1 pejetu 3 ependorfky (č. 1, 2 a 3), popsat jménem býka. - Do ependorfky č. 1 napipetovat 1,6 ml kapacitačního média a ve stojánku umístit do inkubátoru (38,8 C a 5,5 6 % CO2, 100 % vlhkost) (obr. 20) preinkubovat minimálně 1 hodinu. - Připravit velkou Petriho misku na promývání COC s (kapky fertilizačního média) (obr. 21), dát do inkubátoru. - Připravit 4-well s fertilizačním médiem. Popsat IVF, ušním číslem a datem. o Do každé jamky napipetovat 400 μl fertilizačního média + 20 μl heparinového média, převrstvit 400 μl oleje a minimálně 1 hodinu preinkubovat. o Připravit 1 ml mikrozkumavku s 95 μl H2O a Bürkerovu komůrku pro výpočet koncentrace spermií. Obrázek 20: Mikrozkumavka s kapacitačním médiem Obrázek 21: Petriho miska s kapkami IVF-média (200 µl) pro promývání COC s. Šipka znázorňuje směr přesunu COC s mezi kapkami. 22
24 Příprava inseminační dávky: - Vytáhnout pejetu z kontejneru, 8 s nechat na vzduchu odpařit kapalný dusík, vhodit do vodní lázně (39 C, 20 s), pejetu otřít do sucha. - Odstřihnout jeden konec pejety, ID nechat vytéct do ependorfky č. 2 odstřižením druhého konce pejety (obr. 22). - Z jedné kapky pod mikroskopem zkontrolovat motilitu spermií. - Kapacitační médium v ependorfce č. 1 podvrstvit 200 μl inseminační dávky (obr. 23). - Otevřenou ependorfku umístit ve stojánku do inkubátoru. - Nechat proběhnout swim-up minut (38,8 C a 5,5 6 % CO2, 100 % vlhkost). Obrázek 22: Příprava inseminační dávky Obrázek 23: Podvrstvení kapacitačního média spermatem Příprava COC s: - Promýt oocyty ve 2 kapkách fertilizačního média (obr. 21) (na každou jamku s COC s je třeba 2 kapky). - COC s přenést do 4-well s fertilizačním médiem. Misku vrátit zpět do inkubátoru. - Nechat preinkubovat 30 minut před vlastní fertitlizací. 23
25 Centrifugace a fertilizace: Po uplynutí času pro swim-up: - Přepipetovat supernatant z ependorfky č. 1 do prázdné ependorfky č Centrifugovat 15 minut při 200G. - Odebrat část supernatantu z ependorfky č. 3 (ponechá se objem supernatantu odpovídající trojnásobku objemu sedimentu spermií), resuspendovat sediment spermií. - Vypočítat koncentraci spermií v Bürkerově komůrce, vypočítat potřebný objem suspenze na jednu jamku. - Vypočítaný objem suspenze připipetovat do každé jamky (na každou jamku použít novou špičku). - Koinkubovat spermie a COC s minimálně 19 a maximálně 21 hodin (38,8 C, 5,5 6 % CO2, 100 % vlhkost). Výpočet koncentrace spermií a objemu suspenze potřebného pro fertilizaci: - 20násobné ředění: 95 µl H2O + 5 µl suspenze semene - Koncentrace spermií potřebná pro fertilizaci: µl spermií µl (v jamce 4-wellu) spermií - počet spermií ve velkém čtverečku x = počet spermií v µl suspenze - µl suspenze na jamku = : počet spermií v µl suspenze 24
26 DEN 1, In vitro kultivace Média pro kultivaci oocytů: Phosphate buffered saline (PBS) (Filtrovat do sterilních lahví, skladovat při 4 C.) NaCl... 8,000 g KCl... 0,200 g Na2HPO4... 1,150 g KH2PO4... 0,200 g CaCl2. 2 H2O... 0,133 g MgCl2. 6 H2O... 0,100 g H2Obidest.... ad ml Vortexové médium- (Modifikované PBS (m-pbs)) roztok 1: PBS ml A-A solution µl m-pbs: roztok ml BSA mg Sterilně filtrovat do 15 ml falkonu. Inkubovat v inkubátoru se zavřeným vrškem. CR-1 médium zásobní roztok NaCl... KCl... NaHCO3... Hemikalcium-laktát... Na-pyruvát... Phenol Red... L-glutamin... H2Obidest ,30 mg 44,72 mg 420,04 mg 109,10 mg 8,80 mg 2,00 mg 29,22 mg ad 200,00 ml Hemikalcium-laktát nutno nejprve rozpustit v jednom dílu H2Obidest. a následně pomalu nalít za stálého míchání k druhému už rozpuštěnému dílu. Jinak dojde k jeho vysrážení! Po změření osmolarity ( mosm) roztok sterilně přefiltrovat a skladovat při 4 C po dobu max. 2 týdnů. Kultivační médium CR-1 médium čerstvé CR-1 zásobní roztok... 9,50 ml MEM ,00 µl BME (50x) ,00 µl OCS... 0,50 ml Gentamycin - zásobní roztok... 10,00 µl Sterilně filtrovat do 15 ml falkonu. Před použitím minimálně 1 hodinu inkubovat v komůrce. 25
27 Chronologický postup činnosti: - Připravit vortexové a kultivační médium ml falkon s 1ml vortex médiem umístit do inkubátoru (38,8 C, 5,5 6 % CO2, 5 % O2, 100 % vlhkost). - Připravit malou Petriho misku na výplach falkonu po vortexování. - Připravit velkou Petriho misku na promývání zygot (kapky média, vortexové, kultivační) (obr. 24), dát do inkubátoru. - Připravit 4-well s kultivačním médiem. Popsat IVC, ušním číslem a datem. o Do každé jamky napipetovat 400 μl kultivačního média, převrstvit 400 μl oleje a minimálně 1 hodinu preinkubovat. Vortexové médium Kultivační médium Obrázek 24: Petriho miska s kapkami média (200 µl) pro promývání zygot před kultivací. Šipka označuje směr přesunu zygot mezi kapkami. Vortexování a kultivace: Každou jamku vortexujeme samostatně. - Zygoty z IVF 4-wellu přenést do falkonu s vortexovým médiem. - Vortexovat 90 s při maximálních otáčkách. Falkon se zygotami přidržovat o další prázdný falkon (obr. 25). - Obsah falkonu vylít do připravené malé Petriho misky. (Též je možno nechat krátce sedimentovat a přepipetovat sediment). - Falkon 2x propláchnout 1 ml vortex médiem a vylít do Petriho misky se zygotami. - Vyhledané zygoty promýt v připravených kapkách na velké Petriho misce (obr. 24). - Předpokládané zygoty přesadit do 4-well destičky s kultivačním médiem. - Kultivovat v inkubátoru při 38,8 C, 5,5 6 % CO2 a 5 % O2 do dne 7. 26
28 Obrázek 25: Poloha zkumavek při vortexování DEN 7 8 Hodnocení IVP embryí Hodnocení kvality embryí se provádí dle IETS. Obrázek 26: Kolekce IVP embryí 27
29 Poznámky: 28
30 Autoři: Název: Ústav: MVDr. Michaela Andrlíková Mgr. Zuzana Čierniková MVDr. Vojtěch Kos prof. MVDr. Miloslava Lopatářová, CSc. MVDr. Beáta Marková MVC. Veronika Stařecká Mgr. Lenka Vránová doc. MVDr. Svatopluk Čech, PhD. Praktický manuál in vitro produkce embryí u skotu Klinika chorob přežvýkavců a prasat Počet stran: 28 Vydání: 1. Vydavatel: Tiskárna: Veterinární a farmaceutická univerzita Brno Reakce s.r.o. ISBN
Praktické cvičení: Izolace a purifikace rekombinantního proteinu
Praktické cvičení: Izolace a purifikace rekombinantního proteinu Toto blokové praktické cvičení spočívá v teoretickém i praktickém seznámení s rekombinantními proteiny, jejich izolací, purifikací a využitím.
Tkáňový homogenizátor MagNA Lyser od společnosti Roche
Izolace RNA Pracovní postup Homogenizace: Pozn. Postup homogenizace platí pouze pro izolaci RNA z nativní tkáně, v případě izolace z buněčné suspenze je tento krok vynechán a začíná se přídavkem homogenizačního
Inkubace enzymů se substráty
Inkubace enzymů se substráty Inkubace redukčních enzymů... 1 Inkubace oxidačních enzymů... 2 Extrakce látek z inkubační směsi... 2 Příprava vzorků k HPLC/UHPLC detekci... 3 Chemikálie a roztoky... 4 Substráty...
Cvičení č. 2: Pasážování buněk. 1) Teoretický základ
Cvičení č. 2: Pasážování buněk 1) Teoretický základ Kultivace buněk in vitro (ve zkumavce) - Snaha o napodobení podmínek v organismu - Používání jednorázového spotřebního materiálu a speciálních chemikálií
Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU KVASINEK RODU SACCHAROMYCES
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU KVASINEK RODU SACCHAROMYCES 1 Rozsah a účel Metodika slouží ke stanovení počtu probiotických kvasinek v doplňkových látkách, premixech a krmivech.
Protokol 04. pšeničná bílkovina. masné výrobky. zkrácená verze
1 Popis vzorku Podle protokolu č. 04 lze vyšetřit vzorky různých druhů masných výrobků na přítomnost pšeničné bílkoviny. 2 Detekční limit vyšetření Přítomnost pšeničné bílkoviny lze spolehlivě prokázat,
LIDSKÁ CYTOGENETIKA Laboratorní diagnostika
Pod Cihelnou 6 161 00 Praha 6 tel: 233 313 578, fax: 233 313 582 email: asco@ascomed.cz www.ascomed.cz 1. Kultivace lymfocytů LIDSKÁ CYTOGENETIKA Laboratorní diagnostika 1.1 Úvod Karyotypizace lidských
S filtračními papíry a membránou je nutno manipulovat pinzetou s tupým koncem.
Western Blotting Příprava blotovacího sendviče... 1 Blotování... 2 Kontrola přenesení proteinů na membránu... 2 Blokování membrány... 2 Aplikace protilátek... 2 Vizualizace... 3 Vyvolání filmu... 4 Chemikálie
COMET ASSAY (SINGLE CELL GEL ELECTROPHORESIS)
COMET ASSAY (SINGLE CELL GEL ELECTROPHORESIS) OBSAH 1. Princip metody 2. Přístroje a zařízení 3. Příprava vzorků 3.1 Kultivace a sklízení buněk A549 3.2 Výpočet koncentrace buněk 3.3 Hodnocení viability
Diferencované zrání bovinních oocytů využitelných pro reprodukční biotechnologie
UPLATNĚNÁ CERTIFIKOVANÁ METODIKA č. 39 Diferencované zrání bovinních oocytů využitelných pro reprodukční biotechnologie Autoři Ing. Marie Machatková, CSc Ing. Michal Ješeta, Ph.D. MVDr. Drahomíra Čtvrtlíková
CENÍK VÝKONU NEHRAZENÝCH ZE ZDRAVOTNÍHO POJIŠTĚNÍ
CENÍK VÝKONU NEHRAZENÝCH ZE ZDRAVOTNÍHO POJIŠTĚNÍ 1. ICSI 1 oocyt 5.000,- Kč 2-10 oocytů 8.000,- Kč každý další oocyt 1.000,- Kč (Intracytoplazmatická injekce spermie - vpravení spermie do cytoplazmy vajíčka)
Column DNA Lego Kit UNIVERZÁLNÍ SOUPRAVY PRO RYCHLOU IZOLACI ČISTÉ DNA (Katalogové číslo D201 + D202)
Column DNA Lego Kit UNIVERZÁLNÍ SOUPRAVY PRO RYCHLOU IZOLACI ČISTÉ DNA (Katalogové číslo D201 + D202) Popis Column DNA Lego Kit je základ moderní stavebnicové (Lego) soupravy pro izolaci čisté DNA různého
NEPLODNOST A ASISITOVANÁ REPRODUKCE
NEPLODNOST A ASISITOVANÁ REPRODUKCE Problém dnešní doby http://www.ulekare.cz/clanek/ve-zkumavce-se-da-vypestovat-vajicko-i-spermie-13323 http://www.babyfrance.com/grossesse/fecondation.html Co tě napadne,
ANALÝZA MARKERŮ OXIDAČNÍHO POŠKOZENÍ DNA, PROTEINŮ A LIPIDŮ PO IN VITRO APLIKACI LÁTEK NA BUNĚČNÉ KULTURY HEL a A549
ANALÝZA MARKERŮ OXIDAČNÍHO POŠKOZENÍ DNA, PROTEINŮ A LIPIDŮ PO IN VITRO APLIKACI LÁTEK NA BUNĚČNÉ KULTURY HEL a A549 O B S A H 1. Aplikace testovaných látek na buněčné kultury 2. Oxidační poškození DNA
SDS-PAGE elektroforéza
SDS-PAGE elektroforéza Příprava gelu... 1 Recept na 0.75 mm gel (1 gel/2 gely)... 2 Recept na 1.5 mm gel (1 gel/2 gely)... 2 Příprava vzorku... 3 Elektroforéza... 3 Barvení gelů Blue Silver... 4 Chemikálie
Odlepkování jiker. Rumunská modifikace Woynarovichovy metody (s taninem)
Lepivost jiker fytofilních druhů ryb je dána mucoproteiny, až po styku s vodou Pro umělý výtěr ve velkovýrobních technologiích inkubace jiker nutnost zamezit jejich lepivosti Metody odlepkování jiker:
Akutní test toxicity na žábronožkách Artemia salina
Akutní test toxicity na žábronožkách Artemia salina 1. Testovací organismus 1.1. Charakteristika organismu Vajíčka žábronožky slaniskové se k nám dováží v konzervách, téměř výhradně vyráběných v USA, například
Návrh laboratorní směrnice pro konvenční cytogenetickou analýzu karyotypu buněk kostní dřeně a/nebo periferní krve
Návrh laboratorní směrnice pro konvenční cytogenetickou analýzu karyotypu buněk kostní dřeně a/nebo periferní krve Kyra Michalová, Zuzana Zemanová Centrum nádorové cytogenetiky, Ústav klinické biochemie
1. Metodika. Protokol č. F1-4 Metodika: Srovnávací analýza efektivity přípravy rekombinantního proteinu ve fermentoru
Protokol č.: F1-4 Datum: 20.12.2010 Metodika: analýza efektivity přípravy výběr z výsledků ze zkušebních provozů výroby antigenů. Vypracoval: Ing. Václav Filištein, Mgr. Tereza Chrudimská, Spolupracující
Úloha č. 1 Odměřování objemů, ředění roztoků Strana 1. Úkol 1. Ředění roztoků. Teoretický úvod - viz návod
Úloha č. 1 Odměřování objemů, ředění roztoků Strana 1 Teoretický úvod Uveďte vzorec pro: výpočet směrodatné odchylky výpočet relativní chyby měření [%] Použitý materiál, pomůcky a přístroje Úkol 1. Ředění
MagPurix Viral/Pathogen Nucleic Acids Extraction Kit B
MagPurix Viral/Pathogen Nucleic Acids Extraction Kit B Kat. č. ZP02012 Doba zpracování: 45-60 minut pro MagPurix 12S 45-65 minut pro MagPurix 24 Použití Souprava MagPurix Viral/Pathogen Nucleic Acids Extraction
Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU PROBIOTICKÝCH BAKTERIÍ RODU ENTEROCOCCUS
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU PROBIOTICKÝCH BAKTERIÍ RODU ENTEROCOCCUS 1 Rozsah a účel Postup slouží ke stanovení počtu probiotických bakterií v doplňkových látkách, premixech
CHORUS COPROCOLLECT. Výrobce: DIESSE Diagnostica Senese Via delle Rose Monteriggioni (Siena) Itálie
CHORUS COPROCOLLECT 86602 Výrobce: DIESSE Diagnostica Senese Via delle Rose 10 53035 Monteriggioni (Siena) Itálie OBSAH 1 Úvod... 3 2 Princip testu... 3 3 Složení soupravy... 3 4 Další potřebné vybavení
Biologické materiály k biochemickému vyšetření
Biologické materiály k biochemickému vyšetření RNDr. Bohuslava Trnková, ÚKBLD 1. LF UK ls 1 Správný odběr vzorku - první předpoklad k získání správného výsledku preanalytická fáze analytická fáze - vlastní
Médium MarrowGrow. Informace o produktu. Médium MarrowGrow MGM-100 100 ml. Při práci dodržujte zásady práce s biohazardním materiálem
Médium MarrowGrow Informace o produktu Médium MarrowGrow MGM-100 100 ml UPOZORNĚNÍ: Při práci dodržujte zásady práce s biohazardním materiálem CytoGen GmbH, produktová informace verze 1.2 www.cytogen.info
ÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE
LABORATOŘ OBORU I ÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE (111) F Imobilizace na alumosilikátové materiály Vedoucí práce: Ing. Eliška Leitmannová, Ph.D. Umístění práce: laboratoř F07, F08 1 Úvod Imobilizace aktivních
Makrofágy a parazitární infekce
Makrofágy a parazitární infekce Funkce makrofágů Profesionální fagocyty https://www.youtube.com/watch?v=w0-0bqoge2e Antigen-prezentující buňky (asociace s MHC II glykoproteiny) Producenti cytokinů (IL-12,
ANALYTICKÝ SYSTÉM PHOTOCHEM
ANALYTICKÝ SYSTÉM PHOTOCHEM Analytický systém Photochem (firmy Analytik Jena, Německo) je vhodný pro stanovení celkové antioxidační kapacity (tj. celkové schopnosti vzorku vychytávat volné radikály) různých
List protokolu QIAsymphony SP
Únor 2017 List protokolu QIAsymphony SP circdna_2000_dsp_v1 a circdna_4000_dsp_v1 Tento dokument je Listem protokolu QIAsymphony circdna_2000_dsp_v1 a circdna_4000_dsp_v1, verze 1, R1 Sample to Insight
Chemické výpočty I (koncentrace, ředění)
Chemické výpočty I (koncentrace, ředění) Pavla Balínová Předpony vyjadřující řád jednotek giga- G 10 9 mega- M 10 6 kilo- k 10 3 deci- d 10-1 centi- c 10-2 mili- m 10-3 mikro- μ 10-6 nano- n 10-9 piko-
Praktický kurz Monitorování toxicity vybraných cytostatik pomocí MTT testu a real-time monitoringu xcelligence.
Praktický kurz Monitorování toxicity vybraných cytostatik pomocí MTT testu a real-time monitoringu xcelligence. Počítání buněk, příprava speciální xcell destičky, napipetování buněk Vyučující: Mgr. Monika
IZOLACE DNA (KIT DNeasy Plant Mini)
17.1 Izolace DNA (kit DNeasy Plant Mini) Strana 1 IZOLACE DNA (KIT DNeasy Plant Mini) 1 Účel a rozsah Postup slouží k získání deoxyribonukleové kyseliny (DNA) ze vzorku pomocí komerčního kitu DNeasy Plant
Bakteriální bioluminiscenční test. Stanovení účinnosti čištění odpadních vod pomocí bakteriálního bioluminiscenčního testu
Bakteriální bioluminiscenční test Stanovení účinnosti čištění odpadních vod pomocí bakteriálního bioluminiscenčního testu BBTT Cíl: Stanovit účinek odpadních vod na bakterie Vibrio fischeri. Principem
TECHNICKÁ SPECIFIKACE Vybavení genetické laboratoře pro projekt EXTEMIT-K
TECHNICKÁ SPECIFIKACE Vybavení genetické laboratoře pro projekt EXTEMIT-K část C OBSAH Termostabilní inkubační box... 2 Vodní lázeň s kontrolou teploty... 3 Biohazard box... 4 Inkubátor buněčných kultur...
MagPurix Viral Nucleic Acid Extraction Kit
MagPurix Viral Nucleic Acid Extraction Kit Kat. č. ZP02003 Doba zpracování: 40-55 minut pro MagPurix 12S 40-60 minut pro MagPurix 24 Použití Souprava MagPurix Viral Nucleic Acid Extraction Kit je určena
Cvičení č. 2: Pasážování buněk. 1) Teoretický základ
Cvičení č. 2: Pasážování buněk 1) Teoretický základ Kultivace buněk in vitro (ve zkumavce) - Snaha o napodobení podmínek v organismu - Používání jednorázového spotřebního materiálu a speciálních chemikálií
Minulost, současnost a budoucnost práce v embryologické laboratoři RNDr. Kateřina Wagnerová, Mgr. Pavlína Motlová, MUDr.
Minulost, současnost a budoucnost práce v embryologické laboratoři RNDr. Kateřina Wagnerová, Mgr. Pavlína Motlová, MUDr. Pavel Texl Sanatorium Helios, Brno Úvod Obor asistované reprodukce prodělal od svého
Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - OCHRATOXIN A
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - OCHRATOXIN A 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení ochratoxinu A v krmivech. 1 Ochratoxin A patří mezi
1) Název SOP-CCT-CYANOTOX-ELISA Stanovení microcystinů s využitím ELISA
1) Název SOP-CCT-CYANOTOX-ELISA Stanovení microcystinů s využitím ELISA 2) Autor Lucie Bláhová, Luděk Bláha a kol. (Centrum pro cyanobakterie a jejich toxiny, Botanický ústav AVČR a VC RECETOX PřF MU,
CENÍK ASISTOVANÉ REPRODUKCE SAMOPLÁTCI
Ceník pro samoplátce je určen pro klienty, kteří nejsou pojištěni u žádné ze zdravotních pojišťoven v ČR. Pro platby v je platný fixní konverzní kurz 1 EUR : 25,750 CZK. Výkony a léčebné postupy je možné
37 C hynou!!). protože v kul tur-e rostou jejich procy klické formy, fyziologicky odpovídající
IZOLACE KLONU BIČ:ÍKOYCU Z ČELEDI TRYPANOSOMATIDAE NA AGAROYÝCHPLOTNÁCI-I Některé trypanosomy obratlovcú a většinu kinetoplastid z bezobratlých (Crithidia, Blastocrithidia. Lcptomona::; aj.) lze pěstov
Test aktivity a cytotoxicity lymfocytů
Test aktivity a cytotoxicity lymfocytů Teorie: Proliferace je jedním z fyziologických jevů buněčné aktivace. Existuje několik způsobů zjišťování aktivity lymfocytů. Jedna z nejznámějších je použitím radioaktivně
Příprava bovinních embryí definovaného pohlaví v systému in vitro
UPLATNĚNÁ CERTIFIKOVANÁ METODIKA, č. 93 Příprava bovinních embryí definovaného pohlaví v systému in vitro Autoři Ing. Marie Machatková, CSc. MVDr. Pavlína Hulínská, Ph.D. Mgr. Kateřina Hanzalová ISBN 978-80-88233-32-9
Komplement fixační antigen Influenza A (KF Ag Influenza A)
Komplement fixační antigen Influenza A (KF Ag Influenza A) OD - 109 Návod k použití soupravy VÝROBCE : VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II/365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, tel.: 261090565 www.vidia.cz
GERI, GEMS A GAVI ZKUŠENOSTI A KLINICKÉ VÝSLEDKY. RNDr. Kateřina Wagnerová, Mgr. Pavlína Motlová, Mgr. Michaela Žáková, MUDr.
GERI, GEMS A GAVI ZKUŠENOSTI A KLINICKÉ VÝSLEDKY RNDr. Kateřina Wagnerová, Mgr. Pavlína Motlová, Mgr. Michaela Žáková, MUDr. Pavel Texl ÚVOD Obor asistované reprodukce prodělal od svého vzniku velký rozvoj
Jana Fauknerová Matějčková
Jana Fauknerová Matějčková vyjadřování koncentrace molarita procentuální koncentrace osmolarita, osmotický tlak ředění roztoků převody jednotek předpona označení řád giga- G 10 9 mega- M 10 6 kilo- k 10
POSTUPY PRÁCE. 1.1 Stanovení počtu erytrocytů
POSTUPY PRÁCE 1.1 Stanovení počtu erytrocytů Potřeby: banička, Hayemův roztok, mikropipety 25 l a 4 950 l, kapátka, podložní sklíčko, Bürkerova komůrka, krev, emetní miska, čtverečky buničité vaty. Postup
Western blotting. 10% APS 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl
Western blotting 1. Příprava gelu složení aparatury hustotu gelu volit podle velikosti proteinů příprava rozdělovacího gelu: 10% 12% počet gelů 1 2 4 1 2 4 objem 6 ml 12 ml 24 ml 6 ml 12 ml 24 ml 40% akrylamid
PŘÍBALOVÁ INFORMACE. www.geneproof.com. GeneProof PathogenFree DNA Isolation Kit IDNA050 IDNA250. In vitro diagnostický zdravotnický prostředek
PŘÍBALOVÁ INFORMACE GeneProof PathogenFree DNA Isolation Kit IDNA050 IDNA250 In vitro diagnostický zdravotnický prostředek Souprava je vyrobena v souladu s evropskou Směrnicí Rady 98/79/ES jako in vitro
Uchazečem nabízené plnění (obchodní název) Nabídková cena za kus bez DPH. Předpokládaná hodnota celkem v Kč bez DPH
Příloha č. 3 Zadávací dokumentace - laboratorní spotřební materiál 1. část veřejné zakázky: Počet kusů v Počet 1 Oasis HLB 6cc (200mg) SPE kolonky 30 6 chromatografická kolona typu Kinetex 2.6u C18 nebo
cdna synthesis kit First-Strand cdna Synthesis System Verze 1.2
cdna synthesis kit First-Strand cdna Synthesis System Verze 1.2 Obsah soupravy a její skladování Tato souprava pro reverzní transkripci obsahuje reagencie potřebné k provedení reverzní transkripce (RT)
Víme, co vám nabízíme
PDF vygenerováno: 30.12.2016 5:20: Katalog / Laboratorní pomůcky / ace / Nástavce a filtrační špičky na injekční stříkačky Nástavec filtrační na injekční stříkačky MACHEREY-NAGEL Jednoúčelové nástavce
Spektrofotometrické stanovení fosforečnanů ve vodách
Spektrofotometrické stanovení fosforečnanů ve vodách Úkol: Spektrofotometricky stanovte obsah fosforečnanů ve vodě Chemikálie: 0,07165 g dihydrogenfosforečnan draselný KH 2 PO 4 75 ml kyselina sírová H
V lednici (2 8 C) Do 24 hod dní BK - 50 dnů. Uricult Při pokojové teplotě Do hod dní. Při pokojové teplotě
Přehled základních odběrů na bakteriologii - KULTIVACE: Laboratoř upozorňuje, že odběr bez transportní půdy je pro delší uchování a transport nevhodný. Při nedodržení postupů preanalytické fáze nemusí
LRR/BUBCV CVIČENÍ Z BUNĚČNÉ BIOLOGIE 3. TESTY ŽIVOTASCHOPNOSTI A POČÍTÁNÍ BUNĚK
LRR/BUBCV CVIČEÍ Z BUĚČÉ BILGIE 3. TESTY ŽIVTASCHPSTI A PČÍTÁÍ BUĚK TERETICKÝ ÚVD: Při práci s buňkami je jedním ze základních sledovaných parametrů stanovení jejich životaschopnosti (viability). Tímto
I N V E S T I C E D O R O Z V O J E V Z D Ě L Á V Á N Í
I N V E S T I C E D O R O Z V O J E V Z D Ě L Á V Á N Í TENTO PROJEKT JE SPOLUFINANCOVÁN EVROPSKÝM SOCIÁLNÍM FONDEM A STÁTNÍM ROZPOČTEM ČESKÉ REPUBLIKY Laboratorní práce č. 10 Bílkoviny Pro potřeby projektu
PŘEVODY JEDNOTEK. jednotky " 1. základní
PŘEVODY JEDNOTEK jednotky 1. základní Fyzikální veličina Jednotka Značka Délka l metr m Hmotnost m kilogram kg Čas t sekunda s Termodynamická teplota T kelvin K Látkové množství n mol mol Elektrický proud
N217019 - Laboratoř hydrobiologie a mikrobiologie
ÚSTAV TECHNOLOGIE VODY A PROSTŘEDÍ N217019 - Laboratoř hydrobiologie a mikrobiologie Název úlohy: Hydrobiologie: Stanovení koncentrace chlorofylu-a Vypracováno v rámci projektu: Inovace a restrukturalizace
zjištění Downova, Edwardsova a Patauova syndromu plodu z odběru krve matky další fotografie CD / DVD
platný od 1. 4. 2013 Tento ceník je platný pro výkony, které nejsou hrazeny zdravotními pojišťovnami a vycházejí z katalogu dohodnutých služeb poskytovaných na žádost pacienta, vydaného ČLK a jsou všemi
Českomoravská společnost chovatelů, a.s.
Českomoravská společnost chovatelů, a.s. Přenos embryí skotu v České republice v roce 2007 V ý r o č n í z p r á v a Květen, 2008 Vypracovala: Ing. Jiřina Petelíková,CSc. Metoda ET u skotu v České republice
Zkouška inhibice růstu řas
Zkouška inhibice růstu řas VYPRACOVALI: TEREZA DVOŘÁKOVÁ JINDŘICH ŠMÍD Porovnáváme : Zkouška inhibice růstu sladkovodních řas Scenedesmus subspicatus a Senastrum capricornutum : sekce C.3. Zkouška inhibice
DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KOLOREKTÁLNÍHO KARCINOMU
Úvod IntellMed, s.r.o., Václavské náměstí 820/41, 110 00 Praha 1 DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KOLOREKTÁLNÍHO KARCINOMU Jednou z nejvhodnějších metod pro detekci minimální
MagPurix Forensic DNA Extraction Kit
MagPurix Forensic DNA Extraction Kit Kat. č. ZP02010 Doba zpracování: 40-50 minut pro MagPurix 12S 40-60 minut pro MagPurix 24 Použití Souprava MagPurix Forensic DNA Extraction Kit je určena pro izolátor
CENÍK ASISTOVANÉ REPRODUKCE SAMOPLÁTCI
Ceník pro samoplátce je určen pro klienty, kteří nejsou pojištěni u žádné ze zdravotních pojišťoven v ČR. Pro platby v je platný fixní konverzní kurz 1 EUR : 25,495 CZK. Výkony a léčebné postupy je možné
DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KARCINOMU PANKREATU
Úvod IntellMed, s.r.o., Václavské náměstí 820/41, 110 00 Praha 1 DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KARCINOMU PANKREATU Jednou z nejvhodnějších metod pro detekci minimální reziduální
Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VÁPNÍKU MANGANOMETRICKY
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU VÁPNÍKU MANGANOMETRICKY 1 Rozsah a účel Tato metoda specifikuje podmínky pro stanovení celkového obsahu vápníku v krmivech, krmných směsích a premixech.
9.00-11.00 Anatomická stavba pohlavních orgánů, pitva pohlavních orgánů krávy, ovce, kozy. (Ing. R. Filipčík, Ph.D.
1. den (10 hodin) 8.00-9.00 Úvod - význam inseminace, historie, ukazatele reprodukce, hodnocení výsledků reprodukce skotu, ovcí a koz (Ing. M. Hošek, Ph.D.) 1h (teorie OZO) 9.00-11.00 Anatomická stavba
MUKOADHEZIVNÍ ORÁLNÍ FILMY
Návod na cvičení pro skupinu č. 1 MUKOADHEZIVNÍ ORÁLNÍ FILMY Cílem praktické části cvičení je příprava a hodnocení dvou druhů MOF: MOF-A: 4 % sodná sůl karboxymethylcelulosy (NaCMC), 3 % glycerol, ad 100
Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - FUMONISIN B 1 A B 2
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - FUMONISIN B 1 A B 2 1 Rozsah a účel Metoda je vhodná pro stanovení fumonisinů B 1 a B 2 v krmivech. 2 Princip Fumonisiny
Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ AKTIVITY FYTÁZY
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ AKTIVITY FYTÁZY 1 Rozsah a účel Postup specifikuje stanovení fytázové aktivity ve vzorcích krmiva. Tímto postupem se nestanoví rozdíl mezi fytázou přidanou
Príloha č. 1: Prehľadná situácia umiestnenia navrhovanej činnosti (1:50 000) Zdroj obr.: Google maps, https://maps.google.com/
Príloha č. 1: Prehľadná situácia umiestnenia navrhovanej činnosti (1:50 000) Miesto navrhovanej činnosti Zdroj obr.: Google maps, https://maps.google.com/ Jestvujúci areál spoločnosti FARGUELL NITRA, Priemyselný
Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - ZEARALENON
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - ZEARALENON 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení zearalenonu v krmivech. 1 Zearalenon (ZON) je charakterizován
18.914,- Kč do dne OPU 5.404,- Kč v den ET nebo v den mražení. V případě, že se embryotransfer neuskuteční, nebude tato částka účtována.
Tento ceník je určen pro samoplátce (pacienty nepojištěné u smluvních zdravotních pojišťoven). Poplatek za první konzultaci je 2. 702,- Kč a odečte se od zbývajících nákladů na léčbu, kterou můžete podstoupit
Intrafolikulární injekce u skotu.
Veterinární a farmaceutická univerzita Brno Fakulta veterinárního lékařství Palackého třída 1946/1, 612 42 Brno CERTIFIKOVANÁ METODIKA Intrafolikulární injekce u skotu. Autoři doc. MVDr. Svatopluk Čech,
Tento dokument je třeba brát jako dokumentační nástroj a instituce nenesou jakoukoli odpovědnost za jeho obsah
2006D0168 CS 01.01.2013 003.001 1 Tento dokument je třeba brát jako dokumentační nástroj a instituce nenesou jakoukoli odpovědnost za jeho obsah B ROZHODNUTÍ KOMISE ze dne 4. ledna 2006, kterým se stanoví
Téma: Testy životaschopnosti a Počítání buněk
LRR/BUBV vičení z buněčné biologie Úloha č. 3 Téma: Testy životaschopnosti a Počítání Úvod: Při práci s buňkami je jedním ze základních sledovaných parametrů stanovení jejich životaschopnosti (viability).
Vybraná vyšetření u pacientů s diabetes mellitus
ÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE A LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY 1. LF UK Vybraná vyšetření u pacientů s diabetes mellitus Praktické cvičení z lékařské biochemie Všeobecné lékařství Martin Vejražka 2018/19 Obsah 1.
SurTec 650 chromital TCP
SurTec 650 chromital TCP Vlastnosti pasivace bez chromu(vi) pro hliník vhodný pro utěsnění eloxu 1) vhodný pro pasivaci hořčíku 1) kapalný koncentrát na bázi trojmocného chromu vynikající ochrana proti
Mgr. Dagmar Chátalova
Mgr. Dagmar Chátalova Transfuze - převod lidské krve nebo krevních přípravků od jednoho člověka ( dárce ) do krevního oběhu druhého člověka ( příjemce ) Indikace při ztrátě krve úraz, operace,těžký porod,
Protokol 04. pšeničná bílkovina. masné výrobky. plná verze
1 Popis vzorku Podle protokolu č. 04 lze vyšetřit vzorky různých druhů masných výrobků na přítomnost pšeničné bílkoviny. 2 Detekční limit vyšetření Přítomnost pšeničné bílkoviny lze spolehlivě prokázat,
167 ml Folinova činidla doplníme do 500 ml destilovanou vodou. Toto činidlo je nestabilní, je nutné připravit vždy čerstvé a uložit při 4 C.
ROZTOKY 1. Činidlo A 12,5 g (NH 4 ) 6 MO 7 O 4. 4H 2 O rozpustíme ve 125 ml bidestilované vody; 0,5 g K(SbO)C 4 H 4 O 6. 0,5 H 2 O rozpustíme ve 20 ml bidestilované vody; Oba tyto roztoky důkladně promícháme
Cvičení ke kurzu Obecná ekotoxikologie. Úloha A - Stanovení ekotoxicity v testu klíčení rostlin
Cvičení ke kurzu Obecná ekotoxikologie Nutné potřeby, které studenti přinesou s sebou do cvičení: - Tento návod - Poznámkový sešit, psací potřeby - Nůžky - Pravítko (s milimetrovým rozlišením) - Přezůvky
Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU 5-VINYL - 2-THIOOXAZOLIDONU (GOITRINU) METODOU GC
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU 5-VINYL - 2-THIOOXAZOLIDONU (GOITRINU) METODOU GC 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení vinylthiooxazolidonu (dále VOT) v krmivech.
HbA1c. Axis - Shield. Společnost je zapsána v obchodním rejstříku Městského soudu v Praze, odd. C vložka 1299
Lékařská technika a speciální zdravotní materiál Společnost je zapsána v obchodním rejstříku Městského soudu v Praze, odd. C vložka 1299 Obchodní 110, 251 70 Praha Čestlice Tel. +420 296 328 300 Fax. +420
1 Popis vzorku. 2 Detekční limit vyšetření. 3 Časová náročnost. 4 Zpracování vzorku. 4.1 Množství vzorku. 4.2 Odběr vzorků
1 Popis vzorku Dle tohoto postupu se vyšetřují různé vzorky škrobů nebo sypkých výrobků obsahujících škrob (pudinky apod.). Pomocí mikroskopického vyšetření lze nejen prokázat přítomnost škrobu, ale také
Ceník služeb IVF DÁRCOVSKÝ PROGRAM. Kompletní IVF cyklus - bez úhrady ZP Kč. IVF cyklus přerušený před odběrem oocytů Kč.
Ceník služeb IVF Kompletní IVF cyklus - bez úhrady ZP IVF cyklus přerušený před odběrem oocytů IVF cyklus bez zisku oocytů Úhrada v den OPU 32 1 17 000 Kč 1 15 Zahrnuje: konzultaci při zahájení IVF cyklu,
Příprava půd pro diskovou difuzní metodu EUCAST a pro vyšetření hodnot MIC bujonovou mikrodiluční metodou. Změny proti předchozí verzi (v. 4.
Version 5.0 January 2017 Příprava půd pro diskovou difuzní metodu EUCAST a pro vyšetření hodnot MIC bujonovou mikrodiluční metodou. Změny proti předchozí verzi (v. 4.0) A. Půdy pro diskovou difuzní metodu
Chromoprobe Multiprobe - T System
Návod k použití REF: PMP 009/PMP 008/ PMP 007 Chromoprobe Multiprobe - T System Pouze pro profesionální použití Fluorescenční In Situ Hybridizace (FISH) je technika, která umožňuje detekci DNA sekvencí
DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIUDÁLNÍ CHOROBY MRD EGFR
Úvod IntellMed, s.r.o., Václavské náměstí 820/41, 110 00 Praha 1 DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIUDÁLNÍ CHOROBY MRD EGFR Jednou z nejvhodnějších metod pro detekci minimální reziduální choroby
Projekt: Digitální učební materiály ve škole, registrační číslo projektu CZ.1.07/1.5.00/34.0527
Projekt: Digitální učební materiály ve škole, registrační číslo projektu CZ.1.07/1.5.00/34.0527 Příjemce: Střední zdravotnická škola a Vyšší odborná škola zdravotnická, Husova 3, 371 60 České Budějovice
MICRONUKLEUS TEST MODIFIKACE S CYTOCHALASINEM B
MICRONUKLEUS TEST MODIFIKACE S CYTOCHALASINEM B O B S A H: 1. Princip Micronucleus testu 2. Chemikálie a spotřební materiál 3. Přístroje a pomocná zařízení 4. Pracovní postup 4.1 Kultivace buněk 4.2 Zpracování
Speciální odběrové soupravy krácená verze pro tisk. Odběrové soupravy pro odběr žilní krve
Speciální odběrové soupravy krácená verze pro tisk pro odběr žilní krve id:1 Odběrová stříkačka na srážlivou krev (SARSTEDT) id:2 Odběrová stříkačka na nesrážlivou krev s EDTA (SARSTEDT) Vytištěno ke dni:
Alternativy: adopce, pěstounská péče
Léčba neplodnosti neplodnost je vždy nemocí páru! léčbu lze provádět různými postupy: léčba psychosociální, léčba farmaky, asistovaná reprodukce od inseminace po IVF základní etická otázka nejobecnějšího
Médium LymphoGrow. Informace o produktu
Médium LymphoGrow CE Informace o produktu Médium LymphoGrow LGM-100M 100 ml (zmražené) CytoGen GmbH) produktová informace z 7.12.2005) Verze 1.2 www.cytogen.info5tr. 1 z 5 PentaGen s.r.o. tel.+420 606
Projekt: Digitální učební materiály ve škole, registrační číslo projektu CZ.1.07/1.5.00/34.0527
Projekt: Digitální učební materiály ve škole, registrační číslo projektu CZ.1.07/1.5.00/34.0527 Příjemce: Střední zdravotnická škola a Vyšší odborná škola zdravotnická, Husova 3, 371 60 České Budějovice
Proteinový fingerprinting vaječného bílku
Proteinový fingerprinting vaječného bílku Proteinový fingerprinting je technika studia populací organizmů založená na izoelektrické fokuzaci (IEF). IEF spočívá v elektroforetickém dělení proteinů podle
Izolace genomové DNA ze savčích buněk, stanovení koncentrace DNA pomocí absorpční spektrofotometrie
Izolace genomové DNA ze savčích buněk, stanovení koncentrace DNA pomocí absorpční spektrofotometrie IZOLACE GENOMOVÉ DNA Deoxyribonukleová kyselina (DNA) představuje základní genetický materiál většiny
Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv
Národní referenční laboratoř Strana KVANTITATIVNÍ STANOVENÍ GENETICKÝCH MODIFIKACÍ METODOU qpcr POMOCÍ ROTOR-GENE PROBE PCR KITU Účel a rozsah Postup slouží ke kvantitativnímu stanovení genetických modifikací
Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU KOBALTU METODOU ICP-MS
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU KOBALTU METODOU ICP-MS 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení celkového obsahu kobaltu v krmivech metodou hmotnostní spektrometrie
MagPurix Bacterial DNA Extraction Kit
MagPurix Bacterial DNA Extraction Kit Kat. č. ZP02006 Doba zpracování: 55-65 minut pro MagPurix 12S 55-75 minut pro MagPurix 24 Použití Souprava MagPurix Bacterial DNA Extraction Kit je určena pro izolátor