Médium LymphoGrow. Informace o produktu

Transkript

1 Médium LymphoGrow CE Informace o produktu Médium LymphoGrow LGM-100M 100 ml (zmražené) CytoGen GmbH) produktová informace z ) Verze z 5 PentaGen s.r.o. tel info@pentagen.cz wvjw.pentagen.cz

2 Médium LymphoGrow Návod k použití UPOZORNENí: Pri práci dodržujte zásady práce s biohazardním materiálem Katal. c. LGM-100 (100 ml zmraženého roztoku) Predpokládané použití Médium LymphoGrow je urceno pro použití v in vitro diagnostice a bylo vyvinuto pro kultivaci Iymfocytu Z periferní krve. Médium obsahuje mitogen phytohemagglutinin (PHA). Mitogen - zporostredkovaný bunecný rust produkuje bdnky, které jsou vhodné pro karyotypizaci, fluorescencní in situ hybridizaci (FISH) a další cytogenetické procedury. Produkt byl velmi rozsáhle testován predními Evropskými klinickými cytogenetickými diagnostickými referencními laboratoremi. Obecné Lymfocyty periferní krve se bežne používají v cytogenetických laboratorích k cytogenetické alalýze. Lymbocytární bunky jsou zralé bunky, v nichž lze stimulovat mitózu pomocí mitogenu, napr. PHA. Takto stimulované bunky jsou vhodné pro chromozomální analýzu. Cytogenetické laboratore casto používají kompletní média, která jsou založena na bazálním médiu (DM EM? CMRL 1066 nebo RPMI1640), doplnené o fetální hovezí sérum (FBS), PHA, L-glutamin a antibiotika. LymphoGrow je pripraveno k použití a obsahuje sérum, PHA, L-glutamin a antibiotikum Pen-Strep. Toto médium vykazuje menší variabilitu jednotlivých šetrí cas potrebný na testování jednotlivých šarží séra. šarží a Popis produktu Médium LymphoGrow je dodáváno zmražené a kompletní, pripravené k použití ve 100 ml lahvickách. Obsahuje antibiotikum Pen-Strep, L-glutarr:in, zárodecné hovezí sérum (FBS), fytohemaglutinin P (PHA-P), takže je jeho použí'lání velmi pohodlné. Médium LymphoGrow je pufrováno bikarbonátem sodným a jako ph indikátor je použita fenolová cerven. Kompletnost média snižuje možnost ',:echnické chyby a kontaminace kultury. CytoGen GmbH, produktová informace Z , Verze 1.~ 2 z 5

3 Skladování Zmražené: Skladujte pri -10 až -20 C v temnu až do konce exspiracní doby uvedené na nálepce. Doba exspirace: Jeden rok od data výroby, pokud je skladováno Limitace: Nepoužívejte po datu exspirace. Návod k použití dle doporucení. Médium LymphoGrow je kompletní médium, dodávané zmražené a sterilní. Filtrování média není potrebné. Úspešnost kultivace závisí na použití vh ::>dnýchaseptických technik. Rozmražujte pri 4 C až 8 C, vyšší teplota degraduje h=~rmolabilní komponenty. Tesne pred použitím zahrejte na pokojovou teplc1tu a jemne míchejte pro dokonalé promíchání. LymphoGrow uchovávejte po otevrení ve tme pri 2 až 8 C a spotrebujte do 2 týdnu pro maximální kvalitu kultivace. Vyvarujte se opakovanému zmrazování a delší expozici svetlu. LymphoGrow mužete asepticky rozdelit do menších alikvotu, které zmrazíte a opetovne rozmrazíte tesne pred použitím. Rozmražení média LymphoGrow rozmrazujte pred použitím ve vodní lázni s teplo'~ou 37 C za obcasného míchání. Alternativne mužete rozmrazit médium v CO2 inkubácoru pri 37 C s povoleným víckem, aby se umožnila normalizace ph. Teplé llédium se správným ph je pro zahájení kultivace optimální. Antibiotika LymphoGrow obsahuje Pen-Strep k zabránení rustu bakterií. Upozornení Kontaktujte prímo Sales & Marketing Department výrobce CytoGen GmbH pro jakékoli pochybnosti o kvalite média. Nepoužívejte médium, jestliže je Obal jakkoli porušen. Médium kalné, nebo obsahuje viditelný precipitát. Barva není oranžove cervená. CytoGen GmbH, produktová informace z , Verze z 5

4 Pokud obdržíte produkt rozmražený. nebo cástecne rozmražellý, okamžite ho zamrazte na -20 C a kontaktujte distributora. Limitace LymphoGrow je urceno pro in vitro diagnostické postupy vyžadující kultivaci a rust Iymfocytu periferní krve. Pridávání jakýchkoli dalších suplementu se nedoporucuje. Pridávání komponent a redení média muže mít negativní vliv na rust bunek a integritu chromozomu. Každá laborator si musí médium sama otestovat ve vlastním provozu a v návaznosti na vlastní zavedené postupy pred zaclenením do systému in I/itro diagnostiky. Príspevkem firmy CytoGen je pouze kultivace bunek, respektive dodávka kvalitního média. CytoGen nemuže zodpovídat za výsledky testu, které ~;epo kultivaci následne provádejí. CytoGen média se pripravují asepticky. Kultivacní protokoly Následující protokol je návodem k provádení kultivací Iymfocytu periferní krve s použitím LymphoGrow. Muže být použit dle uvážení zákazníka k náhrade bud cásti nebo celého kultivacního protokolu. Vetšina cytogenetických laboratorí má vlastní protokoly a LymphoGrow muže být ve vetšine prípadu použito v rámci techto protokolu. Následující reagencie jsou potrebné (nejsou soucástí dodávky): Colcemid 10JJg/ml KCI roztok 0,075M Methanol/Kyselina octová 3: 1 CytoGen GmbH, produktová informace z , Verze z 5

5 1. Nechte roztát potrebné množství LymphoGrow a vytemperujte na pokojovou teplotu. 2. Sterilne preneste 0,5 ml heparinizované plné krve do zkumavky. 3. Zamíchejte a inkubujte kultury pri 37 C v 5% CO2 atmosfére v inkubátoru 48 až 72 hodin (zkumavky musejí ležet horizontálne) h pred koncem inkubace pridejte 0,1 ml Colcemidu (na finální koncentraci 0,1 Ilg/ml) 5. Centrifugujte (5 minut pri 500 g) 6. Vylijte témer všechen supernatant (nechte jen pár kapek na dne). 7. Pridejte 5-10 ml KCI 0,075 M predehráté na 37 C (prubežne míchejte) minut inkubujte pri pokojové teplote 9. Centrifugujte (5 min pri 500 g) 10. Pridejte 5-8 ml fixativa (cerstve prepravené 3 díly me~thanolua 1 díl kyseliny octové) 11. Opakujte kroky 9 a 10 dvakrát. 12. Resuspendujte bunecný pelet v malém objemu cerswého fixativa. Pokud potrebujete uschovat bunecný pe let, doporucujeme zkumavku peclive uzavrít a zmrazit na -20 C. Pro karyotypizaci postupujte dle svého osvedceného protokoll. Pouze pro použití v in vitro diagnostice NENí urceno pro humánní ani veterinární terapeutické doporucené, muže být v rozporu s místními zákony. úcely. Použití jiné, než Výrobce: CytoGen GmbH, Bienenweg 28, Sinn, Ni!mecko Bienenweg 28, D Sinn, Germany Tel Fax CytoGen@Eurobiz.de Web: Distributor pro Ceskou republiku a Slovensko: PentaGen ~~.r.o., info@pentagen.cz CytoGen GmbH, produktová informace z , Verze z 5