Vliv vysokého tlaku na snížení alergenicity proteinů rmal d1 a rdau c1 a orientační kvantifikace jejich obsahu v jablku Golden Delicious a mrkvi
|
|
- Ján Moravec
- před 8 lety
- Počet zobrazení:
Transkript
1 Vliv vysokého tlaku na snížení alergenicity proteinů rmal d1 a rdau c1 a orientační kvantifikace jejich obsahu v jablku Golden Delicious a mrkvi Influence of the high pressure on reduction of allergenicity of proteins rmal d1, rdau c1 and orientation quantification of their contents in apple Golden Delicious and in carrot IVANA ŠETINOVÁ 1, STANISLAVA HONZOVÁ 1, ANABELA KVÁČOVÁ 1, BARBORA TRNKOVÁ 1, MARTINA HEROLDOVÁ 2, HELENA VÁVROVÁ 2, PETR KUČERA 2, MILAN HOUŠKA 3, MILENA KMÍNKOVÁ 3, DANA GABROVSKÁ 3, JAN STROHALM 3, I. PAULÍČKOVÁ 3, ONDŘEJ JULÍNEK 4, MARIE URBANOVÁ 4 1 Imumed, Imunologické centrum, Synlab. cz s. r. o. Praha 2 Oddělení alergologie a klinické imunologie, FN Královské Vinohrady a 3. LF UK Praha 3 Výzkumný ústav potravinářský, Praha 4 VŠCHT, Praha SOUHRN Cílem práce bylo ověřit hypotézu o vlivu tlaku, doby ošetření a teploty na snížení nebo odstranění alergenních účinků proteinů rmal d1, rdau c1. Alergeny rmal d1 a rdau c1 byly ošetřeny vysokým tlakem 4, 4,, MPa při vybrané konstantní teplotě C s výdrží tlaku 3 min. a 1 min. a poté konstantním tlakem MPa po dobu 1 min. při teplotách 3, 4 a C. Test aktivace basofilů (BAT) byl proveden u 2 břízových alergiků s projevy orálního alergického syndromu po jablku a mrkvi a zároveň s laboratorně prokázanou senzibilizací na alergeny rbet v 1, rmal d1 a rdau c1. Metodou Western blot bylo zjišťováno, zda reaguje sérum senzibilizovaných pacientů s ošetřenými alergeny rmal d1 a rdau c1 tlakem MPa s výdrží 1 min při teplotách 3, 4 a C. Změny struktury rmal d1 a rdau c1 vlivem tlakování byly zjišťovány metodou cirkulárního dichroismu na spektropolarimetru J-81 (Jasco, Japonsko). Vliv vysokého tlaku a vliv mírné teploty na snížení alergenicity proteinů rmal d1 a rdau c1 se nepodařilo v in vitro testech prokázat. Vlivem vysokého tlaku došlo u rmal d1 ke spektrálním změnám se zvyšováním β-helikálních struktur, které však neměly vliv na jeho reaktivitu v in vitro testech. Byl proveden pokus o kvantifikaci obsahu těchto proteinů v jablcích a mrkvi. Klíčová slova: alergeny rmal d1, rdau c1, vysoký tlak, alergenicita SUMMARY The aim of study was to verify the hypothesis of impact of the high pressure, time and moderate temperature on the reduction of allergenicity of proteins rmal d1 and rdau c1. Recombinant allergens rmal d1 and rdau c1 were treated by high pressures 4, 4,, MPa held for 3 and 1 minutes at constant temperature of C and by the constant pressure of MPa for 1 minutes at temperatures 3, 4 and C. The basophile activation test was performed using cells from 2 birch allergic patients with oral allergy syndrome to apple and to carrot who have sensitisation to Bet v 1, Mal d 1 and Dau c1. The reactivity of the serum from sensitized patients with treated allergens rmal d1 and rdau c1 at pressure MPa for 1 minutes at 3 C was verified by Western blot. The modification of structures rmal d1 and rdau c1 by high pressure was determined by circular dichroism (spectropolarimetr J-81). We did not confirm the influence of high pressure and moderate temperature on allergenicity of rmal d1 and rdau c1 proteins in vitro. The high pressure of MPa showed major spectral changes in protein rmal d1 without the reduction of its in vitro reactivity. We have attempted to quantify the content of these proteins in apples and carrot. Key words: allergens rmal d1, rdau c1, high pressure, allergenicity 12 Alergie 2/29
2 Úvod K velmi častým inhalačním alergenům v oblasti severní a střední Evropy patří pyly břízy. V posledních letech stoupá počet pacientů se zkříženou potravinovou alergií vlivem homologie mezi alergeny pylu břízy a potravinami rostlinného původu. Jablko patří k nejčastěji konsumovanému a nejrozšířenějšímu ovoci v těchto oblastech. Jeho hlavní alergen Mal d1 je velmi často zodpovědný díky své homologii s hlavním alergenem břízy Bet v1 za alergické projevy u břízových alergiků (,8). Přibližně % pacientů s potravinovou alergií ve střední Evropě trpí projevy orálního alergického syndromu po požití mrkve. Tyto obtíže nejčastěji vyvolává hlavní alergen mrkve Dau c1 (2). Proto je snaha o přípravu potravin dobře snášených a současně minimálně zpracovaných. Do popředí pozornosti se dostávají technologie, které by vedly ke snížení alergenicity těchto potravin. V literatuře se objevují údaje o možnosti snižování alergenicity potravin, obsahujících alergeny homologní s hlavním alergenem pylu břízy Bet v1, ošetřením vysokým tlakem (7,11,12). Toto ošetření je relativně novou technologií v potravinářském průmyslu a dává naději k využití této metody pro výrobu potravin s charakterem vysloveně čerstvých produktů bez tepelného zpracování. Tímto způsobem ošetřené potraviny by měly charakter hypoalergenní a zároveň by zůstal zachován obsah vitaminů (11). Cílem naší práce bylo ověřit publikovanou a zatím neověřenou hypotézu, zda působení vysokého tlaku, doby ošetření a teploty má vliv na snížení nebo odstranění alergenních účinků proteinů rmal d1, rdau c1. Dalším cílem bylo pokusit se orientačně kvantifikovat obsah alergenu Mal d1 v jablečném extraktu a alergenu Dau c1 v mrkvovém extraktu. Byla použita semikvantitativní ELFO metoda (SDS-PAGE). Touto metodou byl stanoven obsah alergenu v jablcích odrůdy Golden delicious od různých pěstitelů. Dále byl stanoven obsah alergenu Dau c1 v mrkvi odrůda Maxima F1. Obsah alergenu Dau c 1 byl zjišťován u mrkve v závislosti na způsobu zpracování. Metodika Metoda analýzy obsahu Mal d1 a Dau c1 v jablečném a mrkvovém homogenátu Pro elektroforetické dělení jablečných a mrkvových proteinů o různých molekulových hmotnostech byla použita SDS elektroforéza na polyakrylamidovém gelu (SDS-PAGE). Aniontový detergent dodecylsíran sodný (SDS) se váže na povrch proteinů, čímž je denaturuje a proteiny získávají podobný tvar a hustotu náboje. SDS se váže na bílkovinný řetězec v poměru 1,4 g SDS na 1 g bílkoviny, přičemž délka komplexu SDS-bílkovina je úměrná jeho molekulové hmotnosti. Na základě srovnání relativních mobilit neznámé bílkoviny a standardů je možné určit její relativní molekulovou hmotnost. Přidáním merkaptoethanolu ke vzorku bílkovin dochází k redukci disulfidické vazby spojující jednotlivé polypeptidové řetězce molekuly bílkovin a je možno tak stanovit jejich molekulovou hmotnost. Detekce separovaných bílkovin byla provedena barvením Coomassie Brilliant Blue. Materiál pro přípravu roztoků rmal d1, rdau c1 Lahvičky rekombinantního alergenu rmal d1.8 a rdau c1 v lyofilizovaném stavu v množství 1 mg byly dodány firmou Biomay. Do nádobky s 2 mg lyofilisovaného alergenu byl přidán pufr na konečný objem 1 ml, získané množství bylo rozplněno do mikro-zkumavek o objemu 1,6 ml. Takto bylo připraveno 9 zkumavek po 1 ml vzorku rmal d1 a rdau c1 pro studium struktury metodou cirkulárního dichroismu (CD spekter), pro laboratorní test aktivace bazofilů a metodu Western blot. Vzorky byly skladovány při -3 C a před použitím šetrně rozmraženy v chladničce při teplotě do C. Tlakování roztoků alergenů Vzorky roztoků alergenů byly vyjmuty z mrazicího boxu, do víčka nádobky byl propíchnut otvor,6 mm, pod víčko vložena pryžová membrána a nádobka uzavřena (plastová mikro-zkumavka nádobka o objemu 1,6 ml s víčkem). Pak byly vzorky vloženy do PA/PE sáčků, ty naplněny vodou, uzavřeny a temperovány na teplotu 1 C po dobu 3 minut. K ošetření byl použit isostatický lis Žďas CYX 6/13 o objemu komory 2 litry. K testování byly připraveny vzorky ošetřené tlakem 4 MPa s výdrží tlaku 3 minuty a 1 minut (4/3, 4/1, 4/3, 4/1, /3, /1, /3 a /1) a rovněž vzorek neošetřený (značen /). Tlakovým médiem byla pitná voda o teplotě 1 C. Před každým tlakováním byla provedena výměna vody v komoře. Teplota komory se pohybovala od 16, do 17,6 C. Kompresní ohřátí těchto vzorků lze odhadnout na 3 C/1 MPa, což znamená, že se teplota vzorků po stlačení pohybovala v závislosti na konečném tlaku v rozmezí cca 22 až 26, C. Po ošetření byly vzorky okamžitě uloženy v chladničce o teplotě cca C. Po ukončení tlakování všech vzorků byly sáčky otevřeny, vylita voda a sáčky opět uzavřeny a umístěny zpět do chladničky. V chlazeném stavu byly tentýž den převezeny do laboratoří na stanovení CD spekter a k testování aktivace bazofilů. Pro tento test byly vzorky uchovány v mraženém stavu do použití v testu. Dále byl zvolen režim tlakování MPa s dobou výdrže 1 minut. Doba náběhu na tlak byla 6 sekund, doba dekomprese cca 4 sekundy. Byla použita metoda temperace na cílovou teplotu. Komora byla předem temperována na cílové teploty, které měly být dosaženy u vzorků při výdrži tlaku. Výchozí teploty vzorků byly voleny tak, aby ohřátím vlivem stlačení bylo právě dosaženo cílové teploty. Pak je teplota komory i teplota tlakovací vody i vzorku v rovnováze a nedochází tudíž ke změnám teploty při výdrži na tlaku. Byly zvoleny teploty 3, 4 a C. Označení vzorků bylo 1-3, 1-4 a 1-. Byl rovněž připraven vzorek tlakem neošetřený, označený -. Test aktivace bazofilů Vliv ošetření rekombinantních alergenů vysokým tlakem na schopnost alergenů aktivovat bazofilní leukocyty Alergie 2/29 13
3 senzibilizovaných pacientů byl zjišťován testem aktivace bazofilů (BAT). Měření bylo prováděno na průtokovém cytometru FC (Beckman-Coulter). Jako pozitivní výsledek byla považována aktivace více než % bazofilů (> % CD23+CD63+). BAT byl proveden u 2 břízových alergiků s projevy OAS na jablko a mrkev s laboratorně prokázanou senzibilizací na hlavní alergeny rbet v 1, rmal d1 a rdau c1. Bazofily byly stimulovány rekombinantními alergeny rmal d1, rdau c1 (1 μl,1 mg/ml, Biomay) ve vodném roztoku a se všemi tlakem ošetřenými vzorky vždy ve dvou ředěních. Statistika Pro statistické zpracování byl použit Wilcoxonův neparametrický test, hodnota p menší než, byla považována za statisticky významnou. Ověření snížení alergenicity metodou Western blot Metoda Western blot byla použita k průkazu, zda reaguje sérum prokazatelně citlivých pacientů s roztoky alergenu ošetřenými tlakem MPa s výdrží 1 minut tlakované při teplotách 3, 4 a C. Pro imunoreakce byla použita séra senzibilizovaných pacientů na alergen Mal d1 a Dau c1. Protilátky antihuman IgE in goat, antigoat IgG biotin in rabbit, konjugát streptavidin-peroxidasa, substrát peroxid s TMB a chemikálie pro elektroforézu byla získána od firmy Sigma-Aldrich. Vliv záhřevu a tlaku na alergen Mal d1 a Dau c1 byl sledován na rekombinantních standardech těchto alergenů. Ověření vlivu vysokého tlaku na změnu struktury rmal d1, rdau c1 Změny struktury alergenů vlivem tlakování byly ověřovány metodou cirkulárního dichroismu. Měření spekter elektronového cirkulárního dichroismu (ECD) bylo prováděno na spektropolarimetru J-81 (Jasco, Japonsko). K proplachování přístroje byl použit tlakový dusík o čistotě 4.. Při měření byla kyveta chlazena pomocí Peltiérova článku, jehož funkce byla ovládána řídicí jednotkou PTC-423S (Jasco, Japonsko). Jako řídicí i informační teplotní senzor byl zvolen interní senzor zabudovaný v plášti kyvetového držáku. Odvod tepla produkovaného Peltiérovým článkem byl zajišťován chladícím vodním cirkulačním systémem CTFF 6 (Labio). Všechna měření byla prováděna v křemenné kyvetě o tloušťce optického prostředí 1 mm. Zpracování spekter Absorpční spektra jsou vyjádřena jako závislost hodnoty absorbance na vlnové délce, CD spektra jsou vyjádřena v hodnotách elipticity (jednotky mdeg). U všech absorpčních a CD spekter vzorků alergenů byla provedena korekce základní linie odečtením spektra fosfátového pufru. Pro určování přibližného zastoupení jednotlivých sekundárních struktur v molekule proteinu byla spektra dále upravena: CD spektra alergenů v jednotkách elipticity byla po odečtení základní linie převedena na jednotky molární elipticity [deg.cm 2.dmol -1 ]. Molární koncentrace aminokyselinových zbytků v peptidu byla počítána z údaje o navážce alergenu dodané zadavatelem (1 mg do 1 ml) při použití průměrné molekulové hmotnosti peptidického zbytku 11 g.mol -1. Tento způsob určení koncentrace je zatížen nejistotou určení hmotnosti a objemu a též použitím přibližné hodnoty molekulové hmotnosti peptidového zbytku. Jablka a mrkev Ke studiu obsahu Mal d1 byla zakoupena jablka odrůdy Golden delicious ze sklizně roku 27 od různých pěstitelů v ČR. Dále byl stanoven obsah alergenu Dau c1 v mrkvi. Jednalo se o čerstvou neskladovanou mrkev, odrůda MAXIMA F1 hybridní, země původu ČR (Troubky). Výsledky a diskuse Výsledky analýzy obsahu Mal d 1 v jablečném homogenátu. Tab. 1.1: Obsah proteinu Mal d 1 v jablkách Golden delicious v závislosti na lokalitě (metoda SDS PAGE) Lokalita Obsah Mal d1 (mg/1 ml šťávy) Libčice 1,82 Libčany 11, Tísmice 1,8 Jirkov 11,99 Klatovy 11,23 Těnovice 1,37 Litoměřice 1,79 V. Bílovice 12,8 Semikvantitivní metodou SDS-PAGE byl nejvyšší obsah proteinu Mal d1 zjištěn u jablečných šťáv z jablek vypěstovaných ve Velkých Bílovicích, naopak nejnižší obsah byl analyzován u šťáv z jablek z lokality Tísmice. Obsah proteinu Mal d1 v jablečných šťávách odrůdy Golden delicious klesal sestupně v řadě podle lokalit pěstování: Velké Bílovice > Jirkov > Libčany > Klatovy >Libčice > Litoměřice >Těnovice > Tismice, viz. Tab Je zřejmé, že mezi lokalitami nejsou významné rozdíly. Vzhledem k použité semikvatitativní metodě nelze učinit žádné závěry. Semikvantitativní metodou SDS-PAGE byl stanoven obsah proteinu Dau c1 v mrkvové šťávě v závislosti na způsobu zpracování. Výsledky analýzy jsou uvedeny v Tab Nejvyšší obsah proteinu Dau c1 byl zjištěn v mrkvové šťávě neošetřené. Ošetřením vysokým hydrostatickým tlakem došlo k poklesu o 8 % původního obsahu proteinu Dau c1. Vařením mrkvové šťávy se snížil obsah výše zmiňovaného proteinu o 66 %. 14 Alergie 2/29
4 Tab. 1.2: Obsah proteinu Dau c1 v mrkvové šťávě odrůdy MAXI- MA F1 Způsob zpracování mrkvové šťávy Obsah Dau c1 (mg/1 ml šťávy) neošetřená 22,6 ošetřená vysokým hydrostatickým tlakem 9, ošetřená varem 7,7 Vzhledem k tomu, že tato měření jsou založena na analyzování vzorků pouze z jednoho pokusu, nelze dělat jednoznačné závěry. Dále je nutno brát v úvahu, že výsledky byly získány semikvantitativně a ne kvantitativně. Výsledky testu aktivace bazofilů Graficky znázorněné výsledky testu aktivace bazofilů pro roztoky rmal d1, rdau c1 tlakované při MPa po dobu 1 minut a při různých teplotách jsou uvedeny v grafu 1 6. Jsou zde výsledky pro neředěné vzorky ( ng/ml) a vzorky ředěné ( ng/ml). Z výsledků je patrné, že vlivem vysokého tlaku a vlivem teploty při výdrži na tlaku nedošlo ke snížení aktivace bazofilů. Nepodařilo se prokázat statisticky významné snížení laboratorní senzibilizace v testu aktivace bazofilů s ošetřenými tlakovanými rekombinantními alergeny rmal d1, rdau c1 ve srovnání s neošetřenými alergeny (p <,). % tlakované roztoky rmal d 1 anti IgE rmal d 1 ne rmal d 1 1x rmal d 1 /1 3 ne rmal d 1 /1 3 1x rmal d 1 /1 4 ne rmal d 1 /1 4 1x rmal d 1 /1 ne rmal d 1 /1 1x Graf 3: Výsledky testu aktivace bazofilů s tlakovaným rmal d 1 MPa/1min. při 3 C neředěná a ředěná forma: ng/ ml a ng/ml. % Tlakované roztoky rdau c 1 anti IgE rdau c 1 rdau c rdau c rdau c rdau c rdau c 1 3 rdau c 1 3 rdau c 1 1 Graf 4: Výsledky testu aktivace bazofilů s tlakovaným rdau c 1 4 MPa/ 3 a 1 min. neředěná forma: ng/ml. % Tlakované roztoky rmal d 1 anti IgE rmal d 1 rmal d rmal d rmal d rmal d rmal d 1 3 rmal d 1 1 rmal d 1 3 rmal d 1 1 % Tlakované roztoky rdau c 1 anti IgE rdau c 1 rdau c rdau c rdau c rdau c rdau c 1 3 rdau c 1 3 rdau c 1 1 Graf 1: Výsledky testu aktivace bazofilů s tlakovaným rmal d 1 4 MPa/ 3 a 1 min. neředěná forma: ng/ml. Graf : Výsledky testu aktivace bazofilů s tlakovaným rdau c 1 4 MPa/ 3 a 1 min. ředěná forma: ng/ml. % Tlakované roztoky rmal d 1 anti IgE rmal d 1 rmal d rmal d rmal d rmal d rmal d 1 3 rmal d 1 1 rmal d 1 3 rmal d 1 1 Graf 2: Výsledky testu aktivace bazofilů s tlakovaným rmal d 1 4 MPa/3 a 1 min. ředěná forma: ng/ml. % Tlakované roztoky r Dau c 1 ne ed né a v ed ní 1x anti IgE rdau c 1 ne rdau c 1 rdau c 1 /1 3 ne rdau c 1 /1 3 rdau c 1 /1 4 ne rdau c 1 /1 4 rdau c 1 /1 ne rdau c 1 /1 Graf 6: Výsledky testu aktivace bazofilů s tlakovaným rdau c 1 MPa/1min./3 C neředěná a ředěná forma: ng/ml a ng/ml. Alergie 2/29
5 Výsledky metody Western blot Z výsledků tohoto testu vybíráme především výsledky, týkající se vlivu teploty vzorku při tlakování. V obr. 1 jsou uvedeny výsledky hodnocení pro rmal d1. Všechny vzorky rmal d1 ošetřené tlakem při různé teplotě při výdrži tlaku mají pás v oblasti molekulové hmotnosti Mal d1 (18 kda). U vzorku, zahřátého na nejvyšší použitou teplotu C, se objevují dva pásy v oblastech molekulové váhy Mal d1. Tlak MPa a teplota 3, 4 nebo C neodstranily reaktivitu rmal d1. Naopak, vyšší teplota C měla za následek zvýraznění alergenu tak, že se ukazuje ještě jeden proužek. V gelu, vyvolaném stříbrem, není viditelný žádný rozdíl mezi vzorky vzájemně (2 ) ani mezi nimi a kontrolou (1). Blot Gel kontrola rmal d1 21 bez kontrola záhřevu rmal a d1tlakování (24) 32 bez záhřevu MPa, 1 a tlakování minut, 3 C (24) (18) 3 MPa, 1 minut, 3 (18) 4 MPa, 1 minut 4 C (19) 4 MPa, 1 minut, 4 C (19) MPa, 1 minut C (2) MPa, 1 minut, C (2) Obr. 1: Western blot vliv konstantního vysokého tlaku a různé teploty na alergen rmal d1. V obr. 2 jsou uvedeny výsledky hodnocení pro rdau c1. Nejsilnější proužek je v neošetřeném vzorku v pozici 3. Nejslabší se zdá, že je v pozici při 4 C. Ve vzorku v pozici 6 při C se už vytvářejí další proužky, které se nacházejí pod Dau c1, jsou ale vidět jen málo zřetelně. Můžeme tedy vyvodit závěr, že při těchto podmínkách byl o něco lepší účinek teploty 4 C při konstantním tlaku MPa na čistý alergen rdau c1. Ošetření roztoků rmal d1 a rdau c1 tlakem MPa po dobu 1 minut v rozsahu teplot 3 až C nepřineslo významné snížení reakce při hodnocení metodou Western blot. Spektra cirkulárního dichroismu a absorpční spektra rmal d1 Spektra elektronového cirkulárního dichroismu (dále ECD) a absorpční spektra alergenu rmal d1 vykazují výrazné změny vlivem působení tlaku při době výdrže 1 minut, viz obr. 3 a 4. CD spektra jsou však znatelně zašuměná. Poskytnuté vzorky vykazují nízkou intenzitou CD signálu při poměrně vysoké hodnotě absorbance. Tvar CD spektra v oblasti pod 19 nm ukazuje, že vzorek je zřejmě kontaminován chirální nečistotou. Obecně lze říct, že u rmal d1 s rostoucí hodnotou tlaku a dobou ošetření vysokým tlakem klesá intenzita CD signálů aler- 2 kontrola rdau c bez kontrola záhřevu rdau a tlakování c1 4 3 bez MPa, záhřevu 1 minut, a tlakování 3 C 4 MPa, MPa, 1 1 minut, 4 C 3 C 6 MPa, MPa, 1 1 minut, C 4 C 6 MPa, 1 minut, C Obr. 2: Western blot vliv ošetření tlakem MPa po dobu 1 minut za různých teplot na alergen rdau c1. 16 Alergie 2/29
6 ECD spektra alergenu rmal d1 2 1 CD [mdeg] vlnová délka [nm] Obr. 3: ECD spektra tlakově ošetřených roztoků alergenu rmal d1 desetiminutová série. ABS spektra alergenu rmal d1,7, , -1-1,4 Abs,3,2, vlnová délka [nm] Obr. 4: Absorpční spektra tlakově ošetřených roztoků alergenu rmal d1 desetiminutová série. Alergie 2/29 17
7 rmal d1 % MPa 4 MPa 4 MPa MPa MPa 1 min. 3 min. Obr..1: Zastoupení β-struktury v tlakově ošetřených vzorcích alergenu rmal d1. rmal d1 % MPa 4 MPa 4 MPa 9 MPa 6 MPa 9 1 min. 3 min 3 min. Obr..2: Zastoupení α-struktury v tlakově ošetřených vzorcích alergenu rmal d1. genu jak v záporném maximu u 216 nm, tak v kladném maximu u 19 nm. Spektra ECD a absorpční spektra alergenu rmal d1, který byl vystavený tlaku MPa po dobu 1 min. při teplotách 3, 4 a C, spolu se spektrem kontrolního vzorku alergenu, který nebyl vysokému tlaku vystaven, jsou uvedena na obr. 6. Je patrné, že aplikováním tlaku MPa na vzorek dochází oproti kontrolnímu vzorku k výrazné změně absorpčního i CD spektra. Velké spektrální rozdíly je možné pozorovat i v rámci vzorků ošetřených vysokým tlakem při různých teplotách. Obecně je možné říct, že čím nižší je teplota při aplikaci vysokého tlaku na vzorek alergenu, tím větší spektrální změny jsou pozorovány oproti kontrolnímu vzorku. 18 Alergie 2/29
8 Obr. 6: ECD spektra alergenu rmal d1, který byl vystavený tlaku MPa po dobu 1 min. při teplotách 3, 4 a C, spolu se spektrem kontrolního vzorku alergenu, který nebyl vysokému tlaku vystaven. Odhad zastoupení sekundárních struktur rmal d1 Zastoupení jednotlivých struktur bylo stanoveno prováděno programem Dicroprot metodou K2D (neuronová síť) (1). U alergenu rmal d1 dochází po ošetření nejnižším tlakem (4 MPa) k poklesu zastoupení β-struktury oproti neošetřenému standardu (obr..1), zvyšováním tlaku pak dochází k růstu zastoupení β-struktury, a to pro obě časové série (3 min. a 1 min.). U vzorku vystaveného nejvyššímu použitému tlaku ( MPa) dochází pro obě časové série opět k poklesu zastoupení β-struktury. Opačný trend je možné pozorovat při sledování zastoupení α-helikální struktury (obr..2). Při ošetření vzorku nejnižším tlakem dochází k růstu zastoupení α-helikální struktury, zvyšováním tlaku pak klesá podíl této konformace s výjimkou nejvyššího tlaku, kdy je možné pozorovat mírný nárůst zastoupení α-helikální struktury. Při aplikaci vysokého tlaku MPa a teploty 3 C na alergen Mal d1 dochází ke snižování zastoupení α-helikální struktury v peptidu, zároveň dochází ke zvyšování zastoupení β-sheet struktury (obr. 7.1 a 7.2). Snižování zastoupení α-helikální struktury (a současné zvyšování zastoupení β-sheet struktury) v porovnání s neošetřeným srovnávacím vzorkem je tím vyšší, čím nižší je teplota při aplikaci vysokého tlaku. Největší změny v zastoupení jednotlivých konformací byly tak pozorovány u vzorku ošetřeného vysokým tlakem při teplotě 3 C, naopak nejmenší změny byly pozorovány při aplikaci vysokého tlaku při teplotě C. Spektra cirkulárního dichroismu a absorpční spektra rdau c1 Změny CD a absorpčních spekter alergenu rdau c1 vyvolané působením tlaku jsou na hranici pozorovatelnosti (obr. 8). CD spektra jsou také znatelně zašuměná. Na obr. 1 jsou uvedena ECD spektra alergenu rdau c1, ošetřeného tlakem MPa po dobu 1 minut při teplotách 3, 4 a C. Spektra vykazují jen minimální odlišnosti, projevující se postupným snižováním intenzity CD pásů u 193 a 216 nm v porovnání s neošetřeným srovnávacím vzorkem. Odhad zastoupení sekundárních struktur rdau c1 Zastoupení jednotlivých struktur bylo stanoveno programem Dicroprot metodou K2D (neuronová síť) (1). U alergenu rdau c1 je u tlakově ošetřených vzorků pozorovatelný mírný nárůst zastoupení β-struktury (obr. 9.1) při současném poklesu zastoupení α-helikální struktury (obr. 9.2) oproti neošetřenému srovnávacímu vzorku. V rámci jednotlivých tlakově ošetřených vzorků není pozorovatelná prakticky žádná změna sekundární struktury. Alergie 2/29 19
9 1 min. Obr. 7.1: Zastoupení β-struktury v tlakově ošetřených vzorcích alergenu rmal d1. 1 min. Obr. 7.2: Zastoupení α-struktury v tlakově ošetřených vzorcích alergenu rmal d1. Na obr a 11.2 jsou uvedeny vlivy teploty při tlakování. Po ošetření rdau c1 tlakem MPa po dobu 1 minut při teplotách 3, 4 a C jsou pozorované změny velmi malé (v porovnání s neošetřeným rmal d1). Při působení tlaku dochází k mírné změně zastoupení α-helikální struktury. S rostoucí teplotou použitou při tlakovém ošetření klesá zastoupení α-helikální struktury v alergenu. S rostoucí teplotou zastoupení β-sheet struktury mírně roste. Závěr Ošetření rmal d1 a rdau c1 tlakem v rozsahu 4 až MPa s výdrží 3 až 1 minut nevedlo ke snížení laboratorní senzibilizace v testu aktivace bazofilů u břízových alergiků s projevy OAS na jablko a mrkev. Vliv teploty v rozsahu 3 C při výdrži tlaku MPa po dobu 1 minut se v tomto testu rovněž nepodařilo prokázat. Ošetření tlakem MPa po dobu 1 minut za teplot 3 až C při výdrži tlaku nepřineslo snížení reakce v testu Western blot u senzibilizovaných pacientů. U alergenu Mal d1 byly pozorovány po ošetření vzorku vysokým tlakem poměrně velké spektrální změny. Dochází k výrazné změně jak CD, tak absorpčních spekter vzorků, která je obecně tím větší, čím větší je aplikovaný tlak a doba působení vysokého tlaku. Po ošetření vzorku vysokým tlakem MPa/1 min. při 11 Alergie 2/29
10 Obr. 8: ECD spektra tlakově ošetřených roztoků alergenu Dau c1 desetiminutová série. rdau c1 3 % MPa 4 MPa 4 MPa MPa MPa 1 min. min min 3 min. Obr. 9.1: Zastoupení β-struktury v tlakově ošetřených vzorcích alergenu rdau c1. Alergie 2/29 111
11 rdau c1 4 % MPa 4 MPa 4 MPa MPa MPa 1 min. min 3 min. Obr. 9.2: Zastoupení α-struktury v tlakově ošetřených vzorcích alergenu rdau c1. Obr. 1: ECD spektra alergenu rdau c1, který byl vystavený tlaku MPa po dobu 1 min. při teplotách 3, 4 a C, spolu se spektrem kontrolního vzorku alergenu, který nebyl vysokému tlaku vystaven. 112 Alergie 2/29
12 1 min. Obr. 11.1: Zastoupení β-struktury v tlakově ošetřených vzorcích alergenu rdau c 1. 1 min. Obr. 11.2: Zastoupení α-struktury v tlakově ošetřených vzorcích alergenu rdau c 1. teplotách 3, 4 a C dochází ke snižování zastoupení α-helikální struktury v peptidu, zároveň dochází ke zvyšování zastoupení β-sheet struktury. Největší změny byly pozorovány u vzorku ošetřeného vysokým tlakem při teplotě 3 C, naopak nejmenší změny byly pozorovány při aplikaci vysokého tlaku při teplotě C. Tyto strukturální změny bez funkčního důsledku se pravděpodobně týkaly oblastí, kde nejsou koncentrovány imunodominantní epitopy. Změny CD a absorpčních spekter alergenu rdau c1 vyvolané působením tlaku jsou na hranici pozorovatelnosti. Zdá se, že ani výše tlaku,doba působení a teplota 3 C nevyvolá významné změny struktury. Na rozdíl od rmal d1 byly největší změny CD spekter, absorpčních spekter a zastoupení jednotlivých sekundárních struktur pozorovány pro tlakovaný rdau c1 při nejvyšší použité teplotě C. Z našich výsledků je zřejmé, že se nám nepodařilo prokázat vliv vysokého tlaku, doby ošetření a mírné teploty na snížení nebo odstranění alergenních účinků proteinů rmal d1, rdau c1. Strukturální změny rmal d1 po ošetření tlakem nevedly ke změně jeho reaktivity v in vitro testech. Podpořeno v rámci výzkumného projektu MŠMT 2B6139 Inaktivace alergenů v potravinách pomocí vysokotlaké pasterizace. Alergie 2/29 113
13 LITERATURA 1. Andrade MA, Chacon P, Merelo JJ and Moran F. Evaluation of secondary structure of proteins from UV circular dichroism spectra using an unsupervised learning neural network. Protein Engineering 1993;6: Ballmer-Weber BK, Wangorsch A, Bohle B. Component resolved in vitro diagnosis in carrot allergy: Does the use of recombinant carrot allergens improve the reliability of the diagnostic procedure? Clin Exp Allergy ;3: Cudowska B, Kaczmarski M, Restani P. Immunoblotting in diagnosis of cross-reactivity in children allergic to birch, Annales Academiae Medicae Bialostocensis ; : Hebenstreit D, Ferreira F. Structural changes in calcium-binding allergens: use of circular dichroism to study binding characteristics. Allergy ;6: Herndl A, Mrzban G, Kolarich D. Mapping of Malus domestica allergens by 2-D electrophoresis and IgE-reacitivity. Electrophoresis 27;28: Likeš J, Laga L. Základní statistické tabulky. SNTL Praha 1978; Masson P, Tonello C. Potential applications of High pressure in Pharmaceutical Science and Medicine, High Pressure Research 2;19: Montserrrat Fernandez-Rivas, Bolhaar S, Gonzales-Mancebo E. Apple allergy across Europe: How allergen senzitization profiles determine the clinical expression of allergies to plant foods. J Allergy clin immunol 26 ;118(2): Pelton JT, McLean LR. Spectroscopic methods for analysis of protein secondary structure, Analytic Biochemistry 2;227: Scheuer S. Improvement of the diagnosis of allergy by using purified allergens. Clin Exp Allergy 26;36: Scheibenzuber M. Molekulare und klinische Auswirkungen einer Hochdruckbehandlung von allergenen Lebensmitteln. Disertation 22; Technischen Universitat München. 12. Suzuki A. High pressure processed foods in Japan and the world. Trends in High Pressure Bioscience and Biotechnology 22, Hayashi R, Elsevier Science B.V: Uehara M, SatoK, AbeY. Sequential IgE epitope analysis of a birch pollen allergen(bet v 1) and an apple allergen Mal d 1, Allergology International 21;: Urbanova M, Malon P. Circular dichroism spectroscopy in Analytical methods in Supramolecular Chemistry (Ed.C.Schalley), Wiley-VCH, Weinheim, 27; Chapter 8: MUDr. Ivana Šetinová Imumed s. r. o Mlynářská 4 11 Praha 1 setinova@imumed.cz 114 Alergie 2/29
Diagnostické možnosti alergie na jablko a mrkev u pacientů s projevy orálního alergického syndromu
Diagnostické možnosti alergie na jablko a mrkev u pacientů s projevy orálního alergického syndromu Diagnostic options of allergy to apple and carrot in patients with oral allergy syndrome IVANA ŠETINOVÁ,
VíceHodnocení alergenicity jablečných odrůd
Hodnocení alergenicity jablečných odrůd Assessment of allergenicity of apple cultivars STANISLAVA HONZOVÁ 1, ALEXANDRA PROŠKOVÁ 2, FRANTIŠEK PAPRŠTEIN 3, IVANA ŠETINOVÁ 1, MILENA KMÍNKOVÁ 2, ANABELA KVÁČOVÁ
VíceDIAGNOSTIKA ALERGIÍ NA MOLEKULÁRNÍ ÚROVNI
DIAGNOSTIKA ALERGIÍ NA MOLEKULÁRNÍ ÚROVNI Mgr. Manuela Trojáčková Ph.D. a kolektiv Laboratoř klinické imunologie a alergologie Laboratoře AGEL a.s., Nový Jičín ALERGIE epidemie 21. století Alergická onemocnění
VíceJednotné pracovní postupy testování odrůd STANOVENÍ OBSAHU TANINŮ V ČIROKU SPEKTROFOTOMETRICKY
5321.1 Stanovení obsahu taninů v čiroku Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU TANINŮ V ČIROKU SPEKTROFOTOMETRICKY 1 Účel a rozsah Postup je určen pro stanovení obsahu taninů v zrnech čiroku. 2 Princip Taniny se ze
VíceNÁVOD K POUŽITÍ HOŘČÍK 600 A KATALOGOVÉ ČÍSLO 104
NÁVOD K POUŽITÍ HOŘČÍK 600 A KATALOGOVÉ ČÍSLO 104 POUŽITÍ Souprava Mg 600 A se používá ke kvantitativnímu stanovení koncentrace hořečnatých iontů v séru, v moči a v dalších biologických materiálech. SOUHRN
VíceVeronika Janů Šárka Kopelentová Petr Kučera. Oddělení alergologie a klinické imunologie FNKV Praha
Veronika Janů Šárka Kopelentová Petr Kučera Oddělení alergologie a klinické imunologie FNKV Praha interakce antigenu s protilátkou probíhá pouze v místech epitopů Jeden antigen může na svém povrchu nést
VíceCONTRIBUTION TO UNDERSTANDING OF CORRELATIVE ROLE OF COTYLEDON IN PEA (Pisum sativum L.)
CONTRIBUTION TO UNDERSTANDING OF CORRELATIVE ROLE OF COTYLEDON IN PEA (Pisum sativum L.) PŘÍSPĚVEK K POZNÁNÍ KORLAČNÍ FUNKCE DĚLOHY U HRACHU (Pisum sativum L.) Mikušová Z., Hradilík J. Ústav Biologie rostlin,
VíceRychlá kvalitativní detekce lidského hemoglobinu ve vzorcích stolice. Všeobecné informace použití a vyhodnocení
Rychlá kvalitativní detekce lidského hemoglobinu ve vzorcích stolice Všeobecné informace použití a vyhodnocení Použití FOB plus test na okultní krvácení je rychlý vizuální test, založený na principu imunochromatografické
VíceObsah Protein Gel Electrophoresis Kitu a jeho skladování
Obsah Protein Gel Electrophoresis Kitu a jeho skladování Protein Gel Electrophoresis Kit obsahuje veškerý potřebný materiál provádění vertikální polyakrilamidové gelové elektroforézy. Experiment provádějí
VíceThe target was to verify hypothesis that different types of seeding machines, tires and tire pressure affect density and reduced bulk density.
INFLUENCE OF TRACTOR AND SEEDING MACHINE WEIGHT AND TIRE PRESSURE ON SOIL CHARACTERISTICS VLIV HMOTNOSTI TRAKTORU A SECÍHO STROJE A TLAKU V PNEUMATIKÁCH NA PŮDNÍ VLASTNOSTI Svoboda M., Červinka J. Department
VíceSenzibilizace k alergenovým složkám arašídů a její význam v klinické praxi
Senzibilizace k alergenovým složkám arašídů a její význam v klinické praxi Senzitization to peanut allergen components and its use in clinical practice PETRA VÍTOVCOVÁ, PETR PANZNER, IVANA MALKUSOVÁ, TOMÁŠ
VícePylové alergeny. Workshop 2007. 17. března 2007, Praha
Pylové alergeny Workshop 2007 17. března 2007, Praha Pylové alergeny Workshop 2007 17. března 2007 o. s. pro alergiky, astmatiky a ekzematiky Máša Karlovo náměstí 7, 120 00 Praha 2 Tel: 222162321, mobil:
Více1. Metodika. Protokol č. F1-4 Metodika: Srovnávací analýza efektivity přípravy rekombinantního proteinu ve fermentoru
Protokol č.: F1-4 Datum: 20.12.2010 Metodika: analýza efektivity přípravy výběr z výsledků ze zkušebních provozů výroby antigenů. Vypracoval: Ing. Václav Filištein, Mgr. Tereza Chrudimská, Spolupracující
VíceMETODY STUDIA PROTEINŮ
METODY STUDIA PROTEINŮ Mgr. Vlasta Němcová vlasta.furstova@tiscali.cz OBSAH PŘEDNÁŠKY 1) Stanovení koncentrace proteinu 2) Stanovení AMK sekvence proteinu Hmotnostní spektrometrie Edmanovo odbourávání
VíceVLIV MLETÍ ÚLETOVÉHO POPÍLKU NA PRŮBĚH ALKALICKÉ AKTIVACE
VLIV MLETÍ ÚLETOVÉHO POPÍLKU NA PRŮBĚH ALKALICKÉ AKTIVACE INFLUENCE OF GRINDING OF FLY-ASH ON ALKALI ACTIVATION PROCESS Rostislav Šulc 1 Abstract This paper describes influence of grinding of fly - ash
VíceRapid-VIDITEST FOB+Tf
Rapid-VIDITEST FOB+Tf (Jednokrokový kazetový test pro detekci hemoglobinu a transferrinu ve stolici) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u
VíceIndikační kritéria pro imunoterapii hmyzími jedy. M. Vachová, P. Panzner a kol. ÚIA FN Plzeň
Indikační kritéria pro imunoterapii hmyzími jedy M. Vachová, P. Panzner a kol. ÚIA FN Plzeň 1. Alergie na jed blanokřídlého hmyzu. 2. Imunoterapie hmyzím jedem. 3. Indikační kritéria imunoterapie. Doporučený
Více13/sv. 6 CS (80/891/EHS)
65 31980L0891 27.9.1980 ÚŘEDNÍ VĚSTNÍK EVROPSKÝCH SPOLEČENSTVÍ L 254/35 SMĚRNICE KOMISE ze dne 25. července 1980 o analytické metodě Společenství pro stanovení obsahu kyseliny erukové v olejích a tucích
VíceProtokoly Transformace plasmidu do elektrokompetentních buněk BL21 Pracovní postup:
Protokoly Pracovní potřeby, pufry a chemikálie jsou uvedeny na konci protokolu. Pracovní postupy jsou odvozeny od těchto kitů: Champion pet160 Directional TOPO Expression Kit with Lumio Technology (Invitrogen)
VíceVliv přímořské léčby na atopický ekzém
Vliv přímořské léčby na atopický ekzém The influence of thalassotherapy on atopic eczema JAROSLAVA ŠIMONÍČKOVÁ, GABRIELA POLÁKOVÁ, VÍT PETRŮ Centrum alergologie a klinické imunologie, Nemocnice Na Homolce,
VíceIzolace genomové DNA ze savčích buněk, stanovení koncentrace DNA pomocí absorpční spektrofotometrie
Izolace genomové DNA ze savčích buněk, stanovení koncentrace DNA pomocí absorpční spektrofotometrie IZOLACE GENOMOVÉ DNA Deoxyribonukleová kyselina (DNA) představuje základní genetický materiál většiny
VíceEFFECT OF MALTING BARLEY STEEPING TECHNOLOGY ON WATER CONTENT
EFFECT OF MALTING BARLEY STEEPING TECHNOLOGY ON WATER CONTENT Homola L., Hřivna L. Department of Food Technology, Faculty of Agronomy, Mendel University of Agriculture and Forestry in Brno, Zemedelska
VíceTHE USE OF HIGH PRESSURE PROCESSING ON ELIMINATION OF MICROORGANISMS IN VEGETABLE AND FRUIT JUICES
THE USE OF HIGH PRESSURE PROCESSING ON ELIMINATION OF MICROORGANISMS IN VEGETABLE AND FRUIT JUICES VYUŽITÍ VYSOKÉHO TLAKU PRO LIKVIDACI MIKROORGANISMŮ U ZELENINOVÝCH A OVOCNÝCH ŠŤÁV Kvasničková B., Šroubková
VíceVizualizace DNA ETHIDIUM BROMID. fluorescenční barva interkalační činidlo. do gelu do pufru barvení po elfu SYBR GREEN
ETHIDIUM BROMID fluorescenční barva interkalační činidlo do gelu do pufru barvení po elfu Vizualizace DNA SYBR GREEN Barvení proteinů Coommassie Brilliant Blue Coomassie Blue x barvení stříbrem Porovnání
VíceOvěření pravosti říje u dojnic pomocí testu OVUCHECK
Ověření pravosti říje u dojnic pomocí testu OVUCHECK H. Härtlová 1, P. Hering 2, Z. Vodková 1, B Kmochová 1, P. Slavík 1, R. Rajmon 1 1 ČZU FAPPZ v Praze, 2 Českomoravská společnost chovatelů, Hradišťko
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VÁPNÍKU, DRASLÍKU, HOŘČÍKU, SODÍKU A FOSFORU METODOU ICP-OES
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU VÁPNÍKU, DRASLÍKU, HOŘČÍKU, SODÍKU A FOSFORU METODOU ICP-OES 1 Rozsah a účel Metoda je určena pro stanovení makroprvků vápník, fosfor, draslík, hořčík
VíceRekombinantní alergeny
Rekombinantní alergeny Vojtěch Thon Ústav klinické imunologie a alergologie LF MU a FN u sv. Anny v Brně Univerzitní centrum pro alergologii a klinickou imunologii Pylové alergeny - nové horizonty: Rekombinantní
VíceVYUŽITÍ TEPELNÉHO ZMLŽOVAČE V AAS
1 VYUŽITÍ TEPELNÉHO ZMLŽOVAČE V AAS JAN KNÁPEK Katedra analytické chemie, Přírodovědecká fakulta MU, Kotlářská 2, Brno 611 37 Obsah 1. Úvod 2. Tepelný zmlžovač 2.1 Princip 2.2 Konstrukce 2.3 Optimalizace
VíceEFFECT OF DIFFERENT HOUSING SYSTEMS ON INTERNAL ENVIRONMENT PARAMETERS IN LAYING HENS
EFFECT OF DIFFERENT HOUSING SYSTEMS ON INTERNAL ENVIRONMENT PARAMETERS IN LAYING HENS VLIV RŮZNÝCH TECHNOLOGICKÝCH SYSTÉMŮ CHOVU NA VYBRANÉ UKAZATELE VNITŘNÍHO PROSTŘEDÍ NOSNIC Pavlík A. Ústav morfologie,
VíceNÁVOD K POUŽITÍ VÁPNÍK 600 KATALOGOVÉ ČÍSLO 207
NÁVOD K POUŽITÍ VÁPNÍK 600 KATALOGOVÉ ČÍSLO 207 POUŽITÍ Souprava Vápník 600 se používá ke kvantitativnímu stanovení koncentrace vápenatých iontů v séru a moči. SOUHRN V lidském organismu je vázána převážná
VíceKOLIK JE BARVIVA VE VZORKU?
KOLIK JE BARVIVA VE VZORKU? Spektroskopická kvantitativní analýza Karel a Mirek rádi navštěvují restauraci. Tuhle si dali Zelenou (zelený peprmintový likér) a Mirek se při pohledu na ostře zelený nápoj
VícePERSPEKTIVES OF WEGETABLE WASTE COMPOSTING PERSPEKTIVY KOMPOSTOVÁNÍ ZELENINOVÉHO ODPADU
PERSPEKTIVES OF WEGETABLE WASTE COMPOSTING PERSPEKTIVY KOMPOSTOVÁNÍ ZELENINOVÉHO ODPADU Mach P., Tesařová M., Mareček J. Department of Agriculture, Food and Environmental Engineering, Faculty of Agronomy,
VíceZáklady analýzy potravin Přednáška 8. Důvody pro analýzu bílkovin v potravinách. určování původu suroviny, autenticita výrobku
BÍLKOVINY Důvody pro analýzu bílkovin v potravinách posuzování nutriční hodnoty celkový obsah bílkovin aminokyselinové složení bílkoviny, volné aminokyseliny obsah cizorodých nebo neplnohodnotných bílkovin
VíceAgronomická fakulta. Ústav pěstování, šlechtění rostlin a rostlinolékařství. Zemědělská 1, 613 00 Brno, Česká republika. Report č.
Mendelova univerzita v Brně Agronomická fakulta Ústav pěstování, šlechtění rostlin a rostlinolékařství Zemědělská 1, 613 00 Brno, Česká republika Report č.1 Typ Produkt Indikace Plodina Lokalita Pokus
VíceRapid-VIDITEST FOB. (Jednokrokový blisterový test pro detekci hemoglobinu ve stolici) Návod k použití soupravy
Rapid-VIDITEST FOB (Jednokrokový blisterový test pro detekci hemoglobinu ve stolici) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, Tel: 261
VícePSA ELISA test pro kvantitativní stanovení celkového prostatického specifického antigenu (PSA) v lidském séru
PSA ELISA test pro kvantitativní stanovení celkového prostatického specifického antigenu (PSA) v lidském séru Obj. číslo: 52030 96 testů kompletní souprava Účel použití Prostatický specifický antigen (PSA)
VíceAplikace elektromigračních technik
Aplikace elektromigračních technik Capillary electrophoresis D.L.Barker High Performance Capillary electrophoresis M.G. Khaledi Analysis and detection by capillary electrophoresis M.L.Marina (ed.) Electrophoresis
VíceWestern blotting. 10% APS 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl
Western blotting 1. Příprava gelu složení aparatury hustotu gelu volit podle velikosti proteinů příprava rozdělovacího gelu: 10% 12% počet gelů 1 2 4 1 2 4 objem 6 ml 12 ml 24 ml 6 ml 12 ml 24 ml 40% akrylamid
VíceAnalyzátory OPTI firmy ROCHE
Analyzátory OPTI firmy ROCHE - øešení kritických situací Prof. MUDr. Jaroslav Racek, DrSc., MUDr. Vlasta Petøíková, Zuzana Pešková Ústav klinické biochemie a laboratorní diagnostiky Lékaøské fakulty UK
VícePCR IN DETECTION OF FUNGAL CONTAMINATIONS IN POWDERED PEPPER
PCR IN DETECTION OF FUNGAL CONTAMINATIONS IN POWDERED PEPPER Trojan V., Hanáček P., Havel L. Department of Plant Biology, Faculty of Agronomy, Mendel University of Agriculture and Forestry in Brno, Zemedelska
VíceDNA TECHNIKY IDENTIFIKACE ŽIVOČIŠNÝCH DRUHŮ V KRMIVU A POTRAVINÁCH. Michaela Nesvadbová
DNA TECHNIKY IDENTIFIKACE ŽIVOČIŠNÝCH DRUHŮ V KRMIVU A POTRAVINÁCH Michaela Nesvadbová Význam identifikace živočišných druhů v krmivu a potravinách povinností každého výrobce je řádně a pravdivě označit
VíceBet v 1 alergeny v potravinách.. známé či neznámé?
Bet v 1 alergeny v potravinách.. známé či neznámé? Simona Bělohlávková 1,2, Martin Fuchs 1 Immuno-flow, s.r.o. 1 LF Plzeň, UK Praha 2 XXXIV. Kongres SSAKI a ČSAKI 19.10.2017, Horný Smokovec Bet v 1 bílkoviny
VíceCA15-3 IRMA Souprava CA15-3 IRMA umožňuje přímé in-vitro kvantitativní stanovení s tumorem asociovaného antigenu CA15-3 v lidském séru
Informace o výrobku Informace o ostatních produktech jsou dostupné na www.demeditec.com Návod k použití CA15-3 IRMA Souprava CA15-3 IRMA umožňuje přímé in-vitro kvantitativní stanovení s tumorem asociovaného
VíceVERIFICATION OF NUTRITIVE VALUE OF LINES SPRING BARLEY OVĚŘENÍ NUTRIČNÍ HODNOTY LINIÍ JARNÍCH JEČMENŮ
VERIFICATION OF NUTRITIVE VALUE OF LINES SPRING BARLEY OVĚŘENÍ NUTRIČNÍ HODNOTY LINIÍ JARNÍCH JEČMENŮ Pipalová S., Procházková J., Ehrenbergerová J. Ústav výživy a krmení hospodářských zvířat, Agronomická
VíceZahraniční obchod s vínem České republiky. Bilance vína v ČR (tis. hl)
Zahraniční obchod s vínem České republiky (III.a - rok 211) V roce 211 pokračoval trend narůstajícího dovozu vína zavedený vstupem ČR do EU. Nárůst je víceméně lineární. Zřejmě i proto, že sklizeň 29 nebyla
VíceVliv selenu, zinku a kadmia na růstový vývoj česneku kuchyňského (Allium sativum L.)
Vliv selenu, zinku a kadmia na růstový vývoj česneku kuchyňského (Allium sativum L.) Botanická charakteristika: ČESNEK KUCHYŇSKÝ (ALLIUM SATIVUM L.) Pravlastí je Džungarsko (severní Čína) v Střední Asii,
VíceCEA ELISA test pro kvantitativní stanovení karcinoembryonického antigenu (CEA) v lidském séru
CEA ELISA test pro kvantitativní stanovení karcinoembryonického antigenu (CEA) v lidském séru Obj. číslo: 52020 96 testů kompletní souprava Účel použití Karcinoembryonický antigen (CEA) je glykoprotein
VíceMechanismy a působení alergenové imunoterapie
Mechanismy a působení alergenové imunoterapie Petr Panzner Ústav imunologie a alergologie LF UK a FN Plzeň Zavedení termínu alergie - rozlišení imunity a přecitlivělosti Pasivní přenos alergenspecifické
VíceNázev: Vypracovala: Datum: 7. 2. 2014. Zuzana Lacková
Název: Vypracovala: Zuzana Lacková Datum: 7. 2. 2014 Reg.č.projektu: CZ.1.07/2.4.00/31.0023 Název projektu: Partnerská síť centra excelentního bionanotechnologického výzkumu MĚLI BYCHOM ZNÁT: informace,
VíceRapid-VIDITEST Strep A. Jednokrokový kazetový test pro detekci antigenu Steptokoka A ve výtěru z krku. Návod k použití soupravy
Rapid-VIDITEST Strep A Jednokrokový kazetový test pro detekci antigenu Steptokoka A ve výtěru z krku Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice u
VíceMOŽNOSTI TVÁŘENÍ MONOKRYSTALŮ VYSOKOTAVITELNÝCH KOVŮ V OCHRANNÉM OBALU FORMING OF SINGLE CRYSTALS REFRACTORY METALS IN THE PROTECTIVE COVER
MOŽNOSTI TVÁŘENÍ MONOKRYSTALŮ VYSOKOTAVITELNÝCH KOVŮ V OCHRANNÉM OBALU FORMING OF SINGLE CRYSTALS REFRACTORY METALS IN THE PROTECTIVE COVER Kamil Krybus a Jaromír Drápala b a OSRAM Bruntál, spol. s r.
VíceStanovení koncentrace (kvantifikace) proteinů
Stanovení koncentrace (kvantifikace) proteinů Bioanalytické metody Prof. RNDr. Pavel Peč, CSc. Úvod Kritéria výběru metod stanovení koncentrace proteinů jsou založena na možnostech pro vlastní analýzu,
VíceFakulta životního prostředí v Ústí nad Labem. Pokročilé metody studia speciace polutantů. (prozatímní učební text, srpen 2012)
Fakulta životního prostředí v Ústí nad Labem Pokročilé metody studia speciace polutantů (prozatímní učební text, srpen 2012) Obsah kurzu: 1. Obecné strategie speciační analýzy. a. Úvod do problematiky
VíceOdpad z výroby minerální vlny a možnosti jeho využití do betonové směsi
Odpad z výroby minerální vlny a možnosti jeho využití do betonové směsi Ing. Ivana Chromková, Ing. Pavel Leber, Ing. Oldřich Sviták Výzkumný ústav stavebních hmot, a.s., Brno, e-mail: chromkova@vustah.cz,
VíceStanovení cholesterolu ve vaječném žloutku a mléce kapilární elektroforézou
Stanovení cholesterolu ve vaječném žloutku a mléce kapilární elektroforézou Úkol Stanovte obsah cholesterolu ve vaječném žloutku a mléce pomocí kapilární elektroforézy. Teoretická část Cholesterol je steroidní
VíceStanovení difúzního koeficientu cesia na bentonitu
Technická zpráva Stanovení difúzního koeficientu cesia na bentonitu Pracovní postup Ústav jaderného výzkumu Řež a.s. Ing. Helena Kroupová Petr Brůha Červenec 2003 Správa úložišť radioaktivních odpadů Formátování
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU HYDROXYPROLINU SPEKTROFOTOMETRICKY
Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU HYDROXYPROLINU SPEKTROFOTOMETRICKY 1 Rozsah a účel Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu hydroxyprolinu v živočišných tkáních spektrofotometrickou metodou. 2 Princip
VíceCo potřebujeme vědět o potravinové alergii? Co je registr potravinových alergií DAFALL?
» Potravinová alergie je nežádoucí reakce na potravinu a její výskyt v posledních letech významně stoupá. V České republice se tvoří registr, aby se výskyt potravinových alergií zmapoval. ulkas/fotky&foto
VíceNĚKTERÉ ASPEKTY STANOVENÍ ABIOSESTONU ODHADEM POKRYVNOSTI ZORNÉHO POLE
Příspěvek byl publikovaný ve sborníku z konference Vodárenská biologie 214 (5. 6.2.214, Praha) na stránkách 15 2. NĚKTERÉ SPEKTY STNOVENÍ IOSESTONU ODHDEM POKRYVNOSTI ZORNÉHO POLE Petr Pumann Státní zdravotní
VíceKULOVÝ STEREOTEPLOMĚR NOVÝ přístroj pro měření a hodnocení NEROVNOMĚRNÉ TEPELNÉ ZÁTĚŽE
české pracovní lékařství číslo 1 28 Původní práce SUMMARy KULOVÝ STEREOTEPLOMĚR NOVÝ přístroj pro měření a hodnocení NEROVNOMĚRNÉ TEPELNÉ ZÁTĚŽE globe STEREOTHERMOMETER A NEW DEVICE FOR measurement and
VíceBARIÉRY VSTUPU V ODVĚTVÍ PRODUKCE JABLEK V ČESKÉ REPUBLICE BARRIERS TO ENTRY IN THE CZECH APPLES PRODUCTION INDUSTRY.
BARIÉRY VSTUPU V ODVĚTVÍ PRODUKCE JABLEK V ČESKÉ REPUBLICE BARRIERS TO ENTRY IN THE CZECH APPLES PRODUCTION INDUSTRY Dagmar Kudová Anotace: Příspěvek, který je součástí řešení výzkumného záměru PEF MZLU
VíceMagnetické částice pro detekci nádorových onemocnění, založené na protilátkách Vojtěch Adam
Název: Školitel: Magnetické částice pro detekci nádorových onemocnění, založené na protilátkách Vojtěch Adam Datum: 7..203 Reg.č.projektu: CZ..07/2.4.00/3.0023 Název projektu: Partnerská síť centra excelentního
VíceELISA-VIDITEST Neurofilamenta-L
RUO ELISA-VIDITEST Neurofilamenta-L OD-077 Návod k použití soupravy VÝROBCE: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice, ČR, tel.: +420 261 090 565, info@vidia.cz, www.vidia.cz 1.
VíceSDS-PAGE elektroforéza
SDS-PAGE elektroforéza Příprava gelu... 1 Recept na 0.75 mm gel (1 gel/2 gely)... 2 Recept na 1.5 mm gel (1 gel/2 gely)... 2 Příprava vzorku... 3 Elektroforéza... 3 Barvení gelů Blue Silver... 4 Chemikálie
VíceVliv kapkové závlahy na výnos a kvalitu hroznů Effect of drip irrigation on yield and quality grapes
Rožnovský, J., Litschmann, T., (eds): Závlahy a jejich perspektiva. Mikulov, 18. 19. 3. 2015, ISBN 978-80-87577-47-9 Vliv kapkové závlahy na výnos a kvalitu hroznů Effect of drip irrigation on yield and
VíceEvropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY
Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY ELEKTROFORÉZA K čemu to je? kritérium čistoty preparátu stanovení molekulové hmotnosti makromolekul stanovení izoelektrického
VíceMINIREPETITORIUM OBECNÉ FARMAKOLOGIE. Farmakologický ústav 2.LF UK
MINIREPETITORIUM OBECNÉ FARMAKOLOGIE Farmakologický ústav 2.LF UK FARMAKOLOGIE FARMAKOLOGIE v širokém slova smyslu - věda, která studuje interakce látek s živým organismem na všech úrovních v užším slova
VíceProblémy spojené s použitím pozinkované výztuže v betonu
Obsah Problémy spojené s použitím pozinkované výztuže v betonu Rovnaníková P. Stavební fakulta VUT v Brně Použití pozinkované výztuže do betonu je doporučováno normou ČSN 731214, jako jedna z možností
VíceAplikace elektromigračních technik Laboratorní úlohy
Laboratorní úlohy Výukový materiál vznikl za finanční podpory Fondu rozvoje vysokých škol v rámci řešení projektu č. 1377/2013 Vytvoření demonstračních úloh sloužících k inovaci předmětu Aplikace elektromigračních
VíceZpráva z konference IADR, Barcelona 2010 IADR International Association for Dental Research
Zpráva z konference IADR, Barcelona 2010 IADR International Association for Dental Research Česká stomatologická komora, Grantová agentura Univerzity Karlovy a Interní grantová agentura Ministerstva zdravotnictví
VíceJ., HÁJEK B., VOTINSKÝ J.
Kontakty a materiály J. Šedlbauer e-mail: josef.sedlbauer@tul.cz tel.: 48-535-3375 informace a materiály k Obecné chemii: www.fp.tul.cz/kch/sedlbauer (odkaz na předmět) konzultace: úterý odpoledne nebo
VíceDatabáze potravinových alergií DAFALL (Database of Food Allergies)
Databáze potravinových alergií DAFALL (Database of Food Allergies) Simona Bělohlávková Martin Fuchs Ivana Švarcová a kolektiv Immuno-flow, s.r.o. 5.4.2014, Dlouhé Stráně Výskyt astmatu a alergií u dětí
VícePotravinová alergie v dospělosti
Potravinová alergie v dospělosti Simona Bělohlávková Martin Fuchs Medicína pro praxi XII.kongres praktických lékařů a sester Praha, 17.9.2015 PA je nežádoucí reakce způsobená specifickou imunitní odpovědí
VícePresepsin nový marker sepse. Kateřina Valošková OKB Nemocnice ve Frýdku-Místku XL.Den zdravotníků 2.6.2011
Presepsin nový marker sepse Kateřina Valošková OKB Nemocnice ve Frýdku-Místku XL.Den zdravotníků 2.6.2011 Presepsin Presepsin = scd14-st = glykoprotein exprimovaný na povrchu membrány monocytů a makrofágů
VíceAbsorpční spektroskopie při biologické analýze molekul
Absorpční spektroskopie při biologické analýze molekul Pokročilé biofyzikální metody v experimentální biologii Ctirad Hofr 8.11.2007 7 1 UV spektroskopie DNA a proteinů Všechny atomy absorbují v UV oblasti
VíceProtokol o testování systému glukometr měřící proužky Glukometr Contour PLUS
Protokol o zkoušce č.j. 1/2014, počet stran 12, strana číslo 1 Referenční laboratoř pro klinickou biochemii při Ústavu lékařské biochemie a laboratorní diagnostiky VFN Karlovo nám. 32, 121 11 Praha 2,
VíceCRP. Axis - Shield. SINGLE TESTS CRP kvantitativní stanovení pomocí přístroje NycoCard Reader II
Lékařská technika a speciální zdravotní materiál Společnost je zapsána v obchodním rejstříku Městského soudu v Praze, odd. C vložka 1299 Obchodní 110, 251 70 Praha Čestlice Tel. +420 296 328 300 Fax. +420
VíceVyužití faktorového plánu experimentů při poloprovozním měření a v předprojektové přípravě
Využití faktorového plánu experimentů při poloprovozním měření a v předprojektové přípravě Ing. Klára Štrausová, Ph.D. 1 ; doc. Ing. Petr Dolejš, CSc. 1,2 1 W&ET Team, Box 27, 370 11 České Budějovice 2
VíceObr. 1. Struktura glukosaminu.
3. Stanovení glukosaminu ve výživových doplňcích pomocí kapilární elektroforézy Glukosamin (2-amino-2-deoxyglukózamonosacharid je široce distribuován ve tkáních lidského organismu jako složka je klíčovou
VíceDiagnostic Possibilities of Food Allergy and Intolerance
Diagnostic Possibilities of Food Allergy and Intolerance Květa Ettlerová1, Pavel Kohout2 1Ústav klinické imunologie a alergologie, Fakultní nemocnice, Hradec Králové 2Klinika gerontologická a metabolická,
VíceSekvenční injekční analýza laboratoř na ventilu (SIA-LOV) (Stanovení obsahu heparinu v injekčním roztoku)
Sekvenční injekční analýza laboratoř na ventilu (SIA-LOV) (Stanovení obsahu heparinu v injekčním roztoku) Teorie: Sekvenční injekční analýza (SIA) je další technikou průtokové analýzy, která umožňuje snadnou
VíceAKTUÁLNÍ VÝVOJOVÉ TRENDY V OBLASTI KONSTRUKCE A MECHANICKÉ HLUČNOSTI BRZDOVÝCH SYSTÉMŮ
AKTUÁLNÍ VÝVOJOVÉ TRENDY V OBLASTI KONSTRUKCE A MECHANICKÉ HLUČNOSTI BRZDOVÝCH SYSTÉMŮ CURRENT DEVELOPMENT TRENDS IN THE FIELD OF PRODUCT DESIGN AND MECHANICAL NOISE OF THE BRAKE SYSTEMS Petr Kašpar 1
Více5 Potratovost. Tab. 5.1 Potraty, 2004 2014
5 Potratovost V roce bylo evidováno 10 37,0 tisíce potratů, čímž bylo opět překonáno absolutní minimum z minulého roku. Počet uměle přerušených těhotenství (UPT) se snížil o 0,8 tisíce na 21,9 tisíce.
VíceZKŘÍŽENÁ ALERGIE. Markéta Haschová Alergologie a klinická imunologie MN PRIVAMED a.s.
ZKŘÍŽENÁ ALERGIE Markéta Haschová Alergologie a klinická imunologie MN PRIVAMED a.s. Podstata zkřížené alergie Vzájemná podobnost alergenů Nutná významná shoda (více než 70%) Specifické IgE protilátky
VíceAbsolventi středních škol a trh práce DOPRAVA A SPOJE. Odvětví: Ing. Mgr. Pavla Paterová Mgr. Gabriela Doležalová a kolektiv autorů
Absolventi středních škol a trh práce Odvětví: DOPRAVA A SPOJE Ing. Mgr. Pavla Paterová Mgr. Gabriela Doležalová a kolektiv autorů Praha 2015 Obsah 1. Úvodní slovo... 3 2. Nově přijatí žáci a absolventi
VíceZpráva o rodičce 2008. Report on mother at childbirth 2008
Aktuální informace Ústavu zdravotnických informací a statistiky České republiky Praha 9. 11. 29 61 Zpráva o rodičce 28 Report on mother at childbirth 28 Souhrn V posledních letech v České republice úhrnná
Více1b. Ztráta tepla v závislosti na povrchu a objemu tělesa a na chladícím mediu
1b. Ztráta tepla v závislosti na povrchu a objemu tělesa a na chladícím mediu ZÁKLADNÍ POJMY Proces chlazení patří mezi nejvýznamnější prvky v technologii zpracování potravin. Intenzita chlazení je závislá
VíceVliv barometrického tlaku na úroveň hladiny vody v pozorovacích vrtech
Vliv barometrického tlaku na úroveň hladiny vody v pozorovacích vrtech JAN KAŠPÁREK Klíčová slova: pozorovací vrt barometrický tlak podzemní voda SOUHRN Příspěvek se zabývá vlivem změn barometrického tlaku
VíceLANDFILL LEACHATE PURIFICATION USING MEMBRANE SEPARATION METHODS ČIŠTĚNÍ PRŮSAKOVÝCH VOD ZE SKLÁDEK METODAMI MEMBRÁNOVÉ SEPARACE
LANDFILL LEACHATE PURIFICATION USING MEMBRANE SEPARATION METHODS ČIŠTĚNÍ PRŮSAKOVÝCH VOD ZE SKLÁDEK METODAMI MEMBRÁNOVÉ SEPARACE Pavel Kocurek, Martin Kubal Vysoká škola chemicko-technologická v Praze,
VíceProfesionální alergická onemocnění v ČR
Profesionální alergická onemocnění v ČR Occupational allergic diseases in the Czech Republic BEATRICA DLOUHÁ, DANA HAVLOVÁ, ZDEŇKA FENCLOVÁ, JAROMÍR ŠAMÁNEK, LUDMILA BEČVÁŘOVÁ, LENKA RYCHLÁ, MICHAELA ČERSTVÁ
Vícefenanthrolinem Příprava
1 ÚLOHA 9: Spektrofotometrické fenanthrolinem studium komplexu Fe(II) s 1,10- Příprava 2. 3. 4. 5. 6. Zopakujte si základní pojmy z optiky - elektromagnetické záření a jeho šíření absorbujícím prostředím,
VícePŘÍLOHA I SOUHRN ÚDAJŮ O PŘÍPRAVKU
PŘÍLOHA I SOUHRN ÚDAJŮ O PŘÍPRAVKU 1 1. NÁZEV PŘÍPRAVKU VPRIV 200 U prášek pro přípravu infuzního roztoku 2. KVALITATIVNÍ A KVANTITATIVNÍ SLOŽENÍ Jedna injekční lahvička obsahuje 200 jednotek* (U) velaglucerasum
VíceZměny trofického potenciálu a koncentrace chlorofylu a v řece Jihlavě a v nádržích Dalešice a Mohelno od jejich napuštění
Czech Phycology, Olomouc, 2: 115-124, 22 115 Změny trofického potenciálu a koncentrace chlorofylu a v řece Jihlavě a v nádržích Dalešice a Mohelno od jejich napuštění Changes of the trophic potential and
VícePůvod a složení. Obr. 2 Vznik bentonitu pomocí zvětrávání vulkanické horniny. Obr.1 Struktura krystalové mřížky montmorillonitu
Původ a složení Výrazem bentonit, který pochází z Fort Benton, Montana (první naleziště), se označují půdní minerály, jejichž hlavní složkou je montmorillonit. U kvalitních bentonitů je obsah podílu montmorillonitu
VíceIng.Branislav Ruttkay-Nedecký, Ph.D., Ing. Lukáš Nejdl
Název: Školitel: Vznik radikálů v přítomnosti DNA, heminu, peroxidu vodíku, ABTS, kovových iontů a jejich spektrofotometrická detekce Ing.Branislav Ruttkay-Nedecký, Ph.D., Ing. Lukáš Nejdl Datum: 11.10.2013
VíceVYSOKÁ ŠKOLA HOTELOVÁ V PRAZE 8, SPOL. S R. O.
VYSOKÁ ŠKOLA HOTELOVÁ V PRAZE 8, SPOL. S R. O. Návrh konceptu konkurenceschopného hotelu v době ekonomické krize Diplomová práce 2013 Návrh konceptu konkurenceschopného hotelu v době ekonomické krize Diplomová
VíceFunkční testy: BasoFlowEx Kit FagoFlowEx Kit
Mgr. Martin Čonka EXBIO Praha, a.s. Funkční testy: BasoFlowEx Kit FagoFlowEx Kit Funkční testy napodobení biologický procesů in vitro nehrozí nebezpečí ohrožení pacienta v průběhu testování možná analýza
VíceN217019 - Laboratoř hydrobiologie a mikrobiologie
ÚSTAV TECHNOLOGIE VODY A PROSTŘEDÍ N217019 - Laboratoř hydrobiologie a mikrobiologie Název úlohy: Hydrobiologie: Stanovení koncentrace chlorofylu-a Vypracováno v rámci projektu: Inovace a restrukturalizace
VíceOBSAH SOUPRAVY: - Testovací kazety - Odběrové zkumavky s ředicím roztokem - Návod k použití - Certifikát kontroly balení
Rapid-VIDITEST Crypto-Giardia (Jednokrokový kazetový test pro in vitro diagnostiku Cryptosporidium a Giardia) Návod k použití soupravy Výrobce: VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II 365, Vestec, 252 42 Jesenice
VíceInvestiční oddělení ZPRÁVA Z FINANČNÍCH TRHŮ. Únor 2010 MAKROEKONOMICKÝ VÝVOJ
Investiční oddělení Únor 2010 ZPRÁVA Z FINANČNÍCH TRHŮ MAKROEKONOMICKÝ VÝVOJ Česká republika Podle údajů zveřejněných začátkem února vzrostly spotřebitelské ceny během ledna o 1,2 procenta. V meziročním
Více