Aplikace elektromigračních technik Laboratorní úlohy
|
|
- Rudolf Kučera
- před 8 lety
- Počet zobrazení:
Transkript
1 Laboratorní úlohy Výukový materiál vznikl za finanční podpory Fondu rozvoje vysokých škol v rámci řešení projektu č. 1377/2013 Vytvoření demonstračních úloh sloužících k inovaci předmětu Aplikace elektromigračních technik.
2 OBSAH Úvod...2 Separace směsi proteinů pomocí polyakrylamidové gelové elektroforézy (PAGE)...3 Separace směsi anorganických kationtů a aniontů pomocí kapilární zónové elektroforézy s využitím nepřímé UV detekce...9 Separace směsi neutrálních látek pomocí micelární elektrokinetické chromatografie
3 Úvod Elektromigrační metody jsou separačními metodami, které umožňují separaci, detekci a následnou kvalitativní a kvantitativní analýzu látek nesoucích elektrický náboj. Princip separace spočívá v rozdílech rychlosti migrace nabitých částic (např. iontů, nabitých komplexů, iontových asociátů) v elektrickém poli, které umožňuje průchod elektrického proudu (přenos tohoto náboje). Elektromigrační metody jsou spolu s metodami chromatografickými řazeny mezi nejvyužívanější separační techniky, které mohou být uskutečněny jak v analytickém, tak preparativním provedení 1. Tab. 1 Srovnání kapilárních a plošných elektromigračních metod 1 Kapilární elektroforéza Separace probíhá v kapiláře (vnitřní průměr 25 až 100 µm) Napětí vkládané mezi elektrody 0 30 kv Separace malých iontů i makromolekul Složitější instrumentace, lepší účinnost separace, snadná detekce, automatizace Plošná elektroforéza Separace probíhá v gelu nebo na papíře Napětí vkládané mezi elektrody V Separace pouze makromolekul Jednoduchá instrumentace, nízká účinnost, nutnost off-line detekce Obr. 1 Instrumentace - kapilární elektroforéza Obr. 2 Instrumentace plošná elektroforéza 1 Maier V.: Přednášky k předmětu, PřF UP v Olomouci,
4 Separace směsi proteinů pomocí polyakrylamidové gelové elektroforézy (PAGE) Úkol: Pomocí polyakrylamidové gelové elektroforézy rozseparujte směs tří proteinů (lysozym, alfa-laktalbumin, BSA). 1. Teoretická část: Proteiny Proteiny (bílkoviny) patří do skupiny biopolymerů, které jsou složeny převážně z dvaceti druhů α-aminokyselin. Tyto aminokyseliny jsou spojeny peptidovými vazbami a jejich relativní molekulová hmotnost je Proteiny plní v organismu rozličné funkce, např. transportní, stavební, katalytickou, regulační, ochranou, obranou a zajišťují pohyb. Lysozym je enzym, který je obsažený v slzách, slinách, hlenu, krevní plazmě, mateřském mléce, ve vaječném bílku atd. Má silné antibakteriální účinky, které se projevují schopností narušovat vazbu peptidoglykanu v buněčné stěně a následně způsobit lyzi buňky. Alfa-laktalbumin se nachází v lidském mléce a hraje zásadní roli při vstřebávání vápníku do těla. Je součástí enzymu laktososyntetáza, který se podílí na tvorbě laktózy. BSA (bovine serum albumin, hovězí sérový albumin) slouží v krvi jako nosič hydrofobních látek. Díky jeho vysoké koncentraci v krvi se zároveň uplatňuje jako pufrační činidlo a napomáhá tak udržovat stabilní ph krve. Elektroforéza v polyakrylamidovém gelu (SDS-PAGE) Gelová elektroforéza poskytuje informace o molekulové hmotnosti a náboji proteinů, o podjednotkách struktury proteinů a především o čistotě připravených proteinů. Metoda je rychlá, jednoduchá, vykazuje vysokou opakovatelnost a nejvyšší rozlišení ze všech metod dostupných pro separaci proteinů. Nejběžnější použití gelové elektroforézy je kvalitativní analýza směsi proteinů a nukleových kyselin. Nejznámější a nejvíce využívanou technikou je sodium dodecyl sulfát polyakrylamidová gelová elektroforéza (SDS-PAGE). Metoda poskytuje snadný způsob, jak odhadnout počet polypeptidů ve vzorku, a tím posoudit složitost vzorků nebo čistotu přípravy. SDS-PAGE je zvláště užitečná pro monitorování frakcí získaných během chromatografie nebo dalšího čištění. SDS je aniontový detergent, který solubilizuje a denaturuje proteiny 3
5 a dodává proteinům negativní náboj. Téměř všechny proteiny vážou SDS ve stejném poměru, a to asi 1,4 g SDS na 1g proteinu. Obr. 3 Sodium dodecyl sulfát (SDS) Nejdříve jsou proteiny tepelně denaturovány ve vzorkovém pufru, který obsahuje SDS, tudíž je zachována pouze primární struktura proteinů. Obr. 4 Zahřívání proteinů s SDS Denaturované proteiny mají stejný záporný náboj daný vazbou SDS a vláknitý tvar a tedy jejich migrace závisí pouze na jejich molekulové hmotnosti. Po nanesení vzorku (proteinu) na gel a umístění gelu do elektrického pole dochází k migraci proteinů ke kladně nabité elektrodě (anodě). Menší proteiny se pohybují rychleji a tím dochází k jejich separaci podle velikosti (princip molekulového síta). 4
6 Obr. 4 Schéma princip SDS PAGE separace proteinů Detekce separovaných proteinů se provádí kolorimetricky nebo fluorescenčním barvením. Proteiny, posttranslačně modifikovány např. fosforylací nebo glykosilací, mohou být spolehlivě stanoveny několika postupy založenými na fluorescenci. V našem případě provedeme detekci pomocí barviva Coomassie blue, které se zafixuje na protein v gelu. Po odbarvení zůstane na gelu barva pouze v místech, kde se navázala na fixovaný protein. 2. Praktická část 2.1. Přístroje a pomůcky Zařízení pro gelovou elektroforézu vertikální provedení, analytické váhy, ph metr s kombinovanou skleněnou elektrodou, elektromagnetická míchačka, termoblok, elektromagnetické míchadlo, odměrné baňky, plastové nádobky, nádoby na vybarvovací a odbarvovací roztok, rukavice, lopatka na gel, hřebínek, navažovací lodičky, špachtle, pipety, eppendorfky. 5
7 2.2. Chemikálie Standardy proteinů (lysozym, alfa-laktalbumin, BSA), TRIS, kyselina chlorovodíková, SDS, glycerol, β-merkaptoethanol, glycin, akrylamid, persíran amonný, TEMED, bromfenolová modř, deionizovaná voda, Coomassie Blue, ethanol, kalibrační roztoky pro kalibraci ph metru Pracovní postup Příprava elektrolytů Podle následující tabulky se připraví potřebné elektrolyty. Elektrolyt potřebný pro přípravu vzorku (V = 10 ml) 250 mm TRIS 240 mm HCl 10 % SDS, 30 % glycerol 5 % β-merkaptoethanol 0,02 % bromfenolová modř Tab. 2 Příprava elektrolytů Separační elektrolyt (V = 250 ml) 250 mm TRIS 1,9 M glycin 1 % SDS Elektrolyt potřebný pro přípravu separačního gelu (V = 20 ml) 1,5 M TRIS 250 mm HCl Příprava gelu Podle tabulky č. 3 (viz níže) se připraví separační gel. Skla (1 mm) se spolu se spacery umístí do stojanu sloužícího pro nalití vzorků. Následně se gel pomalu nalije (pomocí pipety) mezi připravená skla (pozn. pozor, aby v gelu nevznikaly bubliny). Do gelu se vloží hřebínek, pomocí něhož se v gelu vytvoří jamky sloužící jako prostor pro nadávkování vzorku. Vyčká se na polymerizaci gelu. Po polymerizaci gelu se opatrně vyndá hřebínek a jamky se propláchnou deionizovanou vodou. Skla s vytvořeným gelem se upevní do aparatury pro gelovou elektroforézu. 6
8 Tab. 3 Složení směsi separačního gelu Separační gel (10 %) (V = 10 ml) 3,35 ml 30 % akrylamidu* 2,5 ml 1,5 M TRIS (ph = 8,8) 100 µl 10 % persíran amonný 100 µl 10 % SDS 4 µl TEMEDu 3,95 ml deionizované vody *jedná se o neurotoxickou látku je potřeba pracovat v rukavicích a se zvýšenou opatrností Příprava vzorku Odpipetuje se 50 µl standardních roztoků proteinů a směsi proteinů, ke každému vzorku se přidá 9,5 µl elektrolytu připraveného pro přípravu vzorku. Vzorky se umístí na 5 minut do termobloku vyhřátého na teplotu 95 C. Následně se vzorky ochladí. Příprava vybarvovacího a odbarvovacího roztoku Podle tabulky č. 4 se připraví vybarvovací a odbarvovací roztok. Tab. 4 Složení roztoků potřebných pro detekci Vybarvovací roztok 0,23 % Coomassie blue 3,9 % trichloroctové kyseliny 6 % kyseliny octové 17 % methanolu Odbarvovací roztok 20 % ethanolu 10 % kyseliny octové Analýza pomocí gelové elektroforézy (SDS-PAGE) Pomocí pipety se nanese 20 µl každého vzorku do jednotlivých jamek vytvořených v separačním gelu. Vana se naplní separačním elektrolytem a uzavře se. Následně se připojí elektrody a vloží se napětí (50 V). Analýza se ukončí v momentě, kdy se barvivo (bromfenolová modř) přiblíží k okraji (konci) gelu. Poté se gel vloží do připraveného vybarvujícího roztoku a následně do roztoku odbarvovacího. Vyhodnotí se získaná data (porovnají se skvrny jednotlivých proteinů se skvrnami v jejich směsi). 7
9 3. Otázky 1. Vyjmenujte základní rozdíly (výhody, nevýhody) mezi kapilární a plošnou elektroforézou. 2. Vysvětlete obecný princip gelové elektroforézy. 3. Jaké látky je možno separovat pomocí plošné gelové elektroforézy? Odpověď zdůvodněte. 4. Popište rozdíl mezi nativní gelovou elektroforézou a SDS gelovou elektroforézou. 5. Uveďte příklad detekce analytů po separaci pomocí gelové elektroforézy. 6. Uveďte, jaké typy gelů jsou používány pro gelovou elektroforézu. 4. Literatura 1. Šťulík K.: Analytické separační metody. Karolinum, Praha Hage D.S., Carr J.D.: Analytical Chemistry and Quantitative Analysis, Prentice Hall, New Jersey Miller F.P., a kol.: Gel Electrophoresis, Alphascript publishing, Mauritius Hawcroft D.M.: Electrophoresis, The Basics, IRL Press, Oxford B.D. Hames: Gel Electrophoresis of Proteins, A Practical Approach, IRL Press, Oxford Kurien B.T., Scofield R.H.: Protein Electrophoresis, Methods and Protocols, Humana Press, New York Davey J., Lord M., Essential Cell Biology, Vol. 1: Cell Structure, A Practical Approach, Oxford University Press, Oxford
10 Separace směsi anorganických kationtů a aniontů pomocí kapilární zónové elektroforézy s využitím nepřímé UV detekce Úkol: Pomocí kapilární zónové elektroforézy s nepřímou UV detekcí proveďte separaci anorganických kationtů a aniontů (Ca 2+, Mg 2+, Na +, SO 4 2-, Cl - ). 1. Teoretická část: Kapilární zónová elektroforéza Kapilární zónová elektroforéza (CZE) je nejjednodušším módem kapilární elektroforézy, který je založen na separaci iontů v prostředí základního elektrolytu, a to na základě jejich rozdílných elektroforetických mobilit. Hlavní výhodou CZE je vysoká separační účinnost, krátká doba analýzy a malá spotřeba vzorku, elektrolytů a rozpouštědel. CZE je možno použít na simultánní separaci anorganických i organických iontů. Z pohledu aplikovatelnosti metody může být CZE využita v různých odvětvích, kterými jsou například analýza potravin, environmentální, farmaceutická a klinická analýza. Obr. 5 Schéma instrumentace pro kapilární elektroforézu Detekce V kapilární elektroforéze je nejčastěji používán spektrofotometrický detektor, který je založen na principu absorpce UV nebo Vis záření. Tento detektor je tedy vhodný pouze pro 9
11 látky absorbující v této oblasti. V případě, že látka neabsorbuje v UV oblasti, je možné použít nepřímou UV detekci. Nevýhodou nepřímé UV detekce je horší citlivost (v porovnání s detekcí přímou). V případě nepřímé UV detekce je do základního elektrolytu přidán ion (mající stejné znaménko jako separované ionty tzv. koint), který absorpci poskytuje. Přítomnost neabsorbujícího iontu se poté v záznamu projeví jako negativní pík (dojde ke snížení absorpce). Analýza anorganických iontů pomocí CE Kapilární elektroforéza je metodou vhodnou pro stanovení vybraných iontů, kterými jsou Ca 2+, Mg 2+, Na +, SO 2-4 a Cl -. Pro simultánní stanovení anorganických kationtů a aniontů je nutné do základního elektrolytu přidat jak látku potřebnou pro separaci aniontů (vhodný absorbující anion), tak látku potřebnou pro separaci kationtů (vhodný absorbující kation). Na Obr. 6 je znázorněna analýza směsi obsahující šest anorganických iontů, která byla naměřena pomocí kapilární zónové elektroforézy s nepřímou UV detekcí. Podle migračního času můžeme usuzovat kvalitu, plocha píku udává množství látky ve vzorku. Obr. 6 Elektroforegram zobrazující separaci směsi anorganických iontů využití kapilární zónové elektroforézy s nepřímou UV detekcí 10
12 2. Praktická část 2.1. Přístroje a pomůcky Kapilární elektroforéza Agilent HP 3D CE s UV detektorem, vypalovač detekčního okna, ultrazvuk, ph metr se skleněnou kombinovanou elektrodou, analytické váhy, elektromagnetická míchačka, třepačka, elektromagnetické míchadlo, křemenná kapilára, řezátko na kapiláry, pravítko, odměrné baňky, kádinky, plastové nádobky, stříkačkové filtry (0,45 µm), injekční stříkačky, eppendorfky, špachtle Chemikálie Standardy iontů, α-hydroxyisomáselná kyselina, imidazol, 1,3,6-naftalentrisulfonová kyselina, 18-crown-6-ether, tetramethylammonium hydroxid, hydroxid sodný, deionizovaná voda, destilovaná voda, kalibrační roztoky pro kalibraci ph metru Pracovní postup Příprava separační kapiláry Pomocí řezátka se uřízne kapilára o potřebné délce (viz Tab. 5), pomocí vypalovače detekčních oken (popř. pomocí zapalovače či seškrábáním) se v místě detekce odstraní vrstva polyimidu (vzdálenost odpovídá efektivní délce kapiláry). Detekční okno se opatrně omyje methanolem a vysuší. Na kapiláru se umístí interface a vloží se do kazety (viz Obr. 7) a následně do přístroje. Před prvním měřením se kapilára důkladně promyje (podmínky viz Tab. 5). Obr. 7 Kazeta pro umístění separační kapiláry 11
13 Příprava základního elektrolytu Připraví se základní elektrolyt (100 ml) o následujícím složení 15 mm α-hydroxyisomáselná kyselina, 6 mm imidazol, 3 mm 1,3,6-naftalentrisulfonová kyselina a 4 mm 18-crown-6-ether v deionizované vodě. Pomocí tetramethylammonium hydroxidu se upraví ph na hodnotu 6,5. Vytvořený základní elektrolyt se přefiltruje přes stříkačkový filtr s velikostí pórů 0,45 µm. Příprava standardů Připraví se základní roztoky iontů (Ca 2+, Mg 2+, Na +, SO 2-4 a Cl - ) mající koncentraci 1 mg/ml (V = 1 ml). Ředěním základních roztoků se připraví směs iontů o koncentraci každého iontu 0,1 mg/ml. Pro přípravu základních roztoků a jejich ředění se použije deionizovaná voda. Připravená směs se použije pro analýzu pomocí CZE s nepřímou UV detekcí. CZE separace (nepřímá UV detekce) Připraví se sada viálek, obsahujících: 1 M NaOH deionizovanou vodu základní elektrolyt (3x) vzorek směs iontů 5x (z důvodu spikování vzorku) prázdná viálka sloužící jako odpad Podle pokynů vedoucího cvičení se provede nastavení přístroje a separačních podmínek (viz Tab. 5). Tab. 5 Separační podmínky pro analýzu anorganických iontů Separační napětí Polarita Vlnová délka Dávkování Základní elektrolyt 30 kv kladná 210 nm 50 mbar/5s 15 mm α-hydroxyisomáselná kyselina 6 mm imidazol 3 mm 1,3,6-naftalentrisulfonová kyselina 4 mm 18-crown-6-ether ph = 6,5 (adjustováno pomocí 12
14 tetramethylammonium hydroxidu) Efektivní délka kapiláry 40,0 cm Celková délka kapiláry 48,5 cm Vnitřní průměr kapiláry 50 µm Teplota 25 C Promývání kapiláry před 1. měřením Promývání kapiláry mezi jednotlivými měřeními 1 M NaOH (20 minut), deionizovaná voda (20 minut), základní elektrolyt (15 minut) 1 M NaOH (1 minutu), deionizovaná voda (1 minutu), základní elektrolyt (3 minuty) Nejprve se proměří slepý vzorek (deionizovaná voda). Následně se provede analýza směsi iontů (c = 100 µg/ml) analýzu je potřeba provádět minimálně 3 x. Identifikace jednotlivých píků v elektroforegramu se provede spikováním k analyzované směsi se postupně přidají studované kationty a anionty a provedou se analýzy spikovaných směsí. Získaná data se vyhodnotí a slovně okomentují. 3. Otázky 1. Vyjmenujte jednotlivé módy kapilární elektroforézy. 2. Z jakého důvodu byla pro stanovení anorganických iontů použita nepřímá UV detekce? 3. Je možné pomocí kapilární zónové elektroforézy provést analýzu neutrálních látek? Odpověď zdůvodněte. 4. Jaký jiný typ detektoru by mohl být použit pro detekci anorganických iontů ve spojení s kapilární elektroforézou? 5. Bylo by možné anorganické kationty a anionty stanovit pomocí kapilární izotachoforézy? Byla by popř. možná simultánní analýza kationtů a aniontů? 4. Literatura 1. Šťulík K.: Analytické separační metody. Karolinum, Praha Baker D.R.: Capillary electrophoresis: Techniques in analytical chemistry, John Wiley and Sons Ltd, New York He Z.: Capillary Electrophoresis: Fundamentals, Techniques and Applications, Nova Science Publishers, New York
15 4. Altria K.D., Capillary Electrophoresis Guidebook: Principles, Operation, and Applications. Humana Press Inc., New Jersey Marina L.M., Ríos A., Valcárcel M.: Analysis and Detection by Capillary Electrophoresis, CAC Series, Elsevier, Amsterdam Hopper K.G. a kol.: A novel method for analysis of explosives residue by simultaneous detection of anions and cations via capillary zone electrophoresis, Talanta 67 (2007)
16 Separace směsi neutrálních látek pomocí micelární elektrokinetické chromatografie Úkol: Pomocí micelární elektrokinetické chromatografie ve spojení s UV detekcí proveďte separaci léčiv (nilutamid, flutamid). 1. Teoretická část: Micelární elektrokinetická chromatografie Micelární elektrokinetická chromatografie (MEKC) je jedním z módů kapilární elektroforézy. MEKC je metodou kombinující separační mechanismus kapilární zónové elektroforézy (CZE) a chromatografie. Hlavními výhodami této metody jsou vysoká účinnost separace, rychlá analýza a malá spotřeba vzorku, elektrolytu a rozpouštědel. Jedná se o metodu, kterou je možno použít pro separaci nabitých i neutrálních látek (např. na rozdíl od CZE). Instrumentace potřebná k MEKC separaci je shodná s instrumentací používající se pro separaci pomocí CZE. Separační pufr obsahuje látku (např. tenzid) schopnou vytvářet micely (po překročení kritické micelární koncentrace). Dělení látek v MEKC probíhá tedy na základě jejich rozdílné distribuce mezi vodnou a micelární fází. Nejvíce používaným tenzidem v MEKC je aniontový tenzid dodecyl sulfát sodný (SDS). Mechanismus separace MEKC (pro neutrální látky) při použití aniontového tenzidu je zobrazen na Obr. 8. Obr. 8 Mechanismus separace MEKC při použití aniontového tenzidu 15
17 Detekce Nejčastěji využívaným detektorem ve spojení s CE je detektor spektrofotometrický. Tento detektor je založen na principu absorpce záření v oblasti vlnových délek od 190 do 800 nm. Jedná se o detektor, který umožňuje on-line detekci (v místě detekce je na separační kapiláře odstraněna vrstva polyimidu). Absorbance, která udává množství pohlceného světla měřenou látkou, je závislá na koncentraci měřené látky, tloušťce absorbující vrstvy a na hodnotě molárního absorpčního koeficientu, který je pro danou látku konstantou. Na Obr. 9 je znázorněna analýza směsi obsahující šest neutrálních látek, která byla naměřena pomocí MEKC s UV detekcí. Podle migračního času můžeme usuzovat kvalitu, plocha píku udává množství látky ve vzorku. Obr. 9 Elektroforegram zobrazující separaci směsi neutrálních látek využití micelární elektrokinetické chromatografie s UV detekcí Nilutamid, flutamid Nilutamid a flutamid jsou nesteroidní antiandrogeny, které se využívají na léčbu pokročilých stádií karcinomu prostaty. Chemické struktury těchto látek jsou zobrazeny na Obr. 10. Vzhledem k tomu, že se jedná o látky, které jsou v běžně používaných elektrolytech (ph 2 až 12) látkami nenabitými, není možné provést jejich separaci při použití kapilární zónové elektroforézy. Z tohoto důvodu bude k jejich separaci použita MEKC. 16
18 nilutamid flutamid Obr. 10 Chemické struktury nilutamidu a flutamidu 2. Praktická část 2.1. Přístroje a pomůcky Kapilární elektroforéza Agilent HP 3D CE s UV detektorem, vypalovač detekčního okna, ultrazvuk, ph metr se skleněnou kombinovanou elektrodou, analytické váhy, elektromagnetická míchačka, elektromagnetické míchadlo, křemenná kapilára, řezátko na kapiláry, pravítko, odměrné baňky, kádinky, plastové nádobky, stříkačkové filtry (0,45 µm), injekční stříkačky, eppendorfky, špachtle Chemikálie Kyselina boritá, hydroxid sodný, deionizovaná voda, destilovaná voda, dodecyl sulfát sodný, standardy léčiv (nilutamid, flutamid), methanol, kalibrační roztoky pro kalibraci ph metru Pracovní postup Příprava separační kapiláry Uřízne se kapilára (pomocí řezátka) o potřebné délce (viz Tab. 6) a pomocí vypalovače detekčních oken (popř. pomocí zapalovače či seškrábáním) se v místě detekce odstraní vrstva polyimidu (vzdálenost odpovídá efektivní délce kapiláry). Detekční okno se opatrně omyje methanolem a vysuší. Na kapiláru se umístí interface a vloží se do kazety (viz Obr. 7) a následně do přístroje. Před prvním měřením se kapilára důkladně promyje (podmínky viz Tab. 6). 17
19 Příprava základního elektrolytu Připraví se základní elektrolyt (100 ml) potřebné množství kyseliny borité (c = 50 mm) se naváží, kvantitativně převede do odměrné baňky a doplní deionizovanou vodou po rysku. Pomocí hydroxidu sodného se upraví ph na hodnotu 9,0. Do plastové nádobky se naváží potřebné množství SDS (c = 50 mm; V = 50 ml) a rozpustí se ve vytvořeném pufru. Základní elektrolyt se přefiltruje přes stříkačkový filtr s velikostí pórů 0,45 µm. Příprava standardů Připraví se roztok nilutamidu a flutamidu o koncentraci 1 mg/ml v methanolu (V = 1 ml). Ředěním se připraví směs standardů o koncentraci každého analytu 50 µg/ml (ředí se deionizovanou vodou) tato směs se použije pro analýzu pomocí MEKC-UV. MEKC-UV analýza Připraví se sada viálek, do kterých se napipetuje: 1 M NaOH, deionizovaná voda, základní elektrolyt (3x), vzorek směs nilutamidu a flutamidu (2x). Podle pokynů vedoucího cvičení se provede nastavení přístroje a separačních podmínek (viz Tab. 6). Tab. 6 Separační podmínky MEKC-UV analýzy Separační napětí 20 kv Polarita kladná Vlnová délka 200 nm Dávkování 50 mbar/5s Základní elektrolyt 50 mm borát sodný, ph = 9,0 50 mm SDS Efektivní délka kapiláry 40,0 cm Celková délka kapiláry 48,5 cm Vnitřní průměr kapiláry 50 µm Teplota 25 C Promývání kapiláry před 1. měřením Promývání kapiláry mezi jednotlivými měřeními 1 M NaOH (20 minut), deionizovaná voda (20 minut), základní elektrolyt (15 minut) 1 M NaOH (1 minutu), deionizovaná voda (1 minutu), základní elektrolyt (3 minuty) 18
20 V první řadě se proměří slepý vzorek (deionizovaná voda), následně se provede analýza směsi standardů (c = 50 µg/ml) analýzu je potřeba provádět minimálně 3 x. Identifikace jednotlivých píků se provede spikováním k analyzované směsi se přidá přídavek nilutamidu a následně flutamidu. Získaná data se vyhodnotí a slovně okomentují. 3. Otázky 1. Vysvětlete základní princip micelární elektrokinetické chromatografie. 2. Vysvětlete princip vzniku elektroosmotického toku. 3. Uveďte, jaké typy detektorů je možné použít ve spojení s kapilární elektroforézou. 4. Kterými dalšími metodami by mohla být provedena separace nilutamidu a flutamidu? 5. Bylo by možné pro separaci neutrálních látek použít MEKC s využitím kationtového či neiontového tenzidu? Odpověď zdůvodněte. 4. Literatura 1. Šťulík K.: Analytické separační metody, Karolinum, Praha Baker D.R.: Capillary Electrophoresis: Techniques in Analytical Chemistry, John Wiley and Sons Ltd, New York He Z.: Capillary Electrophoresis: Fundamentals, Techniques and Applications, Nova Science Publishers, New York Phillips T.M., Kalish H.: Clinical Application of Capillary Electrophoresis, Methods and Protocols, Humana Press, New York Altria K.D., Capillary Electrophoresis Guidebook: Principles, Operation, and Applications. Humana Press Inc., New Jersey Znaleziona a kol.: MEKC Determination of Nilutamide in Human Serum Using Sweeping in High Salt Sample Matrix, Chromatografia 74 (2011) Marina L.M., Ríos A., Valcárcel M.: Analysis and Detection by Capillary Electrophoresis, CAC Series, Elsevier, Amsterdam
2. Stanovení 5-hydroxymethylfurfuralu v medu pomocí kapilární elektroforézy
2. Stanovení 5-hydroxymethylfurfuralu v medu pomocí kapilární elektroforézy Med je vodný přesycený roztok sacharidů, který se skládá převážně z fruktózy, glukózy a sacharózy. Kromě toho med obsahuje některé
VíceStanovení cholesterolu ve vaječném žloutku a mléce kapilární elektroforézou
Stanovení cholesterolu ve vaječném žloutku a mléce kapilární elektroforézou Úkol Stanovte obsah cholesterolu ve vaječném žloutku a mléce pomocí kapilární elektroforézy. Teoretická část Cholesterol je steroidní
VíceStanovení kreatininu v mase pomocí kapilární izotachoforézy
Stanovení kreatininu v mase pomocí kapilární izotachoforézy Úkol: Pomocí kapilární izotachoforézy určete, zda je v předloženém reálném vzorku (vařená šunka) obsažen kreatinin. 1. Teoretická část 1.1.Kreatinin
VíceObr. 1. Struktura glukosaminu.
3. Stanovení glukosaminu ve výživových doplňcích pomocí kapilární elektroforézy Glukosamin (2-amino-2-deoxyglukózamonosacharid je široce distribuován ve tkáních lidského organismu jako složka je klíčovou
VíceStanovení kyseliny pantotenové v lupíncích Corn flakes pomocí kapilární izotachoforézy
Stanovení kyseliny pantotenové v lupíncích Corn flakes pomocí kapilární izotachoforézy Úkol: Pomocí kapilární izotachoforézy stanovte, zda je v reálném vzorku (kukuřičné lupínky Corn flakes) obsažena kyselina
VíceObsah Protein Gel Electrophoresis Kitu a jeho skladování
Obsah Protein Gel Electrophoresis Kitu a jeho skladování Protein Gel Electrophoresis Kit obsahuje veškerý potřebný materiál provádění vertikální polyakrilamidové gelové elektroforézy. Experiment provádějí
VíceStanovení kyseliny mravenčí a citronové v kávě pomocí kapilární izotachoforézy
Stanovení kyseliny mravenčí a citronové v kávě pomocí kapilární izotachoforézy Úkol: Proveďte extrakci kyseliny mravenčí a citronové z reálného vzorku (káva). Pomocí kapilární izotachoforézy stanovte,
VíceAnalýza aniontových tenzidů v čisticích prostředcích kapilární elektroforézou
Analýza aniontových tenzidů v čisticích prostředcích kapilární elektroforézou Úkol: Pomocí kapilární elektroforézy v nevodném prostředí semikvantitativně stanovte vybrané aniontové tenzidy v čisticím prostředku.
VíceVizualizace DNA ETHIDIUM BROMID. fluorescenční barva interkalační činidlo. do gelu do pufru barvení po elfu SYBR GREEN
ETHIDIUM BROMID fluorescenční barva interkalační činidlo do gelu do pufru barvení po elfu Vizualizace DNA SYBR GREEN Barvení proteinů Coommassie Brilliant Blue Coomassie Blue x barvení stříbrem Porovnání
VíceSDS polyakrylamidová gelová elektroforéza (SDS PAGE)
SDS polyakrylamidová gelová elektroforéza (SDS PAGE) Princip SDS polyakrylamidová gelová elektroforéza slouží k separaci proteinů na základě jejich velikosti (molekulové hmotnosti). Zahřátím vzorku za
VíceAplikace elektromigračních technik
Aplikace elektromigračních technik Capillary electrophoresis D.L.Barker High Performance Capillary electrophoresis M.G. Khaledi Analysis and detection by capillary electrophoresis M.L.Marina (ed.) Electrophoresis
VíceObr. 1. Stuktura glukózy, fruktózy a sacharózy.
1. Analýza sacharidů v medu pomocí kapilární elektroforézy Med je přírodní produkt, který vyrábí včely z nektaru různých rostlin. Jedná se o vodný přesycený roztok sacharidů, který obsahuje také komplexní
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU C METODOU HPLC
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU C METODOU HPLC 1 Účel a rozsah Postup specifikuje podmínky pro stanovení vitamínu C v krmivech a premixech metodou vysokoúčinné kapalinové
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - ZEARALENON
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - ZEARALENON 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení zearalenonu v krmivech. 1 Zearalenon (ZON) je charakterizován
VíceAPLIKOVANÉ ELEKTROMIGRAČNÍ METODY
APLIKOVANÉ ELEKTROMIGRAČNÍ METODY Princip: migrace elektricky nabitých částic v elektrickém poli Druhy iontů: +, -, obojaký (zwitterion), vícenásobný Typy migrace: a) přímá migrují ionty analytů b) nepřímá
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU HPLC
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Tato metoda specifikuje podmínky pro stanovení vitamínu D v premixech pro výrobu krmných směsí metodou HPLC.
VíceEvropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY
Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY ELEKTROFORÉZA K čemu to je? kritérium čistoty preparátu stanovení molekulové hmotnosti makromolekul stanovení izoelektrického
VíceSešit pro laboratorní práci z chemie
Sešit pro laboratorní práci z chemie téma: Standardizace. Alkalimetrie. autor: ing. Alena Dvořáková vytvořeno při realizaci projektu: Inovace školního vzdělávacího programu biologie a chemie registrační
Více13/sv. 8 (85/503/EHS) Tato směrnice je určena členským státům.
62 31985L0503 L 308/12 ÚŘEDNÍ VĚSTNÍK EVROPSKÝCH SPOLEČENSTVÍ 20.11.1985 PRVNÍ SMĚRNICE KOMISE ze dne 25. října 1985 o metodách pro analýzu potravinářských kaseinů a kaseinátů (85/503/EHS) KOMISE EVROPSKÝCH
VíceZáklady analýzy potravin Přednáška 8. Důvody pro analýzu bílkovin v potravinách. určování původu suroviny, autenticita výrobku
BÍLKOVINY Důvody pro analýzu bílkovin v potravinách posuzování nutriční hodnoty celkový obsah bílkovin aminokyselinové složení bílkoviny, volné aminokyseliny obsah cizorodých nebo neplnohodnotných bílkovin
VíceIzolace genomové DNA ze savčích buněk, stanovení koncentrace DNA pomocí absorpční spektrofotometrie
Izolace genomové DNA ze savčích buněk, stanovení koncentrace DNA pomocí absorpční spektrofotometrie IZOLACE GENOMOVÉ DNA Deoxyribonukleová kyselina (DNA) představuje základní genetický materiál většiny
VíceSekvenční injekční analýza laboratoř na ventilu (SIA-LOV) (Stanovení obsahu heparinu v injekčním roztoku)
Sekvenční injekční analýza laboratoř na ventilu (SIA-LOV) (Stanovení obsahu heparinu v injekčním roztoku) Teorie: Sekvenční injekční analýza (SIA) je další technikou průtokové analýzy, která umožňuje snadnou
Vícelaktoferin BSA α S2 -CN α S1 -CN Popis: BSA bovinní sérový albumin, CN kasein, LG- laktoglobulin, LA- laktalbumin
Aktivita KA 2340/4-8up Stanovení bílkovin v mléce pomocí SDS PAGE (elektroforéza na polyakrylamidovém gelu s přídavkem dodecyl sulfátu sodného) vypracovala: MVDr. Michaela Králová, Ph.D. Princip: Metoda
VíceStanovení paracetamolu, kofeinu a propyfenazonu v tabletách Valetol
Úkol: Stanovení paracetamolu, kofeinu a propyfenazonu v tabletách Valetol pomocí CE-LIF Proveďte separaci a následné stanovení účinných látek (paracetamol, propyfenazon, kofein) v přípravku Valetol pomocí
VíceProtokoly Transformace plasmidu do elektrokompetentních buněk BL21 Pracovní postup:
Protokoly Pracovní potřeby, pufry a chemikálie jsou uvedeny na konci protokolu. Pracovní postupy jsou odvozeny od těchto kitů: Champion pet160 Directional TOPO Expression Kit with Lumio Technology (Invitrogen)
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU HYDROXYPROLINU SPEKTROFOTOMETRICKY
Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU HYDROXYPROLINU SPEKTROFOTOMETRICKY 1 Rozsah a účel Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu hydroxyprolinu v živočišných tkáních spektrofotometrickou metodou. 2 Princip
VíceJednotné pracovní postupy testování odrůd STANOVENÍ OBSAHU TANINŮ V ČIROKU SPEKTROFOTOMETRICKY
5321.1 Stanovení obsahu taninů v čiroku Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU TANINŮ V ČIROKU SPEKTROFOTOMETRICKY 1 Účel a rozsah Postup je určen pro stanovení obsahu taninů v zrnech čiroku. 2 Princip Taniny se ze
VíceELEKTROFORETICKÉ METODY
ELEKTROFORETICKÉ METODY ELEKTROFORETICKÁ SEPARACE AMINOKYSELIN NA PAPÍROVÉM NOSIČI Aminokyseliny lze rozdělit elektroforézou na papíře. Protože molekulová hmotnost jednotlivých aminokyselin není příliš
VícePotenciometrické stanovení disociační konstanty
Potenciometrické stanovení disociační konstanty TEORIE Elektrolytická disociace kyseliny HA ve vodě vede k ustavení disociační rovnováhy: HA + H 2O A - + H 3O +, kterou lze charakterizovat disociační konstantou
VíceNázev: Vypracovala: Datum: 7. 2. 2014. Zuzana Lacková
Název: Vypracovala: Zuzana Lacková Datum: 7. 2. 2014 Reg.č.projektu: CZ.1.07/2.4.00/31.0023 Název projektu: Partnerská síť centra excelentního bionanotechnologického výzkumu MĚLI BYCHOM ZNÁT: informace,
VíceInovace bakalářského studijního oboru Aplikovaná chemie CZ.1.07/2.2.00/15.0247
Papírová a tenkovrstvá chromatografie Jednou z nejrozšířenějších analytických metod je bezesporu chromatografie, umožňující účinnou separaci látek nutnou pro spolehlivou identifikaci a kvantifikaci složek
VíceKOMPLEXOMETRIE C C H 2
Úloha č. 11 KOMPLEXOMETRIE Princip Při komplexotvorných reakcích vznikají komplexy sloučeniny, v nichž se k centrálnímu atomu nebo iontu vážou ligandy donor-akceptorovou (koordinační) vazbou. entrální
Více13/sv. 6 CS (80/891/EHS)
65 31980L0891 27.9.1980 ÚŘEDNÍ VĚSTNÍK EVROPSKÝCH SPOLEČENSTVÍ L 254/35 SMĚRNICE KOMISE ze dne 25. července 1980 o analytické metodě Společenství pro stanovení obsahu kyseliny erukové v olejích a tucích
VíceSDS-PAGE elektroforéza
SDS-PAGE elektroforéza Příprava gelu... 1 Recept na 0.75 mm gel (1 gel/2 gely)... 2 Recept na 1.5 mm gel (1 gel/2 gely)... 2 Příprava vzorku... 3 Elektroforéza... 3 Barvení gelů Blue Silver... 4 Chemikálie
VíceIZOLACE, SEPARACE A DETEKCE PROTEINŮ I. Vlasta Němcová, Michael Jelínek, Jan Šrámek
IZOLACE, SEPARACE A DETEKCE PROTEINŮ I Vlasta Němcová, Michael Jelínek, Jan Šrámek Studium aktinu, mikrofilamentární složky cytoskeletu pomocí dvou metod: detekce přímo v buňkách - fluorescenční barvení
VíceReakce kyselin a zásad
seminář 6. 1. 2011 Chemie Reakce kyselin a zásad Známe několik teorií, které charakterizují definují kyseliny a zásady. Nejstarší je Arrheniova teorie, která je platná pro vodné prostředí, podle které
VíceVYUŽITÍ TEPELNÉHO ZMLŽOVAČE V AAS
1 VYUŽITÍ TEPELNÉHO ZMLŽOVAČE V AAS JAN KNÁPEK Katedra analytické chemie, Přírodovědecká fakulta MU, Kotlářská 2, Brno 611 37 Obsah 1. Úvod 2. Tepelný zmlžovač 2.1 Princip 2.2 Konstrukce 2.3 Optimalizace
VíceStanovení koncentrace (kvantifikace) proteinů
Stanovení koncentrace (kvantifikace) proteinů Bioanalytické metody Prof. RNDr. Pavel Peč, CSc. Úvod Kritéria výběru metod stanovení koncentrace proteinů jsou založena na možnostech pro vlastní analýzu,
VíceWestern blotting. 10% APS 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl
Western blotting 1. Příprava gelu složení aparatury hustotu gelu volit podle velikosti proteinů příprava rozdělovacího gelu: 10% 12% počet gelů 1 2 4 1 2 4 objem 6 ml 12 ml 24 ml 6 ml 12 ml 24 ml 40% akrylamid
VícePříloha 2. Návod pro laboratorní úlohu
Příloha 2. Návod pro laboratorní úlohu VYSOKÁ ŠKOLA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ V PRAZE ÚSTAV CHEMIE A ANALÝZY POTRAVIN Technická 5, 166 28 Praha 6 tel./fax.: + 42 224 353 185; jana.hajslova@vscht.cz Analýza
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU SEMDURAMICINU METODOU HPLC
Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU SEMDURAMICINU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu semduramicinu v krmivech metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) v koncentračním
VícePROTOKOL WESTERN BLOT
WESTERN BLOT 1. PŘÍPRAVA ELEKTROFORETICKÉ APARATURY Saponátem a vodou se důkladně umyjí skla, plastové vložky a hřebínek, poté se důkladně opláchnou deionizovanou/destilovanou vodou a etanolem a nechají
VíceÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE
LABORATOŘ OBORU I ÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE (111) J Katalytická oxidace fenolu ve vodách Vedoucí práce: Doc. Ing. Vratislav Tukač, CSc. Umístění práce: S27 1 Ústav organické technologie, VŠCHT Praha
VícePROTEINOVÁ DENATURUJÍCÍ ELEKTROFORÉZA (SDS PAGE)
PROTEINOVÁ DENATURUJÍCÍ ELEKTROFORÉZA (SDS PAGE) Denaturující proteinová elektroforéza (SDS PAGE - SDS Protein Acrylamide Gel Electrophoresis) je metoda, která se používá k separaci proteinů podle velikosti,
VícePolymorfismus délky restrikčních fragmentů
Polymorfismus délky restrikčních fragmentů Princip: Chemikálie: PCR produkt z předchozího praktického cvičení Endonukleáza KpnI 10 U μl -1 Pufr pro KpnI 10 koncentrovaný (Tris-HCl 100 mmol l -1 ph 7,5,
Více215.1.10 SKUPINOVÁ ANALÝZA MOTOROVÝCH NAFT
215.1.10 SKUPINOVÁ ANALÝZA MOTOROVÝCH NAFT ÚVOD Snižování emisí výfukových plynů a jejich škodlivosti je hlavní hnací silou legislativního procesu v oblasti motorových paliv. Po úspěšném snížení obsahu
VíceMETODY STUDIA PROTEINŮ
METODY STUDIA PROTEINŮ Mgr. Vlasta Němcová vlasta.furstova@tiscali.cz OBSAH PŘEDNÁŠKY 1) Stanovení koncentrace proteinu 2) Stanovení AMK sekvence proteinu Hmotnostní spektrometrie Edmanovo odbourávání
VíceHmotnostní spektrometrie
Hmotnostní spektrometrie Podstatou hmotnostní spektrometrie je studium iontů v plynném stavu. Tato metoda v sobě zahrnuje tři hlavní části:! generování iontů sledovaných atomů nebo molekul! separace iontů
VícePOTENCIOMETRICKÁ TITRAČNÍ KŘIVKA Stanovení hydroxidu a uhličitanu vedle sebe dle Wardera
Úloha č. 10 POTENCIOMETRICKÁ TITRAČNÍ KŘIVKA Stanovení hydroxidu a uhličitanu vedle sebe dle Wardera Princip Potencioetrické titrace jsou jednou z nejrozšířenějších elektrocheických etod kvantitativního
VíceStanovení organofosforových pesticidů ve vodě a půdě micelární elektrokinetickou chromatografií
Stanovení organofosforových pesticidů ve vodě a půdě micelární elektrokinetickou chromatografií Úkol: Proveďte extrakci organofosforových pesticidů z reálných vzorků vody a půdy. Dále proveďte jejich separaci
Vícefenanthrolinem Příprava
1 ÚLOHA 9: Spektrofotometrické fenanthrolinem studium komplexu Fe(II) s 1,10- Příprava 2. 3. 4. 5. 6. Zopakujte si základní pojmy z optiky - elektromagnetické záření a jeho šíření absorbujícím prostředím,
VíceLABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ
LABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ Stanovení tuku a hodnocení kvality tuků a olejů (Soxhletova metoda pro extrakci tuku a titrační stanovení čísla kyselosti) Garant úlohy: doc. Ing. Zuzana
VíceSraz studentů v 8:00 před laboratoří A5/108, s sebou plášť a přezutí PRINCIP. Polyakrylamidová gelová elektroforéza v přítomnosti SDS (SDS-PAGE)
PRINCIP Sraz studentů v 8:00 před laboratoří A5/108, s sebou plášť a přezutí Polyakrylamidová gelová elektroforéza v přítomnosti SDS (SDS-PAGE) SDS-PAGE slouží k separaci proteinů na základě jejich molekulové
VíceRegistrační číslo projektu: CZ.1.07/1.4.00/21.2939. Název projektu: Investice do vzdělání - příslib do budoucnosti
Registrační číslo projektu: CZ.1.07/1.4.00/21.2939 Název projektu: Investice do vzdělání - příslib do budoucnosti Číslo přílohy: VY_číslo šablony_inovace_číslo přílohy Autor Datum vytvoření vzdělávacího
VíceDERIVATIZACE AMINOKYSELIN, PEPTIDŮ A PROTEINŮ PRO LASEREM INDUKOVANOU FLUORESCENČNÍ DETEKCI V KAPILÁRNÍ ELEKTRO-
DERIVATIZACE AMINOKYSELIN, PEPTIDŮ A PROTEINŮ PRO LASEREM INDUKOVANOU FLUORESCENČNÍ DETEKCI V KAPILÁRNÍ ELEKTRO- FORÉZE MARKÉTA RYVOLOVÁ*, PETR TÁBORSKÝ, PATRIK VRÁBEL, JOSEF HAVEL a JAN PREISLER Katedra
VíceIdentifikace a stanovení chininu v toniku pomocí CE-MS
Identifikace a stanovení chininu v toniku pomocí CE-MS Úkol: Stanovte množství chininu v nealkoholickém nápoji (tonik) pomocí kapilární zónové elektroforézy ve spojení s hmotnostní spektrometrií Teoretická
VíceIONOSEP v analýze vody. Využití analyzátorů IONOSEP pro analýzu vod. Doc. Ing. František KVASNIČKA, CSc.
Využití analyzátorů IONOSEP pro analýzu vod Doc. Ing. František KVASNIČKA, CSc. IONOSEP v analýze vody Kapilární isotachoforesa nebo její kombinace se zónovou elektroforesou je svými vlastnostmi velmi
VíceChelatometrie. Stanovení tvrdosti vody
Chelatometrie Stanovení tvrdosti vody CHELATOMETRIE Cheláty (vnitřně komplexní sloučeniny; řecky chelé = klepeto) jsou komplexní sloučeniny, kde centrální ion je členem jednoho nebo více vznikajících kruhů.
VíceMINIATURIZACE PRŮTOKOVÝCH ELEKTROCHEMICKÝCH CEL PRO GENEROVÁNÍ TĚKAVÝCH SLOUČENIN. Jakub Hraníček
MINIATURIZACE PRŮTOKOVÝCH ELEKTROCHEMICKÝCH CEL PRO GENEROVÁNÍ TĚKAVÝCH SLOUČENIN Jakub Hraníček Katedra analytické chemie, Přírodovědecká fakulta, Univerzita Karlova, Albertov 6, 128 43 Praha 2 E-mail:
VíceStanovení sacharidů ve vybraných přírodních matricích pomocí kapalinové chromatografie s odpařovacím detektorem rozptylu světla (UHPLC-ELSD)
Stanovení sacharidů ve vybraných přírodních matricích pomocí kapalinové chromatografie s odpařovacím detektorem rozptylu světla (UHPLC-ELSD) A) Ultrazvuková extrakce Ultrazvuková extrakce je významnou
VíceMonitorování hladiny metalothioneinu a thiolových sloučenin u biologických organismů vystavených působení kovových prvků a sloučenin
Laboratoř Metalomiky a Nanotechnologií Monitorování hladiny metalothioneinu a thiolových sloučenin u biologických organismů vystavených působení kovových prvků a sloučenin Ing. Kateřina Tmejová, Ph. D.,
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - FUMONISIN B 1 A B 2
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - FUMONISIN B 1 A B 2 1 Rozsah a účel Metoda je vhodná pro stanovení fumonisinů B 1 a B 2 v krmivech. 2 Princip Fumonisiny
VíceElektroforéza v přítomnosti SDS SDS PAGE
Elektroforéza v přítomnosti SDS SDS PAGE Elektroforéza v přítomnosti SDS SDS PAGE je jednoduchá, rychlá a reprodukovatelná metoda pro kvalifikovanou charakterizaci a srovnání bílkovin.tato metoda separuje
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MASTNÝCH KYSELIN V OLEJÍCH A TUCÍCH METODOU GC
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MASTNÝCH KYSELIN V OLEJÍCH A TUCÍCH METODOU GC 1 Rozsah a účel Metoda je určena pro kvantitativní a kvalitativní určení složení směsi methylesterů
Více1 DATA: CHYBY, VARIABILITA A NEJISTOTY INSTRUMENTÁLNÍCH MĚŘENÍ. 1.5 Úlohy. 1.5.1 Analýza farmakologických a biochemických dat
1 DATA: CHYBY, VARIABILITA A NEJISTOTY INSTRUMENTÁLNÍCH MĚŘENÍ 1.5 Úlohy Úlohy jsou rozděleny do čtyř kapitol: B1 (farmakologická a biochemická data), C1 (chemická a fyzikální data), E1 (environmentální,
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MELAMINU A KYSELINY KYANUROVÉ METODOU LC-MS
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MELAMINU A KYSELINY KYANUROVÉ METODOU LC-MS 1 Rozsah a účel Postup je určen pro stanovení obsahu melaminu a kyseliny kyanurové v krmivech. 2 Princip
VíceCS Úřední věstník Evropské unie L 54/85
26.2.2009 CS Úřední věstník Evropské unie L 54/85 F. STANOVENÍ DICLAZURILU 2,6-dichlor-alfa-(4-chlorofenyl)-4-(4,5-dihydro-3,5-dioxo-1,2,4-triazin-2-(3-H)yl)benzenacetonitril 1. Účel a rozsah Tato metoda
VícePraktický kurz Pokročilé biofyzikální přístupy v genomice a proteomice. 12.-13. května 2010
www.modernibiofyzika.cz Oddělení funkční genomiky a proteomiky Ústav experimentální biologie, Přírodovědecká fakulta Masarykova univerzita Praktický kurz Pokročilé biofyzikální přístupy v genomice a proteomice
VíceEXTRAKCE, CHROMATOGRAFICKÉ DĚLENÍ (C18, TLC) A STANOVENÍ LISTOVÝCH BARVIV
Úloha č. 7 Extrakce a chromatografické dělení (C18 a TLC) a stanovení listových barviv -1 - EXTRAKCE, CHROMATOGRAFICKÉ DĚLENÍ (C18, TLC) A STANOVENÍ LISTOVÝCH BARVIV LISTOVÁ BARVIVA A JEJICH FYZIOLOGICKÝ
VíceEXTRAKČNÍ METODY. Studijní materiál. 1. Obecná charakteristika extrakce. 2. Extrakce kapalina/kapalina LLE. 3. Alkalická hydrolýza
Studijní materiál EXTRAKČNÍ METODY 1. Obecná charakteristika extrakce 2. Extrakce kapalina/kapalina LLE 3. Alkalická hydrolýza 4. Soxhletova extrakce 5. Extrakce za zvýšené teploty a tlaku PLE, ASE, PSE
VíceLEE: 4a Stanovení 9-ACA ve finálním produktu v rámci výstupní kontroly
LEE: 4a Stanovení 9-ACA ve finálním produktu v rámci výstupní kontroly Pracuješ jako laboratorní technik ve společnosti, která se zabývá, kromě jiné činnosti, výrobou chemických specialit. Máš na starosti
VíceTEORETICKÁ ČÁST (70 BODŮ)
Řešení okresního kola ChO kat. D 0/03 TEORETICKÁ ČÁST (70 BODŮ) Úloha 3 bodů. Ca + H O Ca(OH) + H. Ca(OH) + CO CaCO 3 + H O 3. CaCO 3 + H O + CO Ca(HCO 3 ) 4. C + O CO 5. CO + O CO 6. CO + H O HCO 3 +
VíceInovace bakalářského studijního oboru Aplikovaná chemie CZ.1.07/2.2.00/
Dělení bílkovin pomocí diskontinuální elektroforézy v polyakrylamidovém gelu (PAGE) Při elektroforéze dochází k pohybu (migraci) iontů v elektrickém poli. Elektroforetické metody se tedy používají k separaci
VíceDOPLŇKOVÝ STUDIJNÍ MATERIÁL CHEMICKÉ VÝPOČTY. Zuzana Špalková. Věra Vyskočilová
DOPLŇKOVÝ STUDIJNÍ MATERIÁL CHEMICKÉ VÝPOČTY Zuzana Špalková Věra Vyskočilová BRNO 2014 Doplňkový studijní materiál zaměřený na Chemické výpočty byl vytvořen v rámci projektu Interní vzdělávací agentury
VíceStanovení ethanolu v biologickém materiálu pro forenzní účely
Stanovení ethanolu v biologickém materiálu pro forenzní účely Stanovení ethanolu (alkoholu) v biologickém materiálu se pro forenzní účely provádí dvěma různými metodami. Především jde o metodu plynové
VíceSpektrofotometrické stanovení fosforečnanů ve vodách
Spektrofotometrické stanovení fosforečnanů ve vodách Úkol: Spektrofotometricky stanovte obsah fosforečnanů ve vodě Chemikálie: 0,07165 g dihydrogenfosforečnan draselný KH 2 PO 4 75 ml kyselina sírová H
VíceStanovení koncentrace Ca 2+ a tvrdost vody
Laboratorní úloha B/4 Stanovení koncentrace Ca 2+ a tvrdost vody Úkol: A. Stanovte koncentraci iontů Ca 2+ v mg/l ve vzorku a určete tvrdost vody. Pomocí indikátoru a barevného přechodu stanovte bod ekvivalence
VíceUrčení koncentrace proteinu fluorescenční metodou v mikrotitračních destičkách
Určení koncentrace proteinu fluorescenční metodou v mikrotitračních destičkách Teorie Stanovení celkových proteinů Celkové množství proteinů lze stanovit pomocí několika metod; například: Hartree-Lowryho
VíceNázev: Vitamíny. Autor: Mgr. Jiří Vozka, Ph.D. Název školy: Gymnázium Jana Nerudy, škola hl. města Prahy
Název: Vitamíny Autor: Mgr. Jiří Vozka, Ph.D. Název školy: Gymnázium Jana Nerudy, škola hl. města Prahy Předmět, mezipředmětové vztahy: chemie, biologie, matematika Ročník: 5. Tématický celek: Biochemie
VíceNÁVOD K POUŽITÍ VÁPNÍK 600 KATALOGOVÉ ČÍSLO 207
NÁVOD K POUŽITÍ VÁPNÍK 600 KATALOGOVÉ ČÍSLO 207 POUŽITÍ Souprava Vápník 600 se používá ke kvantitativnímu stanovení koncentrace vápenatých iontů v séru a moči. SOUHRN V lidském organismu je vázána převážná
VíceÚloha č. 1 Příprava nifedipinu
Úloha č. 1 Příprava nifedipinu Do kulaté baňky o objemu 50 ml předložíme 4 mmol 2-nitrobenzaldehydu, 9 mmol methylacetacetátu, 1,2 ml 25% NH 4 OH a 1 ml methanolu. Na baňku nasadíme zpětný chladič a umístíme
VíceFragment Analyzer UNIKÁTNÍ KAPILÁROVÝ FRAGMENTAČNÍ ANALYZÁTOR VÝBORNÉ VÝSLEDKY UNIKÁTNÍ VLASTNOSTI
Fragment Analyzer UNIKÁTNÍ KAPILÁROVÝ FRAGMENTAČNÍ ANALYZÁTOR VÝBORNÉ VÝSLEDKY UNIKÁTNÍ VLASTNOSTI Výborný přístroj, výborné výsledky Fragmentační analyzátor je automatizovaný kapilárový systém s CE značkou
Více1. Příloha 1 Návod úlohy pro Pokročilé praktikum z biochemie I
1. Příloha 1 Návod úlohy pro Pokročilé praktikum z biochemie I Vazba bromfenolové modři na sérový albumin Princip úlohy Albumin má unikátní vlastnost vázat menší molekuly mnoha typů. Díky struktuře, tvořené
VíceVýzkumný ústav rostlinné výroby Praha Ruzyně. Metodika byla vypracována jako výstup výzkumného záměru MZe č. 0002700602. Autor: Ing.
Výzkumný ústav rostlinné výroby Praha Ruzyně Optimalizovaná metodika SDS-PAGE pro analýzu LMW podjednotek gluteninů pšenice Metodika byla vypracována jako výstup výzkumného záměru MZe č. 0002700602 Autor:
VíceP + D PRVKY Laboratorní práce Téma: Reakce mědi, stříbra a jejich sloučenin
P + D PRVKY Laboratorní práce Téma: Reakce mědi, stříbra a jejich sloučenin Úkol 1: Stanovte obsah vody v modré skalici. Modrá skalice patří mezi hydrát, což jsou látky, nejčastěji soli, s krystalicky
VíceAnalyzátory OPTI firmy ROCHE
Analyzátory OPTI firmy ROCHE - øešení kritických situací Prof. MUDr. Jaroslav Racek, DrSc., MUDr. Vlasta Petøíková, Zuzana Pešková Ústav klinické biochemie a laboratorní diagnostiky Lékaøské fakulty UK
VíceIdentifikace barviv pomocí Ramanovy spektrometrie
Identifikace barviv pomocí Ramanovy spektrometrie V kriminalistických laboratořích se provádí technická expertíza písemností, která se mimo jiné zabývá zkoumáním použitých psacích prostředků: tiskových
VíceSTANOVENÍ FLUORIDŮ IONTOVĚ-SELEKTIVNÍ ELEKTRODOU
STANOVENÍ FLUORIDŮ IONTOVĚ-SELEKTIVNÍ ELEKTRODOU T. V. Šiškanová, G. Broncová Teoretický úvod Potenciometrie je elektrochemická metoda, při které se měří rozdíl potenciálů (elektromotorické napětí, E)
VíceMobilní fáze. HPLC mobilní fáze 1
Mobilní fáze 1 VLIV CHROMATOGRAFICKÝCH PODMÍNEK NA ELUČNÍ CHARAKTERISTIKY SEPAROVANÝCH LÁTEK - SLOŽENÍ MOBILNÍ FÁZE Složení mobilní fáze má vliv na eluční charakteristiky : účinnost kolony; kapacitní poměr;
VíceJednotné pracovní postupy Analýza půd
3142.1 Stanovení bazální a substrátem Strana 1 STANOVENÍ BAZÁLNÍ A SUBSTRÁTEM INDUKOVANÉ RESPIRACE METODOU GC 1 Účel a rozsah Postup se používá pro stanovení bazální respirace (BR) a substrátem indukované
VíceZmírnění mírné až průměrné pooperační bolesti a zánětu po chirurgických zákrocích u koček kupř. po ortopedických operacích a operacích měkkých tkání.
SOUHRN ÚDAJŮ O PŘÍPRAVKU 1. NÁZEV VETERINÁRNÍHO LÉČIVÉHO PŘÍPRAVKU Metacam 2 mg/ml injekční roztok pro kočky 2. KVALITATIVNÍ A KVANTITATIVNÍ SLOŽENÍ Jeden ml obsahuje: Léčivá( látka: Meloxicamum Pomocné
VíceOborový workshop pro ZŠ CHEMIE
PRAKTICKÁ VÝUKA PŘÍRODOVĚDNÝCH PŘEDMĚTŮ NA ZŠ A SŠ CZ.1.07/1.1.30/02.0024 Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem České republiky. Oborový workshop pro ZŠ CHEMIE
VíceSTANOVENÍ SIŘIČITANŮ VE VÍNĚ
STANOVENÍ SIŘIČITANŮ VE VÍNĚ CÍLE ÚLOHY: seznámit se s principy izotachoforézy a jodometrické titrace kvantitativně stanovit siřičitany v bílém víně oběma metodami POUŽITÉ VYBAVENÍ: Chemikálie: ITP 10mM
Více26.2.2009 CS Úřední věstník Evropské unie L 54/15
26.2.2009 CS Úřední věstník Evropské unie L 54/15 3.4 Exsikátor s účinný vysoušecí prostředke. 3.5 Analytické váhy. 4. Postup Do isky (3.1), přede vysušené a zvážené, opatřené teploěre (3.2) se naváží
VíceOborový workshop pro SŠ CHEMIE
PRAKTICKÁ VÝUKA PŘÍRODOVĚDNÝCH PŘEDMĚTŮ NA ZŠ A SŠ CZ.1.07/1.1.30/02.0024 Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem České republiky. Oborový workshop pro SŠ CHEMIE
VíceIdentifikace mikroorganismů pomocí sekvence jejich genu pro 16S rrna
Praktická úloha Identifikace mikroorganismů pomocí sekvence jejich genu pro 16S rrna Pro spolehlivou identifikaci mikroorganismů pomocí genetických metod se velmi často využívá stanovení nukleotidové sekvence
VíceTVRDOST, VODIVOST A ph MINERÁLNÍ VODY
TRDOST, ODIOST A ph MINERÁLNÍ ODY A) STANOENÍ TRDOSTI MINERÁLNÍCH OD Prinip: Tvrdost, resp. elková tvrdost vody, je způsobena obsahem solí alkalikýh zemin vápník, hořčík, stronium a barium. Stronium a
VíceÚvod. Náplň práce. Úkoly
Název práce: Zkouška disoluce pevných lékových forem Vedoucí práce: Doc. Ing. Petr Zámostný, Ph.D. Jméno zástupce: Ing. Jan Patera Umístění práce: S25b Úvod Uvolňování léčiva z tuhých perorálních lékových
Více