METODY STUDIA PROTEINŮ

Rozměr: px
Začít zobrazení ze stránky:

Download "METODY STUDIA PROTEINŮ"

Transkript

1 METODY STUDIA PROTEINŮ Mgr. Vlasta Němcová OBSAH PŘEDNÁŠKY 1) Stanovení koncentrace proteinu 2) Stanovení AMK sekvence proteinu Hmotnostní spektrometrie Edmanovo odbourávání 3) Obecné principy specifické detekce molekul 4) Vizualizace proteinů pomocí mikroskopických technik Imunohistochemie Fluorescenční a konfokální mikroskopie Elektronová mikroskopie 5) Stanovení míry exprese proteinu ELISA Průtoková cytometrie SDS-PAGE + Western blot 6) Stanovení fyziologické role proteinu Genový knock-out Genový knock-down pomocí sirna Overexprese proteinu 1

2 1) STANOVENÍ KONCENTRACE PROTEINŮ založené na spektrofotometrickém stanovení (měření absorbance) metoda podle Bradfordové BCA metoda (Bicinchoninová metoda) stanovení z UV spektra atd. 2

3 METODA PODLE BRADFORDOVÉ (Bradford assay) princip: kolorimetrická reakce po smíchání Bradfordova činidla s roztokem obsahujícím proteiny Bradfordovo činidlo obsahuje barvivo Coomassie Brilliant Blue - váže se na bazické a aromatické aminokyselinové zbytky v proteinech (Arg, Phe, Try, Pro) změna barvy roztoku z hnědé na modrou detekce při 595 nm Blank Koncentrace proteinu BCA METODA (BCA assay) detekční činidlo obsahuje BCA (bicinchoninic acid) kolorimetrická reakce založena na interakci činidla přímo s peptidovou vazbou (a ne pouze s určitými AMK) purpurové zbarvení detekovatelné při 562 nm Blank Koncentrace proteinu 3

4 Absorbance (A595 nm) PRINCIP STANOVENÍ KONCENTRACE PROTEINŮ nutno vytvořit kalibrační křivku ze série roztoků o známé koncentraci proteinu nejčastěji je používán bovinní sérový albumin (=BSA) y = x R² = Změřená hodnota absorbance BSA (ug/ul) Zjištěná koncentrace proteinu STANOVENÍ Z ABSORBANCE V UV OBLASTI proteiny absorbují v UV spektru ( nm) díky přítomnosti aromatických aminokyselin (tyrosin a tryptofan, méně cystein) není nutná kalibrační křivka výpočet dle rovnice [Protein] (mg/ml) = 1.55*A *A 260 všechny metody založené na přítomnosti pouze určitých aminokyselin předpokládají stejné zastoupení těchto AMK ve vzorcích!!! 4

5 2) STANOVENÍ AMINOKYSELINOVÉ SEKVENCE PROTEINŮ Edmanovo odbourání Hmotnostní spektrometrie EDMANOVO ODBOURÁNÍ označení N-koncové AMK a její odštěpení od zbytku AMK řetězce identifikace AMK pomocí chromatografie anebo elekroforézy limitace délkou peptidového řetězce max. cca 30 AMK (delší proteiny nutno nejdříve naštěpit na kratší fragmenty) 5

6 HMOTNOSTNÍ SPEKTROMETRIE mass spectrometry detekce molekulové hmotnosti proteinových fragmentů HMOTNOSTNÍ SPEKTROMETRIE porovnání hmotnostního spektra získaného analýzou vzorku s dostupnými databázemi proteinů nalezení AMK sekvence proteinu (nebo identifikace neznámého proteinu) 6

7 3) OBECNÉ PRINCIPY SPECIFICKÉ DETEKCE MOLEKUL (nejen proteinů) zajištění specifické detekce možnosti detekce signálu ZAJIŠTĚNÍ SPECIFICKÉ DETEKCE nalezení detekované molekuly ve vzorku na základě známé a specifické interakce jiné molekuly s detekovanou molekulou Touto molekulou umožňující detekci může být: 1. malá organická molekula molekula, která se specificky váže k cílovému proteinu (např. phaloidin k F-aktinu, DAPI a ethidium bromid k DNA) 2. protein, o kterém je známo, že interaguje s detekovaným proteinem ( např. DNáza I s G-aktinem) 3. protilátka specificky rozpoznávající detekovaný protein (IMONODETEKCE) - nejčastěji používaný systém pro detekci proteinů, protože protilátku lze připravit proti jakémukoliv proteinu 7

8 PŘÍMÁ A NEPŘÍMÁ IMUNODETEKCE Přímá detekce detekovatelný produkt Nepřímá detekce substrát detekovatelný produkt amplifikace signálu substrát enzym enzym sekundární protilátka primární protilátka značená primární protilátka neznačená primární protilátka + značená sekundární protilátka (sekundární protilátka interaguje s Fc fragmentem primární protilátky váže se na všechny protilátky vytvořené určitým živočišným druhem) MOŽNOSTI DETEKCE SIGNÁLU s detekovanou molekulou interagující molekula obvykle není schopna produkovat detekovatelný signál detekující molekula konjugována s jinou molekulou umožňující vizualizaci Touto molekulou umožňující detekci může být: 1. těžký kov 2. fluorofor 3. enzym, jehož enzymová aktivita umožňuje vizualizaci detekované molekuly 8

9 MOŽNOSTI DETEKCE SIGNÁLU s molekulou použitou pro detekci cílového proteinu může být konjugován: 1) těžký kov - nejčastěji koloidní zlato ( imunogold labeling ) Somatostatin v D buňkách pankreatu MOŽNOSTI DETEKCE SIGNÁLU s molekulou použitou pro detekci cílového proteinu může být konjugován: 2) fluorofor = molekula schopná absorbovat záření určité vlnové délky a vyzářit (emitovat) záření jiné vlnové délky (=detekovaný signál) - při použití různých fluoroforů možnost sledování kolokalizace molekul (výskyt na stejné buňce nebo stejném místě v buňce) Pr: detekce cirkulujících nádorových buněk odvozených od epiteliálních nádorů (DNA barvená DAPI, anti-cd45 -FITC, anti-cytokeratin -TRITC) 9

10 MOŽNOSTI DETEKCE SIGNÁLU s molekulou použitou pro detekci cílového proteinu může být konjugován: 3) enzym vizualizace detekované molekuly po reakci se substrátem chemiluminiscence jako enzym se obvykle používá křenová peroxidáza (= horse radish peroxidase = HRP) štěpí luminol za vzniku světla, které je detekováno chromogenní (barevná reakce) vzniká barevný produkt - míra zbarvení může být měřena kvantifikace detekované molekuly - např. enzym alkalická fosfatáza (= AP) produkt reakce musí být nerozpustný, pokud chceme vidět lokalizaci detekované molekuly produkt reakce musí být rozpustný, pokud chceme měřit intenzitu vzniklého zabarvení v roztoku 3) VIZUALIZACE PROTEINŮ POMOCÍ MIKROSKOPICKÝCH TECHNIK imunohistochemie fluorescenční a konfokální mikroskopie elektronová mikroskopie 10

11 IMUNOHISTOCHEMIE detekce v mikroskopickém preparátu (obvykle tenký řez tkáně) obvykle pomocí specifických protilátek a barevné reakce za vzniku nerozpustného produktu FLUORESCENČNÍ MIKROSKOPIE excitační filtr umožňuje výběr vlnové délky pro excitaci fluoroforu, světlo jiné vlnové délky je emitováno fluoroforem a je propuštěno bariérovým filtrem do okuláru lze detekovat signál vždy jen od jednoho fluoroforu, při vícenásobném značení se musí obraz do vícenásobného skládat počítačově) 11

12 FLUORESCENČNÍ vs. KONFOKÁLNÍ MIKROSKOPIE fluorescenční mikroskop do okuláru se dostává signál z celé vrstvy tkáně (nebo z celé výšky buňky), nelze spolehlivě detekovat vzájemnou pozici molekul, protože signál z různých vrstev vzorku se překrývá FLUORESCENČNÍ vs. KONFOKÁLNÍ MIKROSKOPIE konfokální mikroskop do okuláru se díky konstrukci mikroskopu dostává signál pouze z jedné roviny preparátu (tzv. konfokální roviny) možnost detekce vzájemné lokalizace molekul 12

13 FLUORESCENČNÍ vs. KONFOKÁLNÍ MIKROSKOPIE modrá DNA barvená DAPI zelená volný aktin (G-aktin) barvený pomocí konjugátu DNázy I s fluoroforem AlexaFluor 488 červená polymerizovaný aktin (F- aktin) barvený konjugátem phaloidinu s fluoroforem TRITC volba typu mikroskopie závisí na tom, co chceme pozorovat a jakou informaci chceme získat GFP = green fluorescent protein protein s přirozenou schopností fluorescence, izolovaný původně z medúzy Aequorea victoria (zelená fluorescence po osvícení modrým světlem) používán jako reporterový protein pro studium lokalizace proteinů a jejich dynamiky i v živých buňkách (sekvence DNA kódující tento protein vložena za gen kódující zkoumaný protein tak, aby došlo k expresi zkoumaného proteinu s připojeným GFP) v takto upravených buňkách/tkáních lze po excitaci příslušnými vlnovými délkami detekovat signál GFP, který ukazuje lokalizaci zkoumaného proteinu podařilo se vyrobit organismy, které mají expresi GFP ve všech molekulách těla 13

14 ELEKTRONOVÁ MIKROSKOPIE Protilátka obvykle značená koloidním zlatem Somatostatin v D buňkách pankreatu 4) STANOVENÍ MÍRY EXPRESE PROTEINŮ ELISA SDS-PAGE + Western blot Průtoková cytometrie (bude vysvětleno v přednáškách Ústavu imunologie) metody založené nejčastěji na použití specifických protilátek 14

15 ELISA = enzyme-linked immunosorbent assay = EIA (= enzyme immunoassay) používaná zejména v imunologii první rutinně používaná metoda pro detekci HIV infekce umožňuje detekci i kvantifikaci antigenu nebo protilátky ve vzorku tělesná tekutina (plazma, sérum, moč, ) detekce založená na interakci antigen-protilátka provedené in-vitro, obvykle v 96-jamkové destičce předchůdce metoda RIA (=radioimmunoassay) nutné použití radioaktivně značených antigenů nebo protilátek ELISA použití: detekce hladin protilátek (alergie, vakcinace, ) detekce virových infekcí (hepatitis B, hepatitis C, HIV-1, HIV-2, pohlavně přenosné choroby) detekce hladin hormonů (HCG v těhotenství, LH, TSH, T3, T4) detekce prozánětlivých markerů v krvi (cytokiny) 15

16 ELISA jak vznikl název metody (enzyme-linked immunosorbent assay) imobilizace antigenu/protilátky na plastik 96-jamkové destičky ( sorbent - vazba na plastik zjednodušuje veškeré promývání) vazba detekované molekuly ze vzorku na imobilizovaný antigen/protilátku vazba specifické protilátky konjugované s enzymem umožňujícím detekci na tuto molekulu (.imuno - protilátka umožnuje specifickou detekci) detekce signálu po přidání substrátu enzymatické reakce (enzyme-linked - signál vzniká a je zesílen pomocí enzymem katalyzované reakce) ELISA - TYPY přímá (detekované agens je imobilizováno přímo na plast destičky, primární protilátka je značena enzymem umožňujícím detekci) nepřímá (detekované agens je imobilizováno přímo na plast destičky, sekundární protilátka je značena enzymem umožňujícím detekci) sendvičová (detekované agens se váže na specifickou protilátku imobilizovanou v destičce, poté je detekováno kombinací neznačené primární a značené sekundární protilátky) kompetitivní (detekované agens je smícháno s totožným agens, které je značeno enzymem umožňujícím detekci dochází ke kompetici agens značeného a neznačeného (ze vzorku) o vazbu na protilátku imobilizovanou na destičce, signál po přidání substrátu vytváří jen agens značené čím více detekovaného agens ve vzorku, tím větší kompetice se značeným agens, tím méně značeného agens se váže na destičku, tím méně signálu) 16

17 ELISA - TYPY Substrate Substrate Primary antibody conjugate Substrate Primary antibody Secondary antibody conjugate Capture antibody přímá nepřímá sendvičová ELISA TYPY kompetitivní ELISA 17

18 KVANTIFIKACE DETEKOVANÉ MOLEKULY detekce intenzity zabarvení jamek pomocí spektrofotometru (ELISA reader) detekce absorbance při příslušné vlnové délce intenzita barvy odpovídá přímo úměrně množství detekovaného antigenu nebo protilátky (pouze u kompetitivní ELISy se jedná o nepřímou úměrnost) nutná kalibrace testu použití ředicí řady standardů (antigen nebo protilátka totožné s detekovanými) z hodnot známých koncentrací standardů a jim příslušejících absorbancí se sestaví závislost (graf), ze které se vypočítá koncentrace detekovaného antigenu/protilátky SDS-PAGE separace proteinů podle molekulové hmotnosti = sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis proteiny nutno před separací denaturovat za pomoci denaturačních činidel (SDS, merkaptoethanol nebo dithiotreitol, a tepla) separaci postupují jednotlivé polypeptidové řetězce proteinů (zachovaná pouze primární struktura) 18

19 SDS-PAGE SDS dává proteinům homogenní záporný náboj (stejný na jednotku délky proteinu) separace proteinů víceméně pouze podle molekulové hmotnosti proteiny jsou záporně nabité pohyb v elektrickém poli ke kladné elektrodě (ANODA) SDS-PAGE _ záporně nabité proteiny taženy ke kladné elektrodě čím delší polypeptidový řetězec, tím více inhibován při průchodu gelem kratší proteiny doputují dále než delší + 19

20 SDS-PAGE molekulová hmotnost detekovaného proteinu jde zjistit porovnáním jeho velikosti s markerem molekulových hmostností = komerčně dostupná směs proteinů o známých velikostech jednotka molekulové hmotnosti používaná pro proteiny je Dalton (1 000 Da = 1 kda) 1 Da odpovídá hmotnosti atomu vodíku WESTERN BLOT použití nejčastěji pro porovnání míry exprese proteinů přenos proteinů separovaných pomocí SDS-PAGE na povrch vázající proteiny (nitrocelulózová nebo PVDF membrána) pohyb záporně nabitých proteinů v elektrickém poli z gelu na membránu proteiny přeneseny na membránu ve stejné vzájemné pozici vzniká otisk (blot) gelu na mebráně detekce proteinu na membráně pomocí specifických protilátek (membrána umožňuje jednoduchou manipulaci ) 20

21 Control 1 mm SA 1 mm SA mm OA 0.2 mm OA Control 1 mm SA 1 mm SA mm OA 0.2 mm OA Control 1 mm SA 1 mm SA mm OA 0.2 mm OA WESTERN BLOT detekce konkrétních proteinů obvykle pomocí specifických protilátek a chemiluminiscence nebo barevné reakce za vzniku nerozpustného produktu WESTERN BLOT příklady detekce BiP Aktin P-c-Jun Aktin PARP Aktin pro porovnání exprese mezi jednotlivými vzorky je nutné analyzovat stejné množství proteinu ve všech vzorcích průkaz stejné nanášky detekcí některého housekeeping proteinu (aktin, tubulin, GAPDH, ) 21

22 2D-ELEKTROFORÉZA kombinace 2 typů separace 1) isoelektrická fokusace 2) SDS-PAGE 5) STANOVENÍ FYZIOLOGICKÉ ROLE PROTEINU Genový knock-out Genový knock-down pomocí sirna Overexprese proteinu 22

23 GENOVÝ KNOCK-OUT obě alely určitého genu odstraněny nebo nefunkční studium loss-of-function mutací - sledování změn fenotypu, jaké orgány postiženy, ztráta některých genů je letální už v embryonálním vývoji vs. transgenní organismus - vnesen gen Knock-out kaspázy 9 u myši defekt vývoje mozku GENOVÝ KNOCK-DOWN A sirna TECHNOLOGIE sirna = small interfering RNA snížení exprese proteinu využitím buněčných mechanismů obrany proti dsrna (mechanismy protivirové obrany) transfekce buněk dsrna o délce cca 20 nt (sekvence vychází ze sekvence genu, jehož exprese je inhibována) sledován efekt výrazného snížení exprese příslušného proteinu 23

24 OVEREXPRESE PROTEINU sledování efektu nadbytku určitého proteinu (nebo jeho konstitutivně aktivní či inaktivní formy) za účelem purifikace proteinu pro jinou metodu, např. pro zjištění enzymové kinetiky, 3D struktury nutno transfekovat buňky expresním vektorem obsahujícím sekvenci kódující příslušný protein k pomnožení expresních vektorů lze využít bakteriální buňky (transformace expresním vektorem) STUDIJNÍ LITERATURA & UŽITEČNÉ ODKAZY Základní literatura: Alberts B. et al: Molecular Biology of the Cell, 5. vydání, str , , , Další materiály k fluorescenci a průtokové cytometrii pro zájemce: 24

IZOLACE, SEPARACE A DETEKCE PROTEINŮ I. Vlasta Němcová, Michael Jelínek, Jan Šrámek

IZOLACE, SEPARACE A DETEKCE PROTEINŮ I. Vlasta Němcová, Michael Jelínek, Jan Šrámek IZOLACE, SEPARACE A DETEKCE PROTEINŮ I Vlasta Němcová, Michael Jelínek, Jan Šrámek Studium aktinu, mikrofilamentární složky cytoskeletu pomocí dvou metod: detekce přímo v buňkách - fluorescenční barvení

Více

Vizualizace DNA ETHIDIUM BROMID. fluorescenční barva interkalační činidlo. do gelu do pufru barvení po elfu SYBR GREEN

Vizualizace DNA ETHIDIUM BROMID. fluorescenční barva interkalační činidlo. do gelu do pufru barvení po elfu SYBR GREEN ETHIDIUM BROMID fluorescenční barva interkalační činidlo do gelu do pufru barvení po elfu Vizualizace DNA SYBR GREEN Barvení proteinů Coommassie Brilliant Blue Coomassie Blue x barvení stříbrem Porovnání

Více

FIA fluorescenční imunoanalýza (fluorescence immuno-assay) CIA chemiluminiscenční imunoanalýza

FIA fluorescenční imunoanalýza (fluorescence immuno-assay) CIA chemiluminiscenční imunoanalýza FIA a CIA FIA fluorescenční imunoanalýza (fluorescence immuno-assay) CIA chemiluminiscenční imunoanalýza Značky pro antigeny a protilátky: radioizotop enzym fluorescenční sonda luminiscenční sonda kovové

Více

Imunochemické metody. na principu vazby antigenu a protilátky

Imunochemické metody. na principu vazby antigenu a protilátky Imunochemické metody na principu vazby antigenu a protilátky ANTIGEN (Ag) specifická látka (struktura) vyvolávající imunitní reakci a schopná vazby na protilátku PROTILÁTKA (Ab antibody) molekula bílkoviny

Více

Sbohem, paní Bradfordová

Sbohem, paní Bradfordová Sbohem, paní Bradfordová aneb IČ spektroskopie ve službách kvantifikace proteinů Mgr. Stanislav Kukla Merck spol. s r. o. Agenda 1 Zhodnocení současných možností kvantifikace proteinů Bradfordové metoda

Více

Metody testování humorální imunity

Metody testování humorální imunity Metody testování humorální imunity Co je to humorální imunita? Humorální = látková Buněčné produkty Nespecifická imunita příklady:» Lysozym v slinách, slzách» Sérové proteiny (proteiny akutní fáze)» Komplementový

Více

Modul IB. Histochemie. CBO Odd. histologie a embryologie. MUDr. Martin Špaček

Modul IB. Histochemie. CBO Odd. histologie a embryologie. MUDr. Martin Špaček Modul IB Histochemie CBO Odd. histologie a embryologie MUDr. Martin Špaček Histochemie Histologická metoda užívaná k průkazu různých látek přímo v tkáních a buňkách Histochemie Katalytická histochemie

Více

Metody používané v MB. analýza proteinů, nukleových kyselin

Metody používané v MB. analýza proteinů, nukleových kyselin Metody používané v MB analýza proteinů, nukleových kyselin Proteiny analýza a manipulace Izolace, purifikace (rozdělovací metody) Centrifugace Chromatografie Elektroforéza Blotting (identifikace, western

Více

Metody používané v MB. analýza proteinů, nukleových kyselin

Metody používané v MB. analýza proteinů, nukleových kyselin Metody používané v MB analýza proteinů, nukleových kyselin Nukleové kyseliny analýza a manipulace Elektroforéza (délka fragmentů, čistota, kvantifikace) Restrikční štěpení (manipulace s DNA, identifikace

Více

Metody používané v MB. analýza proteinů, nukleových kyselin

Metody používané v MB. analýza proteinů, nukleových kyselin Metody používané v MB analýza proteinů, nukleových kyselin Nukleové kyseliny analýza a manipulace Elektroforéza (délka fragmentů, čistota, kvantifikace) Restrikční štěpení (manipulace s DNA, identifikace

Více

Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY

Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY ELEKTROFORÉZA K čemu to je? kritérium čistoty preparátu stanovení molekulové hmotnosti makromolekul stanovení izoelektrického

Více

DODATEČNÉ INFORMACE dle 49 zákona č. 137/2006 Sb., o veřejných zakázkách

DODATEČNÉ INFORMACE dle 49 zákona č. 137/2006 Sb., o veřejných zakázkách DODATEČNÉ INFORMACE dle 49 zákona č. 137/2006 Sb., o veřejných zakázkách Zadavatel tímto poskytuje dodavatelům v souladu s 49 odst. 4 zákona o veřejných zakázkách dodatečné informace k veřejné zakázce

Více

Aminokyseliny, proteiny, enzymy Základy lékařské chemie a biochemie 2014/2015 Ing. Jarmila Krotká Metabolismus základní projev života látková přeměna souhrn veškerých dějů, které probíhají uvnitř organismu

Více

Antiparalelní beta list

Antiparalelní beta list Antiparalelní beta list Paralelní beta list Schematický model beta listu (stužkový) Proteiny obsahují zpětné kličky (beta kličky nebo vlásenkové ohyby). Obvykle je CO skupina i-té aminokyseliny vázána

Více

Stanovení koncentrace (kvantifikace) proteinů

Stanovení koncentrace (kvantifikace) proteinů Stanovení koncentrace (kvantifikace) proteinů Bioanalytické metody Prof. RNDr. Pavel Peč, CSc. Úvod Kritéria výběru metod stanovení koncentrace proteinů jsou založena na možnostech pro vlastní analýzu,

Více

Využití a princip fluorescenční mikroskopie

Využití a princip fluorescenční mikroskopie Využití a princip fluorescenční mikroskopie fyzikálně chemický děj Fluorescence typem luminiscence (elektroluminiscence, fotoluminiscence, radioluminiscence a chemiluminiscenci) patří mezi fotoluminiscenční

Více

DNA TECHNIKY IDENTIFIKACE ŽIVOČIŠNÝCH DRUHŮ V KRMIVU A POTRAVINÁCH. Michaela Nesvadbová

DNA TECHNIKY IDENTIFIKACE ŽIVOČIŠNÝCH DRUHŮ V KRMIVU A POTRAVINÁCH. Michaela Nesvadbová DNA TECHNIKY IDENTIFIKACE ŽIVOČIŠNÝCH DRUHŮ V KRMIVU A POTRAVINÁCH Michaela Nesvadbová Význam identifikace živočišných druhů v krmivu a potravinách povinností každého výrobce je řádně a pravdivě označit

Více

Pokročilé biofyzikální metody v experimentální biologii

Pokročilé biofyzikální metody v experimentální biologii Pokročilé biofyzikální metody v experimentální biologii Ctirad Hofr 1/1 Proč biofyzikální metody? Biofyzikální metody využívají fyzikální principy ke studiu biologických systémů Poskytují kvantitativní

Více

PLANÁRNÍ (PLOŠNÁ) CHROMATOGRAFIE

PLANÁRNÍ (PLOŠNÁ) CHROMATOGRAFIE PLANÁRNÍ (PLOŠNÁ) CHROMATOGRAFIE Tenkovrstvá chromatografie je technika pro identifikaci a separaci směsi organických látek Identifikace složek směsi (nutné použít standard) analysa frakcí sbíraných během

Více

Obsah Protein Gel Electrophoresis Kitu a jeho skladování

Obsah Protein Gel Electrophoresis Kitu a jeho skladování Obsah Protein Gel Electrophoresis Kitu a jeho skladování Protein Gel Electrophoresis Kit obsahuje veškerý potřebný materiál provádění vertikální polyakrilamidové gelové elektroforézy. Experiment provádějí

Více

Tematické okruhy k SZZ v bakalářském studijním oboru Zdravotní laborant bakalářského studijního programu B5345 Specializace ve zdravotnictví

Tematické okruhy k SZZ v bakalářském studijním oboru Zdravotní laborant bakalářského studijního programu B5345 Specializace ve zdravotnictví Tematické okruhy k SZZ v bakalářském studijním oboru Zdravotní laborant bakalářského studijního programu B5345 Specializace ve zdravotnictví Dle čl. 7 odst. 2 Směrnice děkana pro realizaci bakalářských

Více

ZDRAVOTNÍ NEZÁVADNOST POTRAVIN

ZDRAVOTNÍ NEZÁVADNOST POTRAVIN ZDRAVOTNÍ NEZÁVADNOST POTRAVIN Možnosti stanovení Listeria monocytogenes popis metod a jejich princip Mária Strážiková Aleš Holfeld Obsah Charakteristika Listeria monocytogenes Listerióza Metody detekce

Více

Metody testování humorální imunity

Metody testování humorální imunity Metody testování humorální imunity Co je to humorální imunita? Humorální = látková Buněčné produkty Nespecifická imunita příklady:» Lysozym v slinách, slzách» Sérové proteiny (proteiny akutní fáze)» Komplementový

Více

FLUORESCENČNÍ MIKROSKOP

FLUORESCENČNÍ MIKROSKOP FLUORESCENČNÍ MIKROSKOP na gymnáziu Pierra de Coubertina v Táboře Pavla Trčková, kabinet Biologie, GPdC Tábor Co je fluorescence Fluorescence je jev spočívající v tom, že některé látky (fluorofory) po

Více

Obsah. Sarkosin Charakterizace slepičích protilátek proti sarkosinu. Dagmar Uhlířová

Obsah. Sarkosin Charakterizace slepičích protilátek proti sarkosinu. Dagmar Uhlířová Investice do rozvoje vzdělávání Charakterizace slepičích protilátek proti sarkosinu Dagmar Uhlířová 7.2.2014 Reg.č.projektu: CZ.1.07/2.4.00/31.0023 NanoBioMetalNet Název projektu: Partnerská síť centra

Více

Hybridizace nukleových kyselin

Hybridizace nukleových kyselin Hybridizace nukleových kyselin Tvorba dvouřetězcových hybridů za dvou jednořetězcových a komplementárních molekul Založena na schopnosti denaturace a renaturace DNA. Denaturace DNA oddělení komplementárních

Více

Interakce proteinu p53 s genomovou DNA v kontextu chromatinu glioblastoma buněk

Interakce proteinu p53 s genomovou DNA v kontextu chromatinu glioblastoma buněk MASARYKOVA UNIVERZITA V BRNĚ Přírodovědecká fakulta Ústav experimentální biologie Oddělení genetiky a molekulární biologie Interakce proteinu p53 s genomovou DNA v kontextu chromatinu glioblastoma buněk

Více

Fluorescenční mikroskopie

Fluorescenční mikroskopie Luminiscence jev, kdy látka vysílá do prostoru světlo chemická reakce chemiluminiscence (např. světluška) světlo fotoluminiscence fluorescence (emisní záření jen krátkou dobu po skončení exitačního záření)

Více

WESTERN BLOT. Velikost signálu je vyhodnocována srovnáním s naneseným proteinovým markerem, což je komerčně dostupná směs proteinů o známé velikosti.

WESTERN BLOT. Velikost signálu je vyhodnocována srovnáním s naneseným proteinovým markerem, což je komerčně dostupná směs proteinů o známé velikosti. WESTERN BLOT Western blot je metoda používaná pro kvalitativní nebo semikvantitativní detekci určitého proteinu ve vzorku. Metoda je tvořena třemi základními kroky: 1. elektroforetickou separací proteinů,

Více

Metoda Live/Dead aneb využití fluorescenční mikroskopie v bioaugmentační praxi. Juraj Grígel Inovativní sanační technologie ve výzkumu a praxi

Metoda Live/Dead aneb využití fluorescenční mikroskopie v bioaugmentační praxi. Juraj Grígel Inovativní sanační technologie ve výzkumu a praxi Metoda Live/Dead aneb využití fluorescenční mikroskopie v bioaugmentační praxi Juraj Grígel Inovativní sanační technologie ve výzkumu a praxi Co je to vlastně ta fluorescence? Některé látky (fluorofory)

Více

Název: Vypracovala: Datum: 7. 2. 2014. Zuzana Lacková

Název: Vypracovala: Datum: 7. 2. 2014. Zuzana Lacková Název: Vypracovala: Zuzana Lacková Datum: 7. 2. 2014 Reg.č.projektu: CZ.1.07/2.4.00/31.0023 Název projektu: Partnerská síť centra excelentního bionanotechnologického výzkumu MĚLI BYCHOM ZNÁT: informace,

Více

1. Metodika. Protokol č. F1-4 Metodika: Srovnávací analýza efektivity přípravy rekombinantního proteinu ve fermentoru

1. Metodika. Protokol č. F1-4 Metodika: Srovnávací analýza efektivity přípravy rekombinantního proteinu ve fermentoru Protokol č.: F1-4 Datum: 20.12.2010 Metodika: analýza efektivity přípravy výběr z výsledků ze zkušebních provozů výroby antigenů. Vypracoval: Ing. Václav Filištein, Mgr. Tereza Chrudimská, Spolupracující

Více

Moderní nástroje pro zobrazování biologicky významných molekul pro zajištění zdraví. René Kizek

Moderní nástroje pro zobrazování biologicky významných molekul pro zajištění zdraví. René Kizek Moderní nástroje pro zobrazování biologicky významných molekul pro zajištění zdraví René Kizek 12.04.2013 Fluorescence je fyzikálně chemický děj, který je typem luminiscence. Luminiscence se dále dělí

Více

Luminiscenční analýza Použití luminiscenční spektroskopie v analytické chemii

Luminiscenční analýza Použití luminiscenční spektroskopie v analytické chemii Luminiscenční analýza Použití luminiscenční spektroskopie v analytické chemii Kvantitativní analýza: F = k φ Φ o Vysoká citlivost metody: 2.3 c l ε použití laserů odezva na relativně malé změny v okolí

Více

F l u o r e s c e n c e

F l u o r e s c e n c e F l u o r e s c e n c e Fluorescenční mikroskopie Luminiscence jev, kdy látka vysílá do prostoru světlo chemická reakce chemiluminiscence světlo fotoluminiscence Vyvolávající záření exitační fluorescence

Více

IMUNOCYTOCHEMICKÁ METODA JEJÍ PRINCIP A VYUŽITÍ V LABORATOŘI

IMUNOCYTOCHEMICKÁ METODA JEJÍ PRINCIP A VYUŽITÍ V LABORATOŘI IMUNOCYTOCHEMICKÁ METODA JEJÍ PRINCIP A VYUŽITÍ V LABORATOŘI Radka Závodská, PedF JU v Českých Budějovicích Imunocytochemická metoda - použítí protilátky k detekci antigenu v buňkách (Imunohistochemie-

Více

IMUNOENZYMOVÉ METODY EIA

IMUNOENZYMOVÉ METODY EIA IMUNOENZYMOVÉ METODY EIA RIA zdravotní riziko krátký poločas rozpadů izotopů nákladné zařízení na měření radioaktivity EIA místo radioaktivity se měří enzymová aktivita není zdravotní riziko není nutné

Více

Precipitační a aglutinační reakce

Precipitační a aglutinační reakce Základy imunologických metod: Precipitační a aglutinační reakce Ústav imunologie 2.LF UK a FN Motol Metody, ve kterých se používají protilátky Neznačený antigen/protilátka Precipitace Aglutinace Značený

Více

ZÁSADY SPRÁVNÉ LABORATORNÍ PRAXE VYBRANÁ USTANOVENÍ PRAKTICKÉ APLIKACE

ZÁSADY SPRÁVNÉ LABORATORNÍ PRAXE VYBRANÁ USTANOVENÍ PRAKTICKÉ APLIKACE ZÁSADY SPRÁVNÉ LABORATORNÍ PRAXE VYBRANÁ USTANOVENÍ PRAKTICKÉ APLIKACE Zabezpečování jakosti v laboratorní praxi je významnou součástí práce každé laboratoře. Problematiku jakosti řeší řada předpisů, z

Více

nano.tul.cz Inovace a rozvoj studia nanomateriálů na TUL

nano.tul.cz Inovace a rozvoj studia nanomateriálů na TUL Inovace a rozvoj studia nanomateriálů na TUL nano.tul.cz Tyto materiály byly vytvořeny v rámci projektu ESF OP VK: Inovace a rozvoj studia nanomateriálů na Technické univerzitě v Liberci Zdravotní rizika

Více

Substrát: látka, která se mění účinkem enzymu. NAD, NADP, FMN, FAD, koenzym Q, pyridoxalfosfát prostherická skupina: kofaktor vázán pevně

Substrát: látka, která se mění účinkem enzymu. NAD, NADP, FMN, FAD, koenzym Q, pyridoxalfosfát prostherická skupina: kofaktor vázán pevně Enzymy Enzymy katalyzátory živé buňky proteiny jednoduché nebo složené (holo)enzym = apoenzym + koenzym (kofaktor) apoenzym: proteinová část kofaktor: nízkomolekulová neaminokyselinová struktura nezbytně

Více

Dědičnost pohlaví Genetické principy základních způsobů rozmnožování

Dědičnost pohlaví Genetické principy základních způsobů rozmnožování Dědičnost pohlaví Vznik pohlaví (pohlavnost), tj. komplexu znaků, vlastností a funkcí, které vymezují exteriérové i funkční diference mezi příslušníky téhož druhu, je výsledkem velmi komplikované série

Více

Hmotnostní spektrometrie

Hmotnostní spektrometrie Hmotnostní spektrometrie Podstatou hmotnostní spektrometrie je studium iontů v plynném stavu. Tato metoda v sobě zahrnuje tři hlavní části:! generování iontů sledovaných atomů nebo molekul! separace iontů

Více

Seminář izolačních technologií

Seminář izolačních technologií Seminář izolačních technologií Zpracoval: Karel Bílek a Kateřina Svobodová Podpořeno FRVŠ 2385/2007 a 1305/2009 Úpravy a aktualizace: Pavla Chalupová ÚMFGZ MZLU v Brně 1 Lokalizace jaderné DNA 2 http://www.paternityexperts.com/basicgenetics.html

Více

Inovace studia molekulární a buněčné biologie

Inovace studia molekulární a buněčné biologie Inovace studia molekulární a buněčné biologie Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem České republiky. MBIO1/Molekulární biologie 1 Tento projekt je spolufinancován

Více

Určení koncentrace proteinu fluorescenční metodou v mikrotitračních destičkách

Určení koncentrace proteinu fluorescenční metodou v mikrotitračních destičkách Určení koncentrace proteinu fluorescenční metodou v mikrotitračních destičkách Teorie Stanovení celkových proteinů Celkové množství proteinů lze stanovit pomocí několika metod; například: Hartree-Lowryho

Více

Možná uplatnění proteomiky směrem do klinické praxe

Možná uplatnění proteomiky směrem do klinické praxe Možná uplatnění proteomiky směrem do klinické praxe Formy uplatnění proteomiky do klinické praxe Přímé uplatnění proteomických technologií Metody pro studium proteinů tu byly dřív něž proteomika jako obor

Více

Izolace genomové DNA ze savčích buněk, stanovení koncentrace DNA pomocí absorpční spektrofotometrie

Izolace genomové DNA ze savčích buněk, stanovení koncentrace DNA pomocí absorpční spektrofotometrie Izolace genomové DNA ze savčích buněk, stanovení koncentrace DNA pomocí absorpční spektrofotometrie IZOLACE GENOMOVÉ DNA Deoxyribonukleová kyselina (DNA) představuje základní genetický materiál většiny

Více

Glukóza, glykovaný hemoglobin, glykované proteiny. Glykované proteiny mechanismus glykace, stanovení ve formě formazanů.

Glukóza, glykovaný hemoglobin, glykované proteiny. Glykované proteiny mechanismus glykace, stanovení ve formě formazanů. Část Analytické metody 3. Glukóza, glykovaný hemoglobin, glykované proteiny Glukóza: referenční hodnoty, definitivní a referenční metoda, glukózaoxidázová metoda a interference stanovení, glukózadehydrogenázová

Více

Absorpční spektroskopie při biologické analýze molekul

Absorpční spektroskopie při biologické analýze molekul Absorpční spektroskopie při biologické analýze molekul Pokročilé biofyzikální metody v experimentální biologii Ctirad Hofr 8.11.2007 7 1 UV spektroskopie DNA a proteinů Všechny atomy absorbují v UV oblasti

Více

Metody práce s proteinovými komplexy

Metody práce s proteinovými komplexy Metody práce s proteinovými komplexy Zora Nováková, Zdeněk Hodný Proteinové komplexy tvořeny dvěma a více proteiny spojenými nekovalentními vazbami Van der Waalsovy síly vodíkové můstky hydrofobní interakce

Více

Genetický polymorfismus

Genetický polymorfismus Genetický polymorfismus Za geneticky polymorfní je považován znak s nejméně dvěma geneticky podmíněnými variantami v jedné populaci, které se nachází v takových frekvencích, že i zřídkavá má frekvenci

Více

IMUNOCHEMICKÉ METODY

IMUNOCHEMICKÉ METODY IMUNOCHMICKÉ MTODY Antigeny Protilátky Imunochemické metody Kvantitativní imunoprecipitační křivka Imunoprecipitační metody Imunoanalýza Využití imunochemických metod v rychlé diagnostice Praktické úlohy

Více

VÝVOJOVÁ BIOLOGIE. I. Úvod do vývojové biologie. II. Základní principy a mechanismy vývojové biologie. III. Kmenové buňky

VÝVOJOVÁ BIOLOGIE. I. Úvod do vývojové biologie. II. Základní principy a mechanismy vývojové biologie. III. Kmenové buňky PŘEDNÁŠKOVÝ BLOK VÝVOJOVÁ BIOLOGIE I. Úvod do vývojové biologie II. Základní principy a mechanismy vývojové biologie III. Kmenové buňky IV. Růstové faktory a signální transdukce Kmenové buňky: definice

Více

NMR biomakromolekul RCSB PDB. Progr. NMR

NMR biomakromolekul RCSB PDB. Progr. NMR NMR biomakromolekul Typy biomakromolekul a možnosti studia pomocí NMR proteiny a peptidy rozmanité složení, omezení jen velikostí molekul nukleové kyseliny (RNA, DNA) a oligonukleotidy omezení malou rozmanitostí

Více

ABSORPČNÍ A LUMINISCENČNÍ SPEKTROMETRIE V UV/Vis OBLASTI SPEKTRA

ABSORPČNÍ A LUMINISCENČNÍ SPEKTROMETRIE V UV/Vis OBLASTI SPEKTRA ABSORPČNÍ A LUMINISCENČNÍ SPEKTROMETRIE V UV/Vis OBLASTI SPEKTRA -2014 ABSORPČNÍ SPEKTROMETRIE ACH/IM 1 Absorpce záření ve Vis oblasti Při dopadu bílého světla na vzorek může být záření zcela odraženo

Více

Stanovení hormonů. Miroslava Beňovská

Stanovení hormonů. Miroslava Beňovská Stanovení hormonů Miroslava Beňovská Hormony Látky specificky reagující na metabol. děje v organismu Většinou tvořeny v endokrinních žlázách Krví přenášejí informace do buněk cílových orgánů po vazbě na

Více

Protilátky proti Helicobacter pylori (IgG) Návod na použití ELISA testu

Protilátky proti Helicobacter pylori (IgG) Návod na použití ELISA testu Protilátky proti Helicobacter pylori (IgG) Návod na použití ELISA testu Objednací číslo Určení Ig-třída Substrát Formát EI 2080-9601 G Helicobacter pylori IgG Ag-potažené mikrotitrační jamky 96 x 01 (96)

Více

Fluorescenční mikroskopie

Fluorescenční mikroskopie Fluorescenční mikroskopie Mgr. Jan Černý PhD. Oddělení vývojové biologie, Katedra fyziologie živočichů, Přírodovědecká fakulta UK v Praze janmartincerny@seznam.cz Klasická světelná mikroskopie sloužila

Více

Výzkumné centrum genomiky a proteomiky. Ústav experimentální medicíny AV ČR, v.v.i.

Výzkumné centrum genomiky a proteomiky. Ústav experimentální medicíny AV ČR, v.v.i. Výzkumné centrum genomiky a proteomiky Ústav experimentální medicíny AV ČR, v.v.i. Systém pro sekvenování Systém pro čipovou analýzu Systém pro proteinovou analýzu Automatický sběrač buněk Systém pro sekvenování

Více

Diagnostické metody v analýze potravin. Matej Pospiech, FVHE Brno

Diagnostické metody v analýze potravin. Matej Pospiech, FVHE Brno Diagnostické metody v analýze potravin Matej Pospiech, FVHE Brno Důvody diagnostiky potravin Dodržování legislativních požadavků Vlastní kontrola v provozu Národní legislativa Evropská a mezinárodní legislativa

Více

Imunoreakce se značenými protilátkami

Imunoreakce se značenými protilátkami Imunoreakce se značenými protilátkami Kvantitativní stanovení antigenu/protilátky: precipitace - 30 g/ml aglutinace - 1 g/ml Neprecipitační imunochemické metody: RIA, FIA, EIA - 1 pg/ml Rozdělení metod

Více

ELISA ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY. Tatiana Košťálová, Tereza Leštinová

ELISA ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY. Tatiana Košťálová, Tereza Leštinová ELISA ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY Tatiana Košťálová, Tereza Leštinová Parazitologické laboratorní techniky, 26. listopadu 2014 Průkaz protilátek proti Toxoplasma gondii Průkaz protilátek proti Toxoplasma

Více

Centrum aplikované genomiky, Ústav dědičných metabolických poruch, 1.LFUK

Centrum aplikované genomiky, Ústav dědičných metabolických poruch, 1.LFUK ové technologie v analýze D A, R A a proteinů Stanislav Kmoch Centrum aplikované genomiky, Ústav dědičných metabolických poruch, 1.LFUK Motto : "The optimal health results from ensuring that the right

Více

CZ.1.07/2.4.00/31.0133

CZ.1.07/2.4.00/31.0133 BiochemNet - Vytvoření sítě pro podporu spolupráce biomedicínských pracovišť a zvýšení uplatnitelnosti absolventů biochemických oborů v praxi CZ.1.07/2.4.00/31.0133 Univerzita Palackého Přírodovědecká

Více

Kosterní svalstvo tlustých a tenkých filament

Kosterní svalstvo tlustých a tenkých filament Kosterní svalstvo Základní pojmy: Sarkoplazmatické retikulum zásobárna iontů vápníku - depolarizace membrány uvolnění vápníku v blízkosti kontraktilního aparátu vazba na proteiny zajišťující kontrakci

Více

IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY A AGLUTINAČNÍ KOMPONENTY K DIAGNOSTICE PERTUSE A PARAPERTUSE

IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY A AGLUTINAČNÍ KOMPONENTY K DIAGNOSTICE PERTUSE A PARAPERTUSE INFEKČNÍ SÉROLOGIE Bakteriologie IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY A AGLUTINAČNÍ KOMPONENTY K DIAGNOSTICE PERTUSE A PARAPERTUSE Bordetella pertussis Bordetella parapertussis ELISA a IMUNOBLOT soupravy jsou určeny

Více

M. Kropáček, M. Tomeš, K. Kontrová, J. Zimová, F. Melichar. RadioMedic s.r.o.

M. Kropáček, M. Tomeš, K. Kontrová, J. Zimová, F. Melichar. RadioMedic s.r.o. 1 M. Krpáček, M. Tmeš, K. Kntrvá, J. Zimvá, F. Melichar RadiMedic s.r.. RadiMedic s.r.. 51.DNM 12.-14. 11. 2014 Seč Úvd Stručný ppis prjektu Mnklnální prtilátka Nimtuzumab Hlavní krky výrby 177 Lu-Nimtuzumab

Více

Fluorescence (luminiscence)

Fluorescence (luminiscence) Fluorescence (luminiscence) Patří mezi luminiscenční metody fotoluminiscence. Luminiscence efekt, kdy excitované molekuly či atomy vyzařují světlo při přechodu z excitovaného do základního stavu. Podle

Více

Tématické okruhy pro státní závěrečné zkoušky

Tématické okruhy pro státní závěrečné zkoušky Tématické okruhy pro státní závěrečné zkoušky Obor Povinný okruh Volitelný okruh (jeden ze dvou) Forenzní biologická Biochemie, pathobiochemie a Toxikologie a bioterorismus analýza genové inženýrství Kriminalistické

Více

Písemná zpráva zadavatele

Písemná zpráva zadavatele Písemná zpráva zadavatele o veřejné zakázce zadávané dle zákona č. 137/2006 Sb., o veřejných zakázkách, v platném znění (dále jen ZVZ ). Veřejná zakázka Název: Dokumentační systémy Druh veřejné zakázky:

Více

IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE CHLAMYDIOVÝCH INFEKCÍ

IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE CHLAMYDIOVÝCH INFEKCÍ INFEKČNÍ SÉROLOGIE Bakteriologie IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE CHLAMYDIOVÝCH INFEKCÍ Chlamydia sp. Chlamydia pneumoniae Chlamydia trachomatis ELISA a IMUNOBLOT soupravy jsou určeny ke stanovení

Více

Stanovení cholesterolu ve vaječném žloutku a mléce kapilární elektroforézou

Stanovení cholesterolu ve vaječném žloutku a mléce kapilární elektroforézou Stanovení cholesterolu ve vaječném žloutku a mléce kapilární elektroforézou Úkol Stanovte obsah cholesterolu ve vaječném žloutku a mléce pomocí kapilární elektroforézy. Teoretická část Cholesterol je steroidní

Více

Základy analýzy potravin Přednáška 8. Důvody pro analýzu bílkovin v potravinách. určování původu suroviny, autenticita výrobku

Základy analýzy potravin Přednáška 8. Důvody pro analýzu bílkovin v potravinách. určování původu suroviny, autenticita výrobku BÍLKOVINY Důvody pro analýzu bílkovin v potravinách posuzování nutriční hodnoty celkový obsah bílkovin aminokyselinové složení bílkoviny, volné aminokyseliny obsah cizorodých nebo neplnohodnotných bílkovin

Více

SeroPertussis TM IgA/IgM

SeroPertussis TM IgA/IgM SeroPertussis TM IgA/IgM ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) pro stanovení protilátek IgA a/ IgM proti Bordetelle Pertussis v lidském séru. Testovací souprava pro 96 stanovení. (Katalogové č. A233-01)

Více

7. Měření fluorescence při excitaci kontinuálním světlem ( steady-state )

7. Měření fluorescence při excitaci kontinuálním světlem ( steady-state ) 7. Měření fluorescence při excitaci kontinuálním světlem ( steady-state ) Steady-state měření Excitujeme kontinuálním světlem, měříme intenzitu emise (počet emitovaných fotonů) Obvykle nedetekujeme všechny

Více

Bioscience Imaging Centre

Bioscience Imaging Centre Bioscience Imaging Centre (Středisko mikroskopie) zajišťujeme moderní mikroskopické zařízení a softwary pro analýzu obrazu poradíme s plánováním experimentů (histologie, detekce proteinů a mrna) pomůžeme

Více

DELFIA Dissociation-Enhanced Lanthanide Fluorescent ImmunoAssay

DELFIA Dissociation-Enhanced Lanthanide Fluorescent ImmunoAssay DELFIA Dissociation-Enhanced Lanthanide Fluorescent ImmunoAssay Fluoroimunoanalytická metoda vyvinutá finskou firmou Wallac Oy (LKB Pharmacia), velmi citlivá a specifická metoda pro stanovení nízko- i

Více

BÍLKOVINY R 2. sféroproteiny (globulární bílkoviny): - rozpustné ve vodě, globulární struktura - odlišné funkce (zásobní, protilátky, enzymy,...

BÍLKOVINY R 2. sféroproteiny (globulární bílkoviny): - rozpustné ve vodě, globulární struktura - odlišné funkce (zásobní, protilátky, enzymy,... BÍLKVIY - látky peptidické povahy tvořené více než 100 aminokyselinami - aminokyseliny jsou poutány...: R 1 2 + R 2 R 1 R 2 2 2. Dělení bílkovin - vznikají proteosyntézou Struktura bílkovin primární sekundární

Více

Molekulární diagnostika

Molekulární diagnostika Molekulární diagnostika Odry 11. 11. 2010 Michal Pohludka, Ph.D. Buňka základní jednotka živé hmoty Všechny v současnosti známé buňky se vyvinuly ze společného předka, tedy buňky, která žila asi před 3,5-3,8

Více

Protokoly Transformace plasmidu do elektrokompetentních buněk BL21 Pracovní postup:

Protokoly Transformace plasmidu do elektrokompetentních buněk BL21 Pracovní postup: Protokoly Pracovní potřeby, pufry a chemikálie jsou uvedeny na konci protokolu. Pracovní postupy jsou odvozeny od těchto kitů: Champion pet160 Directional TOPO Expression Kit with Lumio Technology (Invitrogen)

Více

Fluorescenční sondy. Fluorescenční sondy. Indikátory pro anorganické ionty. Fluorescenční sondy pro využití v analytické chemii, medicíně a biologii

Fluorescenční sondy. Fluorescenční sondy. Indikátory pro anorganické ionty. Fluorescenční sondy pro využití v analytické chemii, medicíně a biologii Fluorescenční sondy Fluorescenční sondy vnější fluorofory, které se ke sledovaným molekulám, iontům, atd. váží nekovalentní vazbou změna fluorescenční vlastností (intenzita emise, posun emisního maxima,

Více

Western blotting. 10% APS 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl

Western blotting. 10% APS 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl Western blotting 1. Příprava gelu složení aparatury hustotu gelu volit podle velikosti proteinů příprava rozdělovacího gelu: 10% 12% počet gelů 1 2 4 1 2 4 objem 6 ml 12 ml 24 ml 6 ml 12 ml 24 ml 40% akrylamid

Více

Genetická kontrola prenatáln. lního vývoje

Genetická kontrola prenatáln. lního vývoje Genetická kontrola prenatáln lního vývoje Stádia prenatáln lního vývoje Preembryonální stádium do 6. dne po oplození zygota až blastocysta polární organizace cytoplasmatických struktur zygoty Embryonální

Více

Aplikace elektromigračních technik Laboratorní úlohy

Aplikace elektromigračních technik Laboratorní úlohy Laboratorní úlohy Výukový materiál vznikl za finanční podpory Fondu rozvoje vysokých škol v rámci řešení projektu č. 1377/2013 Vytvoření demonstračních úloh sloužících k inovaci předmětu Aplikace elektromigračních

Více

HMOTNOSTNÍ SPEKTROMETRIE - kvalitativní i kvantitativní detekce v GC a LC - pyrolýzní hmotnostní spektrometrie - analýza polutantů v životním

HMOTNOSTNÍ SPEKTROMETRIE - kvalitativní i kvantitativní detekce v GC a LC - pyrolýzní hmotnostní spektrometrie - analýza polutantů v životním HMOTNOSTNÍ SPEKTROMETRIE - kvalitativní i kvantitativní detekce v GC a LC - pyrolýzní hmotnostní spektrometrie - analýza polutantů v životním prostředí - farmakokinetické studie - kvantifikace proteinů

Více

QuantiFERON -CMV Příbalový leták 2 x 96

QuantiFERON -CMV Příbalový leták 2 x 96 QuantiFERON -CMV Příbalový leták 2 x 96 Interferon-gamma test plné krve ke zjištění odpovědí na peptidové antigeny lidského cytomegaloviru 0350-0201 Cellestis, a QIAGEN Company Level 2, Office Tower 2,

Více

CA15-3 IRMA Souprava CA15-3 IRMA umožňuje přímé in-vitro kvantitativní stanovení s tumorem asociovaného antigenu CA15-3 v lidském séru

CA15-3 IRMA Souprava CA15-3 IRMA umožňuje přímé in-vitro kvantitativní stanovení s tumorem asociovaného antigenu CA15-3 v lidském séru Informace o výrobku Informace o ostatních produktech jsou dostupné na www.demeditec.com Návod k použití CA15-3 IRMA Souprava CA15-3 IRMA umožňuje přímé in-vitro kvantitativní stanovení s tumorem asociovaného

Více

4. Centrální dogma, rozluštění genetického kódu a zrod molekulární biologie.

4. Centrální dogma, rozluštění genetického kódu a zrod molekulární biologie. 4. Centrální dogma, rozluštění genetického kódu a zrod molekulární biologie. Od genu k proteinu - centrální dogma biologie Geny jsou zakódovány v DNA - Jakým způsobem? - Jak se projevují? Již v roce 1902

Více

Identifikace mikroorganismů pomocí sekvence jejich genu pro 16S rrna

Identifikace mikroorganismů pomocí sekvence jejich genu pro 16S rrna Praktická úloha Identifikace mikroorganismů pomocí sekvence jejich genu pro 16S rrna Pro spolehlivou identifikaci mikroorganismů pomocí genetických metod se velmi často využívá stanovení nukleotidové sekvence

Více

IMUNOANALÝZA elektroforetické separační metody. 3. ročník Klinická biologie a chemie

IMUNOANALÝZA elektroforetické separační metody. 3. ročník Klinická biologie a chemie IMUNOANALÝZA elektroforetické separační metody 3. ročník Klinická biologie a chemie Princip elektroforézy I. Separační metoda využívající různé pohyblivosti různých iontů (složek směsi) ve stejnosměrném

Více

Molekulární diagnostika pletencové svalové dystrofie typu 2A

Molekulární diagnostika pletencové svalové dystrofie typu 2A Molekulární diagnostika pletencové svalové dystrofie typu 2A Lenka Fajkusová Centrum molekulární biologie a genové terapie Fakultní nemocnice Brno Pletencové svalové dystrofie (Limb Girdle Muscular Dystrophy

Více

Akreditované zkoušky prováděné v Laboratořích CEM

Akreditované zkoušky prováděné v Laboratořích CEM Strana č.: 1 Nahrazuje stranu: 1 Akreditované zkoušky prováděné v Laboratořích CEM EIA - stanovení protilátek HIV-1/2, HIV-1 p24 antigenu a současné stanovení protilátek HIV-1/2 a HIV-1 p24 antigenu SOP-NRL/AIDS-01-01

Více

UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE 3. LÉKAŘSKÁ FAKULTA (tématické okruhy požadavků pro přijímací zkoušku)

UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE 3. LÉKAŘSKÁ FAKULTA (tématické okruhy požadavků pro přijímací zkoušku) UNIVERZITA KARLOVA V PRAZE 3. LÉKAŘSKÁ FAKULTA (tématické okruhy požadavků pro přijímací zkoušku) B I O L O G I E 1. Definice a obory biologie. Obecné vlastnosti organismů. Základní klasifikace organismů.

Více

BÍLKOVINY STANOVENÍ HRUBÝCH BÍLKOVIN 1. NEPŘÍMÉ METODY

BÍLKOVINY STANOVENÍ HRUBÝCH BÍLKOVIN 1. NEPŘÍMÉ METODY BÍLKVINY Kvantitativní stanovení bílkovin - hrubá bílkovina - čistá bílkovina - travitelná bílkovina Stanovení aminokyselinového složen ení bílkovin - esenciální aminokyseliny - reaktivní kyseliny - limitující

Více

ení s chemickými látkami. l rní optiky

ení s chemickými látkami. l rní optiky OPTICKÉ SENSORY Základem je interakce světeln telného zářenz ení s chemickými látkami. l Při i konstrukci katalytických biosensorů se používaj vají: optické techniky: absorbance fluorescence luminiscence

Více

Část. Molekulární biologie a imunologie. Základy dědičnosti. Struktura nukleových kyselin

Část. Molekulární biologie a imunologie. Základy dědičnosti. Struktura nukleových kyselin Část Molekulární biologie a imunologie 6. Základy dědičnosti Mendelovská dědičnost (autozomálně recesivní, autozomálně dominantní a X-vázaný přenos mutací). Nemendelovská dědičnost (uniparentální disomie,

Více

In vitro testování scaffoldů pro tkáňové inženýrství. Mgr. Jana Horáková

In vitro testování scaffoldů pro tkáňové inženýrství. Mgr. Jana Horáková In vitro testování scaffoldů pro tkáňové inženýrství Mgr. Jana Horáková 9.12.2015 Proces tkáňového inženýrství 1. Návrh nosiče Seznámení se s problematikou dané tkáně/orgánu Návrh nosiče pro danou aplikaci

Více

Elektroforéza Sekvenování

Elektroforéza Sekvenování Elektroforéza Sekvenování Výsledek PCR Elektroforéza V molekulární biologii se používá k separaci nukleových kyselin a bílkovin Principem je pohyb nabitých molekul v elektrickém poli Gelová, polyakrylamidová

Více