Základní pokyny pro odběry biologických vzorků na mikrobiologické vyšetření

Transkript

1 ODBĚRY VZORKŮ Základní pokyny pro odběry biologických vzorků na mikrobiologické vyšetření Uchovávání a transport odebraných vzorků Odběry krve na průkaz protilátek (obecně) Stanovení protilátek komplementfixační reakcí (KFR) Stanovení protilátek metodou ELISA nebo NIF Detekce nukleových kyselin metodou PCR Odběry krve na antigenemii CMV v periferních leukocytech Odběrové soupravy Provedení výtěrů a výplachů z krku, nosu, nasopharyngu, očních spojivek, tekutiny z puchýřků, stěry z kůže a sliznice Provedení odběrů při podezření na pandemickou chřipku H1N1 Odběr stolice pro izolaci viru na tkáňových kulturách a záchyt Rotavirů, Adenovirů a Norovirů ELISA testem Mozkomíšní mok, další tělní tekutiny (synoviální tekutina, ascites, tekutina z perikardu apod.) Moč na záchyt CMV izolací na TK Pitevní a bioptický materiál

2 Základní pokyny pro odběry biologických vzorků na mikrobiologické vyšetření Zkumavky s odebranými vzorky musí být označeny jménem pacienta, datem odběru a rodným číslem pacienta. Ke každému odběru je třeba vyplnit a přiložit žádanku o laboratorní vyšetření s těmito údaji: jméno a příjmení pacienta celé rodné číslo/číslo pojištěnce zdravotní pojišťovna, u které je pacient pojištěn diagnóza, pro kterou se žádá o vyšetření (příp. i základní diagnóza, pokud je odlišná) druh zaslaného vzorku (materiálu) datum odběru vzorku začátek onemocnění (krátká epikríza a výsledek dosavadního základního vyšetření, je-li to vhodné) adresu a IČZ ordinujícího zařízení jméno předepisujícího lékaře, jeho IČL a odbornost číslo telefonu a faxu, event. předepisujícího lékaře pro případ nutnosti bezodkladného sdělení nálezu nebo konzultace druh požadovaného vyšetření Údaje o onemocnění jsou nutné pro výběr vhodných vyšetřovacích metod, pro zhodnocení výsledku, vyslovení závěru a případně dalších doporučení. Ostatní údaje jsou nutné pro vykazování výkonů zdravotním pojišťovnám Prosíme o správné a úplné vyplnění žádanky o vyšetření, která vaše vzorky provází. Pozdější doplňování nebo opatřování chybějících údajů spotřebuje mnoho času, který jinak můžeme zcela věnovat odborné práci pro Vás a Vaše pacienty. Uchovávání a transport odebraných vzorků Všechny odběry biologických materiálů je třeba pro krátkodobé skladování uložit při teplotě 5 ±3 C a při stejné teplotě je co nejrychleji transportovat do laboratoře. Plnou sraženou krev, která se odebírá pro stanovení protilátek v séru, je možno skladovat v chladu 1-2 dny. Po této době již může dojít k hemolýze a vzorek není možno

3 vyšetřit. Pro případ potřeby dlouhodobějšího skladování nebo časově náročnějšího transportu doporučujeme separovat sérum co nejdříve, při dlouhodobém skladování oddělené sérum zmrazit na -20 C. Sérum je možno správně zabalené zaslat i poštou. Klinické materiály na záchyt infekčních agens nebo jejich antigenů (samotné nebo odebrané do transportního media) je možno uchovávat při +5 ± 3 C nejdéle dva dny. Platí zásada, že čím kratší je interval mezi odběrem a vyšetřením, tím je naděje na záchyt agens větší. Materiály tohoto druhu nezmražujte! Pokud nemohou být materiály doručeny do naší laboratoře do 2 dnů, konzultujte další postup telefonicky. Klinické materiály pro průkaz DNA nebo RNA můžete rovněž uchovávat při +5 ± 3 C nejdéle dva dny. Pokud nebudou moci být vzorky v této době dopraveny do laboratoře, je nutné je zmrazit na -20 C, kromě moči, kterou v žádném případě nezmražujte! Plná krev v EDTA (pro vyšetření PCR a antigenemie CMV) se nesmí zmražovat a musí být v den odběru transportována k vyšetření. Klinické materiály určené k detekci genomu enterovirů je nutno dopravit do laboratoře během 12 hodin po odběru. Případné delší skladování konzultujte telefonicky. Odebrané vzorky se musí transportovat do laboratoře za chladu v termoboxu. Pokud byly vzorky předem zmrazeny, je nutný transport ve zmrazeném stavu v termoboxech nebo termolahvích s ledem nebo suchým ledem. Odběry krve na průkaz protilátek (obecně) Odběry krve je třeba provádět pokud možno v časném akutním stadiu onemocnění ještě před zahájením antiinfekční léčby. Krev odebírejte asepticky, protože bakteriální kontaminace může způsobit hemolýzu a hemolytická séra nelze k některým vyšetřením vůbec použít. Je-li třeba vyšetřit druhý vzorek, odebírá se obvykle za 2 až 3 týdny. Jestliže je vhodnější jiný termín odběru (záleží hlavně na dynamice tvorby protilátek proti příslušnému agens), laboratoř vám jej doporučí v rámci komentáře k výsledkům prvního vyšetření. Odebírá se 4-5 ml krve do sterilní zkumavky (bez přísad - EDTA, heparin, apod.), nejlépe ráno nalačno. Lze použít odběrové zkumavky s aktivátorem hemokoagulace. Máte-li možnost oddělit sérum po sražení krevního koláče, je výhodnější a bezpečnější zaslání séra než plné krve. Plná krev se nesmí zmrazit, protože by došlo k hemolýze, znemožňující většinu sérologických vyšetření.

4 Stanovení protilátek komplementfixační reakcí (KFR) Pro vyšetření je zapotřebí odběr dvou vzorků krve pro posouzení vzestupu (poklesu) hladin protilátek. První vzorek krve je vhodné odebrat co nejdříve po začátku onemocnění. Pokud je zachován správný interval mezi jednotlivými odběry (obvykle 2 až 3 týdny), je považován za signifikantní 4 násobný rozdíl v titrech protilátek. Jestliže je zapotřebí provést další odběr v atypickém termínu nebo je výsledek nejasný, uvádíme příslušné doporučení k jeho provedení v rámci komentáře k výsledkům. Stanovení protilátek metodou ELISA nebo NIF Těmito metodami lze většinou zachytit protilátky typu IgM již v prvním vzorku krve a stanovit tak etiologii onemocnění. Pokud je zapotřebí provést další odběr, uvádíme příslušné doporučení k jeho provedení v rámci komentáře k výsledkům. Detekce nukleových kyselin metodou PCR Vzhledem k nebezpečí falešně pozitivních výsledků (mikrokontaminace negativního materiálu pozitivním vzorkem) je pro tento typ vyšetřovací metody třeba klást zvláštní důraz jak na provedení odběru biologického materiálu za přísně sterilních podmínek do sterilních zkumavek nebo jiných sterilních nádobek, tak na jeho přísně sterilní zpracování. Pokud na tuto reakci zasíláte plnou krev, nesmí být odebrána do heparinu (lze použít EDTA). Biologické materiály, které jsou doporučené pro odběr na vyšetření přítomnosti genomu jednotlivých agens, jsou následující: pro průkaz nukleových kyselin HBV, HCV, HDV, HEV a HGV: plná krev (EDTA, minimálně 1,5 ml ), sérum (minimálně 0,5 ml) pro průkaz nukleových kyselin herpetických virů (CMV, HSV1 a 2, EBV, VZV, HHV 6): plná krev (EDTA, minimálně 1,5 ml), mozkomíšní mok (0,5 ml), moč, sliny, tekutina z puchýřků, oční stěr apod. - dle klinického obrazu nebo po konzultaci s našimi pracovníky pro průkaz nukleové kyseliny Borrelií:

5 mozkomíšní mok (0,5 ml), exsudát z kloubů, otoků (0,5 ml), seškrab z kožních lézí (do mikrozkumavky typu Eppendorf), moč (15ml), plná krev pouze na začátku akutní fáze (EDTA, minimálně 1,5 ml) pro průkaz nukleové kyseliny Chlamydia trachomatis: stěry uretrální, cervikální, nasofaryngeální, z oční spojivky nebo jiné dle klinického obrazu do našich odběrových souprav, BAL (min. 1 ml), moč (15-20 ml první porce moče do sterilní zkumavky; interval od posledního močení alespoň 2 hod. nebo optimálně - první ranní moč) pro průkaz nukleové kyseliny Chlamydia pneumoniae: BAL (min. 1 ml), sputum, plná krev (EDTA, minimálně 1,5 ml), stěry nasofaryngeální a z oční spojivky do našich odběrových souprav pro průkaz nukleové kyseliny Mycoplasma pneumoniae: BAL (min. 1 ml), sputum pro průkaz nukleové kyseliny Bordetella pertusis/parapertussis: nasopharyngeální výtěr nebo aspirát pro průkaz nukleové kyseliny Enterovirů : mozkomíšní mok (0,5-1,0 ml), perikardiální výpotek (1,0 2,0 ml), výtěry z krku do transportního media, plná krev u dětí do 2 let života pouze v období viremie (EDTA- min. 1,5 ml) pro průkaz nukleové kyseliny Papillomavirů: cervikální výtěr, u mužů stěr ze sulcu coronarius, stěr z dalších podezřelých míst do našich odběrových souprav pro průkaz nukleové kyseliny viru pandemické chřipky H1N1: výtěr z nazofaryngu a nosu, BAL, výplach, sekční materiál do našich transportních odběrových souprav Odběry krve na antigenemii CMV v periferních leukocytech Na vyšetření je třeba dodat 5-10 ml nesrážlivé krve (odebrané do EDTA). Vyšetření vzorku je vhodné předem telefonicky domluvit a ihned po odběru transportovat do laboratoře.

6 Odběrové soupravy Naše laboratoř vám poskytne na požádání zdarma tyto transportní odběrové soupravy (TOS): Transportní medium včetně odběrového tamponu pro: Průkaz virů z výtěrů, stěrů Průkaz Ag chlamydií testem ELISA Průkaz Ag chlamydií testem amplif. ELISA Průkaz DNA chlamydií testem PCR Průkaz DNA papillomavirů testem PCR Průkaz Mycoplasma hominis a Ureaplasma urealyticum Zkumavky na odběr krve s aktivátorem hemokoagulace na serologická vyšetření Odběrové nádobky na stolici Sterilní roztok na provedení výplachu Provedení výtěrů a výplachů z krku, nosu, očních spojivek, tekutiny z puchýřků, stěry z kůže a sliznice Stěry, výtěry i výplachy je možno provést i přímo v ordinaci našeho pracoviště (kromě stěrů z cervixu uteri a vaginálních stěrů). Provádí se speciálními odběrovými soupravami, určenými na záchyt mikroorganismů, které vám na požádání naše laboratoř dodá. Vzhledem k tomu, že viry a chlamydie jsou intracelulární parazité, je třeba provést stěr poměrně razantně, aby byly setřeny povrchové buňky sliznice. Výtěr výplach z krku, nosu: odběr by měl být proveden co nejdříve po začátku onemocnění, nejlépe ráno před snídaní a hygienou dutiny ústní. Máte-li možnost - zvláště u malých dětí - provést výplach, dejte mu přednost. Výtěr: sterilním tamponem se důkladně vytřou patrové oblouky (ne mandle!) otáčivým energickým pohybem tak, aby se epiteliální buňky dostaly na co největší povrch tamponu. Druhým tamponem se setře sliznice nosu obou nosních dírek opět krouživým pohybem, z co největší vzdálenosti od vchodu. Oba tampony - z nosu i krku - se zalomí sterilně do téže zkumavky s transportním mediem tak, abychom se nedotkli té části dřevěné špejle, která zůstane ve zkumavce s mediem. Zkumavka se pečlivě zazátkuje. Při onemocnění dolních cest dýchacích odebírejte BAL, bronchiální výplach, méně vhodné je sputum.

7 Odběry z očních spojivek se provádějí krouživým pohybem co největší plochou tamponu, který se poté sterilně zalomí do zkumavky s odběrovým mediem a pečlivě zazátkuje. Je-li přítomen výraznější sekret, nejprve ho sterilním tamponem setřete, pak teprve provádějte samotný odběr. Pro každé oko použijte zvláštní tampon. Pokud není nutné oči odlišit, je možné oba tampony zalomit do jedné zkumavky. Stěry z kůže a sliznice se provádějí před ošetřením dezinfekčním nebo léčebným prostředkem. Razantně valivým pohybem setřete lézi a zvláště oblast rozhraní léze a zdravé kůže/sliznice. Tampon se poté sterilně zalomí do zkumavky s odběrovým mediem a pečlivě zazátkuje. Tekutinu z puchýřků lze setřít po protržení puchýřku sterilním tamponem, který se poté sterilně zalomí do zkumavky s odběrovým mediem a pečlivě zazátkuje. Tekutinu lze také odsát sterilní injekční jehlou a stříkačkou. Nasátou tekutinu vstříkneme opatrně pod hladinu odběrového media nebo na stěnu zkumavky s mediem tak, aby nedošlo ke zpěnění a nevznikl aerosol. Vyhneme se tak šíření infekčního agens vzduchem. Tekutinu z puchýřku je možno zaslat rovněž přímo ve stříkačce, kterou byla odebrána (ponechat na stříkačce nasazenou jehlu, zabodnutou do gumové zátky). Uretra: výtěr se provede z hloubky min. 4 cm pomalým krouživým pohybem dakronovým (drsným) tamponem na aluminiovém drátku, který se zahne nebo zastřihne do transportní zkumavky a velmi těsně uzavře. Výtěr u mužů se provádí nejdříve 1 hodinu po močení. Je-li přítomen exsudát, je třeba jej předem setřít. Cervix uteri: nejprve se setře hlen sterilním tamponem, který se zahodí. Vlastní odběr se provededalším tamponem, event. kartáčkem (pokud je obsažen v soupravě) pomalým krouživým pohybem z ústí cervixu v místě, kde je již cylindrický epitel. Podle návodu na odběrové soupravě se tampon opatrně zalomí do transportní zkumavky a velmi těsně uzavře. POZOR!!! U gravidních žen se nesmí používat k odběrům kartáček, který je součástí některých souprav, ale jen tenký tampon, určený ke stěrům z uretry! Provedení odběrů při podezření na pandemickou chřipku H1N1: Poskytujeme odběrovou soupravu REMEL, která obsahuje odběrové médium, 1 silnější tampon a 1 slabší tampon. Tato souprava se před použitím uchovává při pokojové

8 teplotě. Největší výtěžnost má odběr v akutní fázi infekce, tj. v prvých třech dnech od začátku klinických příznaků, provedený ráno nalačno, před hygienou dutiny ústní. Odebírá se nasopharyngeální výtěr a výtěr z nosu, případně BAL, výplach a sekční materiál. Nasopharyngeální výtěr: Před výtěrem necháme pacienta zakašlat. Silnějším tamponem provedeme krouživým pohybem stěr zadní stěny nosohltanu tak, aby se setřelo co nejvíce epiteliálních buněk. Je nutno vyhnout se mandlím! Tampon vložíme do odběrového media a asi uprostřed špejli zalomíme o okraj zkumavky, aniž bychom se v tomto místě špejle dotkli. Slabším tamponem vytřeme obě nosní dírky a špejli zalomíme stejným způsobem do téže zkumavky s odběrovým mediem, kde již je tampon z nosohltanu. Sekční materiál: Provést odběr nejdéle do 24 hod. po exitu. Lze odebrat: při nálezu hemorrhagické tracheitidy stěr z nejvíce postižených míst, malou část trachey se sliznicí (cca 1x1 cm), marginální zónu pneumonického ložiska. Vždy do zkumavky s odběrovým mediem. Vzorky v odběrovém mediu ihned uložíme do chladničky (+2 až +8 st.c.). NESMÍ SE ZMRAZIT! Odběr je zapotřebí opatřit vyplněnou žádankou s údaji o klinických příznacích, přiloženou k soupravě. Transportujeme max. do 48 hodin do laboratoře, stále při teplotě +2 až+8 st.c (v termoboxu). Odběr stolice pro izolaci viru na tkáňových kulturách a pro záchyt Rotavirů, Adenovirů a Norovirů ELISA testem Odebírá se přibližně 1 g stolice ( tj. asi velikost lískového oříšku) do sterilní zkumavky nebo parazitologické nádobky. Výtěr tamponem nebo rektální rourkou lze provést pouze výjimečně u silně průjmových stolic, není-li jiný odběr možný (např. u malých dětí).

9 Odběr stolice na stanovení antigenů Helicobacter pylori Odběr se provádí do čisté dobře uzavíratelné nádobky. Podle konzistence stolice se odebírá cca 500 µl tekuté nebo polotuhé stolice nebo cca 1g (tj. asi velikost lískového oříšku) tuhé stolice. Nevhodně odebrané vzorky: Vodnatá, průjmová stolice, stolice v transportním mediu, odběr tamponem (čistým i s konzervačním roztokem), odběr během léčby nebo do 2 týdnů po léčbě inhibitory protonové pumpy, antimikrobiálními látkami, preparáty s bismutem. Při odběru menšího množství je nebezpečí falešně negativních výsledků. Mozkomíšní mok, další tělní tekutiny (synoviální tekutina, ascites, tekutina z perikardu apod.) Odebírá se minimálně 0,5 ml mozkomíšního moku pro PCR reakci, pro ostatní reakce od 1,5 ml tělníchtekutin do sterilní zkumavky dle množství požadovaných vyšetření. Moč na záchyt CMV izolací na TK Odebírá se 5-10 ml moče, u novorozenců stačí 1-2 ml ( nejlépe ranní, první proud) do sterilní zkumavky. Pitevní a bioptický materiál Odebírá se kousek postiženého orgánu (ne povrchová část, která bývá kontaminována bakteriální flórou) do sterilní nádobky, s následným převrstvením odběrovým mediem nebo sterilním fyziologickým roztokem. Materiál je nutno co nejdříve zaslat do laboratoře k vyšetření.