Praktikum č. 17: Mikrobiologická diagnostika veterinárně významných zástupců z řádů Rickettsiales a Chlamydiales.

Transkript

1 Praktikum č. 17: Mikrobiologická diagnostika veterinárně významných zástupců z řádů Rickettsiales a Chlamydiales. Cíle: 1. Seznámit se s veterinárně významnými zástupci uvedených čeledí. 2. Naučit se obecné postupy bakteriologické diagnosticky Q horečky a chlamydiových infekcí zvířat. Řád: Rickettsiales Čeleď: Rickettsiaceae Rod: Coxiella Příslušníci rodu parazitují ve vakuolách buněk retikuloendoteliálního systému. Coxiella burnetii Vyvolává Q-horečku (zoonóza) ovcí, koz, skotu a ostatních savců, včetně člověka (přenašeči jsou různé druhy klíšťat). Časté bývají sporadické aborty ovcí, které mají až epidemický charakter, a latentní infekce skotu a ovcí. Nemocná zvířata vylučují původce sekrety a exkrety (mléko, plodové obaly), které bývají zdrojem infekce člověka. DIAGNOSTIKA Přímý průkaz. Vyšetřovaný materiál mléko, krev, orgány, plodové obaly. Přímé mikroskopické vyšetření. Otiskový preparát (hlavně z placenty po abortu) barvíme podle Giemsy nebo Machiavelliho. Izolace původce. Vyšetřovaný materiál se nejdříve homogenizuje, dále filtruje a centrifuguje. Supernatant se pasážuje přes morče (aplikujeme 0,5 ml vzorku do obou varlat, případně 4-5 ml i. p.. Je možné provést izolaci na kuřecích embryích (6 až 7 dnů starých). Hodnocení. Provádí se mikroskopie otiskových preparátů z plic pokusných zvířat a žloutkových vaků kuřecích embryí. Důležitou součástí tohoto diagnostického postupu je průkaz protilátek u pokusných zvířat (RVK). Nepřímý průkaz Sérologické vyšetření krevního séra metodou RVK nebo ELISA. Rod: Rickettsia Zástupci rodu parazitují hlavně v endoteliélních buňkách cév. Ricketsia rickettsii Původce skvrnité horečky člověka (východní část USA - Rocky Mountain ), možná je i infekce psů. 107

2 Přenašečem jsou klíšťata rodu Dermacentor. Rod: Ehrlichia Ehrlichia equi Parazituje v cytoplazmatických vakuolách granulocytů. Erlichióza koní byla prokázána v USA a Evropě, včetně ČR. Přenašeči onemocnění jsou klíšťata. Diagnostika průkaz původce na krevních roztěrech barvených podle Giemsy. E. phagocytophila Predilekčním místem výskytu jsou granulocyty ovcí a skotu. V Evropě je přenašečem Ixodes ricinus. E. canis Původce erlichiózy psů (tropical canine pancytopenia), parazituje v makrofázích, monocytech, zřídka v neutrofilech. Rod: Cowdria Cowdria ruminantium Je parazit cytoplazmy endotelu přežvýkavců (Afrika). Rod: Neorickettsia Neorickettsia helminthoeca Infekce psů na západním pobřeží Severní Ameriky (salmon poisoning disease) Čeleď: Anaplasmataceae Rod: Anaplasma Zástupci rodu vyvolávají anaplasmózu skotu, ovcí a koz. A. marginale Původce maligní anaplazmózy skotu. Parazituje při okraji erytrocytů skotu, ovcí, koz a divokých přežvýkavců (Afrika, Australie, USA). Přenašečem jsou klíšťata. A.centrale Původce benigní anaplazmózy skotu v Africe, Asii, Americe a Evropě. Parazituje centrálně v erytrocytech skotu. Přenašeci jsou klíšťata. A. ovis Původce anaplazmózy ovcí a koz (Afrika, Asie, Amerika, Evropa). Parazituje marginálně v erytrocytech ovcí a koz. Přenašeči jsou různé druhy klíšťat. 108

3 Rod: Aegyptianella A. pullorum Původce aegyptianelózy drůbeže, který parazituje v erytrocytech. Rod: Haemobartonella H. felis, H. canis Původci infeční anemie koček a psů, infekce jsou celosvětově rozšířeny. Přenašeči jsou krev sající členovci. Rod: Eperythrozoon E. suis, E. ovis Parazitují na erytrocytech zvířat. Infekce jsou celosvětově rozšířeny, u nás se ojeďiněle vyskytuje eperythrozoonóza prasat. Čeleď: Chlamydiaceae Rod: Chlamydia Chlamydie jsou kokoidní mikroorganismy velikosti 0,3µm, které vyvolávají různé chlamydiové infekce savců. Ty se projevují ve formě pneumonií, infekcí urogenitálního aparátu, artritíd apod.. Ch. trachomatis Původce infekcí člověka trachom (konjunktivitis), respiratorní infekce, lymfogranuloma venereum, artritídy, nespecifické uretritídy. Ch. suis Intestinální infekce prasat. Ch. muridarum Respiratorní infekce myšovitých hlodavců. Rod: Chlamydophila Chlamydophila psittaci Vyvolává ornitózu ptáků, psittakózu člověka, enzootické aborty ovcí, pneumonie koček, dále pak polyartritídy, polyserozitídy, urogenitální infekce, mastitídy aj.. Chlamydophila abortus Původce enzootických abortů ovcí, dále abortů koz, skotu a prasat. 109

4 Chlamydophila felis Původce konjunktivitíd a pneumonií koček. Chlamydophila caviae Původce inkluzivní konjunktivitídy morčat. Chlamydophila pecorum u ovcí infekce střeva, konjunktivitídy, polyartritídy u skotu sporadické encefalomyelitídy, polyartritídy, metritídy u koal konjunktivitídy, respiratorní infekce DIAGNOSTIKA ORNITÓZY A. Přímý průkaz: Vyšetřovaný materiál plíce, játra, perikard, střevo, sražená krev nebo erytrocyty odebrané před antibiotickou terapií. Mikroskopické vyšetření: Otiskový preparát nebo roztěr barvíme podle Giemsy, Castanediho nebo Machiavelliho, často se využívá také imunofluorescence. Kultivace. Původce izolujeme na kuřecích embryích nabo tkáňových kulturách (McCoyovi buňky), vyšetřovaný materiál můžeme pasážovat přes bílou myš (materiál se podá i. p. a 6. den prokazujeme chlamydie v otiskových preparátech z peritonea), někdy se pasáž 1-2x opakuje. Lze využít PCR. B. Nepřímý průkaz: Specifické protilátky se stanovují RVK. Signifikantní titr je 1:8, důležité je posouzení dynamiky titru. Dostupné jsou různé kity na principu ELISA metod. DIAGNOSTIKA CHLAMYDIOVÝCH INFEKCÍ A. Přímý průkaz: Vyšetřovaný materiál stěry sliznic, placenta Mikroskopické vyšetření: Otiskový preparát nebo roztěr barvíme podle Giemsy, Castanediho nebo Machiavelliho a hledáme intracytoplasmatické inkluze, často se využívá také imunofluorescence. Kultivace. Původce izolujeme na kuřecích embryích nabo tkáňových kulturách (McCoyovi buňky), vyšetřovaný materiál můžeme pasážovat přes bílou myš (materiál se podá i. p. a 6. den prokazujeme chlamydie v otiskových preparátech z peritonea), někdy se pasáž 1-2x opakuje. Polymerázová řetězová reakce. C.abortus, C. pecorum, C.felis 110

5 B. Nepřímý průkaz: Dostupné jsou různé kity na principu ELISA metod. 111