Komplexní pohled na laboratorní diagnostiku Chlamydia pneumoniae

Transkript

1 Komplexní pohled na laboratorní diagnostiku Chlamydia pneumoniae Iva Stoklásková, Lenka Pokorná Seminář, Laboratoře Mikrochem, Šumperk, listopad 2016

2 Druhy Chlamydia Chlamydia trachomatis Serotypy A-C, D-K, L1-3 Urogenitální trakt Sexuální přenos Chlamydia pneumoniae Nedělí se na subtypy Dýchací cesty Kapénková infekce Chlamydia psittaci Ch. trachomatis, zdroj Wikipedia.org Řada zvířecích subtypů Dýchací cesty Ptáci trus, peří Ch. pneumoniae, zdroj Profimedia.cz

3 Vývojový cyklus Ch. pneumoniae Během 102 hodin se vytvoří elementárních tělísek elementární tělísko (ET) epitelová buňka jádro inkluse hodiny retikulární tělísko (RT)

4 Schématický průběh protilátkové odpovědi

5 Buněčná struktura Ch. pneumoniae Antigeny LPS, MOMP, OMP2, OPM4, OMP5 LPS OMP2 OMP2 MOMP Elementární tělísko LPS MOMP Vnitřní membrána Vnější membrána Periplasmatický prostor Zdroj: medac.de

6 Přehled metod Metody průkazu Průkaz Metoda Materiál přímé nepřímé Kultivace Antigen Přímá fluorescence ELISA výtěr, moč DNA PCR výtěr, krev KFR Protilátka Nepřímá fluorescence ELISA sérum, plasma Imunoblot

7 ELISA soupravy První generace inaktivovaný a purifikovaný celobuněčný antigen nespecifické reakce Třetí generace rekombinantní antigeny Ch. pneumoniae: MOMP, MOMP1, OMP2, p54, OMP4, OMP5 Ch. trachomatis: MOMP, OMP2 vysoká shoda EIA s imunoblotem

8 Konfirmační soupravy - imunobloty BLOT-LINE Chlamydia IgG BLOT-LINE Chlamydia IgA Control line IgA IgG Start MOMP Cp MOMP1 OMP2 Cp P54 OMP5 OMP4 MOMP Ct OMP2 Ct HSP60 MOMP Cps OMP2 Cps Antigenní složení souprav Patogen Dominantní antigeny Další antigeny Ch. pneumoniae MOMP, MOMP1, OMP2 OMP4, OMP5, p54 Ch. trachomatis MOMP OMP2, HSP60 Ch. psittaci MOMP OMP2

9 Antigenní složení BL Ch. pneumoniae MOMP Cp (Major outer membrane protein) dominantní povrchový druhově specifický membránový protein funkce strukturálního proteinu metabolická funkce MOMP1 Cp (Major outer membrane protein 1) izoforma antigenu MOMP, vzniklá posttranslační modifikací OMP2 Cp (Outer membrane protein 2) povrchový druhově specifický membránový protein základní složka povrchového membránového komplexu chlamydií OMP4 (Outer membrane protein 4) vnější membránový protein OMP5 (Outer membrane protein 5) imunodominantní povrchový antigen vysoce specifický pro Ch.pneumoniae p54 imunodominantní povrchový antigen vysoce specifický pro Ch.pneumoniae Ch. pneumoniae Ch. pneumoniae Read TD, Nucleic Acids Res., 2000 Mar 15;28(6): Dr Stratton's Image

10 Interpretace výsledků IgM IgA IgG Hodnocení negativní negativní negativní pozitivní negativní nebo pozitivní negativní Negativní nález Možná falešná negativita ve velmi časné fázi onemocnění, nutná kontrola Možná počínající infekce Možná falešná pozitivita, nutná kontrola negativní negativní pozitivní Persistentní IgG protilátky po dříve prodělané infekci negativní Negativní hraniční nebo sl. pozitivní silně pozitivní pozitivní pozitivní Dříve prodělaná infekce Začínající reinfekce pozitivní pozitivní pozitivní Probíhající infekce Probíhající infekce (IgM nemusí být tvořeny) Opakující se infekce Chronická infekce (nutné potvrzení chronicity opakovaným vyšetřením po 1 a 3 měsících, nutné klinické příznaky)

11 Význam konfirmace IgA protilátek Tvorba antichlamydiových protilátek IgA po infekci obvykle za 3-4 týdny Dynamika IgA protilátek v druhém odběru je někdy slabá Protilátky IgA po konfirmaci imunoblotem důležitý marker infekce Možná zkřížená reaktivita mezi jednotlivými species rozhodující je klinický stav pacienta

12 Laboratorní výsledky pacient 1 žena, r. 1980, diagnóza: Z008 jiné celkové vyšetření Sérologické hodnocení 2015: pravděpodobně primární infekce (bez tvorby IgM), reinfekce či reaktivace Ch. pneumoniae druh Ch. pneumoniae Ch. trachomatis metoda ELISA BLOT BLOT datum IgA IgG IgM IgA IgG IgA IgG 7/2015 2,3 1,3 0,1 6/2016 2,5 2,2 0,1 neg (MOMP+/-) neg neg neg

13 Laboratorní výsledky pacient 2 muž, r. 1971, diagnóza: Z008 jiné celkové vyšetření druh Ch. pneumoniae Ch. trachomatis metoda ELISA BLOT BLOT datum IgA IgG IgM IgA IgG IgA IgG 11/2013 1,7 1,7 0,3 1/2014 2,0 2,1 0,4 neg (MOMP+/-) neg neg neg 1/2016 0,9 1,3 0,2

14 Laboratorní výsledky pacient 3 muž, r. 1972, diagnóza: Z008 jiné celkové vyšetření hodnocení 2013: reaktivace 2014 doporučen blot pouze anamnestické protilátky druh Ch. pneumoniae Ch. trachomatis metoda ELISA BLOT BLOT datum IgA IgG IgM IgA IgG IgA IgG 2/2011 1,9 2,4 0,3 2/2013 2,8 3,6 0,4 1/2014 2,7 4,1 0,5 neg poz (MOMP+,OMP2++, OPM4+/-) neg poz (MOMP++,OMP2+, HSP60+)

15 Laboratorní výsledky pacient 4 Žena, r. 1974, bolest kyčelního kloubu, několikrát přeléčená ATB, bez klinické úlevy; 3/2011, 10/2015 možná aktivní infekce; 3/2016 přetrvávající Ab druh Ch. pneumoniae Ch. trachomatis metoda ELISA BLOT ELISA BLOT datum IgA IgG IgM IgA IgG IgA IgG IgA IgG 3/2011 1,3 0,9 0,4 poz (MOMP+/-, OMP4+,OMP5+) poz (MOMP+) 0,5 0,1 neg neg 9/2011 1,2 1,6 0,6 neg poz (MOMP+) 0,2 0,1 neg neg 6/2012 1,2 2,5 8/2012 2,5 6,9 4/2014 0,3 2,3 0,3 2,6 7,3 10/2015 0,4 2,2 0,1 3/2016 1,0 2,5 0,4 hraniční (OMP5+) hraniční (OMP5+) poz (MOMP+/-, OMP2+,OMP5++) poz (MOMP+/-, OMP2+,OMP5++) 1,6 6,2 neg 2,7 9,9 neg poz (MOMP+,OMP2++) poz (MOMP+,OMP2++, HSP60+/-, MIP++)

16 Shrnutí Laboratorní diagnostika chlamydiových infekcí Klinický obraz Fáze onemocnění Přímý průkaz patogenu Průkaz protilátek

17 Závěr Pouze komplexní diagnostický přístup může přinést správné zhodnocení stavu pacienta. Průkaz protilátek není průkazem onemocnění.

18 Děkuji za pozornost