Vyšetření hevylite přispělo k odhalení nemoci z těžkých řetězců

Transkript

1 Vyšetření hevylite přispělo k odhalení nemoci z těžkých řetězců Karel Kalla, OKB Nemocnice Pelhřimov, p.o. Petr Kessler, OHT Nemocnice Pelhřimov, p.o. Petr Šebek, Binding Site, CZ

2 anamnéza Žena, r.narození 1935 RA:matka a bratr + na ca žaludku OA:řadu let se léčím s páteří, posledních 5 let chodí s chodítkem, jinak nevýznamná NO:od roku 2003 sledována na hematologii jedné nemocnice v kraji pro MGUS IgG kappa. Nyní nárůst hladiny paraproteinu, odeslána na HTO v PE k přešetření

3 klinika Nález negativní, pouze systolický šelest na aortou. Renální funkce dobrá S-Ca a S P v normě Jaterní markery v normě, CRP O mg/l LDH 2,24 ukat/l KO lehká anemie, B pmol/l S-Celková bílkovina 106 g/l

4 ELFO bílkovin séra V oblasti pomalých imunoglobulinů je M gradient v koncentraci 44,6 g/l. Imunofixací prokázán paraprotein IgG kappa, imunoglobuliny IgA (0,04g/l) a IgM (0,08g/l)snížené. Vysoké VLŘ kappa 104,3mg/l lambda nízké (0,06 mg/l) vysoký zlomek K/L (1738,3)

5 Hevylite HvG/K 8,9 g/l HvG/L 0,6g/l Ani další ředění nevykazují vyšší hodnoty. Zpravidla tak velké diskrepance mezi hevylite a denzitometrií nejsou. Dotaz na Binding Site CZ, doporučeno poslat vzorek do laboratoří BS v Anglii

6 Hevylite BS VB laboratoř provedla identická vyšetření s námi se stejným výsledkem. Požádali nás o zasláni nového vzorku séra k provedení dalších analýz Sérum odesláno

7 SDS Elektroforéza Proteiny jsou denaturovány dodecylsíranem sodným (SDS) a beta-merkaptoetanolem, který zruší disulfidické vazby. SDS je denaturační činidlo a detergent, obalí proteiny a denaturuje. Proteiny mají tyčinkovitý tvar a při ph 7-10 mají díky SDS všechny stejnou hustotu povrchového náboje.

8 SDS Elektreoforéza Jejich pohyblivost závisí téměř výhradně na molekulové hmotnosti polypeptidových řetězců. Metoda vhodná pro analýzu makromolekulárních komplexů.

9 Western blot WB-metoda k detekci určitého proteinu ve směsi proteinů. WB následuje po gelové elektroforéze ( ať už nativní nebo za denaturujících podmínek) namísto obvyklého barvení elfo. Proti samotné SDS elfo, která dělí proteiny podle velikosti, ale neříká nic o tom zda jsou proteiny nějak podobné či nikoliv, stanoví o jaký protein jde.

10 Barvení s Coomassie Blue Ukazuje výraznější zbarvení intaktního IgG u pac. vzorku, než u vzorku zdravého člověka. To souvisí se zvýšenou hladinou IgG. U pac. vzorku protein migruje v rozmezí mol. hmotnosti, která je nižší než u zdravého člověka. Ukazuje strukturně nestabilní protein.

11 Imunobarvení s anti-kappa Ukazuje na porovnatelnost zbarvení IgG kappa mezi oběma séry. Kdyby byla hodnota celkového IgG správná ( 45,16g/l), měli bychom očekávat vyšší intenzitu u pac. vzorku

12 Imunobarvení s anti lambda Intaktní IgG lambda ani VLŘ lambda nejsou detekovány u pac. vz. To je ve shodě s IT měřením (O,O58 g/l) Suprese izotypu kompletní molekuly IgG Proto nižší než očekávaná sumace Hv výsledků

13 Imunobarvení s anti IgG Protilátky proti těžkým řetězcům gama rozpoznaly ještě další druh proteinu s nižší mol. Hmotností 76 kda. Hlavní protein migruje kol 100 kda, což odpovídá dimeru těžkých řetězců IgG.

14 Imunobarvení s anti IgG Dokazuje přítomnost dalšího proteinu u pac. vz. odvozeného z molekuly IgG, který postrádá navázané VLŘ kappa a proto je nedetekovatelný testem hevylite

15 Princip hevylite Hevylite je protilátka namířená na junkční epitop mezi těžkým a lehkým řetězcem

16 Diagnoza pacientky Mnohočetný myelom IgG kappa CRAB pozitivní ( skelet) lebka, humery, femury, st. po zlomenině Th 12 a L 1 Perniciozní anemie Dodatečně- Nemoc z těžkých řetězců γ

17 Nemoc z těžkých řetězců Jeden klon B-lymfocytů produkuje nekompletní molekulu imunoglobulinu bez lehkých řetězců, tedy jen těžké řetězce α,µ,γ,δ Franklin et al. 1964, nemocný s lymfoproliferativním onemocněním s HC gama v séru a moči. Nejčastější nemocí z těžkých řetězců je nemoc z těžkých řetězců α (400),Středozemí, Střední východ,10-30 let, kostní léze O,BJB O,příznivá

18 Nemoc z těžkých řetězců HCD γ (100),Sev. Amerika, Evropa, 62 let, heterogenní M gradient, BJB 0, kostní léze výjimečně, prognóza nepříznivá HCD µ ( 35),Severní Amerika, Evropa, střední a starší věk, normální elfo nebo hypogamaglobulinemie, BJB ano, kostní léze ano, nepříznivá prognóza HCD δ ( ojediněle)

19 Nemoc z těžkých řetězců γ Probíhá asymptomaticky či rychle progreduje Lymfoproliferativní onemocnění s hepatosplenomegalií a lymfadenopatií. Časté autoimunní onemocnění Většina těžkých řetězců γ u HCD jsou dimery, kdežto u α a µ jsou polymery různé velikosti

20 Léčení Bisfosfonáty Cyklofosfamid i.v. Velcade s.c. Dexamethazon v krvi paraprotein IgG kappa v koncentraci 24,5 g/l ( 44,6 g/l) HvG/K 6,7 g/l, HvG/L 1,16 g/l

21 Kdy provádět Hevylite Monitorace MM u pacienta, kde je M protein těžko kvantifikovaný S-elfo. Zhruba 50 % pacientů s IgA MM a 5 % pacientů s IgG MM nemůže být přesně monitorováno S-elfo. Mnoho pacientů s IgA MM mají M protein v beta 1 zóně.

22 Kdy provádět Hevylite S-elfo podhodnocuje kvantitu M proteinu vzhledem k nižší saturaci barviva v gelu. Může být až o 30 % nižší než ve skutečnosti je. S-elfo je nepřesná pokud je M protein nižší jak 20g/l. Hv identifikuje zbytkovou nemoc a dává včasnou informaci o relapsu dříve než se zvýšení projeví v S-elfo

23 Kdy provádět Hevylite Hv může spolehlivě stanovit, že paraprotein u nemocného již vymizel Hv může upozornit na podezření nemoci z těžkých řetězců. To však vyžaduje další analýzy séra.

24 A to je vše Děkuji za pozornost