Jak analyzovat monoklonální gamapatie

Transkript

1 Jak analyzovat monoklonální gamapatie -od stanovení diagnózy až po detekci léčebné odpovědi Říhová Lucie a kol. OKH, FN Brno BMG při ÚPF, LF MU

2 Monoklonální gamapatie(mg) heterogenní skupina onemocnění charakteristická přítomnost klonálních plazmocytů(pc)produkujících monoklonální imunoglobulin (MIG) maligní mnohočetný myelom (MM) benigní monoklonální gamapatie nejasného významu (MGUS) Kyle 1978, IMWG 2003

3 Plazmatická buňka (PC) Normální CD19 CD27 CD45 CD81 CD44 0,3 cκ/λ poměr 3 CD38 CD138 Abnormální CD56 CD28 CD117 CD20 CD33 0,3 >cκ/λ /λratio > 3

4 Analýza PC pomocí FC 1. krok - analýza leukocytů (kostní dřeň, periferní krev ) 2. krok - analýza plazmocytů % N-PC normální PC všechny PC PC v rámci leukocytů % A-PC aberantní PC všechny PC

5 Stanovení počtu PC pomocí FC Podhodnocení % PC ve srovnání s morfologií zředění KD v důsledku odběru dalších ml analýza suspenze ochuzené o PC asociované s lipidovými fragmenty senzitivita obou přístupů je shodná % infiltrace PC z obou metod spolu korelují FC stanovení % PC je nezávislý prognostický faktor s dopadem na celkové přežití pacientů Nadav 2006, Paiva 2009

6 Normalita vs. klonalitapc I. Normální PC polyklonální s normálním fenotypem n-pc N-PC (CD19 + CD56 - ) Patologické PC klonální s aberantním/abnormálním fenotypem a-pc A-PC (CD19 - CD56 + /CD19 - CD56 - /CD19 + CD56 + )

7 Normalita vs. klonalitapc II. 31 % CD % CD ,3 % % 44,7% ckappa 55,3% clambda Na základě povrchové analýzy: 28% N-PC 72% A-PC = 100%-(N-PC)

8 Normalita vs. klonalitapc III. CD56 + CD27 - Na základě povrchové + cytoplazmatické analýzy: 76% polyklonálních n-pc 24% klonálních a-pc CD56 + CD27 - clambda +

9 (Ne)normalita PC 13 % PC z leukocytů 80 % 19 + PC

10 (Ne)normalita PC 28 % PC z leukocytů 40 % 19 + PC

11 Klinické aplikace FC u MG 1. diferenciální diagnostika 2. stanovení rizika progrese u MGUS a amm 3. detekce minimální reziduální nemoci (MRN) u léčených pacientů s MM 4. analýza prognostických markerů u MM 5. identifikace nových léčebných cílů Paiva 2010

12 Diferenciální dg. u MG Reaktivní plazmocytóza odlišení od primární PCL MGUS (riziko maligní transformace) benigní vs. MM-like(rizikový) MM (symptomatologie) asymptomatický (MGUS-like) vs. symptomatický Waldenströmova makroglobulinémie odlišení od IgMMM

13 Waldenströmova makroglobulinémiei. B-lymfoproliferacecharakterizovanáprodukcí IgM a přítomným lymfoplazmocytárním lymfomem prvotním stádiem je IgM MGUS kostní dřeň obsahuje směs Blymfocytů a lymfoplazmocytoidníchbb, které mohou vykazovat plazmocelulární diferenciaci

14 Waldenströmova makroglobulinémieii. 71,4 97,7 0,1 % PC 0,5 % LPC 18,5 % mb 0,9 % imb CD19 + CD56-97,5 28,6 2,3 CD19 - CD56 +/- 92,6 mb-zralé B imb-nezralé B LPC - lymfoplasmocytoidní bb 2,5 7,4

15 Léčebná odpověď Stanovení minimální reziduální nemoci (MRD) analýza přítomnosti klonálních PC senzitivita 10-5 a detekce min a-pc Potvrzení/vyloučení progrese či relapsu nejasné stavy, nevýtěžná morfologie

16 Stanovení MRD I. léčebná odpověď přísná kompletní remise (CR) imunofenotypová remise (icr = scr+) nepřítomnost fenotypově aberantních (klonálních)pcv10 6 buněk KD analyzovaných multiparametrickou FC ( 4 znaky) Rajkumar 2011

17 Stanovení MRD II. 1R po T 3M po T

18 Extramedulárnírozšíření -PCL Plasmocelulární leukémie primární vs. sekundární >20% circulujících PC v periferní krvi Analýza pomocí FC leckdy přínosnější než morfologické hodnocení

19 Extramedulárnírozšíření -PCL Plasmocelulární leukémie primární vs. sekundární >20% circulujících PC v periferní krvi Analýza pomocí FC leckdy přínosnější než morfologické hodnocení

20 Extramedulárnírozšíření -EMM Extramedulárnímyelom primární MM či častěji relaps MM měkkotkáňové nebo útrobní infiltráty špatná prognóza

21 Extramedulárnírozšíření -EMM 2 subpopulace PC v rámci leukocytů KD Extramedulárnímyelom primární MM či častěji relaps MM měkkotkáňové nebo útrobní infiltráty špatná prognóza 1 subpopulace PC ve vzorku tumoru

22 KlonalitaPC provádí se u nových dg., v rámci diferenciální dg., u susp. PG, v době CR aj. neprovádí se u jasných relapsů/pg stačí N-PC a A-PC pokud je k dispozici výsledek analýzy klonality PC: uvádí se % n-pc a a-pc % N-PC a A-PC se neuvádí -nepřesné!

23 Shrnutí stanovení normality (N-PC vs. A-PC) na základě CD19/CD56 je pouze orientační stanovení klonality(npcvs. apc) je přesnější, nezbytné u stanovení MRN, klinický dopad prozatím není znám, ale očekává se vyšší výpovědní hodnota

24 Závěr Pokroky v průtokové cytometrii (technické i výzkumné) tuto metodu posouvají do popředí analýz uplatňovaných v diagnostice monoklonálních gamapatií.

25 Děkuji za pozornost