Imunoreakce se značenými protilátkami
|
|
- Patrik Švec
- před 9 lety
- Počet zobrazení:
Transkript
1 Imunoreakce se značenými protilátkami
2 Kvantitativní stanovení antigenu/protilátky: precipitace - 30 g/ml aglutinace - 1 g/ml Neprecipitační imunochemické metody: RIA, FIA, EIA - 1 pg/ml
3 Rozdělení metod podle použitého značení Radioaktivní Enzymatické Fluorescenční Luminiscenční
4 Typy imunoreakcí Kompetitivní: neznačený analyt v testovaném vzorku soutěží o vazebná místa protilátek s přidaným značeným analytem Neznačený antigen blokuje vazbu značeného antigenu čím méně signálu je naměřeno, tím vyšší koncentrace analytu (nepřímá úměra). Protilátka není v nadbytku, je přidáváno omezené množství, tak aby mohlo docházet ke kompetici
5 Typy imunoreakcí Nekompetitivní (sendvičová analýza) Obecně nejvyšší úroveň sensitivity a specifity Sendvič: analyt je vázán mezi dvěma specifickými protilátkami Protilátka je v nadbytku, takže všechen analyt je vyvázán Množství navázané značené protilátky je úměrné množství analytu ve vzorku
6 Homogenní vs heterogenní metody a) heterogenní - vyžadují separaci volné a vázané frakce analytu b) homogenní - nevyžadují separaci volné a vázané frakce analytu Pokud navázání protilátky na antigen ovlivní intenzitu signálu značky (např. prostorovým blokováním, aktivního místa enzymu protilátkou), není důvod k separaci frakcí Homogenní metody jsou obecně používány při měření malých analytů (léky, drogy). Není vyžadováno oddělení komplexů Ab-Ag od volného Ag* - rychlejší a jednodušší v provedení S enzymem se ale podařilo sestavit homogenní imunoanalýzu pouze pro několik dvojic hapten-enzym
7 Heterogenní imunoanalýza Metodu heterogenní imunoanalýzy lze sestrojit pro každou dvojici protilátkaantigen Stěžejní problém je separace volné a vázané frakce: chromatograficky, srážením imunokomplexů, nebo zakotvením neznačeného imunoreaktantu na pevnou fázi
8 Výsledky imunoanalýzy kvalitativní Jediný kalibrační bod ( cutoff bod) Výsledky jsou buď pozitivní nebo negativní ; (tj. nad nebo pod hodnotou cutoff) Možné falešně pozitivní výsledky; použití monoklonálních protilátek toto nebezpečí omezuje kvantitativní Vztah mezi naměřenou hodnotou a koncentrací zkoumané látky určen z kalibrační křivky (obvykle 5 6 bodů) Problémy může způsobovat crossreaktivitita (protilátka se váže i na jiné podobné antigeny).
9
10 Radioimunoanalýza (RIA) v roce 1960 (Berson a Yalow) - metoda pro stanovení koncentrace inzulinu v plazmě První případ, kdy bylo možné stanovit hormonální hladinu z krve pomocí in vitro metody. Využíváno v klinické praxi v mnoha oblastech: Endokrinologie (hladiny hormonů) v krvi digitoxin nebo digoxin u pacientů, kteří berou tyto léky Toxikologie: průkaz přítomnosti drog Krevní transfuze: přítomnost povrchového antigenu hepatitidy B HBsAg) v darované krvi Imunologie: anti-dna protilátky u systémového lupus erythematosus (SLE).
11 RIA velmi citlivá metoda kompetitivní heterogenní metoda postup: Ab + Ag + Ag* v jedné směsi separace imunokomplexů měření aktivity, nepřímo úměrná množství Ag Různé techniky separace imunokomplexů solid phase radioimmunoassay sekundární precipitační protilátky elektroforéza ionexová chromatografie precipitace přidáním solí varianta se značenou protilátkou - IRMA
12 RIA Značení - 125I a 131I pro proteinové antigeny, tritium nebo 14 C pro nízkomolekulární látky. Radioaktivita se měří např. scintilací. Pro kvantifikaci nutná standardizace.
13 RIA Dva způsoby provedení 1. Smísí se Ag* (známá konc.) a Ag (neznámá konc.) a směs se inkubuje se specifickou protilátkou (volně v roztoku). Následuje přídavek sekundární protilátky, komplex Ab- Ag/Ag* je takto precipitován, separován, v precipitátu se měří radioaktivita. Primární protilátka může být imobilizována, např. na stěně zkumavky, pak se zkumavka po přídavku směsi a inkubaci pouze vymyje. 2. Protilátka reaguje nejdříve pouze se značeným antigenem a přídavky neznačeného antigenu o různé koncentraci různě vytěsňují Ag* z vazby. Ab-Ag* se tak doplňuje Ab-Ag.
14 Provedení RIA 1. způsob Separace Ab-Ag komplexu pomocí sekundární protilátky sraženina se separuje centrifugací
15 Imunoradiometrické stanovení (IRMA) Nekompetitivní metoda Použití dvou protilátek jedna značená ( 125 I), druhá neznačená Neznačená protilátka imobilizována na stěně zkumavky Veškerý stanovovaný antigen se vyváže na stěnu zkumavky Promytí zkumavek Volná značená protilátka/antigen zůstává v roztoku a je odmyta Měření radioaktivity ve zkumavce př. stanovení parathormonu, C-peptidu
16
17 Nevýhody RIA Náročnost a riziko spojené s prací s radioaktivním materiálem 125 I or 131 I emitují gamma záření, které vyžaduje speciální zařízení Lidské tělo má tendenci koncentrovat atomy jódu (radioaktivní i neradioaktivní) ve štítné žláze Gamma Counter
18 Enzymová Immunoassay (EIA) Značení antigenu/protilátky enzymem detekce: podle povahy substrátu (spektrofotometrie) Klasifikace: Heterogenní nebo homogenní Kompetitivní nebo nekompetitivní výhoda: Srovnatelná citlivost s RIA výhoda: Odpadá práce s radioaktivitou nevýhoda: nebezpečí inhibice enzymu některými látkami v biologickém materiálu (např. salicyláty)
19 Enzymatická detekce Používané substráty pro křenovou peroxidázu (horseradish peroxidase HRP) v Ab-konjugátech: Oxidace substrátu za přítomnosti peroxidu vodíku Chromogenní substráty ( barevný produkt - kolorimetrická detekce) 3, 3, 5, 5 -tetramethylbenzidin (TMB) 2,2 -azinobis(3-ethylbenzthiazolin-6-sulfonát) - ABTS o-fenylendiamin o-dianisidin o-toluidin Používané substráty pro alkalickou fosfatasu (AP) v Ab konjugátech: 4-nitrofenylfosfát LIA (Luminiscence Immunoassay) Chemiluminiscenční substráty (záblesky světla - detekce světla) SuperSignal ECL
20 Heterogenní enzymová assay ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) Nejběžnější imunoanalýza v biochemických a klinických laboratořích Komplex Ab-Ag je imobilizován na pevný povrch plastové mikrotitrační destičky Stanovení koncentrace antigenů nebo protilátek přímá úměra mezi koncentrací analytu a aktivitou enzymu Varianty: přímá ELISA nepřímá ELISA Kompetitivní ELISA Sendvičová ELISA
21 Nepřímá (nekompetitivní) ELISA Immobilizovaný antigen. Nejdříve se Ag inkubuje s primární protilátkou a její nadbytek se vymyje. Sekundární protilátka - konjugát se váže na primární Ab, nadbytek se opět vymyje. Pozitivní reakce - ve vzorku musí být přítomna primární Ab. Podmínkou spolehlivosti je, že sekundární Ab neváže imobilizovaný Ag ani nepřilne na stěny mikrotitrační destičky.
22 Enzyme-linked immunosorbent Principle of ELISA/RIA assay (ELISA) Potažení jamek antigenem 2. Přidání vzorku séra 3. Přídání enzymem značené protilátky (anti-human IgG) 4. Přidání substrátu 5. Odečtení barevné reakce
23 Sendvičová ELISA ( capture, sandwich ELISA) Varianta se záchytem antigenu. Protilátka vážící Ag je immobilizována (může to být i test jejího titru). Přídavek Ag, promytí. Přidá se značená protilátka, která váže zachycený Ag. Přísné podmínky značená Ab nesmí reagovat s immobilizovanou Ab. Značená Ab by měla být z jiného obratlovce (králík - koza) a reaguje s jiným epitopem Nesmí být nespecifická vazba s pevnou fází.
24 Sendvičová ELISA ( capture, sandwich ELISA) Varianta se záchytem protilátky. Immobilizovaná protilátka váže protilátky ze vzorku (např. lidské IgG, IgA nebo IgM ze zkoumaného séra pacientů). Po vymytí se přidá specifický antigen a nakonec anti-ag konjugát poskytující signál. Značená Ab nesmí reagovat s Ab ve vzorku bez přítomnosti Ag. Nesmí ani vytvářet nespecifickou vazbu s pevnou fází
25 ELISA - detekce Při sendvičové ELISE může být použito i sekundární protilátky
26 Kompetitivní ELISA U kompetitivní ELISy se zkoumané sérum inkubuje společně se značeným anti-ag konjugátem. Antigen je vázán na nosič. Kompetice o vazbu protilátky Nutná standardizace.
27 Kompetitivní ELISA varianta s immobilizovanou protilátkou Detekce antigenu v séru Nespecifické vazby protilátek mohou být odstraněny blokováním stěn ELISA destiček 0.1% roztokem BSA.
28 EMIT (Enzyme Multiplied Immunoassay Technique) homogenní EIA antigen je navázán na enzym lyzozym malátdehydrogenáza, glukóza-6-fosfátdehydrogenáza protilátky kompetují o antigeny po vzniku imunokomplexu dochází k měřitelné změně aktivity enzymu snížení obvyklé, blokáda vazebného místa, konf. změna zvýšení jen tyroxin, konformační změna použití stanovení koncentrace nízkomolekulárních látek (haptenů - léků a drog v tělních tekutinách) léky antibiotika, cytostatika, digoxin hormony T3, T4, kortizol Kompetitivní Homogenní Čím více antigenu tím více signálu
29 Avidin-biotin systém Zesilovací efekt: Avidin je glykoprotein (MW 68 Kd), který má vysokou afinitu k malé molekule (MW 24Kd) vitaminu biotinu, rozpustnému ve vodě. Biotin může být konjugován k celé řadě biomolekul, včetně protilátek, a to tak, že k jedné molekule protilátky může být připojeno mnoho molekul biotinu. Biotinylovaná protilátka potom může vázat několik molekul avidinu. Podobné vlastnosti jako avidin má také streptavidin (MW 60 Kd), izolovaný z bakterie Streptomyces avidinii.
30 Využití ELISA metod výzkum humánní a veterinární diagnostika Příklady : Screening dárců krve na virové infekce HIV-1 and HIV-2 (přítomnost anti-hiv protilátek) hepatitis C (přítomnost protilátek) hepatitis B (testování protilátek, antigenů)
31 Využití ELISA metod Hormonální hladiny HCG (test těhotenství) LH (určení ovluace) TSH, T3 and T4 (funkce štítné žlázy) hormony (e.g., anabolika, HGH) u sportovců Detekce infekcí Sexuálně přenosné (HIV, syphilis, and chlamydia) hepatitis B and C Toxoplasma gondii
32 Využití ELISA metod Detekce alergenů v jídle a prachu Stanovení revmatoidního faktoru, autoprotilátek u autoimunitních onemocnění (lupus erythematosus) Měření toxinů v kontaminovaném jídle Detekce drog kokain opiáty Δ-9-tetrahydrocannabinol
33 FIA (Fluoro Immuno Assay) metody využívají toho, že některé látky po ozáření absorbují energii a se zpožděním jí část vyzáří Stokesův posun = rozdíl mezi vlnovou délkou pohlceného a vyzářeného záření heterogenní i homogenní uspořádání kompetitivní i nekompetitivní techniky (obdoba EIA) měření fluorescence je silně ovlivňováno prostředím (interference některých látek v séru, fluorescence trvá řádově nanosekundy) citlivější než měření radioaktivity stanovení nízko- i vysokomolekulárních látek značka: konjugovaný nebo kovalentně vázaný fluorochrom fluorescein-isothiokyanát (FITC) umbeliferon cheláty vzácných zemin (Eu, Tb, Sm) detekce: fluorometricky
34 Princip fluorimetru Základní konstrukce fluorimetrů sestává ze zdroje zářivé energie, dvou optických separačních prvků a detektoru. Zdrojem záření jsou nejčastěji halogenové žárovky a xenonové výbojky. Světlo ze zdroje prochází buď interferenčním filtrem nebo mřížkovým monochromátorem. Dále prochází kyvetou s roztokem měřeného vzorku a emitovaná fluorescence se měří pod úhlem 90, kdy po průchodu filtrem nebo po difrakci reflexní mřížkou dopadá emitované světlo vybrané vlnové délky na fotonásobič. Fluorimetr obsahuje také pomocné optické prvky jako clonku, čočky a zrcadla; špičkový přístroj má navíc dělič paprsku přivádějící část světla k referenčnímu fotonásobiči.
35 Heterogenní FIA SepFIA = Separační FIA značený antigen IFMA = ImmunoFluoroMetric Assay značené protilátky MEIA = Microparticle Enzyme IA mikročástice s protilátkou, na které se váže Ag druhá protilátka s alkalickou fosfatázou po separaci se přidá substrát a fosfatáza štěpí substrát (4-metylumbelliferylfosfát) na produkt s vyšší fluorescencí
36 Homogenní FIA jednoduché uspořádání je málo citlivé a použitelné jen na hapteny modifikace zvyšují přesnost i citlivost DELFIA FPIA
37 Fluorescent Polarized Immunoassay (FPIA) homogenní, kompetitivní, značený Ag rovinně polarizované excitační záření malé molekuly v roztoku rychle rotují depolarizace záření po vazbě Ag* na protilátku se rotace zpomalí emitované fluorescenční záření zůstává polarizováno (polarizační filtry) stanovení malých molekul (např. nádorové markery, hormony, léky, vitamíny) nepřímá úměra mezi koncentrací analytu a naměřenou fluorescencí
38 LIA (CLIA) ChemiLumminiscence ImmunoAssay Chemiluminiscence se liší od ostatních luminiscenčních jevů tím, že excitace fotonů je vyvolána chemickou reakcí, která proběhne buď po nástřiku syntetizovaného činidla, nebo se k aktivaci činidel využívá oxidace na anodě (elektrochemiluminiscence). luminiscenční značka chemiluminofor luminol, izoluminol (aktivace přidáním H 2 O 2 ) luciferáza - luciferin citlivost je vyšší než u RIA modifikace: luminiscence zesílená enzymem (enzym AP) elektroluminiscence (ECLIA)
Jaromír Šrámek, 5108 1. LF UK 2006/07
Jaromír Šrámek, 5108 1. LF UK 2006/07 Obecné principy 2 Rozdělení metod imunoprecipitační metody při reakci vzniká precipitát např. aglutinační reakce, imunodifúze, imunoelektroforéza neprecipitační metody
Fluorescence (luminiscence)
Fluorescence (luminiscence) Patří mezi luminiscenční metody fotoluminiscence. Luminiscence efekt, kdy excitované molekuly či atomy vyzařují světlo při přechodu z excitovaného do základního stavu. Podle
IMUNOENZYMOVÉ METODY EIA
IMUNOENZYMOVÉ METODY EIA RIA zdravotní riziko krátký poločas rozpadů izotopů nákladné zařízení na měření radioaktivity EIA místo radioaktivity se měří enzymová aktivita není zdravotní riziko není nutné
RADIOIMUNOANALÝZA (RADIOIMMUNOASSAY) Převzato: sciencephoto.com Test krve hepatitis virus
RADIOIMUNOANALÝZA (RADIOIMMUNOASSAY) Převzato: sciencephoto.com Test krve hepatitis virus RADIOIMUNOANALÝZA Stanovení látek, proti kterým lze připravit protilátky ng (10-9 g) až pg (10-12 g) ve složitých
FIA fluorescenční imunoanalýza (fluorescence immuno-assay) CIA chemiluminiscenční imunoanalýza
FIA a CIA FIA fluorescenční imunoanalýza (fluorescence immuno-assay) CIA chemiluminiscenční imunoanalýza Značky pro antigeny a protilátky: radioizotop enzym fluorescenční sonda luminiscenční sonda kovové
Imunochemické metody. na principu vazby antigenu a protilátky
Imunochemické metody na principu vazby antigenu a protilátky ANTIGEN (Ag) specifická látka (struktura) vyvolávající imunitní reakci a schopná vazby na protilátku PROTILÁTKA (Ab antibody) molekula bílkoviny
Metody testování humorální imunity
Metody testování humorální imunity Co je to humorální imunita? Humorální = látková Buněčné produkty Nespecifická imunita příklady:» Lysozym v slinách, slzách» Sérové proteiny (proteiny akutní fáze)» Komplementový
Metody testování humorální imunity
Metody testování humorální imunity Co je to humorální imunita? Humorální = látková Buněčné produkty Nespecifická imunita příklady:» Lysozym v slinách, slzách» Sérové proteiny (proteiny akutní fáze)» Komplementový
Precipitační a aglutinační reakce
Základy imunologických metod: Precipitační a aglutinační reakce Ústav imunologie 2.LF UK a FN Motol Metody, ve kterých se používají protilátky Neznačený antigen/protilátka Precipitace Aglutinace Značený
DELFIA Dissociation-Enhanced Lanthanide Fluorescent ImmunoAssay
DELFIA Dissociation-Enhanced Lanthanide Fluorescent ImmunoAssay Fluoroimunoanalytická metoda vyvinutá finskou firmou Wallac Oy (LKB Pharmacia), velmi citlivá a specifická metoda pro stanovení nízko- i
ELISA ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY. Tatiana Košťálová, Tereza Leštinová
ELISA ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY Tatiana Košťálová, Tereza Leštinová Parazitologické laboratorní techniky, 26. listopadu 2014 Průkaz protilátek proti Toxoplasma gondii Průkaz protilátek proti Toxoplasma
P. Schneiderka, Ústav patologické fyziologie LFUP a OKB FN Olomouc
Verze 23.10.2012 P. Schneiderka, Ústav patologické fyziologie LFUP a OKB FN Olomouc Imunoanalytické metody Úvod Klasické imunologické metody, jako jsou imunoprecipitace, imunodifúze, imunoelektroforéza
Imunohistochemické metody
Imunohistochemické metody -stanovení Ag či Ab Reakce: Ag + Ab IK- imunokomplex - jeden z reaktantů nese značku: -radioaktivní (Ria) -fluorescenční (Fia) -enzymatickou (Eia) -a další EIA, IMUNOENZYMOVÉ
Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti IMUNOCHEMICKÉ METODY
Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti IMUNOCHEMICKÉ METODY ZÁKLADNÍ TERMÍNY antigen jakákoli látka, se kterou specificky reaguje protilátka imunogen látka schopná vyvolat v
Imunochemie. Doc. MUDr. Petr Schneiderka, CSc. Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem České republiky
Imunochemie Doc. MUDr. Petr Schneiderka, CSc. Tvorba a ověření e-learningového prostředí pro integraci výuky preklinických a klinických předmětů na LF UP a FZV UP Reg. č.: CZ.1.07/2.2.00/15.0313 Úvod do
Rozdělení imunologických laboratorních metod
Rozdělení imunologických laboratorních metod Aglutinace Mgr. Petr Bejdák Ústav klinické imunologie a alergologie Fakultní nemocnice u sv. Anny a Lékařská fakulta MU Rozdělení imunologických laboratorních
Radioimunolýza (RIA)
Radioimunolýza (RIA) Doc. MUDr. Petr Schneiderka, CSc. Tvorba a ověření e-learningového prostředí pro integraci výuky preklinických a klinických předmětů na LF UP a FZV UP Reg. č.: CZ.1.07/2.2.00/15.0313
Precipitace, radioimunodifúze (RID), nefelometrie, turbidimetrie
Precipitace, radioimunodifúze (RID), nefelometrie, turbidimetrie RNDr. Jana Nechvátalová, Ph.D. Ústav klinické imunologie a alergologie FN u sv. Anny v Brně Reakce Ag - Ab primární fáze rychlá; vznik vazby
Luminiscenční analýza Použití luminiscenční spektroskopie v analytické chemii
Luminiscenční analýza Použití luminiscenční spektroskopie v analytické chemii Kvantitativní analýza: F = k φ Φ o Vysoká citlivost metody: 2.3 c l ε použití laserů odezva na relativně malé změny v okolí
Analýza proteinů. Stanovení bílkovin. Elektroforéza plazmatických bílkovin
Analýza proteinů udržování onkotického tlaku transport minerálů, hormonů, lipidů, katabolitů (prealbumin, Alb, ceruloplasmin, transferin, apoproteiny ) obrana proti infekci (imunoglobuliny) hemokoagulace
Vybrané imunochemické metody
ÚSTAV LÉKAŘSKÉ BIOCHEMIE A LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY 1. LF UK Vybrané imunochemické metody Praktické cvičení z lékařské biochemie Všeobecné lékařství Lenka Fialová 2013 Úloha 1 Imunoprecipitační křivka lidského
METODY STUDIA PROTEINŮ
METODY STUDIA PROTEINŮ Mgr. Vlasta Němcová vlasta.furstova@tiscali.cz OBSAH PŘEDNÁŠKY 1) Stanovení koncentrace proteinu 2) Stanovení AMK sekvence proteinu Hmotnostní spektrometrie Edmanovo odbourávání
Precipitace, radioimunodifúze (RID), nefelometrie, turbidimetrie
Precipitace, radioimunodifúze (RID), nefelometrie, turbidimetrie Mgr. Jana Nechvátalová Ústav klinické imunologie a alergologie FN u sv. Anny Ag - Ab hypervariabilní oblasti - antigen vazebná aktivita
Aglutinace Mgr. Jana Nechvátalová
Aglutinace Mgr. Jana Nechvátalová Ústav klinické imunologie a alergologie FN u sv. Anny v Brně Aglutinace x precipitace Aglutinace Ag + Ab Ag-Ab aglutinogen aglutinin aglutinát makromolekulární korpuskulární
Imunochemické techniky. Miroslava Beňovská
Imunochemické techniky Miroslava Beňovská Antigeny Látky schopné vyvolat v živém organismu tvorbu specifických protilátek Imunitní odpověď může vyvolat pouze kompletní antigen - imunogen Nekompletní antigen
Automatické imunochemické analyzátory
Automatické imunochemické analyzátory Spojení luminiscenčních technik a imunoanalýzy představují automatické imunochemické analyzátory Na nich většina imunoanalytických metod v laboratorní medicíně Uplatnění
Serologické vyšetřovací metody
Serologické vyšetřovací metody Serologické reakce Přímý průkaz Nepřímý průkaz průkaz antigenu průkaz nukleové kyseliny průkaz protilátek Nepřímý průkaz = průkaz specifických protilátek neboli průkaz serologický
IMUNOCHEMICKÉ METODY
IMUNOCHMICKÉ MTODY Antigeny Protilátky Imunochemické metody Kvantitativní imunoprecipitační křivka Imunoprecipitační metody Imunoanalýza Využití imunochemických metod v rychlé diagnostice Praktické úlohy
ZÁKLADY OBECNÉ A KLINICKÉ BIOCHEMIE
ZÁKLADY OBECNÉ A KLINICKÉ BIOCHEMIE 2004 Technologie kvantitativních metod Petr Štern kapitola ve skriptech - 4.2.2 Optické zdroje U V V I S I R Spektrální distribuční křivky W žárovky b.t. W ~ 3600 C
Luminiscence. emise světla látkou, která je způsobená: světlem (fotoluminiscence) fluorescence, fosforescence. chemicky (chemiluminiscence)
Luminiscence Luminiscence emise světla látkou, která je způsobená: světlem (fotoluminiscence) fluorescence, fosforescence chemicky (chemiluminiscence) teplem (termoluminiscence) zvukem (sonoluminiscence)
Obsah. Sarkosin Charakterizace slepičích protilátek proti sarkosinu. Dagmar Uhlířová
Investice do rozvoje vzdělávání Charakterizace slepičích protilátek proti sarkosinu Dagmar Uhlířová 7.2.2014 Reg.č.projektu: CZ.1.07/2.4.00/31.0023 NanoBioMetalNet Název projektu: Partnerská síť centra
Luminiscence. Luminiscence. Fluorescence. emise světla látkou, která je způsobená: světlem (fotoluminiscence) chemicky (chemiluminiscence)
Luminiscence Luminiscence emise světla látkou, která je způsobená: světlem (fotoluminiscence) fluorescence, fosforescence chemicky (chemiluminiscence) teplem (termoluminiscence) zvukem (sonoluminiscence)
ZÁKLADNÍ DĚLENÍ IMUNOLOGICKÝCH LABORATORNÍCH VYŠETŘENÍ
Aglutinace přímá a nepřímá, Coombsův test, antiglobulinová séra Precipitační reakce v roztoku a v gelu Imunoelektroforéza, imunoelektrofixace, Western-blot Imunofluorescence ELISA, RIA, LIA Praktikum č.
IMUNOFLUORESCENCE. Mgr. Petr Bejdák Ústav klinické imunologie a alergologie Fakultní nemocnice u sv. Anny a Lékařská fakulta MU
Mgr. Petr Bejdák Ústav klinické imunologie a alergologie Fakultní nemocnice u sv. Anny a Lékařská fakulta MU Luminiscence jev, při kterém látka emituje záření po absorpci excitačního záření (fotoluminiscence)
Antiparalelní beta list
Antiparalelní beta list Paralelní beta list Schematický model beta listu (stužkový) Proteiny obsahují zpětné kličky (beta kličky nebo vlásenkové ohyby). Obvykle je CO skupina i-té aminokyseliny vázána
Příklady biochemických metod turbidimetrie, nefelometrie. Miroslav Průcha
Příklady biochemických metod turbidimetrie, nefelometrie Miroslav Průcha Příklady optických technik Atomová absorpční spektrofotometrie Absorpční spektrofotometrie Absorpční spektrofotometrie kinetická
Základy imunologických metod: interakce antigen-protilátka využití v laboratorních metodách
Základy imunologických metod: interakce antigen-protilátka využití v laboratorních metodách Imunoglobuliny membránově vázané a solubilní receptory Epitopy Antigen = částice rozpoznávaná protilátkou Epitop
LUMINISCENČNÍ metody. Petr Breinek
LUMINISCENČNÍ metody Petr Breinek Luminiscence _ 2013 Bioluminiscence v přírodě Světlušky, medúzy, dřevokazné houby, hlubokomořské ryby, světluška Světluška princip: oxidace luciferinu Luciferin + ATP
IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE CYTOMEGALOVIROVÉ INFEKCE
INFEKČNÍ SÉROLOGIE Virologie IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE CYTOMEGALOVIROVÉ INFEKCE Cytomegalovirus ELISA soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy IgA, IgG a IgM v lidském
Optické metody. Denzitometrie Vertikální fotometrie Reflexní fotometrie
Optické metody Denzitometrie Vertikální fotometrie Reflexní fotometrie Denzitometrie Optická metoda, která se zabývá měřením optické hustoty Reflexní denzitometrie v odraženém světle přímá denzitometrie
Fluorescenční mikroskopie
Fluorescenční mikroskopie Pokročilé biofyzikální metody v experimentální biologii Ctirad Hofr 1 VYUŽITÍ FLUORESCENCE, PŘÍMÁ FLUORESCENCE, PŘÍMÁ A NEPŘÍMA IMUNOFLUORESCENCE, BIOTIN-AVIDINOVÁ METODA IMUNOFLUORESCENCE
Afinitní kapilární elektroforéza
Pražské analytické centrum inovací Projekt CZ.04.3.07/4.2.01.1/0002 spolufinancovaný ESF a Státním rozpočtem ČR Afinitní kapilární elektroforéza Věra Pacáková a Tereza Vařilová PřF UK Praha Obsah 1. Úvod
ZÁKLADNÍ ČÁSTI SPEKTRÁLNÍCH PŘÍSTROJŮ
ZÁKLADNÍ ČÁSTI SPEKTRÁLNÍCH PŘÍSTROJŮ (c) -2008, ACH/IM BLOKOVÉ SCHÉMA: (a) emisní metody (b) absorpční metody (c) luminiscenční metody U (b) monochromátor často umístěn před kyvetou se vzorkem. Části
Optické metody Absorpční fotometrie
Optické metody Absorpční fotometrie Kvantitativní hodnocení změny intenzity záření po průchodu analytickým prostředím Zákon Lambert-Beerův: log Φ o = A = a. c. l Φ Φ o = světlo vstupující do měřeného prostředí
IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE TOXOPLAZMÓZY
INFEKČNÍ SÉROLOGIE Parazitologie IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE TOXOPLAZMÓZY Toxoplasma gondii ELISA a IMUNOBLOT soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy IgA, IgE, IgG a
DELFIA. RNDr. Alena Mikušková. FN Brno Pracoviště dětské medicíny, OKB
DELFIA RNDr. Alena Mikušková FN Brno Pracoviště dětské medicíny, OKB DELFIA Dissociation-Enhanced Lanthanide Fluorescent ImmunoAssay fluoroimunoanalytická metoda firma Wallac Oy - LKB Pharmacia (fin.)
Objednací číslo Určení Ig-třída Substrát Formát EI 2192-9601 M Chlamydia pneumoniae IgM Ag-potažené mikrotitrační jamky
Protilátky proti Chlamydia pneumoniae (IgM) Návod na použití ELISA testu Objednací číslo Určení Ig-třída Substrát Formát EI 2192-9601 M Chlamydia pneumoniae IgM Ag-potažené mikrotitrační jamky 96 x 01
Využití metody ELFA při stanovení bakterií Salmonella spp. v potravinách
Využití metody ELFA při stanovení bakterií Salmonella spp. v potravinách Chemie a mikrobiologie potravin, III. ročník Ústav hygieny a technologie mléka, FVHE, VFU Brno Říjen 2013 Technika ELFA Enzyme Linked
IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE SYSTÉMOVÝCH AUTOIMUNITNÍCH ONEMOCNĚNÍ
IMUNOLOGIE Autoimunita IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE SYSTÉMOVÝCH AUTOIMUNITNÍCH ONEMOCNĚNÍ Antinukleární protilátky (ANA) Protilátky proti extrahovatelným nukleárním antigenům (ENA) a soupravy
CA15-3 IRMA Souprava CA15-3 IRMA umožňuje přímé in-vitro kvantitativní stanovení s tumorem asociovaného antigenu CA15-3 v lidském séru
Informace o výrobku Informace o ostatních produktech jsou dostupné na www.demeditec.com Návod k použití CA15-3 IRMA Souprava CA15-3 IRMA umožňuje přímé in-vitro kvantitativní stanovení s tumorem asociovaného
IMUNOCYTOCHEMICKÁ METODA JEJÍ PRINCIP A VYUŽITÍ V LABORATOŘI
IMUNOCYTOCHEMICKÁ METODA JEJÍ PRINCIP A VYUŽITÍ V LABORATOŘI Radka Závodská, PedF JU v Českých Budějovicích Imunocytochemická metoda - použítí protilátky k detekci antigenu v buňkách (Imunohistochemie-
Antinukleární protilátky (ANA) Protilátky proti extrahovatelným nukleárním antigenům (ENA)
Antinukleární protilátky (ANA) Protilátky proti extrahovatelným nukleárním antigenům (ENA) Imunoenzymatické soupravy k diagnostice systémových autoimunitních onemocnění ELISA a IMUNOBLOT soupravy jsou
Biochemická laboratoř
Biochemická laboratoř školní rok 2013/14 Ing. Jarmila Krotká 3. LF UK, Klinická biochemie, bakalářské studium Hlavní úkol biochemické laboratoře Na základě požadavku lékaře vydat co nejdříve správný výsledek
Základy imunologických metod: interakce antigen-protilátka využití v laboratorních metodách
Základy imunologických metod: interakce antigen-protilátka využití v laboratorních metodách Obecné principy reakce antigenprotilátka 1929 Kendall a Heidelberg Precipitační reakce Oblast nadbytku protilátky
Principy imunoanalytických metod pro mediky
INVESTICE DO ROZVOJE VZDĚLÁVÁNÍ Principy imunoanalytických metod pro mediky Kolektiv autorů Editoři: Marie Karlíková, Ondřej Topolčan Předmluva Imunoanalytické metody jsou nedílnou součástí metod laboratorní
Toxoplasma gondii. Imunoenzymatické soupravy k diagnostice toxoplazmózy
Toxoplasma gondii Imunoenzymatické soupravy k diagnostice toxoplazmózy ELISA a IMUNOBLOT soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy IgA, IgE, IgG a IgM v lidském séru nebo plazmě ÚVOD
Katedra laboratorních metod LF MU Mgr. Jana Gottwaldová
Optické metodyturbidimetrie, nefelometrie Katedra laboratorních metod LF MU Mgr. Jana Gottwaldová Turbidimetrie a nefelometrie Patří mezi běžné analytické optické metody v klinické biochemii se používají
Objednací číslo Určení Třída IgG Substrát Formát EI G Parainfluenza viry typu 1. Ag-potažené mikrotitrační jamky
Protilátky proti virům parainfluenzy 1 (IgG) Návod na použití ELISA testu Objednací číslo Určení Třída IgG Substrát Formát EI 2721-9601 G Parainfluenza viry typu 1 IgG Ag-potažené mikrotitrační jamky 96
Kolektiv autorů. Editoři: Marie Karlíková, Ondřej Topolčan. Protilátka a antigen. Zdroj:
Imunoanalytické metody a jejich využití v biomedicínském výzkumu a klinické praxi Kolektiv autorů Editoři: Marie Karlíková, Ondřej Topolčan Protilátka a antigen. Zdroj: www.scienceclarified.com 2 Autoři
nano.tul.cz Inovace a rozvoj studia nanomateriálů na TUL
Inovace a rozvoj studia nanomateriálů na TUL nano.tul.cz Tyto materiály byly vytvořeny v rámci projektu ESF OP VK: Inovace a rozvoj studia nanomateriálů na Technické univerzitě v Liberci Experimentální
PŘÍPRAVA PACIENTA : Speciální příprava pacienta ani dieta není nutná, pro obvyklé vyšetřování je vhodný odběr ráno, nalačno.
SEROLOGIE HEPATITID NÁZEV : Hepatitida A HAV-IgM POUŽITÍ : kvalitativní detekce protilátek proti viru hepatitidy A třídy IgM v lidském séru a plazmě při diagnostice akutní nebo nedávno proběhlé virové
Automatické imunochemické analyzátory
Automatické imunochemické analyzátory Automatizace koncem 80. let Uplatnění pro analyty s nízkou koncentrací (nmol/l, pmol/l) Využití reakce antigen protilátka Značená protilátka (případně antigen) Většinou
Novinky VIDIA v di agnost ce Lymeské borreliózy
Novinky VIDIA v diagnostice i Lymeské borreliózy Marie Šteinbachová ELISA testy VIDIA pro diagnostiku LB testy III. generace vysoce specifické rekombinantní antigeny (IgG verze obsahuje VlsE) vysoká specifita
METODY VYŠETŘOVÁNÍ BUNĚČNÉ IMUNITY. Veřejné zdravotnictví
METODY VYŠETŘOVÁNÍ BUNĚČNÉ IMUNITY Veřejné zdravotnictví METODY VYŠETŘOVÁNÍ BUNĚČNÉ IMUNITY průtoková cytometrie metody stanovení funkční aktivity lymfocytů testy fagocytárních funkcí Průtoková cytometrie
Stanovení hormonů. Miroslava Beňovská
Stanovení hormonů Miroslava Beňovská Hormony Látky specificky reagující na metabol. děje v organismu Většinou tvořeny v endokrinních žlázách Krví přenášejí informace do buněk cílových orgánů po vazbě na
RIA instrumentace. Jana Číhalová OKB FN Brno
RIA instrumentace Jana Číhalová OKB FN Brno jcihalova@email.cz 1 RIA instrumentace Radioizotopové metody Radioindikátorové značenky- 125 I Detekce ionizujícího záření Popis přístrojů v klin.laboratořích
laboratorní technologie
Evaluace imunoanalytického systému Olympus AU3000i Firma OLYMPUS uvedla na trh imunoanalytický systém AU3000i. Přístroj pracuje na principu heterogenní imunoanalýzy s technologií paramagnetických mikročástic
IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE INFEKCE HELICOBACTER PYLORI
INFEKČNÍ SÉROLOGIE Bakteriologie IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE INFEKCE HELICOBACTER PYLORI Helicobacter pylori ELISA a IMUNOBLOT soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy
Principy a instrumentace
Průtoková cytometrie Principy a instrumentace Ing. Antonín Hlaváček Úvod Průtoková cytometrie je moderní laboratorní metoda měření a analýza fyzikálních -chemických vlastností buňky během průchodu laserovým
IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE INFEKČNÍ MONONUKLEÓZY
INFEKČNÍ SÉROLOGIE Virologie IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE INFEKČNÍ MONONUKLEÓZY EBV VCA EBV EBNA-1 EBV EA-D ELISA soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy IgA, IgG a IgM
Imunoblot, imunoelektroforéza
Imunoblot, imunoelektroforéza Jana Švarcová. Plazmatické proteiny. http://slideplayer.cz/slide/2345714/ Jana Švarcová. Plazmatické proteiny. http://slideplayer.cz/slide/2345714/ Jana Švarcová. Plazmatické
Imunologické metody imunitní odpovědí humorální typ protilátek odpověď na buněčné úrovni plazmové buňky Antigenní determinant neboli epitop
Imunologické metody Obratlovci vystavení působení cizorodých molekul a organismů reagují imunitní odpovědí, jejímž cílem je eliminace jejich škodlivého vlivu. Imunitní odpověď je dvojího typu, humorální
Objednací číslo Protilátky proti Třída Ig Substrát Formát EI 2691-9601 G Chřipka A IgG Ag-potažené mikrotitrační jamky
Protilátky třídy IgG proti chřipce typu A Návod na použití ELISA testu Objednací číslo Protilátky proti Třída Ig Substrát Formát EI 2691-9601 G Chřipka A IgG Ag-potažené mikrotitrační jamky 96 x 01 (96).
Přehled histologických barvení včetně imunohistochemie
Přehled histologických barvení včetně imunohistochemie Výukový materiál pro praktická cvičení z histologie Anna Malečková Vytvořeno v rámci projektu OP VVV Zvýšení kvality vzdělávání na UK a jeho relevance
Treponema pallidum. Imunoenzymatické soupravy k diagnostice syfilis
Treponema pallidum Imunoenzymatické soupravy k diagnostice ELISA a IMUNOBLOT soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy a v lidském séru nebo plazmě ÚVOD Syfilis (lues) je sexuálně
Zoologická mikrotechnika - FLUORESCENČNÍ MIKROSKOPIE
Fluorescence Fluorescence je jev, kdy látka absorbuje ultrafialové záření nebo viditelné světlo s krátkou vlnovou délkou a emituje viditelné světlo s delší vlnovou délkou než má světlo absorbované Emitace
Základní pojmy. Antigen specifická povrchová struktura schopná vyvolat imunitní reakci
Sérologie Prezentace pro obor: Všeobecná sestra Jan Smíšek ÚLM. LF UK specifická povrchová struktura schopná vyvolat imunitní reakci Často proteinová, ale i polysacharidová, glykoproteinová, lipoproteinová
Chemické senzory Principy senzorů Elektrochemické senzory Gravimetrické senzory Teplotní senzory Optické senzory Fluorescenční senzory Gravimetrické chemické senzory senzory - ovlivňov ování tuhosti pevného
Western blotting. 10% APS 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl
Western blotting 1. Příprava gelu složení aparatury hustotu gelu volit podle velikosti proteinů příprava rozdělovacího gelu: 10% 12% počet gelů 1 2 4 1 2 4 objem 6 ml 12 ml 24 ml 6 ml 12 ml 24 ml 40% akrylamid
Návod a protokol k praktickým cvičením z lékařské biochemie
Datum... Jméno... Kroužek... Návod a protokol k praktickým cvičením z lékařské biochemie Téma: Vybrané imunochemické metody 1. Úloha Imunoprecipitační křivka lidského albuminu a stanovení Princip: koncentrace
ení s chemickými látkami. l rní optiky
OPTICKÉ SENSORY Základem je interakce světeln telného zářenz ení s chemickými látkami. l Při i konstrukci katalytických biosensorů se používaj vají: optické techniky: absorbance fluorescence luminiscence
Speciální koagulační vyšetření II
Speciální koagulační vyšetření II Přirozené inhibitory Antitrombin Systém PC/PS (ProC Global) Protein C Protein S APC-rezistence Antitrombin Vyšetření funkční aktivity fotometricky (IIa, Xa) Vyšetření
SPEKTROSKOPICKÉ VLASTNOSTI LÁTEK (ZÁKLADY SPEKTROSKOPIE)
SPEKTROSKOPICKÉ VLASTNOSTI LÁTEK (ZÁKLADY SPEKTROSKOPIE) Elektromagnetické vlnění SVĚTLO Charakterizace záření Vlnová délka - (λ) : jednotky: m (obvykle nm) λ Souvisí s povahou fotonu Charakterizace záření
CEA ELISA test pro kvantitativní stanovení karcinoembryonického antigenu (CEA) v lidském séru
CEA ELISA test pro kvantitativní stanovení karcinoembryonického antigenu (CEA) v lidském séru Obj. číslo: 52020 96 testů kompletní souprava Účel použití Karcinoembryonický antigen (CEA) je glykoprotein
Protilátky proti Helicobacter pylori (IgG) Návod na použití ELISA testu
Protilátky proti Helicobacter pylori (IgG) Návod na použití ELISA testu Objednací číslo Určení Ig-třída Substrát Formát EI 2080-9601 G Helicobacter pylori IgG Ag-potažené mikrotitrační jamky 96 x 01 (96)
IZOLACE, SEPARACE A DETEKCE PROTEINŮ I. Vlasta Němcová, Michael Jelínek, Jan Šrámek
IZOLACE, SEPARACE A DETEKCE PROTEINŮ I Vlasta Němcová, Michael Jelínek, Jan Šrámek Studium aktinu, mikrofilamentární složky cytoskeletu pomocí dvou metod: detekce přímo v buňkách - fluorescenční barvení
K čemu slouží záznam provedených výkonů logbook?
K čemu slouží záznam provedených výkonů logbook? Předkládaný Záznam provedených výkonů ve specializačním vzdělávání neboli logbook je součástí vzdělávacího programu a slouží k evidenci průběhu odborné
Objednací číslo Určení Ig-třída Substrát Formát EI M CMV (Cytomegalovirus)
Protilátky proti CMV (IgM) Návod na použití ELISA testu Objednací číslo Určení Ig-třída Substrát Formát EI 2570-9601 M CMV (Cytomegalovirus) IgM Ag-potažené mikrotitrační jamky 96 x 01 (96) Princip testu:
IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE KLÍŠŤOVÉ ENCEFALITIDY
INFEKČNÍ SÉROLOGIE Virologie IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE KLÍŠŤOVÉ ENCEFALITIDY Virus klíšťové encefalitidy (TBEV) ELISA soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy a IgM
FLUORIMETRICKÉ STANOVENÍ FLUORESCEINU
FLUORIMETRICKÉ STANOVENÍ FLUORESCEINU návod vznikl jako součást bakalářské práce Martiny Vidrmanové Fluorimetrie s využitím spektrofotometru SpectroVis Plus firmy Vernier (http://is.muni.cz/th/268973/prif_b/bakalarska_prace.pdf)
HbA1c. Axis - Shield. Společnost je zapsána v obchodním rejstříku Městského soudu v Praze, odd. C vložka 1299
Lékařská technika a speciální zdravotní materiál Společnost je zapsána v obchodním rejstříku Městského soudu v Praze, odd. C vložka 1299 Obchodní 110, 251 70 Praha Čestlice Tel. +420 296 328 300 Fax. +420
- Rayleighův rozptyl turbidimetrie, nefelometrie - Ramanův rozptyl. - fluorescence - fosforescence
ROZPTYLOVÉ a EMISNÍ metody - Rayleighův rozptyl turbidimetrie, nefelometrie - Ramanův rozptyl - fluorescence - fosforescence Ramanova spektroskopie Každá čára Ramanova spektra je svými vlastnostmi závislá
Molekulová spektroskopie 1. Chemická vazba, UV/VIS
Molekulová spektroskopie 1 Chemická vazba, UV/VIS 1 Chemická vazba Silová interakce mezi dvěma atomy. Chemické vazby jsou soudržné síly působící mezi jednotlivými atomy nebo ionty v molekulách. Chemická
Speciální koagulační vyšetření II
Speciální koagulační vyšetření II Testy k diagnostice VWF Screeningové testy doba krvácení PFA APTT Specifické testy F VIII:C (funkční aktivita) funkční aktivita VWF (VWF:RCo, VWF:Ac) antigen VWF (LIA,
ABSORPČNÍ A EMISNÍ SPEKTRÁLNÍ METODY
ABSORPČNÍ A EMISNÍ SPEKTRÁLNÍ METODY 1 Fyzikální základy spektrálních metod Monochromatický zářivý tok 0 (W, rozměr m 2.kg.s -3 ): Absorbován ABS Propuštěn Odražen zpět r Rozptýlen s Bilance toků 0 = +
ProGastrin-Releasing Peptide (ProGRP) u nemocných s malobuněčným karcinomem plic
ProGastrin-Releasing Peptide (ProGRP) u nemocných s malobuněčným karcinomem plic FONS Symposium klinické biochemie Pardubice, 23.9. 25.9.202 M. Tomíšková, J. Skřičková, I. Klabenešová, M. Dastych 2 Klinika
ÚVOD DO IMUNOCHEMICKÝCH METOD
ÚVOD DO IMUNOCHEMICKÝCH METOD Imunochemické metody antigen + protilátka biospecifická haptén vazba komplement protein A + protilátka nespecifická vazba Fc receptory Význam imunochemických metod důkaz přítomnosti
Rentgenová spektrální analýza Elektromagnetické záření s vlnovou délkou 10-2 až 10 nm
Rtg. záření: Rentgenová spektrální analýza Elektromagnetické záření s vlnovou délkou 10-2 až 10 nm Vznik rtg. záření: 1. Rtg. záření se spojitým spektrem vzniká při prudkém zabrzdění urychlených elektronů.
Virus klíšťové encefalitidy (TBEV)
Virus klíšťové encefalitidy (TBEV) Imunoenzymatické soupravy k diagnostice klíšťové encefalitidy ELISA soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy a IgM v lidském séru, plazmě nebo
PSA ELISA test pro kvantitativní stanovení celkového prostatického specifického antigenu (PSA) v lidském séru
PSA ELISA test pro kvantitativní stanovení celkového prostatického specifického antigenu (PSA) v lidském séru Obj. číslo: 52030 96 testů kompletní souprava Účel použití Prostatický specifický antigen (PSA)