Příloha 2. Návod pro laboratorní úlohu



Podobné dokumenty
Příloha 1. Návod pro laboratorní úlohu

VYSOKÁ ŠKOLA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ V PRAZE Ústav chemie a analýzy potravin Technická 5, Praha 6 tel./fax: , tel ,

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU C METODOU HPLC

Metodický postup pro stanovení PAU v půdách volných hracích ploch metodou HPLC a GC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - ZEARALENON

P. Martinková, D. Pospíchalová, R. Jobánek, M. Jokešová. Stanovení perfluorovaných organických látek v elektroodpadech

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MADURAMICINU A SEMDURAMICINU METODOU HPLC

Stanovení cholesterolu ve vaječném žloutku a mléce kapilární elektroforézou

VYUŽITÍ TEPELNÉHO ZMLŽOVAČE V AAS

L 54/116 CS Úřední věstník Evropské unie

Příloha 1: Série chromatogramů vybraných standardů polyfenolických látek zaznamenány pomocí metody HPLC s detekcí UV-DAD.

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MELAMINU A KYSELINY KYANUROVÉ METODOU LC-MS

STANOVENÍ TĚKAVÝCH HALOGENOVÝCH UHLOVODÍKŮ VE VODNÉM PROSTŘEDÍ METODOU PLYNOVÉ CHROMATOGRAFIE S DETEKCÍ NA PRINCIPU ELEKTRONOVÉHO ZÁCHYTU (GC/ECD)

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU SEMDURAMICINU METODOU HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU DEKOCHINÁTU METODOU HPLC

Stanovení sacharidů ve vybraných přírodních matricích pomocí kapalinové chromatografie s odpařovacím detektorem rozptylu světla (UHPLC-ELSD)

VITAMÍNY ROZPUSTNÉ V TUCÍCH. Retinoidy (vitamin A) A, E a D v nezmýdelnitelném podílu, K se rozkládá

CS Úřední věstník Evropské unie L 54/85

Analýza kofeinu v kávě pomocí kapalinové chromatografie

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - aflatoxin B1, B2, G1 a G2

Stanovení chmelových silic metodou SPME GC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv

Acta fytotechnica et zootechnica Mimoriadne číslo Nitra, Slovaca Universitas Agriculturae Nitriae, 2009, s

LABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Vydání 1 STANOVENÍ OBSAHU MADURAMICINU METODOU HPLC

CS Úřední věstník Evropské unie L 54/59

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU LC/MS

Obr. 1. Struktura glukosaminu.

CRH/NPU I - Systém pro ultraúčinnou kapalinovou chromatografii (UHPLC) ve spojení s tandemovým hmotnostním spektrometrem (MS/MS)

Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU A A VITAMÍNU E METODOU HPLC

SKUPINOVÁ ANALÝZA MOTOROVÝCH NAFT

Problémy u kapalinové chromatografie

L 54/80 CS Úřední věstník Evropské unie

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - FUMONISIN B 1 A B 2

Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253

Analýza směsí, kvantitativní NMR spektroskopie a využití NMR spektroskopie ve forenzní analýze

Standardní operační postup

kakao a jeho slo ení okoláda: výroba, slo ení, jakostní po adavky analýza kakaa analýza okolády

MINIATURIZACE PRŮTOKOVÝCH ELEKTROCHEMICKÝCH CEL PRO GENEROVÁNÍ TĚKAVÝCH SLOUČENIN. Jakub Hraníček

13/sv. 6 CS (80/891/EHS)

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU NEPOVOLENÝCH DOPLŇKOVÝCH LÁTEK METODOU LC-MS

Inovace bakalářského studijního oboru Aplikovaná chemie CZ.1.07/2.2.00/

Sekvenční injekční analýza laboratoř na ventilu (SIA-LOV) (Stanovení obsahu heparinu v injekčním roztoku)

VYUŽITÍ BEZKONTAKTNÍ VODIVOSTNÍ DETEKCE PRO HPLC SEPARACI POLYKARBOXYLÁTOVÝCH DERIVÁTŮ CYKLENU. Anna Hamplová

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Vydání 1 STANOVENÍ OBSAHU KOKCIDIOSTATIK METODOU LC-MS

CS Úřední věstník Evropské unie L 54/89

LABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ

Konfirmace HPLC systému

Uvod. Chem. Listy 91, (1997) STANOVENI 1-HYDROXYPYRENU VYSOKOÚČINNOU KAPALINOVOU CHROMATOGRAFIÍ S ELEKTROCHEMICKOU DETEKCÍ

LABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VÁPNÍKU, DRASLÍKU, HOŘČÍKU, SODÍKU A FOSFORU METODOU ICP-OES

ÚSTAV CHEMIE A ANALÝZY POTRAVIN

2. Stanovení 5-hydroxymethylfurfuralu v medu pomocí kapilární elektroforézy

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Stanovení obsahu celkového a volného tryptofanu metodou HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MASTNÝCH KYSELIN V OLEJÍCH A TUCÍCH METODOU GC

HPLC-ED AMINOBIFENYLŮ POMOCÍ BOREM DOPOVANÉ DIAMANTOVÉ FILMOVÉ ELEKTRODY

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Vydání 1 STANOVENÍ OBSAHU KOKCIDIOSTATIK METODOU LC-MS

Úloha: Stanovení pálivosti paprik metodou kapalinové chromatografie

L 54/76 CS Úřední věstník Evropské unie

STANOVENÍ AMINOKYSELINOVÉHO SLOŽENÍ BÍLKOVIN. Postup stanovení aminokyselinového složení

Ústav molekulární a translační medicíny LF UP - HPLC

Danica Pospíchalová. Stanovení nelegálních drog a jejich metabolitů v odpadních vodách

LABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ

Univerzita Karlova v Praze Farmaceutická Fakulta v Hradci Králové Katedra analytické chemie

Problémy v kapalinové chromatografii. Troubleshooting

STANOVENÍ KOFEINU V NÁPOJÍCH METODOU HPLC

Aplikace elektromigračních technik

LABORATOŘE OBORU I ÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE

Repetitorium chemie IX (2016) (teorie a praxe chromatografie)

LABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ. Stanovení těkavých látek

Zajištění správnosti výsledků analýzy kotininu a kreatininu

Stanovení vit. A a vit. E metodou HPLC v krmivech a premixech dopl ňkových látek

KAPALINOVÁ CHROMATOGRAFIE A ABSORPČNÍ UV SPEKTROFOTOMETRIE

Název práce: VLIV IONTOVÝCH KAPALIN NA STEREOSELEKTIVNÍ HYDROGENACE V HOMOGENNÍ FÁZI PRO PŘÍPRAVU OPTICKY ČISTÝCH LÁTEK.

LABORATORNÍ PŘÍSTROJE A POSTUPY

Stanovení vitaminu B2 v produktech živočišného původu. Bc. Magda Hábová

BIODEGRADACE POLYCHLOROVANÝCH BIFENYLŮ IMOBILIZOVANÝMI BUŇKAMI PSEUDOMONAS SP2

Stanovení kyseliny pantotenové v lupíncích Corn flakes pomocí kapilární izotachoforézy

Mobilní fáze. HPLC mobilní fáze 1

L 54/66 CS Úřední věstník Evropské unie

LABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ

Stanovení fenolických látek pomocí kapalinové chromatografie

Izolace genomové DNA ze savčích buněk, stanovení koncentrace DNA pomocí absorpční spektrofotometrie

NOVÉ ORGANOHALOGENOVANÉ KONTAMINANTY VE VODNÍM EKOSYSTÉMU

Jednotné pracovní postupy testování odrůd STANOVENÍ OBSAHU TANINŮ V ČIROKU SPEKTROFOTOMETRICKY

EXTRAKCE, CHROMATOGRAFICKÉ DĚLENÍ (C18, TLC) A STANOVENÍ LISTOVÝCH BARVIV

Stanovení kreatininu v mase pomocí kapilární izotachoforézy

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - OCHRATOXIN A

EXTRAKČNÍ METODY. Studijní materiál. 1. Obecná charakteristika extrakce. 2. Extrakce kapalina/kapalina LLE. 3. Alkalická hydrolýza

LABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ

MOŽNOSTI STANOVENÍ 2-ETHYLHEXYL NITRÁTU V NAFTĚ. OLGA NYKODÝMOVÁ, BOHUSLAV DVOŘÁK, PETRA BAJEROVÁ, ALEŠ EISNER a KAREL VENTURA.

Stanovení kyseliny ginkgolové metodou HPLC. Bc. Adéla Blažková

LABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ. Stanovení těkavých látek

STANOVENÍ OBSAHU PRENYLFLAVONOIDŮ VE CHMELOVÉM MATERIÁLU

Hmotnostní spektrometrie

Metodický postup stanovení kovů v půdách volných hracích ploch metodou RTG.

Vysokoúčinná kapalinová chromatografie

Transkript:

Příloha 2. Návod pro laboratorní úlohu VYSOKÁ ŠKOLA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ V PRAZE ÚSTAV CHEMIE A ANALÝZY POTRAVIN Technická 5, 166 28 Praha 6 tel./fax.: + 42 224 353 185; jana.hajslova@vscht.cz Analýza karotenoidů v rajčatech technikou HPLC/DAD

ANALÝZA KAROTENOIDŮ V RAJČATECH TECHNIKOU HPLC/DAD 1. Vymezení oboru metody Cílem této úlohy je seznámit studenty s aplikací techniky HPLC-DAD při sledování hladin biologicky aktivních látek - karotenoidů v rajčatech. Metoda je vhodná také pro stanovení obsahu karotenoidů ve výrobcích z rajčat. Předmětem sledování jsou hlavní karotenoidy rajčat lykopen a β-karoten. Obsah lykopenu a β-karotenu je významným ukazatelem kvality a vyzrálosti rajčat. Vedoucí úlohy nejprve shrne základní informace o aplikačním potenciálu techniky HPLC-DAD a poté bude demonstrovat funkci instrumentu. Studenti pak pod dohledem pedagoga provedou vlastní analýzu. Rozsah úlohy určí vyučující. Diskutována bude interpretace získaných záznamů a odhad pracovních charakteristik postupu. Zjištěné hladiny karotenoidů budou diskutovány s údaji v literatuře. 2. Princip metody Lykopen a β-karoten jsou z rajčat a výrobků z rajčat extrahovány směsí ethanol (s přídavkem,2% BHT) : hexan. Spojené hexanové extrakty jsou po odpaření rozpuštěny ve směsi aceton : ethanol (s,2% BHT) a karoteniody stanoveny metodou HPLC v reverzní fázi s DAD detekcí vč viditelné oblasti. 3. Chemikálie a laboratorní pomůcky Chemikálie, spotřební materiál, standardy Aceton, p. a. (Penta Chrudim, Česká Republika) Acetonitril, Chromasolv (Sigma Aldrich, Německo) Butylhydroxytoluen (Sigma Aldrich, Německo) Ethanol, p. a. (Merk, Německo) Hexan, LiChrosolv (Merk, Německo) Methanol, LiChrosolv (Merk, Německo) Síran sodný, p. a. (Penta Chrudim, Česká Republika) Tetrahydrofuran, p. a. (Merk, Německo) Mikrofiltry Rotilalo Spritrenfilter PTFE 5µm, (Carl Roth GmbH, Německo) Běžné laboratorní sklo Analytické standardy : - β-karoten (Sigma Aldrich, Německo) - lykopen (Rotichrom, Německo) Příprava zásobních roztoků standardů 4-5 mg β-karotenu bylo rozpuštěno v 25 ml směsi aceton:ethanol (s,2% BHT) 4:6 (v/v). Tento zásobní roztok byl pak podle potřeby dále ředěn. Vzhledem k nestabilitě - karotenu je nutno před každým stanovením připravovat vždy nový standard a chránit jej před světlem.

4-5 mg lykopenu bylo rozpuštěno v 1 ml směsi aceton:ethanol (s,2% BHT) 4:6 (v/v). Vzhledem k nestabilitě lykopenu je nutno před každým stanovením připravovat vždy nový standard a chránit jej před světlem. Přístroje a zařízení Laboratorní homogenizátor 38BL4, Dynamics Corporation of America Ultrazvuková lázeň Topné hnízdo, LTHS 1, Brněnská Drutěva v.d. Rotační vakuová odparka Büchi Rotavapor R-114 s vodní lázní B-48, (Švýcarsko) Automatická SPE: Aspec XL, Gilson, Francie Kapalinový chromatograf HP 12 (Hewlett-Packard, USA) s DAD a FLD detektorem Vakuová pumpa Vacc-Space 2 (Chromservis, Slovensko) Váhy - Analytické váhy GR-22-EC (e = 1 mg, d =,1/,1 mg) (AND, Japonsko) - Elektronické předváhy HF 12G (e =,1 g, d =,1g) (AND, Japonsko) Rotační vakuová odparka (BÜCHI Laboraltechnik AG, Švýcarsko) Třepačka HS 25 basic IKA Labortechnik (IKA Werk, Německo) Halogenový analyzátor HG-63 (Mettler-Toledo, Švýcarsko) Sušárna ULE 5 (Memmert, Německo) Ultrazvuková lázeň - Bandelin Sonorex Super RK 51 (Bandelin, Německo) Zařízení na úpravu destilované vody, Milli - Q RG (Millipore, Francie) Analytická kolona a předkolona pro kapalinovou chromatografii: LiChroCART (125 4 mm), LiChrospher 1 RP-18 (5 µm); Guard columm LiChroCART (4 4 mm), LiChrospher 1; Merck, Německo 4. Popis jednotlivých kroků experimentu Příprava vzorku V důsledku nízké stability analytů (zejména lykopenu) byly vzorky v průběhu manipulace chráněny pomocí aluminiové fólie a skladovány v mrazicím boxu. 5 g homogenizovaných rajčat (mražených) bylo extrahováno směsí ethanol (Merk, s přídavkem,2% BHT) : hexan (Merk) (4 : 3) s 15 g Na 2 SO 4 na třepačce rychlostí 21 kyvů/min. po dobu 3 minut. Vzniklý homogenát byl přefiltrován přes fritu s filtračním papírem č. 39 a filtrační koláč promyt extrakčním činidlem. Poté byla provedena separace pomocí dělící nálevky. Byla odebrána hexanová vrstva a ethanolický podíl byl ještě jednou reextrahován 3 ml hexanu. Spojené hexanové extrakty byly odpařeny na vakuové rotační odparce (4 C) a odfoukány pomocí N 2 do sucha. Odparek byl skladován při -18 C. Před analýzou byl rozpuštěn v 5 ml směsi aceton : ethanol (s,2% BHT) 4 : 6. Byly použity tmavé vialky jako ochrana před UV zářením. HPLC-DAD analýza Parametry separace (HP 12) analytická kolona: MERCK, LiChroCART (125 4 mm), LiChrospher 1 RP-18 (5 µm) analytická předkolona: MERCK, LiChroCART (4 4 mm), LiChrospher 1 RP-18 (5 µm) teplota kolony: 35 C mobilní fáze: MeOH:THF (95 : 5 v/v) průtok: 1 ml/min

nástřik: 2 µl Nastavení DAD detektoru Karotenoidy byly detekovány pomocí DAD detektoru při vlnové délce 45 a 47 nm. Na obrázku (obr. 1) jsou znázorněny absorpční spektera sledovaných karotenoidů. Během jednotlivých analýz bylo snímáno celé UV/VIS spektrum (2-6 nm). mau DAD1, 2.874 (37.9 mau, - ) of LYCOP11.D mau DAD1, 24.118 (226 mau, - ) of LYCOP12.D 225 35 2 3 175 25 15 2 125 1 15 75 1 5 5 25 25 3 35 4 45 5 55 nm 25 3 35 4 45 5 55 nm Obrázek 1 Absorpční spektrum lykopenu a β -karotenu 5. Vyhodnocení naměřených dat Identifikace β-karotenu a lykopenu ve vzorcích byla provedena porovnáním retenčních časů vzorku s retenčními časy standardů. Kvantifikace analytů byla provedena přímým porovnáním ploch standardů s plochami příslušných analytů identifikovaných v analyzovaných vzorcích. Pro zjištění kalibrační závislosti a její linearity byly analyzovány roztoky standardu β-karotenu o koncentraci analytu,5;,2;,5; 2; 5; 1 µg/ml a standardu lykopenu o koncentraci analytu,2;,5; 2; 5; 2; 5; 2 µg/ml. Bylo zjištěno, že kalibrační křivka standardu β-karotenu je v celém sledovaném rozmezí lineární. Kalibrační křivka lykopenu je lineární v rozmezí koncentrací 2-2 µg/ml. 6. Stanovení pracovních charakteristik (výsledky validace) Opakovatelnost metody byla stanovena na rajčatech zakoupených v tržní síti, pro pět paralelních stanovení. Opakovatelnost metody stanovení lykopenu a β -karotenu vyjádřená jako relativní směrodatná odchylka je 7,8 % pro lykopen 8,7 % pro β-karoten. Výtěžnost metody byla stanovena pouze pro β-karoten z důvodu velmi malého množství komerčně dodávaného standardu lykopenu. Výtěžnost metody stanovená ve třech opakováních na hladině přídavku β-karotenu 6 mg/kg je 13%. Mez detekce metody byla určena jako nejnižší množství stanovovaného analytu ve vzorku, které může být detekováno, tj. trojnásobek šumu. Byla stanovena mez detekce,2 mg/kg pro β- karoten a,1 mg/kg pro lykopen. Příklad analýzy reálných vzorků Na obr. 2 je uveden chromatogram vzorků rajčat v různém stadiu zralosti.

mau VWD1 A, Wavelength=47 nm (LYCOPEN\511861.D) VWD1 A, Wavelength=47 nm (LYCOPEN\511862.D) 8 lykopen 7 6 5 4 β-karoten 3 2 červené rajče 1 zelené rajče 6 8 1 12 14 16 Obrázek 2 Chromatogram srovnávající vzorky různého stupně zralosti: zralé červené rajče a nezralé zelené rajče min