Kamila Bartošová Institut klinické a experimentální analýzy FONS 2016

Kamila Bartošová Institut klinické a experimentální analýzy FONS 2016

Studie močových analyzátorů Realizace Instalace přístrojů Seznámení s jednotlivými analyzátory Testování a sběr dat Statistické zpracování Výsledky Postřehy při testování Závěr

Výchozí podmínky studie Vzorky pro testování čerstvé vzorky moče nefrologická ambulance a lůžkové oddělení IKEM rutinní indikace vyšetření MS ošetř. lékařem minimálně 20 ml moče + dodržení správný odběr vzorku okamžitý transport do laboratoře Porovnání systémů na měření MS (souběžně na stejných vzorcích ) Testovány byly všechny parametry vyšetření MS a moč chemicky Analyzátory Iris IQ 200 Sprint Arkray AU 4050 Dirui FUS-2000 SediMAX Použití QC doporučených od výrobce Sporné nálezy fotografické snímky barvených preparátů - popř. konzultace

Cesta vzorku

Mikroskop Leica DM 2000 zlatý standard klasická světelná mikroskopie Reference pro mikroskopické zhodnocení MS Vzorky hodnoceny 1 pozorovatelem

IRIS iq 200 Sprint Stříbrný standard Princip: digitální analýza obrazu Výhody: Námi používaný přístroj (známe provoz) Přehledný software, velké snímky Dobré rozřazování elementů do skupin (subjektivní, obdobné jako Dirui FUS2000) Záznam o editaci dat součástí reportu!!! (žádný jiný systém toto neumožňuje v době testování) Nevýhody: časté střídání šarží není dlouhodobá statistika QC Proběhla verifikace pomocí kappa statistiky Iris iq200 x mikroskopie (reference) Výsledky κ (vážené): leukocyty 0,803 - téměř perfektní shoda editované výsledky erytrocyty 0,873 - téměř perfektní shoda editované výsledky Pozn. Reagencie originální Iris

ARKRAY AU 4050 Princip: Průtoková cytometrie Odlišný princip od ostatních analyzátorů Výhody: Spec. barvení na bakterie lepší hodnocení Rozlišuje isomorfní a dysmorfní erytrocyty Nevýhody v době testování: Těžko uchopitelná data (nutné mikroskopické ověření) Patologické válce Typ krystalických struktur U vzorků s vysokými počty elementů zanášení filtr (nad cca 8000 elementů/µl)

DIRUI FUS 2000 Princip MS: digitální analýza obrazu Výhody: Kompaktnost přístroje ( je malý ) Velmi rychlé zpracování stojánku (jedna jehla pro moč chemicky i sediment) Dobré rozřazování elementů do skupin (subjektivní, obdobné jako Iris IQ) Nevýhody v době testování Dlouhá ranní příprava stroje před měřením Software špatná čitelnost a malé písmo

SEDIMAX Princip: digitální analýza obrazu hodnocení fotografií centrifugovaného sedimentu v kalibrované kazetě Výhody: rychlé zpracování stojánku nemá mycí roztok, jen H 2 O Nevýhody v době testování: Označování popř. oprava každé částice zvlášť (dvojklik a výběr z nabídky a pořád dokola) problém v patologických vzorků Špatně čitelná zorná pole (rozmazané síla preparátu?) v pozitivních sedimentů alespoň 1 nečitelné pole Přítomnost jakéhosi krystalu (označení SW) podle firmy je to prachová částice

Všechny testované systémy zajišťují.. Snadná obsluha Bezproblémová základní údržba přístroje Vyhledávání v databázi (podle skupin) Přehledné reporty výsledku

Zpracování dat Do statistiky byly započítány pouze editované (a editovatelné) vzorky Naměřená data rozřazena do skupin podle Stanoviska ČSKB ČLS JEP Vydávání výsledků vyšetření moče a močového sedimentu Hodnocení erytrocytů a leukocytů v moči: (erytrocyty negativní = 0 5 ery/µl; ery +1 = 6 50 ery/µl; atd.) (leukocyty negativní = 0 10 leuko/µl; leuko +1 = 11 50 leuko/µl) Přepis dat do tabulky podle četnosti pro Kappa statistiku Leu Iris iq 200 Sprint Mikroskop Leica 0 1+ 2 + 3+ 4 + 0 18 4 0 0 0 1+ 2 12 6 1 0 2 + 0 4 12 1 0 3+ 0 0 2 10 1 4 + 0 0 0 8 19

Kappa - statistika Kappa statistika obdoba korelačního koeficientu pro kategoriální proměnné na základě analýzy shody (dvou přístrojů, postupů, soudců) Porovnání výsledků Kappa statistiky na základě Cohenovo Kappa Cohenova Kappa je mírou indexu shodnosti s více kategoriálními proměnnými (při posuzování dvou přístrojů pro více než 2 kategorie) Použití programu R + s knihovnami (vcd) / lze použít i MS Excel Porovnání stanovení leukocytů a erytrocytů v MS IRIS IQ200 x Arkray AU 4050 x Dirui x SediMAX x Mikroskop Leica REFERENCE mikroskopie

Kappa - statistika - pro hodnocení Kappa statistiky - (ordinální škály- Landis and Koch (1977) Kappa value Degree of agreement <=0 Poor 0-0.2 Slight 0.2-0.4 Fair 0.4-0.6 Moderate 0.6-0.8 Substantial 0.8-1 Almost perfect Nevyhovující Střední, průměrná shoda Podstatná shoda Téměř Perfektní shoda

Kappa nevážené x vážené Hodnota neváženého kappa data jen na diagonále Hodnota váženého kappa data na i kolem diagonály, kde je největší výskyt dat Leuko Iris iq 200 Sprint Mikroskop Leica 0 1+ 2+ 3+ 4+ 0 18 4 0 0 0 1+ 2 12 6 1 0 2+ 0 4 12 1 0 3+ 0 0 2 10 1 4+ 0 0 0 8 19 V tomto případě kappa nevážené = 0,64 Podstatná shoda

Kappa nevážené x vážené Hodnota neváženého kappa data jen na diagonále Hodnota váženého kappa data na i kolem diagonály, kde je největší výskyt dat Leuko Iris iq 200 Sprint Mikroskop Leica 0 1+ 2+ 3+ 4+ 0 18 4 0 0 0 1+ 2 12 6 1 0 2+ 0 4 12 1 0 3+ 0 0 2 10 1 4+ 0 0 0 8 19 V tomto případě kappa vážené = 0,93 Téměř perfektní shoda

Požadavky pro kappa-statistiku z European Urinalysis Guidelines 2000

Požadavky pro kappa-statistiku z European Urinalysis Guidelines 2000 Tabulka XV. EUG 2000, str.43

Výpočet Kappa statistiky v aplikaci MS Excel Instalace: Measurement_Error_QUAL.xla v doplňcích MS Excel COHEN'S KAPPA leukocyty porovnání Weights No Yes n 100 100 Kappa 0,638 0,926 SE of Kappa 0,06 0,02 CI of Kappa: Lower limit 0,53 0,89 CI of Kappa: Upper limit 0,75 0,96 Strength of agreement Substantial Perfect

Porovnání leukocytů kappa statistika Kappa Statistika0 Kappa nevážené Kappa vážené Mikroskop Leica x IRIS IQ200 Mikroskop Leica x Arkray AU 4050 Mikroskop Leica x Dirui Mikroskop Leica x SediMAX 0,637 0,650 0,616 0,600 0,925 0,921 0,916 0,911 CI 95% 0,80-1,00 0,80-1,00 0,77-1,00 0,79-1,00 Hodnocení Téměř perfektní shoda Téměř perfektní shoda Téměř perfektní shoda Téměř perfektní shoda Váha do statistiky jsou započítány i těsné vztahy dat kolem diagonály (očekávána nejvyšší četnost výsledků)

Porovnání erytrocytů Kappa statistika Kappa nevážené Mikroskop Leica x IRIS IQ200 Mikroskop Leica x Arkray AU 4050 Mikroskop Leica x Dirui FUS 2000 Mikroskop Leica x SediMAX 0,40 0,33 0,577 0,230 Kappa 0,852 0,706 0,881 0,573 vážené CI 95% 0,71-1,0 0,57-0,84 0,72-1,0 0,45-0,70 Hodnocení Téměř perfektní shoda Podstatná shoda Téměř perfektní shoda průměrná shoda Těžko hodnotitelné Váha do statistiky jsou započítány i těsné vztahy dat kolem diagonály (očekávána nejvyšší četnost výsledků)

Falešná negativita a pozitivita erytrocytů a leukocytů Limit pro pozitivitu bylo určeno: 10 leukocytů/µl 5 erytrocytů/µl. Hodnocení Iris iq 200 Sprint Arkray AU 4050 Dirui FUS 2000 Menarini SediMAX Falešná negativita stanovení leukocytů (%) Falešná pozitivita stanovení leukocytů (%) Falešná negativita stanovení erytrocytů (%) Falešná pozitivita stanovení erytrocytů (%) 23.6 13.9 17.1 22.5 6.2 11.0 12.2 8.5 31.1 21.6 10.0 36.5 18.8 34.6 34.2 8.6

Postřehy při testování Analyzátor Arkray AU 4050 průtoková cytometrie Složité posouzení absolutních hodnot močového sedimentu přístroj vyhodnotil válce x kt. nebyly mikroskopicky potvrzeny 6 vzorků viz tabulka níže Mikroskop Leica IRIS iq200 Arkray AU 4050 Dirui FUS 2000 SediMAX číslo vzorku x x 2,00 /µl x x 12 x x 2,57 /µl x x 26 x x 3,79 /µl x x 92 x x 2,16 /µl x x 104 x x 2,57 /µl x x 115 x x 12,45 /µl x x 125

Zajímavé obrázky při hodnocení sytému Sedimax Označování a odoznačování každé částice zvlášť Přítomnost krystalu podle firmy je to prachová částice V mikroskopu ani v jiných analyzátorech nenalezeno

SediMAX Nehodnotí hláška: Review of images is necessary. Cca 3000 leuko, bakterie a hlen špatně čitelná některá zorná pole (rozmazané síla preparátu)

Shrnutí Shoda všech testovaných systémů při hodnocení leukocytů Rozdílné výsledky zjištěny při hodnocení erytrocytů (kappa statistika) u přístroje Arkray - nižší shoda s mikroskopií SediMAX pouze průměrná shoda Falešná negativita u stanovení erytrocytů systémy Iris a SediMAX je vyšší než 30% - u neshodných výsledků MS x moč chemicky je nutné ověření (mikroskop či proužky jiné firmy) Falešná pozitivita u systému Arkray a Dirui je vyšší než 30% fal.pozitivita je z klinického hlediska přijatelnější než fal. neg. Systém SediMAX pro měření erytrocytů je na hranici požadovaného minima dle doporučení EUG2000 Podle kritérií EUG2000 jsou systémy IRIS, ARKRAY, DIRUI přijatelné pro močovou analýzu

Závěr Typy systémů výrazná odlišnost Výběr systému pro močovou analýzu Počet vyšetření MS Počet patologických vzorků Personální stav pracoviště SediMAX - menší provozy, převážně negativní MS Arkray - převážně negativní vzorky (i mikrobiologie) Iris a Dirui - provozy s vyššími počty patologických vzorků Do budoucnosti kombinace průtokové cytometrie a digitální analyýzy obrazu

Poděkování prof. MUDr. A. Jabor, CSc. RNDr. Z. Kubíček MUDr. J. Franeková, Ph.D RNDr. G. Louženský MUDr. P. Lavríková Firma Medista

Pravdivost stanovení elementů Pravdivost měření leukocytu (%) 85.1 87.6 85.4 84.5 Pravdivost měření erytrocytů (%) 75.1 71.9 77.9 77.5 Kritérium EUG2000

Pravdivost klasifikace/stanovení elementů Je definována jako suma všech správně pozitivních a správně negativních z celkového počtu vzorků [(100-False negativity)+(100-false positivity)]/2. Pravdivost měření leukocytu (%) 85.1 87.6 85.4 84.5 Pravdivost měření erytrocytů (%) 75.1 71.9 77.9 77.5 Kritérium EUG2000