ZÁKLADY OBECNÉ A KLINICKÉ BIOCHEMIE

Transkript

1 ZÁKLADY OBECNÉ A KLINICKÉ BIOCHEMIE 2004 Vyšetření likvoru Kateřina Mrázová kapitola ve skriptech

2 Co je to likvor Čirá bezbarvá tekutina V subarachnoidální prostoru (mezi arachnoideou a piou mater) % ultrafiltrát plasmy Kojenci ml Dospělí ml Produkce ml/24hod Hustota g.cm -3 Tlak vleže 0,59-1,96 kpa Vsedě 3,92 kpa Kůže Periost Kost Dura mater Arachnoidea Pia mater Obaly mozkomíšní 2

3 Odběr likvoru Lumbální punkce Místo vpichu je na spojnici vrcholů kostí kyčelních a křížení s páteří v místě L4 3 Odběr se provádí pomocí jehly s mandrenem do sterilních zkumavek. Množství u dospělého činí ml.

4 Vzhled likvoru Vzhled likvoru hodnotíme před a po centrifugaci Normální likvor: čirý, bezbarvý 4 Likvor zakalený Likvor xantochromní (nažloutlý) Likvor sangvinolentní (obsahuje erytrocyty)

5 Základní vyšetření mozkomíšního moku Biochemická vyšetření: Celková bílkovina (dospělí < 0,45 g/l ) Glukosa (2,2 4,2 mmol/l) Laktát (1,1-2,1 mmol/l) 2 komůrky Fuchs-Rosenthalova komůrka Kvantitativní cytologie: Počet elementů a erytrocytů ve Fuchs-Rosenthalově komůrce Norma : <10/3 elemntů 0/3 erytrocytů 16 velkých čtverců ohraničených trojitou čarou 256 malých čtverečků ohraničených jednoduchou čarou Objem 3,2 µl 5 Kvalitativní cytologie: Trvalý preparát zhotovený buď pomocí cytosedimentační komůrky nebo pomocí cytocentrifugy Cytosedimentační komůrka Cytocentrifuga

6 Kvalitativní cytologie Základní barvení: Dle Papenheima (hematologické barvení) Rychlé barvení Hemacolor Preparát fixujeme metanolem Obarvíme roztokem č.2 (červený) 3x po 2 sekundách. Pokračujeme roztoku č.3 (modrý) a to 6x po 2 sekundách. Opláchneme ve vymývacím roztoku. Necháme oschnout Montujeme do Entellanu. Barvení dle Grama Barvení na lipidy olejovou červení nebo sudanovou černí Normální likvor : Klidové lymfocyty 60-80% Klidové monocyty 20-40% Patologické nálezy: Erytrocyty Bakterie Neutrofilní granulocyty Další patologické nálezy: Aktivované lymfocyty a plasmatické buňky Aktivované monocyty a makrofágy (erytrofágy, siderofágy, lipofágy, ) Nádorové buňky 6

7 Další likvorová vyšetření Albumin Imunoglobuliny IgG, IgA, IgM Kvocient albuminu (ukazuje na stav hematolikvorové bariery) Q Alb = CSF-Alb x 10-3 S-Alb Kvocient Imunoglobulinu Q Ig = CSF-Ig x 10-3 S-Ig Schematický graf dle Reibera ke zjištění syntézy imunoglobulinů v likvorových cestách Kvocient Imunoglobulinu Syntéza imunoglobulinů Normální nález Porucha bariery a syntéza imunoglobulinů Porucha hematolikvorové bariery 7 Výpočet lokální syntézy Imunoglobulinu Kvocient Albuminu Albumin, imunoglobuliny, ale i glukosa, laktát a další se vyšetřují současně v likvoru a v séru ( v plasmě)

8 Speciální vyšetření likvoru Spektrofotomotrie Specifické proteiny CNS: MBP, NSE, S100 (β podjednotka) Transferrin Β-2-mikroglobulin CEA Stanovení oligoklonálních pásů IgG Volné lehké řetězce (kappa, lambda) Mikrobiologické vyšetření Specifické protilátky proti infekčnímu agens PCR Spektrofotometie: Detekce krevních barviv při podezření na kvácení do likvorových cest Čerstvé krvácení: Oxyhemoglobin - maximum absorbance při 415 nm Staré krvácení: Bilirubin, maximální absorbance při nm V mezidobí je přítomna kombinace obou barviv Isoelektrická fokusace (stanovení oligoklonálních pásů IgG porovnáním likvoru a séra) 8

9 Patologické likvorové nálezy Hnisavá neuroinfekce Elementy >900/3 Neutrofilní granulocyty Celková bílkovina >2 g/l Glukosa v CSF< 40% S-glykemie Laktát > 3,5 mmol/l Serosní neuroinfekce Elementy desítky až sta Aktivované lymfocyty a monocyty Celková bílkovina <2 g/l nebo normální Glukosa v CSF v normě Laktát < 3,5 mmol/l 9

10 Subarachnoidální krvácení Mozkomíšní mok krvavý,po centrifugaci nažloutlý Spektrofotometrie: Oxyhemoglobin, Bilirubin Elementy >900/3 Erytrofágy, siderofágy či kombinace, neutrofilní granulocyty, četné erytrocyty Celková bílkovina různě zvýšená Glukosa v CSF normální nebo snížená Maligní infiltrace Elementy normální počet - tisíce Maligní buňky Celková bílkovina normálnízvýšená Glukosa v CSF normální nebo lehce snížená Laktát zvýšený Laktát mírně zvýšený 10 Erytrosiderofág Siderofágy Lymfoblasty

11 Závěrečné shrnutí Základní vyšetření: 1. Biochmické: Celková bílkovina, glukosa, laktát, spekteofotometrie 2. Cytolofické: počet jaderných elementů, počet erytrocytů, kvalitativní zhodnocení cytologické skladby mozkomíšního moku Další důležitá vyšetření: 1. Albumin, Albuminový kvocient, imunoglobuliny, detekce oligoklonální tvorby imunoglobulinů, 2. Mikrobiologické vyšetření, specifické protilátky proti infekčnímu agens, PCR 3. Nádorové markery, markery tkáňové destrukce 11