DEN LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY

Rozměr: px

Začít zobrazení ze stránky:

Download "WWW.DYNEX.CZ DEN LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY"

Vítězslav Vopička
před 9 lety
Počet zobrazení:

1 DEN LABORATORNÍ DIAGNOSTIKY LYMESKÉ BORRELIÓZY Brno, seminář f. Dynex

2 Zdravotní ústav se sídlem v Ostravě Centrum klinických laboratoří Hana Bílková Fránková á Oddělení parazitologie a lékařské zoologie

3 SOP 4011 Stanovení protilátek IgG a IgM proti Borrelia afzelii metodou EIA SOP 4012Stanovení protilátek IgG a IgM proti Borrelia garinii metodou EIA SOP 4013 Stanovení protilátek IgG a IgM proti Borrelia burgdorferi metodou EIA SOP 4014 Stanovení protilátek IgG a IgM proti Borrelia afzelii metodou Western blot SOP 4015 Stanovení protilátek IgG a IgM proti Borrelia garinii metodou Western blot

proti Borrelia burgdorferi metodou EIA SOP 4014 Stanovení protilátek IgG a IgM proti Borrelia

4 Stanovení IgG a IgM protilátek Borrelia burgdorferi sensu lato metodou EIA Stanovení IgG a IgM protilátek Borrelia burgdorferi sensu lato metodou Western blot Stanovení intratekální syntézy protilátek proti boréliím

blot Stanovení intratekální syntézy protilátek proti

5 Western blot V roce 2008 jsme vyšetřili celkem 3783 (600) pacientů na přítomnost IgG a IgM protilátek proti Borrelia afzelii (300) pacientů na přítomnost IgG a IgM protilátek proti Borrelia garinii likvorů na přítomnost protilátek proti Borrelia garinii 2 x týdně ě 45 pacientů ů

..719 (300) pacientů na přítomnost IgG a IgM protilátek proti Borrelia

6 EX YN.D W W W Z.C

7 použito z

10 Způsob hodnocení reakce western Manuálně Scanner Kamera! blot použito z

11 EUROBLOT kamerový systém v provozu karvinské laboratoře od listopadu 2006 Za toto období zpracováno celkem vzorků 325 neshod (11/06 3/09) 1,7%

14 přínos pro laboratoř + - standardizace odečítání nečistot, bublin... eliminace subjektivní chyby v IgM přeceňování, převod dat do LISu nadhodnocování pozitivity na eliminace chyby při vkládání úrovni p41 archivace VŠ provádí pouze kontrolu upozornění na atypické - neshodné výsledky

nadhodnocování pozitivity na eliminace chyby při vkládání úrovni p41

15 NEUROBORRELIÓZA Na základě mezinárodního doporučení č European Union Concerted Action on Lyme Borreliosis je pro diagnostiku časné i pozdní neuroboreliózy je nezbytně nutný průkaz intratekální produkce protilátek tedy detekce specifických antiborreliových protilátek syntetizovaných v likvoru.

neuroboreliózy je nezbytně nutný průkaz intratekální produkce protilátek

16 Principem metody je stanovení specifického protilátkového indexu, který vyjadřuje poměr hladiny protilátek v mozkomíšním moku k výši hladiny protilátek v krevním séru a to ve vztahu ke stavu hematolikvorové bariéry a koncentraci celkových imunoglobulinů li ů vmozkomíšním í moku a séru.

protilátek v krevním séru a to ve vztahu ke stavu hematolikvorové

17 Hladina prolilátek v likvoru závisí na: Hladině ě protilátek v krevním séru Permeabilitě HE bariéry Intratekální produkci Ab

18 Specifické protilátky stanovujeme imunoenzymaticky Celkové IgG a IgM protilátky a hladinu albuminu stanovujeme nefelometricky Absolutní hodnoty absorbancí sér a likvorů jsou převedeny na tzv. arbitrární jednotky (AU) a poté je vypočtena hodnota protilátkového indexu dle Reibera

hodnoty absorbancí sér a likvorů jsou převedeny na tzv.

19 AU = arbitrární jednotky odpovídajícím absorbancím b likvoru a séra jsou odečteny z kalibrační křivky AI index je počítán dle Reiberovy metodiky. Z hodnot koncentrací albuminu a celkových Ig v séru a likvoru je vypočítán: QAlb = konc.al v likvoru/ konc. Al v séru QIgG, IgM = konc.celk.igg,igm v likvoru/ konc.celk.igg,igm v séru

Z hodnot koncentrací albuminu a celkových Ig v séru a likvoru je vypočítán: QAlb =

20 Qspec IgG, IgM = AU v likvoru/ AU v séru Horní hranici rozsahu QAlb statisticky definuje rovnice pro QLim: QLim( IgG) 2 6 = 0,93x QAlb + (6x10 ) 1,7 x 10 3 QLim( IgM ) 2 6 = 0,67x QAlb + (120x10 ) 7,1x 10 3

21 AI vyjadřuje poměr koncentrací specifických protilátek v likvoru a séru ve vztahu ke stavu hematoencefalické bariéry a koncentraci celkových imunoglobulinů li ů v likvoru a séru výpočet AI pro IgG (stejně IgM): Je-li: QLim(IgG) > QIgG, pak AI(IgG) = Qspec (IgG) / QIgG QLim(IgG) < QIgG, pak AI(IgG) = Qspec (IgG) / QLim(IgG)

22 Hodnota QAlb udává stav hematoencefalické bariéry: Normální Střední porucha Těžká porucha

23 Produkce Ig v CNS, intaktní bariéra Dysfunkce bariéry, přídatná produkce Ig Dysfunkce bariéry bez produkce Ig Intaktní bariéra, normální rozmezí Chyba v analytickém kroku

24 Podmínky stanovení: Párový odběr likvoru a séra Stanovení hodnot koncentrace albuminu, imunoglobulinů IgM a IgG v likvoru i séru Použití standard IgG a IgM Pozn. mok nesmí být kontaminovaný erytrocyty (>100 ery v 1μl) Albumin je protein syntetizovaný v játrech, přítomnost v CSF je krevního původu. Zvýšení permeability hematoencefalické a hematolikvorové bariéry při neuroinfekcích avizující patologické změny v CNS. Změna je dána úsilím organismu poskytnout CNS látky s neuroprotektivním účinkem, umožňující efektivní a plnohodnotný průběh zánětlivého procesu.

25 191 požadavků na vyšetření protilátek v likvoru. 31 stanovení s pozitivním signálem tvorby protilátek v mozkomíšním moku (nebo těsně pod hranicí cut-off), u 12 (7%) prokázali intratekální tvorbu protilátek 6 žen a 6 mužů. 5 s dg. G 51 Obrna lícního nervu 3 s dg. G 03 Meningitis 2 s dg. A 69.2 Lymeská nemoc 1 s dg. I 63 Mozkový infarkt 1 s dg. G 62 Polyneuropatie Ženy ( ) převažují ř mladší Muži ( ) převažují starší

26 Stanovení protilátek metodou EIA Negativní Pozitivní Stanovení protilátek metodou Westernblot Stanovení antibody indexu Stanovení protilátek metodou Westernblot

27 Děkuji za pozornost

Podobné dokumenty

Jana Bednářová Oddělení klinické mikrobiologie FN Brno

Jana Bednářová Oddělení klinické mikrobiologie FN Brno Jistá LNB: Splněna následující tři kritéria: (i) neurologické příznaky odpovídající LNB (ii) pleocytóza v CSF (iii) intratekální syntéza Bb-specifických