Validita vyšetření nádorových markerů v rámci požadavků správné laboratorní práce Preanalytická fáze vyšet etřování sérových nádorových markerů (TM) Základní předpoklady správného užití TM: nádorové markery součástí diagnosticko-léčebných protokolů, výběr vhodného nádorového markeru (doporučení specializovaných pracovních skupin), vhodné načasování vyšetření (screening, diagnostika), staging, monitorování v optimálních časových intervalech efektivita užití - retrospektivní hodnocení. Preanalytické vlivy Vyšetřovací či jiné postupy u pacienta (PS) Hemolýza vzorku ( zejména NSE) Kontaminace vzorku slinami (zejména S) Nevhodné uložení vzorku před analýzou HM protilátky Validita (určuje kvalitu testu)v % = SP/ SP+FP+FN+SN Specificita = je obrazem správné negativity Senzitivita - odráží správnou pozitivitu Pozitivní prediktivní hodnota - v % pravděpodobnost, že při zvýšeném testu je vyšetřovaná osoba nemocná (SP/SP+FP)x100 Negativní prediktivní hodnota - v % pravděpodobnost, že při negativním výsledku je vyšetřovaná osoba zdravá (SN/FN+SN)x100 Požadavky SLP: OR (odds ratio, poměr šancí) nebo též relativní riziko RR = výskyt faktoru u nemocných / výskyt faktoru u zdravých Specificita nejméně 90, ale lépe až 95% Senzitivita - co možná nejvyšší, hodnoty kolem 80% charakterizují dobrý marker 1
senzitivita Vztah senzitivity a specificity vyjadřuje RO ( Receiver Operating haracteristics) křivka. Její operační bod udává optimální cut-off při požadované specificitě 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 falesna_pozitivita metoda S_125 S_199 S_E. Postup při zavádění nové metody Je nutná spolupráce s lékařem Při zavádění nové metody se přejímá cutoff doporučovaná výrobcem. Ta ale nezaručí požadovanou specificitu vyšetření. Potom je nutno vyhodnotit metodu, případně změnit nastavení cut-off na základě posouzení správné pozitivity, negativity a falešné pozitivity a negativity. Je nezbytné označení klinického stavu vyšetřované osoby jako R, PR, PD, případně nový pacient ( bráno jako PD). Další pomocný parametr je označení terapie Lze pak vyhodnotit: Lze statisticky vyhodnotit význam jednotlivých markerů pro konkrétní nádor obráceně pro konkrétní marker určit pořadí významnosti pro jednotlivé diagnózy Tak v budoucnu lze očekávat různé cut- off jednoho markeru pro různé typy nádorů. Postup při výběru metody Monitorování nemocných v čase vyžaduje nestřídat metodu Metoda musí být spolehlivá - což vyjadřuje její správnost, přesnost, vhodný detekční limit, možnost automatizace a další parametry Podstatná je i finanční náročnost vyšetření 2
Diagnostická efektivita = SN+SP/ SN+SP+FN+FP Poměr věrohodnosti (LR) = diag. senzitivita / 1-specificita In vitro interference při manipulaci se vzorkem: OR (odds ratio, poměr šancí) nebo též relativní riziko RR = výskyt faktoru u nemocných / výskyt faktoru u zdravých Uvolnění analytu z erytrocytů (hemolýza): NSE Interference analytu ze slin: S,19-9, E,TPS Opakované zmražení a rozmražení: fps Nemaligní příčiny zvýšených hodnot TM zánětlivé procesy jater, ledvin (akutní či chronické), hepatitida, cirhóza: E, FP, 15-3, 125 záněty plic: FP, S pankreatitidy: E, TP/S, 125 choroby GIT: 72-4 ovariální cysty: 125, YFR 21-1 cholestáza: 19-9 diabetes: 19-9 poruchy imunity: 2M benigní nádory prsu: 72-4 hyperplasie prostaty, prostatitidy: PS, fps virová infekce: TK poruchy metabolismu železa: FERR myomy: YFR 21-1 12-deficience: TK Doporučení pro stanovení TM v praxi KLINIK Výběr vhodného TM, ev. jejich kombinace, časování odběru ve vztahu k vývoji onemocnění, volba TM pro účely (ev. screeningu, stanovení diagnózy), staging, monitorování vývoje choroby i účinnosti terapie, určení prognózy. LORTOŘ zpětné zhodnocení senzitivity a PV+, PV- a RR pomocí známého klinického stavu, poskytnutí kumulativních a interpretovaných výsledků, aplikace nových ověřených TM v praxi, sledování vývoje poznatků o funkci jednotlivých molekul 3
a prsu Sledovali jsme: 15-3 E TP - TPS M Nyní doporučujeme: 15-3 a E Specificita,senzitivita a PV+ 15-3 90% 75% 89% E 93% 48% 90% TP 90% 59% 87% M 86% 66% 85% 1 + 3 81% 87% 84% 1 + 2 84% 77% 86% 1 + 4 81% 82% 84% a pankreatu specificita senzitivita PV+ E (5,0) 97,4% 66,7% 90,9% 19-9 79,1% 76,5% 48,1% (37) 1 + 2 100% 41,7% 100% a kolorektální specificita senzitivita PV+ E (6,6) 90,0% 79,5% 38,2% 19-9 90,0% 63,6% 36,5% (26 ku/l) 1 or 2 85,5% 87,2% 30,3% LD (8,2) 90,0% 59,4% 39,8% a ovaria SF SN PV+ PV- 125 94% 82% 49% 98% Zpětné zhodnocení validity stanovení E u nemocných MOU (1993-2001) pro uvedené diagnózy: RO křivky (U), senzitivita (SN) při 90% specificitě a relativního rizika (RR) N Diagnóza elkem R PD U cut-off SN RR 00-15 346 40 9 0,578 6,7 33,3 3,0 18,19 5625 1628 185 0,785 7 65,4 10,5 20,21 4243 1420 140 0,798 10 62,6 9,8 16 608 100 22 0,786 6 50 4,8 4
Zhodnocení validity stanovení jednotlivých TM v kombinaci s optimální diagnózou (SF=90%) N TM Diagnóza elkem R PD U cut-off SN RR 125 56 3803 1207 205 0,923 18 83,9 20,4 E 18,19 5625 1628 185 0,785 7,0 65,4 10,5 15-3 50 43935 26 335 1063 0,782 31 59,3 10,2 19-9 18,19 2280 826 123 0,881 24 64,2 9,1 S 53 2022 913 121 0,759 1,3 50,4 5,8 TPS 50 3777 2019 133 0,712 156 42,1 5,4 2M 81-85 3772 1271 27 0,685 3,0 40,7 5,5 YFR21-1 34 1721 140 96 0,761 4,3 53,1 3,0 FP 62 5777 3993 43 0,632 6,9 34,9 4,7 TK 81-85 2576 593 16 0,728 9,3 31,3 3,9 LD 18-20 9813 956 171 0,725 8,2 36,7 3,8 NSE 34 973 112 45 0,545 18,1 20 1,7 5