Příručka pro odběr primárních vzorků

Transkript

1 Strana č.: 1 Laboratoře CEM (LCEM) provádějí široké spektrum vyšetření pro diagnostiku původců infekčních onemocnění a protilátkové odpovědi na tato onemocnění. Zjišťují citlivost na antibiotika a chemoterapeutické preparáty a poskytují klinické a epidemiologické interpretace těchto nálezů. Jedná se o bakteriologická, virologická, parazitologická, sérologická, elektronmikroskopická a molekulárně biologická vyšetření. Některé laboratoře LCEM (např. NRL pro AIDS, NRL pro virové hepatitidy, NRL pro chřipku, NRL pro nechřipkové respirační viry, NRL pro meningokokové nákazy a další) provádějí vyšetření v rámci epidemiologické surveillance a pravidelných sérologických přehledů. Odběr primárních vzorků pro laboratorní vyšetření obecně provádějí pracovníci zdravotnických zařízení (zákazníci), kteří tato vyšetření požadují. Při odběru se řídí návody pro specifická vyšetření, která pro jednotlivé pacienty ordinují (viz dále v této příručce). Příprava pacienta pro odběr vzorku spolu se získáním jeho informovaného souhlasu s vyšetřením je rovněž povinností klinického pracovníka, který v této oblasti konzultuje příslušné laboratorní pracovníky. Uvedený proces zajišťuje optimální podmínky pro vyšetření ve prospěch pacienta. Pro klinické pracovníky jsou rovněž závazné návody pro transport vzorků do laboratoře. Tyto návody jsou uvedeny detailně podle infekčních agens, event. protilátek proti těmto agens, jejichž průkaz je v primárním vzorku požadován. Kliničtí pracovníci také odpovídají za správné vyplnění formuláře žádosti (žádanky) a označení primárních vzorků štítky pro jednoznačnou identifikaci pacienta. Na žádance o vyšetření musí být rovněž uvedeny základní klinické informace o pacientovi, datum odběru a záznam totožnosti osoby provádějící odběr primárního vzorku. Vyšetřovací laboratoře sledují transport primárních vzorků do laboratoře tak, aby byla zaručena jejich doprava v čase a rozmezí teplot odpovídajícím povaze požadovaných vyšetření. Pokud transport neproběhne za doporučených podmínek (viz dále), může dojít k nežádoucímu ovlivnění výsledku zkoušky. Vyšetřovací laboratoř má právo vyšetření vzorku buď odmítnout nebo upozornit zákazníka na omezenou validitu zkoušky. Odběr primárních vzorků provádí jen výjimečně sama vyšetřující laboratoř. Jedná se o NRL pro chřipku a NRL pro nechřipkové respirační viry, které provádějí odběry nazofaryngeálních výtěrů v rámci surveillance akutních respiračních infekcí (ARI) s cílem zjišťovat cirkulaci jednotlivých virových respiračních agens v dětské i dospělé populaci. Výsledky vyšetření pak slouží jak pro epidemiologické analýzy tak pro diagnostiku a terapii vyšetřovaných pacientů. Tyto odběry se uskutečňují na dvou externích pracovištích ambulancích zdravotnických zařízení v Praze 10. Přípravu pacientů pro tyto odběry provádějí kliničtí pracovníci (lékaři) těchto ambulancí podle stanovených pravidel (viz předchozí odstavec). Vlastní odběry pak provádějí pracovníci NRL pověření k této činnosti podle příslušného SOP. NRL pro AIDS a NRL pro virové hepatitidy jsou pověřeny zákonným ustanovením k provádění konfirmačních testů, které potvrzují nebo vyvracejí pozitivitu u primárně reaktivních nálezů získaných v terénních vyšetřovacích laboratořích. K provádění konfirmačních testů používají vzorky zaslané z těchto vyšetřovacích laboratoří. NRL/AIDS a NRL/VH mají pro konfirmační testování standardní postupy (SOP) včetně speciálních žádankových formulářů. S požadavky na konfirmační testy jsou všechny terénní vyšetřovací laboratoře seznámeny a podle nich postupují při předávání reaktivních vzorků k vyšetření. Seznam akreditovaných zkoušek (vyšetření), které jsou prováděny v LCEM shrnuje tabulka (viz str.14 19). Se seznamem zkoušek jsou zákazníci LCEM (zdravotnická zařízení) seznámeni na hlavní domovské stránce Centra epidemiologie a mikrobiologie Státního zdravotního ústavu:

2 Strana č.: 2 A. Obecná pravidla pro odběr a transport primárních vzorků pro bakteriologické vyšetření: 1. Sérologické vyšetření protilátek (infekce mykobakteriální, hemofilové, streptokokové, pneumokokové, meningokokové, yersiniemi, lymeská borrelióza) 1.1 Odběr krve pro sérologické vyšetření Pro sérologické vyšetření se odebírá žilní krev bez použití protisrážlivých prostředků s dodržováním všech bezpečnostních pravidel (dezinfekce místa vpichu, stříkačky a jehly pro jedno použití, rukavice pro jedno použití pro odebírající personál). Odběr by se měl provádět nejlépe ráno nalačno za aseptických podmínek. Krev se odebírá do sterilních zkumavek na jedno použití (event. s aktivátorem hemokoagulace) v množství 3-7 ml podle požadavků vyšetřující laboratoře. Krev by neměla být hemolyzovaná nebo chylózní. Dobře uzavřené zkumavky se opatří štítkem s identifikačními znaky vyšetřovaného pacienta. Pozn.: a) při podezření na selhání Hib vakcíny (u invazivního Hib onemocnění dětí očkovaných Hib vakcínou) se odebírají 2 následné vzorky sér po 1 ml (akutní sérum - odebrané co nejdříve po začátku onemocnění a rekonvalescentní sérum odebrané za 14 a více dnů po začátku onemocnění) b) o patologické hladině streptokokových protilátek (ASO, ADNB) je možné se vyjádřit pouze vyšetřením dvou vzorků od téhož jedince ve vhodném časovém odstupu (3-4 týdny). První vzorek může být odebrán již koncem prvního týdne po začátku onemocnění (retrospektivní průkaz tonzilofaryngitidy) nebo ihned při podezření na poststreptokokový sterilní následek c) pro průkaz vzestupu antipneumokokových postvakcinačních protilátek je zapotřebí dvou vzorků sér (odběr před zahájením imunizace a 3-4 týdny po jejím ukončení). 1.2 Žádanka o vyšetření Ke každému vzorku pro vyšetření musí být přiložena žádanka o vyšetření, která obsahuje informace postačující pro identifikaci pacienta a oprávněného žadatele a poskytuje odpovídající klinické údaje. Žádanka obsahuje následující údaje: jednoznačnou identifikaci pacienta jméno a adresu pracoviště lékaře oprávněného požadovat vyšetření nebo používat lékařské informace předurčené pro výslednou zprávu laboratoře včetně IČZ a kódu odbornosti pracoviště druh primárního vzorku požadované vyšetření příslušné klinické informace o pacientovi nutné pro volbu vhodných vyšetřovacích metod a pro interpretaci výsledku vyšetření datum odběru primárního vzorku 1.3 Transport vzorku do laboratoře Zkumavka s odebranou plnou krví se obalí savým materiálem (buničitá vata apod.) k zachycení event. úniku krve a uloží se do pevného transportního kontejneru (termobox). Plná krev se může skladovat před doručením do laboratoře nejdéle 24 hodin při pokojové teplotě nebo 72 hodin při teplotě C. Nelze-li dodržet tuto

3 Strana č.: 3 podmínku, je nutno po sražení krve oddělit sérum od krevního koláče a do laboratoře zaslat jen oddělené sérum. Sérum je možno skladovat při teplotě o C max. 5 dní. Sérum je možno před transportem zamrazit a dlouhodobě skladovat při teplotě -20º C ± 5ºC. Tato teplota musí být dodržována až do vyšetření vzorku. 2. Průkaz bakteriálního agens 2.1 Odběr primárních vzorků pro přímý průkaz střevních bakterií a stafylokoků stolice moč výtěr z pochvy, výtěr z rány, stěr z kůže odebírá se tamponem na tyčince z umělé hmoty, kterou zavedeme do konečníku 1 2 cm hluboko. Tampon po odběru zasuneme do transportního media (např. AMIES) ve sterilní zkumavce s uzávěrem po omytí zevního ústí uretry se odebírá střední proud nejlépe ranní moče nebo cévkovaná moč (event. z permanentního katétru) do sterilní umělohmotné nádobky (kontejneru) se šroubovacím víčkem do odeslání max. 4 hod. při o C, transport do 24 hod. při o C nebo při pokojové teplotě do odeslání max. 4 hod. při o C, transport do 12 hod. při C nebo do 2 hod. při pokojové teplotě Odebírá se na sterilní transportní tampon do odeslání max. 4 hod. při o C, s médiem (AMIES, STUART). Větší množství transport do 24 hod. při o C nebo materiálu odebereme do sterilní zkumavky při pokojové teplotě nebo kontejneru 2.2 Odběr primárních vzorků pro přímý průkaz vyvolavatele lymeské borreliózy a ehrlichiózy (Borrelia burgdorferi senzu lato, Ehrlichia) nesrážlivá krev pro získání plazmy 5 ml krve (odběr dle kap. 1.1) do zkumavky s antikoagulačním činidlem (citrát, EDTA) 48 hod. při pokojové teplotě, pro vyšetření v PCR max. 8 hod. likvor min. 3 ml bez aditiv 48 hod. při C, pro vyšetření v PCR max. 8 hod. punktát (synoviální, kardiální tělní tekutiny, tkáně (pro kultivaci) min. 3 ml 48 hod. při C, pro vyšetření v PCR max. 8 hod. min. 2 ml tělní tekutiny či vzorek tkáně o velikosti 2 mm 3, odebírat do speciálních médií 24 hod. při pokojové teplotě (např. BSK) tkáně (pro PCR) vzorky o velikosti 2 mm 3, odebírat do fyziologického roztoku tkáně bioptické a autoptické (pro ELM) vzorky o velikosti 2 mm 3, odebírat do glutaraldehydu 24 hod. při C 48 hod. při pokojové teplotě Primární vzorek musí být odebrán za aseptických podmínek do sterilní plastové šroubovací zkumavky na specializovaných pracovištích. Jednotlivý primární vzorek se odebírá vždy pouze pro vyšetření v jedné metodě a je provázen samostatnou žádankou o vyšetření.

4 Strana č.: Odběr primárních vzorků pro přímý průkaz mykobakterií sputum bronchoalveolární laváž odběr ráno, nalačno, před hygienou ústní dutiny. Je nutné nemocného upozornit, aby před odběrem několikrát zakašlal se zavřenými ústy. K odběru je vhodná sterilní umělohmotná nebo skleněná nádobka se širokým hrdlem. Množství 2-5 ml sputa, ne sliny. Opakovat ve 3 po sobě následujících dnech odběr podle metodického návodu pro obor TRN, provádí se pouze ve specializovaných pneumologických zařízeních žaludeční výplach odběr nalačno žaludeční sondou. Objem ml, získá se natažením do sterilní stříkačky. Zpracovat nejpozději do 4 hodin po odběru, není-li možné tento interval dodržet, je nutné vzorek neutralizovat roztokem uhličitanu nebo fosforečnanu sodného (10 g na 100 ml sterilní destilované vody). Odběr na gastroenterologických odděleních moč likvor, pleurální výpotek, punktát výtěry a stěry z píštělí, hnisavých procesů a ran menstruační krev odběr ráno, střední proud moči,do sterilní nádobky se širokým hrdlem, v množství ml. Opakovat 3 po sobě následující dny odběr v množství 3-5 ml za aseptických podmínek na specializovaných pracovištích odběr se provádí třemi (ve sterilní destilované vodě zvlhčenými) laryngeálními sondami. Pokud je z postiženého místa možné získat tekutý materiál, odebírá se do injekční stříkačky odebírá se v prvních 3 dnech menstruace na sterilní tampón z gázy, který je do pochvy zaveden nejméně na 3 hodiny. Po vynětí se ve sterilní Petriho misce předá do laboratoře ke zpracování stolice odběr do parazitologických zkumavek s lopatičkou, vzorek velikosti lískového oříšku bioptický a sekční materiál laryngální výtěr 24 hod. při o C chránit před slunečním a germicidním zářením 24 hod. při o C chránit před slunečním a germicidním zářením 24 hod. při o C chránit před slunečním a germicidním zářením 24 hod. při o C chránit před slunečním a germicidním zářením 24 hod. při o C chránit před slunečním a germicidním zářením 24 hod. při o C chránit před slunečním a germicidním zářením 24 hod. při o C chránit před slunečním a germicidním zářením 24 hod. při o C chránit před slunečním a germicidním zářením odběr vzorku tkáně o velikosti cca 2 cm 3 do sterilní nádobky. K tkáni nesmí být přidán 24 hod. při o C chránit před žádný fixační ani konzervační prostředek slunečním a germicidním zářením pro svou malou citlivost a vysoké riziko infekce při odběru používán velmi zřídka. Odběr ráno 24 hod. při o C chránit před nalačno, před provedením hygieny ústní dutiny. slunečním a germicidním zářením Jeden vzorek představují 3 laryngeální tampónové sondy z chrommolybdenového drátu, které jsou před odběrem ponořeny do sterilní destilované vody a po odběru zasunuty zpět do zkumavky. Odběr se provádí na spec. pracovištích

5 Strana č.: Odběr primárních vzorků pro přímý průkaz N.meningitidis, H. influenzae, S. pneumoniae (identifikace DNA) likvor nesrážlivá krev pro získání plazmy plná krev sérum bronchoalveolární laváž (BAL) hrudní výpotek 0,5-1 ml za aseptických podmínek do sterilní plastové šroubovací zkumavky 5 ml krve (odběr dle kap. 1.1) do zkumavky s antikoagulačním činidlem (citrát sodný) 4,5 ml + 0,5 ml citrátu sodného 0,5 ml asepticky do sterilní plastové šroubovací zkumavky 0,5 ml asepticky do sterilní plastové šroubovací zkumavky 0,5 ml asepticky do sterilní plastové šroubovací zkumavky do odeslání max. 48 hod. při -20ºC ± 5ºC, transport do 12 hod. v kontejneru se suchým ledem (při rychlém dodání kurýrem stačí ledová tříšť) do odeslání max. 48 hod. při C, transport do 12 hod. při pokojové teplotě do odeslání max. 48 hod. při C, transport do 12 hod. při pokojové teplotě do odeslání max. 48 hod. při C, transport do 12 hod. při pokojové teplotě do odeslání max. 48 hod. při C, transport do 12 hod. při pokojové teplotě Primární vzorky je možné odebrat do dne po zahájení léčby antibiotiky. 2.5 Odběr primárních vzorků pro přímý průkaz beta-hemolytických streptokoků skupiny A z výtěrů horních cest dýchacích Pro mikrobiologickou diagnostiku tonzilofaryngitidy vyvolané streptokoky skupiny A, případně nosičství, je vhodné odebrat současně výtěr z tonzil a nosu (zvýšení záchytu). výtěr z tonzil za použití tampónu, který je součástí transportního systému (AMIES, STUART), se provede výtěr z tonzil pod zrakovou kontrolou pomocí špátle stlačující kořen jazyka. Tampón se nasadí na dolním pólu jedné tonzily a posunuje se valivým pohybem po celé ploše povrchu tonzily na druhou tonzilu od horního pólu k dolnímu, aniž se odebírající dotkne kořene jazyka. U povlaků lpících pevně na spodině se provede stěr nikoli z povrchu povlaků, ale z jejich okrajů. Tampón s odebraným materiálem se zanoří do transportního média a zkumavka se uzavře výtěr z nosu Tampón, který je součástí transportního systému (AMIES, STUART), se zavede do obou nosních průduchů asi 1-2 cm hluboko a rotačním pohybem se otře nosní sliznice. Tampón s odebraným materiálem se zanoří do 48 hod. při pokojové teplotě - chránit před slunečním zářením 48 hod. při pokojové teplotě - chránit před slunečním zářením

6 Strana č.: 6 transportního media a zkumavka se uzavře B. Obecná pravidla pro odběr a transport primárních vzorků pro virologické vyšetření: 1. Sérologické vyšetření protilátek proti adenovirům (AV), cytomegaloviru (CMV), viru Epsteina a Barrové (EBV), enterovirům, hantavirům, virům hepatitidy, herpetickým virům, viru lidského imunodeficitu (HIV), virům chřipky, viru klíšťové encefalitidy, viru lymfocytární meningitidy, papillomavirům, parvoviru B19, virům parainfluenzy (PIV), polyomavirům, viru příušnic, Respiračnímu syncytiálnímu viru (RSV), viru spalniček, viru varicella zoster (VZV), viru zarděnek, chlamydiím 1.1 Odběr, transport a skladování krve pro sérologické virologické vyšetření Pro sérologické vyšetření se odebírá žilní krev bez použití protisrážlivých prostředků s dodržováním všech bezpečnostních pravidel (dezinfekce místa vpichu, stříkačky a jehly pro jedno použití, rukavice pro jedno použití pro odebírající personál). Odběr by se měl provádět nejlépe ráno nalačno za aseptických podmínek. Krev se odebírá do sterilních zkumavek na jedno použití (event. s aktivátorem hemokoagulace) v množství 5-7 ml. Krev by neměla být hemolyzovaná nebo chylózní. Dobře uzavřené zkumavky se opatří štítkem Pro sérologický průkaz virové infekce se obvykle doporučuje vyšetření párových sér: - akutní sérum - odebrané co nejdříve po začátku onemocnění - rekonvalescentní sérum - odebrané za 14 a více dnů (dle jednotlivých agens) po začátku onemocnění. Zkumavka s odebranou plnou krví se obalí savým materiálem (buničitá vata apod.) k zachycení event. úniku krve a uloží do pevného transportního kontejneru (termobox). Plná krev se může skladovat před doručením do laboratoře nejdéle 24 hodin při pokojové teplotě nebo 72 hodin při teplotě C. Nelze-li dodržet tuto podmínku, je nutno po sražení krve oddělit sérum od krevního koláče a do laboratoře zaslat jen oddělené sérum. Sérum je možno skladovat při teplotě o C max. 5 dní. Sérum je možno před transportem zamrazit a dlouhodobě skladovat při teplotě -20ºC. Tato teplota musí být dodržována až do vyšetření vzorku Odběr, transport a skladování dalších biologických vzorků pro sérologické virologické vyšetření Pro sérologické vyšetření některých virových infekcí lze použít i další biologické vzorky (plazma, likvor, sliny). Způsob odběru, transport a skladování viz následující tabulka: nesrážlivá krev pro získání plazmy 5 ml krve (odběr dle kap. 1.1) do zkumavky s antikoagulačním činidlem (nejlépe EDTA) 24 hod. při pokojové teplotě nebo 72 hod. při C, jinak nutno plazmu oddělit od krevních buněk. Oddělenou plazmu možno skladovat při C max. 5 dní, dlouhodobě při -20ºC

7 Strana č.: 7 likvor odběr likvoru v množství min. 1 ml za aseptických podmínek (specializovaná pracoviště) sliny plodová voda pro odběr slin se používá speciální odběrový set, který na vyžádání dodá příslušná laboratoř odběr plodové vody v množství 5 ml za aseptických podmínek 5 dní při C, dlouhodobě při -20ºC 14 dní při pokojové teplotě, dlouhodobě při -20ºC 5 dní při C, dlouhodobě při -20ºC 1.2 Žádanka o vyšetření Ke každému vzorku pro vyšetření musí být přiložena žádanka o vyšetření, která obsahuje informace postačující pro identifikaci pacienta a oprávněného žadatele a poskytuje odpovídající klinické údaje. Žádanka obsahuje následující údaje: jednoznačnou identifikaci pacienta jméno a adresu pracoviště lékaře oprávněného požadovat vyšetření nebo používat lékařské informace předurčené pro výslednou zprávu laboratoře včetně IČZ a kódu odbornosti pracoviště druh primárního vzorku požadované vyšetření příslušné klinické informace o pacientovi nutné pro volbu vhodných vyšetřovacích metod a pro interpretaci výsledku vyšetření datum odběru primárního vzorku 2. Průkaz virového agens 2.1 Odběr primárních vzorků pro přímý průkaz viru lidského imunodeficitu (HIV) nesrážlivá krev pro získání plazmy a mononukleár. buněk periferní krve 5-7 ml krve (odběr dle kap. 1.1) do zkumavky s antikoagulačním činidlem (jen EDTA) 6 hod. při pokojové teplotě, jinak nutno plazmu oddělit od krevních buněk. Oddělenou plazmu možno skladovat 48 hod. při C, dlouhodobě při -70ºC 2.2 Odběr primárních vzorků pro přímý průkaz virů lidských hepatitid (HBV,HCV,HVD) nesrážlivá krev pro získání plazmy srážlivá krev pro získání séra 5-7 ml krve (odběr dle kap. 1.1) do zkumavky s antikoagulačním činidlem (jen EDTA) 24 hod. při pokojové teplotě, jinak nutno plazmu oddělit od krevních buněk. Oddělenou plazmu možno skladovat 5 dní při C, dlouhodobě při -20ºC 5-7 ml krve (odběr dle kap. 1.1) 24 hod. při pokojové teplotě, jinak nutno sérum oddělit od krevního koláče. Sérum možno skladovat 5 dní při C, dlouhodobě při -20ºC

8 Strana č.: Odběr primárních vzorků pro přímý průkaz viru chřipky a nechřipkových respiračních agens (AV, RSV, PIV, SARS coronavirus) výtěr z nosohltanu odběr ráno, nalačno, před hygienou ústní dutiny do odeslání max. 24 hod. při o C, sterilním tamponem. Pacienta před výtěrem dlouhodobě při -70ºC. Transport nechat několikrát zakašlal se zavřenými ústy. do 24 hod. při o C nebo při Jedním tamponem provést stěr zadní stěny pokojové teplotě nosohltanu krouživým pohybem (vyhnout se mandlím).tampon zalomit do sterilní zkumavky s odběrovým virologickým médiem ( 1 ). Druhým tamponem provést stejným způsobem stěr z obou nosních průduchů a tampon zalomit do stejné zkumavky s odběrovým virologickým médiem ( 1 ) BAL,výplach, aspirát odběr do sterilní nádobky do odeslání max. 24 hod. při o C, dlouhodobě při -70ºC. Transport do 24 hod. při o C nebo při pokojové teplotě sputum odběr ráno, nalačno, před hygienou ústní do odeslání max. 24 hod. při o C, dutiny. Pacienta nechat před odběrem dlouhodobě při -70ºC. Transport několikrát zakašlal se zavřenými ústy. Množství do 24 hod. při o C nebo při 2-5 ml sputa, ne sliny, do sterilní nádobky pokojové teplotě moč odběr 3-4 ml do sterilní zkumavky 24 hod. při o C výtěr spojivkového sterilním tamponem do sterilní zkumavky 24 vaku s odběrovým virologickým médiem ( 1 ) hod. při o C, dlouhodobě při -70ºC seškrab z rohovky sterilním tamponem do sterilní zkumavky s odběrovým virologickým médiem ( 1 ) 24 hod. při o C, dlouhodobě při -70ºC výtěr z rekta sterilním tamponem do sterilní zkumavky 24 s odběrovým virologickým médiem ( 1 ) hod. při o C stolice odběr do sterilní zkumavky, vzorek velikosti do odeslání během transportu max. 24 lískového oříšku hod. při o C sekční materiál (trachea do sterilní nádobky, nebo stěr z trachey do 12 sterilní zkumavky s odběrovým virologickým hod. při o C, dlouhodobě při -70ºC s bifurkací) médiem ( 1 ) 1 Složení odběrového virologického média: PBS ph 7,4, 2% roztok BSA a antibiotika (2000 j/ml penicilinu a 1 mg/ml streptomycinu, při použití v tkáňových kulturách přidat 25 µg/ml amphotericinu). Médium dodává rovněž NRL na vyžádání.

9 Strana č.: Odběr primárních vzorků pro přímý průkaz herpetických virů (CMV 1, EBV 2, HSV 1,2 3, VZV 4,HHV6 5,HHV8 6 ) moč ( 1 ) do sterilní nádobky 72 hod. při o C výtěr z nosohltanu sterilním tamponem do odběrového 24 ( 1,3,4 ) virologického média (dodá laboratoř na hod. při o C, dlouhodobě při -70ºC vyžádání) biopsie, autopsie ( 1,2,3,4,5,6, ) likvor, ( 1,2,3,4,5, ) sliny ( 5,6 ) BAL, výpotek, aspirát ( 1,2,3,4,5,6, ) leukocyty, polymorfonukleáry ( 1 ) krev (PCR) ( 1,2,5,6, ) 3 cca 1 mm nefixované tkáně do 0,5 ml 6 sterilního odběrového virologického média nebo hod. při o C, dlouhodobě při -70ºC sterilního fyziologického roztoku do sterilní nádobky 72 hod. při o C, dlouhodobě při -70ºC do sterilní nádobky 7 dní při o C,dlouhodobě při -70ºC ± 5ºC 5 ml nesrážlivé krve (odběr dle kap. 1.1) do zkumavky s antikoagulačním činidlem (heparin, EDTA, citrát) 5 ml nesrážlivé krve (odběr dle kap. 1.1) do zkumavky s antikoagulačním činidlem (EDTA) 12 hod. při o C 24 hod. při o C, po separaci při o C max. 7 dní, dlouhodobě při -70ºC kostní dřeň ( 1,2,5, ) 3 ml punktátu do EDTA 24 hod. při o C, po separaci při o C max. 7 dní, dlouhodobě při -70ºC plodová voda ( 1,3,4 ) ascites, ( 1,2,3,4,5,6 ) oční tekutina ( 1,4 ) stěr z kožní a slizniční léze ( 2,3,4 ) tekutina z puchýřků ( 3,4, ) stěr z rohovky, spojivky, ( 1,3,4, ) do sterilní nádobky 72 hod. při o C, dlouhodobě při -70ºC stěr sterilním tamponem z čerstvého puchýřku 24 do odběrového virologického média (stěr nemá hod. při o C, dlouhodobě při -70ºC být kontaminovaný krví) injekční stříkačkou do 0,5 ml PBS 7 dní při o C, dlouhodobě při -70ºC stěr sterilním tamponem do odběrového virologického média 24 hod. při o C, dlouhodobě při -70ºC Volba optimálního vzorku závisí na klinických příznacích pacienta, typu viru a vyšetřovací metody. V případě nejasností konzultujte s laboratoří.

10 Strana č.: Odběr primárních vzorků pro přímý průkaz enterovirů (Polio, ECHO, Coxsackie) stolice 2 g stolice do sterilní uzavřené nádoby 48 hod. při C, dlouhodobě při -20ºC likvor 1 ml do sterilní nádobky 48 hod. při C, dlouhodobě při -20ºC výpotek 1 ml do sterilní nádobky 48 hod. při C, dlouhodobě při -20ºC výtěr z nosohltanu sterilním tamponem do sterilního odběrového virologického média 48 hod. při C, dlouhodobě při -20ºC 2.6 Odběr primárních vzorků pro přímý průkaz chlamydií nazofaryngeální výtěr konjunktivální stěr- průkaz antigenu konjunktivální stěr- PCR BAL, výpotek, aspirát, sputum cervikovaginální výtěr suchým sterilním tamponem, který se zalomí do sterilní zkumavky s odběrovým médiem ( 1 ) suchým sterilním tamponem, zhotovení otiskového preparátu na imunofluorescenční sklíčko (oči před vyšetřením nijak nevymývat a nerozkapávat) suchým sterilním tamponem, zalomt do sterilní zkumavky s odběrovým médiem ( 1 ) (oči před vyšetřením nijak nevymývat a nerozkapávat) 48 hod. při o C 48 hod. při o C 48 hod. při o C do sterilní nádobky 72 hod. při o C, dlouhodobě při -70 C ± 5 C suchým sterilním tamponem, zalomit do sterilní zkumavky s odběrovým médiem ( 1 ) 48 hod. při o C moč první proud ranní moče do sterilní nádobky 48 hod. při o C 1 Komerčně dostupná odběrová média pro chlamydie nebo STD, nebo 0,5 ml sterilního fyziologického roztoku.

11 Strana č.: Odběr primárních vzorků pro elektronovou mikroskopii moč, likvor, BAL, sérum, plazma, vezikulární tekutina, nazofaryngeální výtěr stolice krusty, biopsie, autopsie odběr vzorků do sterilních zkumavek nebo transportních nádobek s pevným uzávěrem. Min. množství kapalných vzorků je 0,2 ml, max. 2 ml odběr vzorků do sterilních zkumavek nebo transportních nádobek s pevným uzávěrem. Vzorek o velikosti lískového oříšku nebo max. 2 ml odběr vzorků do sterilních zkumavek nebo transportních nádobek s pevným uzávěrem. Vzorky o velikosti 5 mm 3 do odeslání max. 24 hod. při C, transport do 24 hod. při C nebo při pokojové teplotě do odeslání max. 24 hod. při C, transport do 24 hod. při C nebo při pokojové teplotě do odeslání max. 24 hod. při C, transport do 24 hod. při C nebo při pokojové teplotě

12 Strana č.: 12 C. Obecná pravidla pro odběr a transport primárních vzorků pro parazitologické vyšetření: 1. Sérologické vyšetření protilátek proti toxoplasmám a leptospirám 1.1 Odběr, transport a skladování krve pro sérologické parazitologické vyšetření Pro sérologické vyšetření se odebírá žilní krev bez použití protisrážlivých prostředků s dodržováním všech bezpečnostních pravidel (dezinfekce místa vpichu, stříkačky a jehly pro jedno použití, rukavice pro jedno použití pro odebírající personál). Odběr by se měl provádět nejlépe ráno nalačno za aseptických podmínek. Krev se odebírá do sterilních zkumavek na jedno použití (event. s aktivátorem hemokoagulace) v množství 3-7 ml podle požadavků vyšetřující laboratoře. Krev by neměla být hemolyzovaná nebo chylózní. Dobře uzavřené zkumavky se opatří štítkem s identifikačními znaky vyšetřovaného pacienta. Zkumavka s odebranou plnou krví se obalí savým materiálem (buničitá vata apod.) k zachycení event. úniku krve a uloží do pevného transportního kontejneru (termobox). Plná krev se může skladovat před doručením do laboratoře nejdéle 24 hodin při pokojové teplotě nebo 72 hodin při teplotě o C. Nelze-li dodržet tuto podmínku, je nutno po sražení krve oddělit sérum od krevního koláče a do laboratoře zaslat jen oddělené sérum. Sérum je možno skladovat při teplotě o C max. 5 dní. Sérum je možno před transportem zamrazit a dlouhodobě skladovat při teplotě -20ºC. Tato teplota musí být dodržována až do vyšetření vzorku. 1.2 Žádanka o vyšetření Ke každému vzorku pro vyšetření musí být přiložena žádanka o vyšetření, která obsahuje informace postačující pro identifikaci pacienta a oprávněného žadatele a poskytuje odpovídající klinické údaje. Žádanka obsahuje následující údaje: jednoznačnou identifikaci pacienta jméno a adresu pracoviště lékaře oprávněného požadovat vyšetření nebo používat lékařské informace předurčené pro výslednou zprávu laboratoře včetně IČZ a kódu odbornosti pracoviště druh primárního vzorku požadované vyšetření příslušné klinické informace o pacientovi nutné pro volbu vhodných vyšetřovacích metod a pro interpretaci výsledku vyšetření datum odběru primárního vzorku 2. Průkaz toxoplasem 2.1 Odběr primárních vzorků pro izolaci toxoplasem likvor min. 1 ml, neředit, nestabilizovat, nemrazit do odeslání max. 12 hod. při C, transport max. 6 hodin při C

13 Strana č.: 13 plodová voda min. 5 ml, neředit, nestabilizovat, nemrazit do odeslání max. 12 hod. při C, transport max. 6 hodin při C Reference: 1. Kolektiv autorů: Doporučené metody ve virologické diagnostice, Acta hygienica, epidemiologica et microbiologica č.1/2000, str M.Otavová a kolektiv: Doporučený postup při odběru klinického materiálu pro diagnostiku respiračních virů, Zprávy CEM (SZÚ, Praha) 2004, 13(9), str D.Zusková a kolektiv: Principy boje s přenosnými nemocemi, kapitola II Odběr a zasílání materiálu na mikrobiologické vyšetření, str.14 37, Avicenum Kolektiv autorů: Doporučené standardní metody v mikrobiologii mykobakteriálních infekcí, příloha k časopisu Klinická mikrobiologie a infekční lékařství, NRLM Praha, X/1998, str.1-48.

14 Strana č.: 14 Akreditované zkoušky prováděné v Laboratořích CEM NRL Název zkoušky Identifikace zkoušky EIA - stanovení protilátek HIV-1/2, SOP-NRL/AIDS HIV-1 p24 antigenu a současné stanovení až protilátek HIV-1/2 a HIV-1 p24 antigenu Předmět zkoušky Lidské sérum, plazma, sliny NRL pro AIDS ELFA - stanovení HIV-1 p24 antigenu a současné stanovení protilátek HIV-1/2 a HIV-1 p24 antigenu SOP-NRL/AIDS SOP-NRL/AIDS Lidské sérum, plazma Western blot - stanovení protilátek HIV-1/HIV-2 SOP-NRL/AIDS Lidské sérum, plazma PCR stanovení HIV nukleových kyselin a rezistence k antiretrovirovým preparátům SOP-NRL/AIDS až 10-01, 15-03, Mononukleární buňky periferní krve, plazma Sekvenační metody - určení genotypu HIV-1 Agarová diluční metoda vyšetření citlivosti bakterií k antibiotikům SOP-NRL/AIDS-11-01, SOP-NRL/ATB Mononukleární buňky periferní krve Izoláty bakterií NRL pro antibiotika Disková difuzní metoda vyšetření citlivosti bakterií k antibiotikům SOP-NRL/ATB Izoláty bakterií Vyšetření beta-laktamázy bakterií SOP-NRL/ATB Izoláty bakterií Mikroskopický průkaz mykobakterií (přímá mikroskopie) a mikroskopie nátěru z kultury Kultivační průkaz mykobakterií SOP-NRL/M SOP-NRL/M SOP-NRL/M až Klinický materiál (sputum, punktát, krev, stolice, laryngální výtěr, aspirát, bronchoalveolární laváž - BAL, žaludeční výplach, bioptický a sekční materiál, výtěry a stěry z píštělí hnisavých procesů a ran), mykobakteriální kultura Klinický materiál viz zkouška č. 19 NRL pro mykobakterie Identifikace mykobakterií konvenčními a molekulárně biologickými metodami SOP-NRL/M SOP-NRL/M Mykobakteriální kultura Stanovení citlivosti mykobakterií na antituberkulotika a další antibakteriální léky SOP-NRL/M až Mykobakteriální kultura Průkaz sérových protilátek proti mykobakteriálním antigenům SOP-NRL/M Lidské sérum Analýza DNA M.tuberculosis SOP-NRL/M Kultura M.tuberculosis Stanovení mykobaktericidní účinnosti dezinfekčních látek suspenzní metodou SOP-NRL/M Dezinfekční připravky

15 Strana č.: 15 NRL Název zkoušky Identifikace zkoušky Stanovení nukleových kyselin různých druhů SOP-NRL/LB Borrelia burgdorferi sensu lato SOP-NRL/LB Předmět zkoušky Krev, mok, výpotek, tkáň, klíště, mikrobiální kultury ELISA (enzyme-linked immunoassay), sérologický průkaz spec. protilátek LB SOP-NRL/LB Protilátky, imunokomplexy v lidském séru, moku, výpotku NRL pro lymeskou borreliózu Průkaz antigenů Borrelia garinii a Borrelia afzelii a identifikace epitopů protilátek LB pomocí Western blotu SOP-NRL/LB SOP-NRL/LB Tkáň, mok, sérum, výpotek, kultury Borrelia garinii, B.afzelii,B. burgdorferi Kultivace Borrelia v speciálním BSK médiu SOP-NRL/LB Krev, mok, výpotek, tkáň, klíště Kvantitativní stanovení antigenu a protilátek proti r.borrelia a Ehrlichia pomocí imunofluorescence IFA SOP-NRL/LB Krev, mok, kultury Borrelia Přímý průkaz Borrelia pomocí imunosorbentní elektronové mikroskopie (ISEM) SOP-NRL/LB Plazma, mok, tkáň Stanovení antigenů nebo protilátek proti antigenům virů hepatitid neautomatizovanou EIA metodou SOP-NRL/VH Lidské sérum, lidská plazma a jejich deriváty NRL pro virovou hepatitidu Stanovení nukleových kyselin virů hepatitid metodou PCR Automatizované stanovení antigenů a protilátek proti antigenům virů hepatitid SOP-NRL/VH až a SOP-NRL/VH Lidské sérum, lidská plazma a jejich deriváty Lidské sérum, lidská plazma a jejich deriváty Stanovení protilátek proti antigenům virů hepatitid metodou LIA SOP-NRL/VH Lidské sérum, lidská plazma a jejich deriváty NRL pro meningokokové nákazy Identifikace species rodu Neisseria Identifikace antigenů Neisseria meningitidis a)kapsulárních b)nekapsulárních Identifikace ET typů Neisseria meningitidis Průkaz DNA mikroorganismu v klinickém materiálu amplifikací SOP-NRL/MEN SOP-NRL/MEN až SOP-NRL/MEN SOP-NRL/MEN až SOP-NRL/MEN a SOP-NRL/MEN SOP-NRL/MEN až SOP-NRL/MEN a SOP-NRL/MEN SOP-NRL/MEN až Klinický materiál (likvor, krev, nazofaryngeální výtěr), kultury bakteriálních kmenů Kultury Neisseria meningitidis Kultury Neisseria meningitidis Klinický materiál (likvor, krev, sérum) Detekce antimeningokokových protilátek SOP-NRL/MEN SOP-NRL/MEN až Klinický materiál (sérum)

16 Strana č.: 16 NRL Název zkoušky Identifikace zkoušky Identifikace Haemophilus species SOP-NRL/HEM až Předmět zkoušky Kultury bakteriálních kmenů NRL pro hemofilové nákazy Identifikace kapsulárního antigenu Haemophilus influenza SOP-NRL/HEM SOP-NRL/HEM Kultury bakteriálních kmenů Detekce protilátek proti Haemophilus influenzae b metodou ELISA SOP-NRL/HEM Lidské sérum Stanovení streptokokových protilátek SOP-NRL/STR až Lidské sérum Identifikace species streptokoků a enterokoků SOP-NRL/STR až SOP-NRL/STR Kmeny streptokoků a enterokoků, klinický materiál (výtěry krk, nos, vagína, anus, likvor, krev, moč) NRL pro streptokoky a enterokoky Identifikace skupinového antigenu streptokoků a enterokoků SOP-NRL/STR až SOP-NRL/STR až Kmeny streptokoků a enterokoků, klinický materiál (výtěry krk, nos, vagína, anus, likvor, krev, moč) Identifikace typového antigenu streptokoků SOP-NRL/STR až SOP-NRL/STR až Kmeny streptokoků a enterokoků, klinický materiál (výtěry krk, nos, vagína, anus, likvor, krev, moč) Molekulární typizace streptokoků SOP-NRL/STR Izoláty bakterií Hemaglutinačně inhibiční test (HIT) pro identifikaci virového antigenu a pro průkaz antivirových protilátek (virus chřipky, viry parainfluenzy) SOP-NRL/CH SOP-NRL/CH Lidské a zvířecí sérum, virová tekutina NRL pro chřipku Izolace a pomnožení viru chřipky a nechřipkových resp. virů v buněčných kulturách a v kuřecích embryích Imunoperoxidázový test (IPT) pro průkaz a identifikaci antigenů viru chřipky a nechřipkových resp. virů SOP-NRL/CH SOP-NRL/CH SOP-NRL/NCH SOP-NRL/CH SOP-NRL/NCH Klinický materiál (výtěr nosohltanu, krční výplach, aspirát, BAL, autopsie), virová tekutina Klinický materiál (výtěr nosohltanu, krční výplach, aspirát, BAL),virová tekutina Testování citlivosti chřipkových kmenů k antivirotikům SOP-NRL/CH Virem infikovaná buněčná kultura pod vlivem antivirotika PCR - průkaz nukleových kyselin respiračních agens SOP-NRL/CH-30-03, 31-03,33-03,34-03, až 39-03, NRL Název zkoušky Identifikace zkoušky Klinický materiál (výtěr nosohltanu, krční výplach, aspirát, BAL, sputum, výtěr ze spojivkového vaku, moč, stolice, autopsie), virová tekutina, virem infikovaná buněčná kultura Předmět zkoušky

17 Strana č.: 17 NRL pro nechřipkové respirační viry NRL pro přímou diagnostiku virů, borelií a cizorod. buněk v klinickém materiálu pomocí elektronmikroskopických metod NRL pro enteroviry EIA pro průkaz a identifikaci virových antigenů a antivirových protilátek (virus chřipky, nechřipkové respirační viry, M. pneumoniae) Komplement fixační test (KFR) pro identifikaci virových antigenů a pro průkaz antivirových protilátek (virus chřipky, nechřipkové respirační viry, M.pneumoniae) Imunofluorescenční test (IFT) pro průkaz a identifikaci virových antigenů a pro průkaz antivirových protilátek (virus chřipky, nechřipkové respirační viry) Virus neutralizační test (VNT) pro typizaci virových antigenů (nechřipkové respirační viry) Přímý průkaz virů pomocí elektronové mikroskopie SOP-NRL/NCH SOP-NRL/NCH SOP-NRL/NCH SOP-NRL/NCH SOP-NRL/NCH SOP-NRL/NCH SOP-NRL/NCH SOP-NRL/ELM až Klinický materiál (výtěr nosohltanu, krční výplach, aspirát, BAL, výtěr ze spojivkového vaku, seškrab rohovky, moč,lidské sérum, autopsie), virová tekutina, zvířecí sérum Lidské a zvířecí sérum, virová tekutina Klinický materiál (výtěr nosohltanu, krční výplach, aspirát, BAL, lidské sérum, autopsie), infikované buněčné kultury, zvířecí sérum Virová tekutina Stolice, moč, plazma, sérum, mozkomíšní mok, vesikulární tekutiny, laváže horních a dolních dýchacích cest, bioptický a autoptický materiál, vakcíny Izolace enterovirů na TK SOP-NRL/ENT Stolice, likvor, výtěr krku, odpadní vody Identifikace poliovirů na TK SOP-NRL/ENT Stolice, likvor, výtěr krku odpadní vody Identifikace ECHO a coxsackie virů SOP-NRL/ENT Stolice, likvor, výtěr krku, odpadní vody Průkaz protilátek proti antigenům enterovirů SOP-NRL/ENT Lidské sérum ELISA - průkaz protilátek proti enterovirům SOP-NRL/ENT Lidské sérum NRL pro herpetické viry ELISA průkaz virového antigenu a protilátek proti hantavirům Stanovení virových antigenů a protilátek proti herpetickým virům metodou EIA Stanovení virových antigenů a protilátek proti herpetickým virům metodou nepřímé imunofluorescence Izolace a identifikace herpetických virů v tkáňové kultuře Průkaz nukleových kyselin herpetických virů metodou amplifikace vybraného úseku virového genu SOP-NRL/ENT SOP-NRL/ENT SOP-NRL/HV SOP-NRL/HV-02-02, SOP-NRL/HV SOP-NRL/HV SOP-NRL/HV-05-02, 06-02, NRL Název zkoušky Identifikace zkoušky NRL pro zarděnky, ELISA - sérologický průkaz spec. antivirových SOP-NRL/ZSP spalničky, parotitidu protilátek Lidské sérum, myší orgány (ledviny, plíce) Lidské sérum, plazma, mozkomíšní mok Lidské sérum, plazma, mozkomíšní mok Stěr z léze, moč, BAL, aspirát, výtěr ze spojivky, autopsie, výtěr nosohltanu, leukocyty, infikované buněčné kultury Krev, mozkomíšní mok, stěr z léze, moč, BAL, aspirát, výtěr ze spojivky, leukocyty, autopsie, infikované buněčné kultury, oční tekutina, synoviální tekutina, plodová voda Předmět zkoušky Lidské sérum

18 Strana č.: 18 a parvovirus B19 NRL pro chlamydie NRL pro leptospiry (virus zarděnek,spalniček, příušnic, parvovirus B 19) Stanovení chlamydiového antigenu a protilátek proti chlamydiovým antigenům metodou EIA Stanovení chlamydiových antigenů a protilátek proti těmto antigenům pomocí imunofluorescence (IFA, DFA) Průkaz bakteriální DNA metodou amplifikace vybraného úseku bakteriálního genu Mikroskopický aglutinační test (MAT) k průkazu antileptospirových protilátek SOP-NRL/CHLA SOP-NRL/CHLA SOP-NRL/CHLA SOP-NRL/CHLA SOP-NRL/CHLA SOP-NRL/CHLA SOP-NRL/LEPT Lidské sérum, plazma, moč, uretrální, cervikální, konjunktivální výtěry Lidské sérum, plazma, uretrální, cervikální, nazofaryngeální výtěry, konjunktivální výtěry, BAL, sputum Moč, uretrální, cervikální, nazofaryngeální výtěry, konjunktivální výtěry, BAL, sputum, kloubní výpotky Lidská krev, sérum, likvor NRL pro toxoplasmosu NRL pro stafylokoky NRL pro salmonely Stanovení protilátek proti Toxoplasma gondii komplementfixační reakcí Stanovení protilátek proti Toxoplasma gondii tříd IgA,IgE,IgG a IgM metodou ELISA Stanovení avidity protilátek IgG proti Toxoplasma gondii Analýza protilátek proti Toxoplasma gondii metodou Western blot Izolace Toxoplasma gondii na laboratorních zvířatech Kultivace a identifikace Staphylococcus species Fenotypizace kmenů Staphylococcus aureus Fenotypizace ostatních kmenů stafylokoků Průkaz stafylokokových toxinů metodou PCR Kultivace a identifikace Salmonella species Fenotypizace salmonel Kultivace a identifikace Escherichia, Shigella a ostatních rodu z čeledi Eterobacteriaceae SOP-NRL/TOX SOP-NRL/TOX SOP-NRL/TOX SOP-NRL/TOX SOP-NRL/TOX SOP-NRL/ST-01-02, 02-02, SOP-NRL/ST-02-02, 04-02, SOP-NRL/ST-02-02, 04-02, SOP-NRL/ST-44-04, SOP-NRL/SA-01-02, 02-02, SOP-NRL/SA-02-02, 04-02, SOP-NRL/ECS až Lidské nebo zvířecí sérum, plazma, likvor, plodová voda, oční tekutina Lidské sérum, plazma, likvor, plodová voda, oční tekutina Lidské sérum, plazma Lidské sérum, plazma, likvor, plodová voda, oční tekutina Lidská krev, likvor, plodová voda, oční tekutina, bioptický či sekční materiál Klinický materiál (krev, stolice, moč, výtěr z pochvy, z rány, stěr z kůže, lidské sérum), bakteriální kultura Kmeny stafylokoků, fágy Kmeny stafylokoků Kmeny Staphylococcus aureus Klinický materiál (moč, stolice, krev), bakteriální kultura Kultura salmonel Klinický materiál (moč, stolice, krev), bakteriální kultura NRL pro E.coli a shigely Fenotypizace Escherichia, Shigella a ostatních SOP-NRL/ECS-02-02, Kultura E.coli rodu z čeledi Enterobacteriaceae Kultivace a identifikace Vibrio species SOP-NRL/ECS-01-02, Klinický materiál (moč, stolice, krev), bakteriální kultura Fenotypizace Vibrio cholerae SOP-NRL/ECS Kultura vibrií NRL Název zkoušky Identifikace zkoušky Kultivace a identifikace Yersinia species SOP-NRL/YE až Předmět zkoušky Klinický materiál (moč, stolice, krev), bakteriální kultura

19 Strana č.: 19 NRL pro yersinie Fenotypizace Yersinia enterocolitica SOP-NRL/YE-02-02, Kultury Y. enterocolitica Odběr primárních vzorků: NRL Přesný název postupu odběru Identifikace postupu odběru Odebíraný materiál NRL pro chřipku, NRL pro nechřipkové respirační viry Doporučený postup pro provádění nazofaryngeálního výtěru SOP/V-NRL/NCH Nazofaryngeální výtěr