|
|
- Alois Pešan
- před 8 lety
- Počet zobrazení:
Transkript
1 CHIÁNÍ KAPAINOVÁ CHOMATOGAFIE J. FÄHNICH Obecné základy separace opticky aktivních látek Opticky aktivní látky se při interakci s elektromagnetickým zářením projevují ve dvou směrech. Jednak stáčejí rovinu lineárně polarizovaného světla, jednak rozdílně absorbují pravotočivě a levotočivě kruhově polarizované světlo. První jev studuje polarimetrie a v závislosti na vlnové délce optická rotační disperze, druhý z těchto jevů je označován jako cirkulární dichroismus a pro jeho měření se používá takto označovaná forma absorpční spektrometrie. Oba jevy jsou závislé na vlnové délce (podobně jako index lomu a absorbance) a jsou spolu vzájemně vázány integrální transformací (Kronig-Kramers). Aby tedy látka stáčela rovinu polarizovaného světla v určité spektrální oblasti, musí existovat spektrální oblast, kde se projevuje její cirkulární dichroismus, a naopak. Optická aktivita se může projevit pouze u chirálních látek. Tímto termínem jsou označovány látky, které se vyskytují ve dvou formách, které jsou vzájemně zrcadlově symetrické (podobně jako pravá a levá ruka) a nejsou přitom stejné, tzn. nelze je převést na sebe pouhým přemístěním v prostoru. Tyto stereoisomerní formy jsou označovány jako enantiomery. Jako racemická směs se označuje směs obsahující oba enantiomery ve stejném množství. Tato směs není opticky aktivní, protože se účinky obou forem kompenzují. Mezi opticky aktivní patří například ty látky, které obsahují čtyřvazný uhlíkový atom s různými substituenty nebo jiné tzv. (asymetrické) chirální centrum. Chiralita může být ale spojena i se sekundární strukturou molekuly, jak je tomu u biopolymerů tvořících pravotočivou či levotočivou šroubovici. Pokud molekula obsahuje n chirálních center, je počet možných stereoisomerů dán vztahem 2 n. Některé z nich tvoří zrcadlově symetrické dvojice enantiomerů, které mají stejné fyzikálně chemické vlastnosti, pouze jejich optická aktivita se liší znaménkem. Stereoisomery, které nejsou ve vztahu zrcadlové symetrie, jsou označovány jako diastereoizomery a mají obecně odlišné fyzikálně chemické vlastnosti. Materiál obsahující oba enantiomery určité opticky aktivní látky bývá charakterizován veličinou označovanou jako enantiomerní přebytek ee (enantiomeric excess) neboli enantiomerní či optická čistota. Je dán vztahem n1 n2 ee= n + n 1 2 kde n 1 a n 2 jsou látková množství obou enantiomerů. Jako míra cirkulárního dichroismu se měří rozdíl absorbance levotočivého a pravotočivého cirkulárně polarizovaného záření A A= A A Často se ale výsledky měření vyjadřují jako tzv. elipticita θ. To souvisí s tím, jak se cirkulární dichroismus projeví u lineárně polarizovaného světelného paprsku. Ten je možno rozložit na dva opačně kruhově polarizované paprsky o stejné amplitudě a fázi. Po průchodu prostředím vykazujícím
2 cirkulární dichroismus se ale jeden z těchto paprsků zeslabí více než druhý. Když se pak opět složí dohromady, výsledkem není lineárně polarizované světlo, ale světlo elipticky polarizované. (srv. Jako elipticita je označován úhel, který svírá přepona pravoúhlého trojúhelníku tvořeného poloosami elipsy, kterou opisuje vektor elektrického pole v rovině kolmé na směr šíření paprsku, s hlavní osou elipsy (Obr.1). Obr. 1 Průchod lineárně polarizovaného světla opticky aktivním prostředím. Vlevo lineárně polarizované světlo vstupující do prostředí a jeho rozklad na pravotočivou a levotočivou komponentu, vpravo superposice obou paprsků po průchodu prostředím, je-li pravotočivý paprsek zeslaben více než levotočivý. ( E θ = arctg E E + E 1 E = arctg 1+ E / E / E 1 10 = arctg ( A A ) / = arctg A / 2 ( A A )/ 2 A / 2 Pro nízké hodnoty A zanedbáním vyšších členů rozvoje dostaneme ln(10) θ = 4 A
3 pro elipticitu vyjádřenou v radiánech a 180 ln(10) θ = A= 32, 9821 A 4π pro elipticitu vyjádřenou ve stupních. Pro separaci enantiomerů bývá používáno několik přístupů, které využívají biotransformace, membránové děje, krystalizaci, extrakci kapalina-kapalina, elektroforézu a v neposlední řadě chromatografii. Aby bylo možno chromatograficky dělit enantiomery, musí být v separačním systému přítomna v nějaké formě opticky aktivní složka. V jednom přístupu se složky vzorku derivatizují chirálním derivatizačním činidlem. Z enantiomerních složek vzorku se tím vytvoří diastereoizomerní deriváty, které jsou v principu již separovatelné i v systémech s achirální stacionární a mobilní fází. Druhou, častější možnost separace přinášejí chirální stacionární fáze. Dnes je komerčně dostupná celá řada chirálních sorbentů, které jsou použitelné pro separace v normálním nebo reversním modu. Některé fáze jsou použitelné pro oba typy separací. V této práci je pro chirální separace použita kolona plněná sorbentem ux 3µm Cellulose-3 (Phenomenex Inc.). Tento sorbent patří do skupiny chirálních stacionárních fází na bázi polysacharidů. Jedná se o p-methylbenzoátový derivát celulózy (Obr. 2 ). Sorbent je použitelný pro separace v normálním i reversním modu. Výrobce uvádí vysokou účinnost a stabilitu až do tlaků 300 bar. Obr. 2 Struktura chirálního sorbentu ux Cellulose-3 ( Návod laboratorní práce SEPAACE DEIVÁTŮ POPANOVÉ KYSEINY Úkolem práce je nalezení vhodných podmínek pro separaci zadané neznámé směsi derivátů propanové kyseliny na běžné koloně pro chromatografii s obrácenými fázemi a rovněž na chirální koloně. Za těchto podmínek budou izolovány jednotlivé komponenty. Pro izolované frakce budou změřena absorpční spektra jednak na konvenčním spektrofotometru CAY 50, jednak s využitím CD detektoru JASCO CD Deriváty propanové kyseliny tvoří významnou skupin farmaceuticky aktivních látek. Mezi deset ve světě nejprodávanějších léčiv patří Ibuprofen (Obr. 3) ((S)-2-(isobutylfenyl)-propanová kyselina). Je používán v přípravcích proti zánětu, bolesti a horečce ve formě racemické směsi, i když farmakologicky aktivní je pouze jeho (S)-forma. I ()-enantiomer je nicméně v organismu postupně racemizován na aktivní (S) formu. Disociační konstanta ibuprofenu má hodnotu pka=4.43±0.03,
4 distribuční koeficient n-oktanol/voda je 11.7 při ph=7.4 a racemická směs má bod tání C. ( Bod tání čistých enantiomerů je pouze okolo 51 C. Obr. 3 Struktura Ibuprofenu I další deriváty propanové kyseliny mají podobné farmakologické využití. Jako příklad (Obr. 4) uveďme Ketoprofen ((S)-2-(3-Benzoylfenyl)propanová kyselina), Naproxen ((S)-2-(6-Methoxy-2- naftyl)propanová kyselina, Carprofen ((S)-2-(6-chloro-9H-carbazol-2-yl)propanová kyselina), Fenoprofen ((S)-2-(3-fenoxyfenyl)propanová kyselina) nebo oxoprofen ((S)-2-{4-[(2- oxocyklopentyl)methyl]fenyl}propanová kyselina). Ketoprofen Naproxen Fenoprofen Carprofen oxoprofen Obr. 4 Struktura některých farmakologicky významných derivátů propanové kyseliny Úkoly: 1. Ověřte činnost kapalinového chromatografu 2. Separujte isokraticky zadanou směs derivátů propanové kyseliny na koloně pro separaci s obrácenými fázemi pro tři složení mobilní fáze
5 3. Separujte isokraticky zadanou směs derivátů propanové kyseliny na chirální koloně pro tři složení mobilní fáze 4. Pro vybrané složení mobilní fáze opakovaně izolujte frakce ze separace na chirální koloně 5. Změřte absorpční spektra zachycených frakcí na spektrometru CAY Pro vybrané složení mobilní fáze separujte zadanou směs derivátů propanové kyseliny na chirální koloně s detekcí detektorem JASCO CD Separujte zadanou směs derivátů propanové kyseliny na chirální koloně s detekcí detektorem JASCO CD-2095 se současným záznamem CD a UV spekter 8. Zpracujte výsledky (určete retenční časy jednotlivých složek vzorku pro obě kolony a vyneste do grafu v závislosti na složení mobilní fáze, zobrazte spektra frakcí změřená na spektrometru CAY 50 a odhadněte pravděpodobnou strukturu chromoforu v těchto látkách, porovnáním se separací na chirální koloně určete, která z komponent vzorku má chirální charakter, zobrazte CD a absorpční spektra změřená detektorem JASCO CD-2095) Přístroje a zařízení Kapalinový chromatograf a jeho ovládání Kapalinový chromatograf je zobrazen na Obr. 5. V tomto konkrétním případě bude využívána tzv. kapalinová chromatografie na obrácené/reverzní fázi. Kolona pro separaci s obrácenými fázemi je naplněna sorbentem Eclipse Plus C18, který má formu sférických částic o střední průměrné velikosti 5 µm. Sorbent je vyráběn z porézního silikagelu. Jeho povrch je chemicky modifikován hydrofobními kovalentně navázanými oktadecylovými řetězci. Vlastní analytická kolona má rozměry 50 2,1 mm a je chráněna předkolonou o rozměrech 12,5 x 2,1 mm. Celková délka separačního lože je tedy 62,5mm. Chirální kolona je naplněna sorbentem ux 3µm Celllulose-3 o průměrné velikosti částic 3 µm. Kolona má rozměry mm, předkolona 2 x 2 mm, celková délka separačního lože je tedy 152 mm. Obr. 5 Kapalinový chromatograf 1 zásobníky mobilní fáze, 2 degaser mobilní fáze, 3 směšovací ventil mobilní fáze (nízkotlaký gradient), 4 vysokotlaké čerpadlo, 5 nástřikový ventil (smyčkový dávkovač,
6 injektor), 6 chromatografická kolona s předkolonou, 7 detekční cela UV-VIS detektoru. Mobilní fází je směs 0.1% vodný roztok kyseliny mravenčí methanol. Přítomnost kyseliny mravenčí (pka=3,75) v mobilní fázi potlačí disociaci slabě kyselých separovaných složek. Mobilní fáze je online tvořena mícháním obou komponent ve směšovacím elektronicky řízeném ventilu kapalinového chromatografu. Poměr, ve kterém jsou obě komponenty míchány, je volitelný. Při tzv. isokratické separaci je udržován po celou dobu analýzy na konstantní hodnotě. Čerpadlo ale umožnuje i tvorbu tzv. nízkotlakého gradientu, při kterém se poměr směšovaní mění během analýzy podle předem nastaveného programu. Před vstupem do směšovacího ventilu jsou z obou komponent mobilní fáze odstraňovány rozpuštěné plyny průtočným vakuovým degaserem. Vzorek je do toku mobilní fáze dávkován nástřikovým ventilem (smyčkovým dávkovačem). Do jeho krátké kapiláry (smyčky) o přibližném objemu 20 µl může být injekční stříkačkou nadávkován analyzovaný vzorek. Po přepnutí ventilu je smyčka vřazena do toku mobilní fáze a nadávkovaný vzorek je mobilní fází unášen na začátek kolony. Na výstupu z kolony jsou jednotlivé složky detegovány fotometrickým detektorem. Signál z detektoru je zaznamenáván počítačem, který je vybaven chromatografickým programem Clarity. Fotometrický detektor měří absorpci ultrafialového záření mobilní fází, která vytéká z kolony. Jako zdroj záření je použita deuteriová výbojka, z jejíhož spektra je monochromátorem izolováno záření s volitelnou detekční vlnovou délkou. Průtočná kyveta má optickou délku 1 cm a celkový objem 14 µl. Tok UV záření prošlý kyvetou je měřen fotodiodou. Elektrický signál na výstupu z detektoru je lineárně závislý na absorbanci roztoku v průtočné kyvetě pro zvolenou vlnovou délku. Zpracování signálu z detektoru Chromatografická datastanice Clarity pracuje pod operačním systémem Windows. Naměřené chromatogramy jsou ukládány jako soubory na pevný disk počítače. Uložené datové soubory mohou být kdykoliv vyvolány a dále zpracovány tak, aby se získaly např. informace o retenčních časech, plochách píku, výškách píku nebo o účinnosti kolony. (Při kvantitativní chromatografické analýze je možno vytvořit kalibrační soubory, s jejichž pomocí lze získat údaje o obsahu stanovované složky v nastřikovaném roztoku.) V této práci bude využita jen malá část možností, které datastanice poskytuje. Spuštění chromatografického systému Zkontrolujeme sestavení přístroje (kabely, kapiláry) a zjistíme, zda jsou ovládací tlačítka na chromatografu a počítači ve vypnuté poloze. Zapneme síťový vypínač na chromatografu (na přístroji je umístěn vlevo dole), po chvíli se rozsvítí oranžová ED dioda (vpravo nahoře), instrument je ve standby stavu. Zapneme síťový vypínač na počítači. Automaticky začne běžet spouštění programu Windows a na obrazovce se objeví požadavek Prihlášení k systému Windows. Uživatelské jméno bude automaticky předvyplněno ( student ), položku Heslo vyplníme také student a stiskneme tlačítko OK. Na ploše spustíme dvojklikem program Clarity. Objeví se nové okno se symbolem přikrytého chromatografu. Klikneme na něj, otevře se okno ogin Dialog s požadavkem Enter user name a s roletovým menu s nabídkou naposledy zpracovávaného projektu. Zde je možno vybrat projekt, který chceme otevřít k dalšímu zpracování, nebo vytvořit projekt nový. Pak beze změny user name stiskneme tlačítko OK. Po tomto kroku se objeví symbol odkrytého chromatografu a otevře se zvolený projekt ve stavu, v jakém byl naposledy opuštěn. V hlavním okně Clarity je zobrazeno formou ikon celé schéma chromatografického systému. Klikáním na ikony je pak možno přistupovat k jednotlivým částem/modulům HPC systému. Nahoře na liště okna je zobrazeno označení chromatografického systému a aktuálně zvolená metoda. Pokud je zvolena jiná metoda než Method
7 C:\Clarity\UVbezCD.met, vyhledáme tuto metodu v adresáři C:\Clarity\ příkazem File/Open Method a otevřeme ji. Dále v hlavním okně Clarity příkazem Monitor/Device Monitor otevřeme stejně označené okno obsahující v částech Grad. Pump, Column Oven a VWD aktuální informace o stavu gradientového čerpadla, termostatu kolony a detektoru s proměnnou vlnovou délkou (Variable Wavelength Detector). V tomto okně je také možno přímo vypnout nebo zapnout tyto části chromatografu. Dále klikneme na symbol vialky s mikrostříkačkou ve schématu HPC v hlavním okně Clarity. Otevře se okno umožňující v položce označené Chromatogram File Name volbu jména souboru, ve kterém bude budoucí chromatogramu uložen. Pokud již soubor s uvedeným jménem v rámci projektu již existuje, bude po ukončení následné analýzy po varování přepsán. Ostatní položky mohou zůstat nevyplněny. Dále v této obrazovce klikneme na Send Method. Tím se odešlou pracovní podmínky uvedené ve zvolené metodě z počítače do chromatografu. Chromatografický systému se pak přepne ze stavu standby do pracovního režimu podle těchto podmínek. ozběhne se čerpadlo, degaser mobilní fáze, a zapne se deuteriová lampa detektoru. V okně Device Monitor ověříme, zda parametry experimentu odpovídají požadovaným hodnotám: průtok 0,1 ml min -1, složení mobilní fáze 80% methanolu (složky B), detekční vlnová délka 220 nm. Nakonec ověříme, že v otevřeném okně se schématem HPC (v hlavním menu Clarity) je v dolní části nápis Waiting. Tím je systém připraven k prvnímu nástřiku. Úprava pracovních podmínek chromatografu Pokud je třeba změnit pracovní podmínky chromatografu, jako je průtok či složení mobilní fáze nebo detekční vlnová délka, upravíme nejprve aktuální parametry metody v příslušných sekcích nabídky Method ( Event Table, Measurement, Acquisition, Ingtegration, Calculation a Advanced a Thermostat Control ). Tyto sekce jsou rovněž přístupné ze sekce Method/C Control, v níž se nastavuje průtok a složení mobilní fáze. Pracovní podmínky chromatografu se nastaví podle změněných podmínek po příkazu Send Method v sekci C Control nebo v okně Single Analysis. Nástřik vzorku na kolonu a ukončení analýzy Přestavováním páky smyčkového dávkovače je smyčka tvořená nerezovou kapilárou buď vřazována, nebo vyřazována z toku mobilní fáze na kolonu. Je použita smyčka o celkovém objemu přibližně 20 µl. Přesvědčíme se, že v okně Clarity je v jeho dolní části nápis Waiting. Do injekční stříkačky nabereme definovaný objem roztoku, který chceme nastříknout na kolonu. Stříkačku opatrně vsuneme do nástřikového otvoru v pravé horní části čelní stěny ventilu až na doraz. Páku ventilu rychle přestavíme z polohy Inject do krajní polohy oad. Potom píst stříkačky zvolna stlačíme a tak přesuneme její obsah do smyčky. Následně rychle přestavíme páku zpět do polohy Inject. Tím se smyčka vřadí zpět do toku mobilní fáze a její obsah se tak nastříkne na kolonu. Spínací kontakt na ventilu současně automaticky spustí záznam chromatogramu programem Clarity. Přesvědčíme se o tom pohledem na hlavní okno Clarity se schématem HPC. Původní nápis Waiting se změnil na unning a nalevo od nápisu je zobrazován aktuální čas od provedení nástřiku. Potom vyjmeme stříkačku z ventilu, promyjeme ji několikrát methanolem a pak prostříkneme několikrát methanolem i dávkovací ventil, aniž bychom přitom páku ventilu kamkoliv přesunovali. Důležité: páku ventilu vždy přestavujeme sice opatrně, ale co nejrychleji, protože mezi krajními polohami páky je průtok mobilní fáze částečně přerušen a toto přerušení by mělo být co nejkratší.
8 Sběr dat lze ukončit stisknutím ikony STOP (symbol dopravní značky Stop). Po ukončení analýzy se může (podle toho jak je datastanice nastavena) automaticky otevřít okno Chromatogram Window, ve kterém je zobrazen právě získaný chromatogram. Detektor cirkulárního dichroismu JASCO CD-2095 Tento chromatografický detektor umožňuje měřit současně s absorbancí roztoku v průtočné kyvetě také jeho cirkulární dichroismus. Pracuje v rozsahu vlnových délek nm se spektrální šířkou pásu 20 nm (na vlnové délce 365 nm). Jeho optické schéma je na Obr. 6. Jako zdroj záření je v tomto detektoru použita vysokotlaká výbojka obsahující xenon a rtuťové páry. Její spektrum obsahuje kromě kontinua tepelného záření obloukového výboje intenzivní čáry spektra rtuti. Záření z výbojky je kolimátorem soustředěno do polarizátoru typu Glan-Taylorova hranolu, který izoluje z dopadajícího záření lineárně polarizovanou složku. Záření dále prochází monochromátorem (Monk-Gilliesonova montáž), jehož mřížka má 1200 vrypů na mm. Obr. 6 Optické schema detektoru JASCO CD-2095 Víceméně monochromatické lineárně polarizované záření déle dopadá na fotoelastický modulátor. (Srv. Toto zařízení využívá dvojlomu vytvořeného v některých materiálech při jejich deformaci. V důsledku dvojlomu se mohou lineárně polarizované paprsky, jejichž rovina polarizace je na sebe vzájemně kolmá, pohybovat různou rychlostí a tak získat vůči sobě fázový posun. Nabude-li fázový posun hodnotu ±π/4, vznikne při stejné amplitudě obou složek pravotočivě resp. levotočivě kruhově polarizované záření. Ve fotoelastickém modulátoru je deformace vytvářena periodicky piezoelektrickým krystalem řízeným střídavým napětím. Toto napětí je voleno tak, aby při maximálním stlačení a roztažení materiálu byl vytvořen právě fázový posun ±π/4. Procházející paprsek se tak periodicky mění v rozmezí pravotočivého a levotočivého kruhově polarizovaného záření. Takto modulované záření prochází průtočnou kyvetou a dopadá na fotodiodu. Pokud kyveta neobsahuje látku, která rozdílně absorbuje pravotočivě a levotočivě kruhově polarizované záření, mění se signál fotodiody pouze podle celkové
9 absorbance roztoku v kyvetě. Jakmile je v kyvetě pravotočivé a levotočivé záření absorbováno různě, objeví se na signálu fotodiody střídavá složka, z níž je možno vyhodnotit rozdíl absorbancí pro pravotočivé a levotočivé záření a tím i elipticitu. Střední hodnota signálu slouží i v tomto případě k určení celkové absorbance roztoku v průtočné kyvetě. Detektor má tedy dva výstupy, jeden pro CD signál a druhý pro celkovou absorbanci. Analogový výstup CD signálu pro integrátor je na detektoru JASCO CD-2095 kalibrován (vodným roztokem d-kamforsulfonátu amonného) tak, aby napětí 1V odpovídala elipticita 1, na výstupu pro celkovou absorbanci odpovídá napětí 1 V absorbanci A=1. Průtočná kyveta detektoru má optickou délku 25 mm a její objem je 44 µl. Pracovní návod 1. Ověřte činnost kapalinového chromatografu Zadaný vzorek (roztok derivátů propanové kyseliny) naředíme (smícháme 800 µl methanolu, 30 µl vzorku a 200 µl vody). S kolonou pro separaci s obrácenými fázemi zvolíme složení mobilní fáze 0,1% mravenčí kyselina ve vodě methanol 90:10, průtok 0,1 ml min -1 a detekční vlnovou délku 220 nm. Několikrát propláchneme stříkačku a smyčku dávkovacího ventilu methanolem. Poté, co se stabilizuje základní linie, nastříkneme na kolonu 1 µl zředěného vzorku. Stříkačku důkladně propláchneme methanolem. Zaznamenáme a uložíme chromatogram (doba záznamu asi 15 min). 2. Separujte isokraticky zadanou směs derivátů propanové kyseliny na koloně pro separaci s obrácenými fázemi pro tři složení mobilní fáze Opakujeme separaci za stejných podmínek jako v předchozím kroku. Pokud se chromatogram nebude lišit, je chromatografický systém již ostatečně stabilizován. Pak nastavíme složení mobilní fáze v poměru 85:15 a po 5 minutách stabilizace podmínek nástřik opakujeme. Postup opakujeme pro složení mobilní fáze v poměru 80: Separujte isokraticky zadanou směs derivátů propanové kyseliny na chirální koloně pro tři složení mobilní fáze V chromatografu nahradíme kolonu pro separace s obrácenými fázemi chirální kolonou. Nastavíme stejné podmínky jako v bodu 1 a po stabilizaci základní linie nastříkneme naředěný vzorek. Dále postupujeme stejně jako v bodu Pro vybrané složení mobilní fáze opakovaně izolujte frakce ze separace na chirální koloně Na základě měření v bodu 3 zvolíme složení mobilní fáze, které bude vhodné pro izolaci komponent obsažených ve vzorku. Po stabilizaci základní linie nastříkneme na kolonu 5 µl původního vzorku. Během separace budeme jednotlivé významné komponenty jímat do předem připravených vialek. Nástřik a izolaci budeme opakovat ještě alespoň dvakrát. Do jedné z vialek zachytíme rovněž samotnou mobilní fázi pro záznam základní linie při měření spekter. 5. Změřte absorpční spektra zachycených frakcí na spektrometru CAY 50 Na spektrometru CAY 50 nastavíme podmínky měření (rozsah nm, krok měření 0,5 nm a dobu měření jednoho bodu 0,1 s, režim měření s korekcí základní linie). Do čisté křemenné kyvety spektrometru vneseme samotnou mobilní fázi, vložíme do spektrometru a zaznamenáme základní linii. Poté postupně do kyvety vneseme jednotlivé najímané frakce a zaznamenáme jejich spektra. Při těchto měřeních je automaticky odečítána předem změřená základní linie. Je důležité, aby měřící paprsek ve spektrometru procházel nerušeně roztokem v kyvetě a nedopadal na stěnu nebo dno kyvety nebo při malém objemu roztoku na jeho hladinu. To se většinou projeví jako zvýšená úroveň absorpce na vlnové délce 400 nm, kde by absorbance měla být blízká nule, pokud měřený roztok není barevný. 6. Pro vybrané složení mobilní fáze separujte zadanou směs derivátů propanové kyseliny na chirální koloně s detekcí detektorem JASCO CD-2095
10 Kapilárou propojíme výstup mobilní fáze z detektoru chromatografu Agilent se vstupem detektoru JASCO CD Ukončíme program Clarity a spustíme program aunch Manager. Zde zvolíme konfiguraci přístroje Jasco_CD a poté, co se spustí program Clarity zvolíme příkazem File/oad Method metodu UVsCD.met a aktivujeme ji příkazem Send Method. Na detektoru JASCO CD nastavíme detekční vlnovou délku 220 nm (postupný stisk kláves EDIT/ENTE, 220 a a EDIT/ENTE na klávesnici detektoru). Na kapalinový chromatograf pak nastříkneme původní vzorek a zaznamenáme chromatogram registrovaný detektorem chromatografu Agilent a dále CD a UV chromatogramy registrované detektorem JASCO CD Separujte zadanou směs derivátů propanové kyseliny na chirální koloně s detekcí detektorem JASCO CD-2095 se současným záznamem CD a UV spekter Na kapalinový chromatograf znovu nastříkneme původní vzorek a během separace zaznamenáme nejprve základní linii pro spektra měřená detektorem JASCO CD-2095 v oblasti, kde není eluována žádná složka vzorku. Poté zaznamenáme do jednotlivých registrů detektoru spektra jednotlivých eluovaných komponent vzorku. Je výhodné zaznamenat alespoň jedno spektrum na náběžné hraně píku a druhé na sestupné hraně píku. Doba záznamu spekter detektorem JASCO CD-2095 je poměrně dlouhá (asi 40 s) a tak se obsah kyvety detektoru během záznamu spektra významně mění. Pokud se ale zprůměruje měření na vzestupné a sestupné hraně píku, tento vliv změny složení roztoku v kyvetě během měření se částečně potlačí. Pro záznam spektra CD (a absorpčního spektra) se na detektoru JASCO CD-2095 stiskne tlačítko SCAN, čímž detektor přejde do režimu snímání spekter. Na výstupech z detektoru je stále aktuálně měřený CD a UV signál. Před záznamem spektra se stiskem kláves n, EDIT/ENTE, kde n je celé číslo od 0 do 9, zvolí paměťový registr detektoru, kam se má následně změřené spektrum uložit. Stiskem klávesy POG UN se zahájí měření spektra a jeho ukládání do paměti detektoru. Paměťový registr 0 je reservován pro spektrum základní linie, která je při exportu jednotlivých spekter od každého spektra automaticky odečítána. Do počítače jsou spektra z paměti detektoru přenášena (stejně jako chromatogramy) analogovým signálem, který je digitalizován datastanicí Clarity. Pro export spektrálních dat ukončíme program Clarity a spustíme program aunch Manager. Zde zvolíme konfiguraci přístroje SpectraCD a poté, co se spustí program Clarity zvolíme příkazem File/oad Method metodu CDSpectra.met a aktivujeme ji příkazem Send Method. Pak zvolíme jméno souboru pro uložení spektrálních dát, spustíme záznam dat programem Clarity a na detektoru JASCO CD-2095 postupně exportujeme spektra z jednotlivých registrů. Na detektoru zvolíme režim exportu dat stiskem SHIFT a SCAN. Kurzorem nebo z číselné klávesnice zvolíme číslo registru (0 až 9), ze kterého má být spektrum exportováno, volbu potvrdíme stiskem EDIT/ENTE a export spektra ze zvoleného registru zahájíme stiskem POG UN. Spektra v rozsahu 220 až 420 nm jsou exportována rychlostí 5 nm s -1 a jsou uvedena a zakončena konstantní úrovní signálu v délce 2 s. Protože ve zvolené metodě registruje program Clarity 5 hodnot za 1 s, jsou v souborech jednotlivé hodnoty od sebe vzdáleny právě o 1 nm.
KAPALINOVÁ CHROMATOGRAFIE A ABSORPČNÍ UV SPEKTROFOTOMETRIE
KAPALINOVÁ CHROMATOGRAFIE A ABSORPČNÍ UV SPEKTROFOTOMETRIE D. SÝKORA, J. FÄHNRICH Obecné základy kapalinové eluční kolonové chromatografie Kapalinová chromatografie je jednou z chromatografických separačních
VíceMěření koncentrace roztoku absorpčním spektrofotometrem
Měření koncentrace roztoku absorpčním spektrofotometrem Teoretický úvod Absorpční spektrofotometrie je metoda stanovení koncentrace disperzního podílu analytické disperze, založená na měření absorpce světla.
VíceSPEKTROSKOPICKÉ VLASTNOSTI LÁTEK (ZÁKLADY SPEKTROSKOPIE)
SPEKTROSKOPICKÉ VLASTNOSTI LÁTEK (ZÁKLADY SPEKTROSKOPIE) Elektromagnetické vlnění SVĚTLO Charakterizace záření Vlnová délka - (λ) : jednotky: m (obvykle nm) λ Souvisí s povahou fotonu Charakterizace záření
VíceZÁKLADNÍ ČÁSTI SPEKTRÁLNÍCH PŘÍSTROJŮ
ZÁKLADNÍ ČÁSTI SPEKTRÁLNÍCH PŘÍSTROJŮ (c) -2008, ACH/IM BLOKOVÉ SCHÉMA: (a) emisní metody (b) absorpční metody (c) luminiscenční metody U (b) monochromátor často umístěn před kyvetou se vzorkem. Části
VíceAnalýza kofeinu v kávě pomocí kapalinové chromatografie
Analýza kofeinu v kávě pomocí kapalinové chromatografie Kofein (obr.1) se jako přírodní alkaloid vyskytuje v mnoha rostlinách (např. fazolích, kakaových bobech, černém čaji apod.) avšak nejvíce je spojován
VíceMolekulová spektroskopie 1. Chemická vazba, UV/VIS
Molekulová spektroskopie 1 Chemická vazba, UV/VIS 1 Chemická vazba Silová interakce mezi dvěma atomy. Chemické vazby jsou soudržné síly působící mezi jednotlivými atomy nebo ionty v molekulách. Chemická
VíceHPLC - Detektory A.Braithwaite and F.J.Smith; Chromatographic Methods, Fifth edition, Blackie Academic & Professional 1996 Colin F. Poole and Salwa K.
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie - Detektory - I Příprava předmětu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 HPLC - Detektory A.Braithwaite and F.J.Smith; Chromatographic Methods, Fifth
VíceDerivační spektrofotometrie a rozklad absorpčního spektra
Derivační spektrofotometrie a rozklad absorpčního spektra Teorie: Derivační spektrofotometrie, využívající derivace absorpční křivky, je obecně používanou metodou pro zvýraznění detailů průběhu záznamu,
VíceRefraktometrie, interferometrie, polarimetrie, nefelometrie, turbidimetrie
Refraktometrie, interferometrie, polarimetrie, nefelometrie, turbidimetrie Refraktometrie Metoda založená na měření indexu lomu Při dopadu paprsku světla na fázové rozhraní mohou nastat dva jevy: Reflexe
VíceMETODY BEZ VÝMĚNY ENERGIE MEZI ZÁŘENÍM A VZORKEM
METODY BEZ VÝMĚNY ENERGIE MEZI ZÁŘENÍM A VZORKEM REFRAKTOMETRIE POLARIMETRIE SPEKTROMETRIE VYUŽÍVAJÍCÍ ROZPTYL MĚŘENÍ VELIKOSTI ČÁSTIC (c) -2012 REFRAKTOMETRIE Metoda založená na měření indexu lomu látek
VíceNávod k obsluze spektrofotometru UNICAM UV550
Návod k obsluze spektrofotometru UNICAM UV550 Tento návod slouží pro základní seznámení se spektrofotometem Unicam UV550 a jeho obsluhou. Detailní popis veškerých možností spektrofotometru a zejména obslužných
VíceFLUORIMETRICKÉ STANOVENÍ FLUORESCEINU
FLUORIMETRICKÉ STANOVENÍ FLUORESCEINU návod vznikl jako součást bakalářské práce Martiny Vidrmanové Fluorimetrie s využitím spektrofotometru SpectroVis Plus firmy Vernier (http://is.muni.cz/th/268973/prif_b/bakalarska_prace.pdf)
VíceSpektroskopické metody. převážně ve viditelné, ultrafialové a blízké infračervené oblasti
Spektroskopické metody převážně ve viditelné, ultrafialové a blízké infračervené oblasti Elektromagnetické záření Elektromagnetické záření je postupné vlnění elektromagnetického pole složeného z kombinace
VíceMĚŘENÍ ABSOLUTNÍ VLHKOSTI VZDUCHU NA ZÁKLADĚ SPEKTRÁLNÍ ANALÝZY Measurement of Absolute Humidity on the Basis of Spectral Analysis
MĚŘENÍ ABSOLUTNÍ VLHKOSTI VZDUCHU NA ZÁKLADĚ SPEKTRÁLNÍ ANALÝZY Measurement of Absolute Humidity on the Basis of Spectral Analysis Ivana Krestýnová, Josef Zicha Abstrakt: Absolutní vlhkost je hmotnost
VíceMĚŘENÍ ABSORPCE SVĚTLA SPEKOLEM
MĚŘENÍ ABSORPCE SVĚTLA SPEKOLEM Průchodem světla homogenním prostředím se jeho intenzita zmenšuje podle Lambertova zákona. Klesne-li intenzita monochromatického světla po projití vrstvou tloušťky l z hodnoty
VíceABSORPČNÍ A EMISNÍ SPEKTRÁLNÍ METODY
ABSORPČNÍ A EMISNÍ SPEKTRÁLNÍ METODY 1 Fyzikální základy spektrálních metod Monochromatický zářivý tok 0 (W, rozměr m 2.kg.s -3 ): Absorbován ABS Propuštěn Odražen zpět r Rozptýlen s Bilance toků 0 = +
VíceDodatek k uživatelském manuálu Adash 4202 Revize 040528MK
Vyvažovací analyzátory Adash 4200 Dodatek k uživatelském manuálu Adash 4202 Revize 040528MK Email: info@adash.cz Obsah: Popis základních funkcí... 3 On Line Měření... 3 On Line Metr... 3 Časový záznam...
VíceSvětlo jako elektromagnetické záření
Světlo jako elektromagnetické záření Základní pojmy: Homogenní prostředí prostředí, jehož dané vlastnosti jsou ve všech místech v prostředí stejné. Izotropní prostředí prostředí, jehož dané vlastnosti
VíceSPEKTROMETRIE. aneb co jsem se dozvěděla. autor: Zdeňka Baxová
SPEKTROMETRIE aneb co jsem se dozvěděla autor: Zdeňka Baxová FTIR spektrometrie analytická metoda identifikace látek (organických i anorganických) všech skupenství měříme pohlcení IČ záření (o různé vlnové
VíceAplikační rozsah chromatografie
Chromatografické metody II. Aplikační rozsah chromatografie Chromatografie Kapalinová chromatografie rozdělení Nízkotlaká (atmosferický tlak) LPC Střednětlaká (4 Mpa) FPLC Vysokotlaká (40 Mpa) HPLC Ultravysokotlaká
VíceMěření optických vlastností materiálů
E Měření optických vlastností materiálů Úkoly : 1. Určete spektrální propustnost vybraných materiálů různých typů stavebních skel a optických filtrů pomocí spektrofotometru 2. Určete spektrální odrazivost
VíceAPO seminář 5: OPTICKÉ METODY v APO
APO seminář 5: OPTICKÉ METODY v APO Princip: fyzikální metody založené na interakci vzorku s elektromagnetickým zářením nebo na sledování vyzařování elektromagnetického záření vzorkem nespektrální metody
VíceINSTRUMENTÁLNÍ METODY
INSTRUMENTÁLNÍ METODY ACH/IM David MILDE, 2014 Dělení instrumentálních metod Spektrální metody (MILDE) Separační metody (JIROVSKÝ) Elektroanalytické metody (JIROVSKÝ) Ostatní: imunochemické, radioanalytické,
VíceZÁKLADY OBECNÉ A KLINICKÉ BIOCHEMIE
ZÁKLADY OBECNÉ A KLINICKÉ BIOCHEMIE 2004 Technologie kvantitativních metod Petr Štern kapitola ve skriptech - 4.2.2 Optické zdroje U V V I S I R Spektrální distribuční křivky W žárovky b.t. W ~ 3600 C
VíceMěření optických vlastností materiálů
E Měření optických vlastností materiálů Úkoly : 1. Určete spektrální propustnost vybraných materiálů různých typů stavebních skel a optických filtrů pomocí spektrofotometru 2. Určete spektrální odrazivost
VíceDETEKTORY pro kapalinovou chromatografii. Izolační a separační metody, 2018
DETEKTORY pro kapalinovou chromatografii Izolační a separační metody, 2018 Detektory v kapalinové chromatografii Typ detektoru Zkratka Měřená veličina Refraktometrický detektor RID index lomu Spektrofotometrický
VíceMěření spektra světelných zdrojů LED Osvětlovací soustavy - MOSV
FAKULTA ELEKTROTECHNIKY A KOMUNIKAČNÍCH TECHNOLOGIÍ VYSOKÉ UČENÍ TECHNICKÉ V BRNĚ Měření spektra světelných zdrojů LED Osvětlovací soustavy - MOSV Autoři textu: Ing. Tomáš Pavelka Ing. Jan Škoda, Ph.D.
Vícenano.tul.cz Inovace a rozvoj studia nanomateriálů na TUL
Inovace a rozvoj studia nanomateriálů na TUL nano.tul.cz Tyto materiály byly vytvořeny v rámci projektu ESF OP VK: Inovace a rozvoj studia nanomateriálů na Technické univerzitě v Liberci Experimentální
VíceStereochemie 7. Přednáška 7
Stereochemie 7 Přednáška 7 1 ptická čistota p = [ ]poz [ ]max x 100 = ee = [R] - [S] [R] + [S] x 100 p optická čistota [R], [S] molární frakce R a S enantiomerů ee + 100 %R = ee + %S = ee + 100 - %R =
VíceAdsorpce barviva na aktivním uhlí
Adsorpce barviva na aktivním uhlí TEORIE ABSORBANCE Prochází-li světelný tok monochromatických paprsků o intenzitě I 0 určitým prostředím dojde k pohlcení jisté části záření a intenzita záření se sníží
Více215.1.10 SKUPINOVÁ ANALÝZA MOTOROVÝCH NAFT
215.1.10 SKUPINOVÁ ANALÝZA MOTOROVÝCH NAFT ÚVOD Snižování emisí výfukových plynů a jejich škodlivosti je hlavní hnací silou legislativního procesu v oblasti motorových paliv. Po úspěšném snížení obsahu
VíceSpektroskopie v UV-VIS oblasti. UV-VIS spektroskopie. Roztok KMnO 4. pracuje nejčastěji v oblasti 200-800 nm
Spektroskopie v UV-VIS oblasti UV-VIS spektroskopie pracuje nejčastěji v oblasti 2-8 nm lze měřit i < 2 nm či > 8 nm UV VIS IR Ultra Violet VISible Infra Red Roztok KMnO 4 roztok KMnO 4 je červenofialový
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU SEMDURAMICINU METODOU HPLC
Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU SEMDURAMICINU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu semduramicinu v krmivech metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) v koncentračním
VíceKOMUNIKACE PC DAT 400/500. přes USB programem INOVATION
KOMUNIKACE PC DAT 400/500 přes USB programem INOVATION O programu Inovation Umožňuje konfigurovat analogově/digitální převodník DAT400/500 dálkovým ovládáním, přes PC a sériové rozhraní RS232 nebo přes
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU DEKOCHINÁTU METODOU HPLC
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU DEKOCHINÁTU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Tato metoda specifikuje podmínky pro stanovení dekochinátu metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie
VíceFluorescence (luminiscence)
Fluorescence (luminiscence) Patří mezi luminiscenční metody fotoluminiscence. Luminiscence efekt, kdy excitované molekuly či atomy vyzařují světlo při přechodu z excitovaného do základního stavu. Podle
VíceL 54/116 CS Úřední věstník Evropské unie
L 54/116 CS Úřední věstník Evropské unie 26.2.2009 8. Výsledky kruhových testů V rámci ES byly provedeny kruhové testy, při nichž až 13 laboratoří zkoušelo čtyři vzorky krmiva pro selata, včetně jednoho
VíceSPEKTRÁLNÍ METODY. Ing. David MILDE, Ph.D. Katedra analytické chemie Tel.: ; (c) David MILDE,
SEKTRÁLNÍ METODY Ing. David MILDE, h.d. Katedra analytické chemie Tel.: 585634443; E-mail: david.milde@upol.cz (c) -2008 oužitá a doporučená literatura Němcová I., Čermáková L., Rychlovský.: Spektrometrické
VícePráce se spektrometrem SpectroVis Plus Vernier
informace pro učitele Práce se spektrometrem SpectroVis Plus Vernier Aleš Mareček Kvinta úloha Měřené veličiny Přístroj SpectroVis Plus umožní studovat viditelnou část spektra a část blízké infračervené
VíceSpektrometrické metody. Reflexní a fotoakustická spektroskopie
Spektrometrické metody Reflexní a fotoakustická spektroskopie odraz elektromagnetického záření - souvislost absorpce a reflexe Kubelka-Munk funkce fotoakustická spektroskopie Měření odrazivosti elmg záření
VíceSpektrální charakteristiky optických komponentů
Úloha č. 5 pro laserová praktika KFE, FJFI, ČVUT Praha, verze 27.2.2014 Spektrální charakteristiky optických komponentů Úvod V laboratorní praxi často řešíme otázku, jak v experimentu použitý optický prvek
VíceMetody separace. přírodních látek
Metody separace přírodních látek (5) Chromatografie; základní definice a klasifikace ruzných metod; kapalinová chromatografie, plynová chromatografie, přístrojová technika. Chromatografie «F(+)d» 1897
VíceÚvod k biochemickému praktiku. Pavel Jirásek
Úvod k biochemickému praktiku Pavel Jirásek Úvodní informace 4 praktika B1 B2 B3 B4 4 týdny 8 pracovních stolů rozdělení kruhu do 8 pracovních skupin (v každé 2-3 studenti) Co s sebou na praktika plášť
VíceSentech AL 7000 C. Instalace a ovládání programu BREATH
Sentech AL 7000 C Instalace a ovládání programu BREATH Program BREATH slouží k ovládání detektoru alkoholu AL 7000C pomocí počítače. Umožňuje provádět měření, zaznamenávat je a exportovat do Excelu. Instalace
VíceSTANOVENÍ AZOBARVIV VE SMĚSI METODOU RP-HPLC SE SPEKTROFOTOMETRICKOU DETEKCÍ
STANOVENÍ AZOBARVIV VE SMĚSI METODOU RP-HPLC SE SPEKTROFOTOMETRICKOU DETEKCÍ 1 Úkol Separovat a metodou kalibrační křivky stanovit azobarviva (methyloranž - MO, dimethylová žluť - DMŽ) ve směsi metodou
VíceMěření a analýza mechanických vlastností materiálů a konstrukcí. 1. Určete moduly pružnosti E z ohybu tyče pro 4 různé materiály
FP 1 Měření a analýza mechanických vlastností materiálů a konstrukcí Úkoly : 1. Určete moduly pružnosti E z ohybu tyče pro 4 různé materiály 2. Určete moduly pružnosti vzorků nepřímo pomocí měření rychlosti
VíceVoltampérová charakteristika diody
Voltampérová charakteristika diody Pozn.: Voltampérovou charakteristiku diod, resp. i rezistorů, žárovek aj. lze proměřovat se soupravou ISES-PCI a též i s ISES-USB. Souprava ISES-PCI, resp. ISES-PCI Professional
VícePřednáška č.14. Optika
Přednáška č.14 Optika Obsah základní pojmy odraz a lom světla disperze polarizace geometrická optika elektromagnetické záření Světlo = elektromagnetické vlnění o vlnové délce 390nm (fialové) až 790nm (červené)
VíceSeparační metody v analytické chemii. Plynová chromatografie (GC) - princip
Plynová chromatografie (GC) - princip Plynová chromatografie (Gas chromatography, zkratka GC) je typ separační metody, kdy se od sebe oddělují složky obsažené ve vzorku a které mohou být převedeny do plynné
VícePříprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253
Příprava materiálu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 Část 16 Iontová chromatografie Iontová chromatografie je speciální technika vyvinutá pro separaci anorganických iontů a organických
VíceLogické řízení výšky hladiny v nádržích
Popis úlohy: Spojené nádrže tvoří dohromady regulovanou soustavu. Přívod vody do nádrží je zajišťován čerpady P1a, P1b a P3 ovládaných pomocí veličin u 1a, u 1b a u 3, snímání výšky hladiny je prováděno
VíceSpektrální charakteristiky
Spektrální charakteristiky Cíl cvičení: Měření spektrálních charakteristik filtrů a zdrojů osvětlení 1 Teoretický úvod Interakcí elektromagnetického vlnění s libovolnou látkou vzniká optický jev, který
VíceMěření závislosti indexu lomu kapalin na vlnové délce
Měření závislosti indexu lomu kapalin na vlnové délce TOMÁŠ KŘIVÁNEK Přírodovědecká fakulta Masarykovy univerzity, Brno Abstrakt V příspěvku je popsán jednoduchý experiment pro demonstraci a měření závislosti
VíceCharakteristiky optického záření
Fyzika III - Optika Charakteristiky optického záření / 1 Charakteristiky optického záření 1. Spektrální charakteristika vychází se z rovinné harmonické vlny jako elementu elektromagnetického pole : primární
VíceSTANOVENÍ ZELENĚ BRILANTNÍ TENKOVRSTVOU CHROMATOGRAFIÍ
STANOVENÍ ZELENĚ BRILANTNÍ TENKOVRSTVOU CHROMATOGRAFIÍ TEORIE: Zeleň brilantní patří mezi triarylmethanová barviva, je rozpustná ve vodě a v ethanolu. Tvoří malé lesklé krystaly. V roztoku má velmi intenzivní
VíceMetodika 3: uvedení systému Jasco LC 2000 do provozu
Metodika 3: uvedení systému Jasco LC 2000 do provozu (HPLC High Performance Liquid Chromatography) 7 8 4 9 10 1 2 5 11 3 6 12 Popis sestavy: 1) Refraktometrický detektor RI 2000, 2) detektor diodového
VíceIzomerie a stereochemie
Izomerie a stereochemie 1 2 Izomery mají stejný sumární vzorec, ale liší se uspořádáním atomů v prostoru. Konstituční izomery jednotlivé atomy v molekule jsou spojeny různým způsobem Stereoizomery jednotlivé
VíceKonfirmace HPLC systému
Mgr. Michal Douša, Ph.D. Obsah 1. Měření modulové... 2 1.1 Těsnost pístů tlakový test... 2 1.2 Teplota autosampleru (správnost a přesnost)... 2 1.3 Teplota kolonového termostatu... 2 1.3.1 Absolutní hodnota...
VíceINFRAČERVENÁ SPEKTROMETRIE A BIOSLOŽKY PALIV
VYSOKÁ ŠKOLA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ V PRAZE Fakulta technologie ochrany prostředí Ústav technologie ropy a alternativních paliv INFRAČERVENÁ SPEKTROMETRIE A BIOSLOŽKY PALIV Laboratorní cvičení ÚVOD V několika
VíceStudijní materiál HMF_1 1. Hydroxymethylfurfural a jeho stanovení v potravinách 2. Kapalinová chromatografie (HPLC, UPLC)
Studijní materiál HMF_1 1. Hydroxymethylfurfural a jeho stanovení v potravinách 2. Kapalinová chromatografie (HPLC, UPLC) V Brně dne 20. 11. 2011 Vypracoval: RNDr. Ivana Borkovcová, Ph.D. 1. Hydroxymethylfurfural
VíceChirální separace pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie
Chirální separace pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie Zadání úlohy: a) Skupinové zadání Porovnejte vliv složení mobilní fáze na chirální separace jednotlivých β-blokátorů na vankomycinové koloně
VíceFyzikální praktikum FJFI ČVUT v Praze
Fyzikální praktikum FJFI ČVUT v Praze Úloha 4: Balrmerova série Datum měření: 13. 5. 016 Doba vypracovávání: 7 hodin Skupina: 1, pátek 7:30 Vypracoval: Tadeáš Kmenta Klasifikace: 1 Zadání 1. DÚ: V přípravě
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MELAMINU A KYSELINY KYANUROVÉ METODOU LC-MS
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MELAMINU A KYSELINY KYANUROVÉ METODOU LC-MS 1 Rozsah a účel Postup je určen pro stanovení obsahu melaminu a kyseliny kyanurové v krmivech. 2 Princip
VíceAutomatický analyzátor aminokyselin AAA500
Automatický analyzátor aminokyselin AAA500 Clarity Uživatelská příručka 1 Výrobce: Dodavatel a servis : INGOS s.r.o. divize laboratorních přístrojů INGOS s.r.o. K Nouzovu 2090 14316 Praha 4 Fax: + 420244403051
VíceUrčení koncentrace proteinu fluorescenční metodou v mikrotitračních destičkách
Určení koncentrace proteinu fluorescenční metodou v mikrotitračních destičkách Teorie Stanovení celkových proteinů Celkové množství proteinů lze stanovit pomocí několika metod; například: Hartree-Lowryho
VícePříklady biochemických metod turbidimetrie, nefelometrie. Miroslav Průcha
Příklady biochemických metod turbidimetrie, nefelometrie Miroslav Průcha Příklady optických technik Atomová absorpční spektrofotometrie Absorpční spektrofotometrie Absorpční spektrofotometrie kinetická
Více7 FYZIKÁLNÍ OPTIKA. Interference Ohyb Polarizace. Co je to ohyb? 27.2 Ohyb
1 7 FYZIKÁLNÍ OPTIKA Interference Ohyb Polarizace Co je to ohyb? 27.2 Ohyb Ohyb vln je jev charakterizovaný odchylkou od přímočarého šíření vlnění v témže prostředí. Ve skutečnosti se nejedná o nový jev
VíceFrekvenční charakteristika soustavy tří nádrží
Popis úlohy: Spojené nádrže tvoří dohromady regulovanou soustavu. Přívod vody do nádrží je zajišťován čerpady P1a, P1b a P3 ovládaných pomocí veličin u 1a, u 1b a u 3, snímání výšky hladiny je prováděno
VícePLYNOVÁ CHROMATOGRAFIE
PLYNOVÁ CHROMATOGRAFIE Pavel Zachař, David Sýkora Obecné základy Plynová chromatografie je metoda určená k dělení a stanovení plynů, kapalin i látek pevných s bodem varu do cca 400 C. Metoda je založena
VíceSekvenční injekční analýza (Stanovení obsahu dusitanů rivanolovou metodou)
Sekvenční injekční analýza (Stanovení obsahu dusitanů rivanolovou metodou) Teorie: Sekvenční injekční analýza (SIA) je průtoková analytická metoda, řešící některé nedostatky průtokové injekční analýzy
VíceOperační systém MS Windows XP Professional
Operační systém MS Windows XP Professional Operační systém základní programové vybavení počítače zprostředkovává komunikaci uživatele s počítačem s technickým vybavením počítače s aplikačním programovým
VíceStanovení sedimentační stability a distribuce velikosti částic na přístroji LUMisizer
Návody pro laboratorní cvičení z technologie mléka 1/6 Stanovení sedimentační stability a distribuce velikosti částic na přístroji LUMisizer Popis zařízení LUMisizer je temperovaná odstředivka, která umožňuje
VíceCharakteristiky optoelektronických součástek
FYZIKÁLNÍ PRAKTIKUM Ústav fyziky FEKT VUT BRNO Spolupracoval Jan Floryček Jméno a příjmení Jakub Dvořák Ročník 1 Měřeno dne Předn.sk.-Obor BIA 27.2.2007 Stud.skup. 13 Odevzdáno dne Příprava Opravy Učitel
VíceSTANOVENÍ KOFEINU V NÁPOJÍCH METODOU HPLC
ÚLOHA 10: STANOVENÍ KOFEINU V NÁPOJÍCH METODOU HPLC Příprava: 1. Zopakujte si metodiku kapalinové chromatografie po stránce schematické a částečně fyzikálněchemické. 2. Zopakujte si metodu kalibrační křivky
VíceUV MONITOR UVM 254 NÁVOD K OBSLUZE. Science Instruments and Software, s.r.o PUB#: DI351004, Rev. A
UV MONITOR UVM 254 NÁVOD K OBSLUZE Science Instruments and Software, s.r.o. 2015 PUB#: DI351004, Rev. A OBSAH Obsah... 2 Úvod... 3 Specifikace... 3 Instalace... 4 Obsah dodávky... 4 Kapalinové připojení...
Vícetohoto systému. Můžeme propojit Mathcad s dalšími aplikacemi, jako je Excel, MATLAB, Axum, nebo dokumenty jedné aplikace navzájem.
83 14. (Pouze u verze Mathcad Professional) je prostředí pro přehlednou integraci a propojování aplikací a zdrojů dat. Umožní vytvořit složitý výpočtový systém a řídit tok dat mezi komponentami tohoto
VíceFYZIKA II. Marek Procházka 1. Přednáška
FYZIKA II Marek Procházka 1. Přednáška Historie Dělení optiky Základní pojmy Reflexe (odraz) Refrakce (lom) jevy na rozhraní dvou prostředí o různém indexu lomu. Disperze (rozklad) prostorové oddělení
VíceSpektroskopické é techniky a mikroskopie. Spektroskopie. Typy spektroskopických metod. Cirkulární dichroismus. Fluorescence UV-VIS
Spektroskopické é techniky a mikroskopie Spektroskopie metody zahrnující interakce mezi světlem (fotony) a hmotou (elektrony a protony v atomech a molekulách Typy spektroskopických metod IR NMR Elektron-spinová
VíceMĚŘENÍ SE SPEKTROMETREM S CCD DETEKTOREM
MĚŘENÍ SE SPEKTROMETREM S CCD DETEKTOREM Obsah Popis a vlastnosti spektrometru Avantes S2000 1 Úvod 1 Popis měřící soupravy 2 Měření optických charakteristik roztoku pomocí spektrometru S2000 4 Postup
VíceÚLOHA č. 9 PLYNOVÁ ROZDĚLOVACÍ CHROMATOGRAFIE (GLC) Seznámení s metodou, stanovení methylalkoholu a ethylalkoholu v konzumním destilátu
Příloha I ÚLOHA č. 9 PLYNOVÁ ROZDĚLOVACÍ CHROMATOGRAFIE (GLC) Seznámení s metodou, stanovení methylalkoholu a ethylalkoholu v konzumním destilátu Důležité pokyny (čtěte prosím pozorně!!!): otevírat plyny
VíceCHROMATOGRAFIE ÚVOD Společný rys působením nemísících fází: jedna fáze je nepohyblivá (stacionární), druhá pohyblivá (mobilní).
CHROMATOGRAFIE ÚOD Existují různé chromatografické metody, viz rozdělení metod níže. Společný rys chromatografických dělení: vzorek jako směs látek - složek se dělí na jednotlivé složky působením dvou
VíceLABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ. Stanovení těkavých látek
LABORATOŘ ANALÝZY POTRAVIN A PŘÍRODNÍCH PRODUKTŮ Stanovení těkavých látek (metoda: plynová chromatografie s hmotnostně spektrometrickým detektorem) Garant úlohy: doc. Ing. Jana Pulkrabová, Ph.D. 1 OBSAH
VíceJednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU SELENU METODOU ICP-OES
Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU SELENU METODOU ICP-OES 1 Rozsah a účel Postup specifikuje podmínky pro stanovení celkového obsahu selenu v minerálních krmivech a premixech metodou optické emisní spektrometrie
VícePracovní návod 1/5 www.expoz.cz
Pracovní návod 1/5 www.expoz.cz Fyzika úloha č. 14 Zatěžovací charakteristika zdroje Cíle Autor: Jan Sigl Změřit zatěžovací charakteristiku různých zdrojů stejnosměrného napětí. Porovnat je, určit elektromotorické
VíceVyužití UV/VIS a IR spektrometrie v analýze potravin
Využití UV/VIS a IR spektrometrie v analýze potravin Chemické laboratorní metody v analýze potravin MVDr. Zuzana Procházková, Ph.D. MVDr. Michaela Králová, Ph.D. Spektrometrie: základy Interakce záření
VíceLaboratorní cvičení z předmětu Elektrická měření 2. ročník KMT
MĚŘENÍ S LOGICKÝM ANALYZÁTOREM Jména: Jiří Paar, Zdeněk Nepraš Datum: 2. 1. 2008 Pracovní skupina: 4 Úkol: 1. Seznamte se s ovládáním logického analyzátoru M611 2. Dle postupu měření zapojte pracoviště
VícePokyny pro obsluhu programu. EZZ01 File reader 1.3
www. první-saz.cz Pokyny pro obsluhu programu EZZ01 File reader 1.3 příloha k TP SaZ 3/01 1. Instalace programu EZZ01 File reader 1.3 do počítače Program EZZ01 File reader 1.2 pracuje s operačními systémy
VíceSKUPINOVÁ ANALÝZA MOTOROVÝCH NAFT
VYSOKÁ ŠKOLA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ V PRAZE Fakulta technologie ochrany prostředí Ústav technologie ropy a alternativních paliv SKUPINOVÁ ANALÝZA MOTOROVÝCH NAFT Laboratorní cvičení ÚVOD Snižování emisí
VíceOddělení fyzikálních praktik při Kabinetu výuky obecné fyziky MFF UK
Oddělení fyzikálních praktik při Kabinetu výuky obecné fyziky MFF UK FYZIKÁLNÍ PRAKTIKUM III Úloha číslo: 16 Název: Měření indexu lomu Fraunhoferovou metodou Vypracoval: Ondřej Hlaváč stud. skup.: F dne:
VíceBalmerova série. F. Grepl 1, M. Benc 2, J. Stuchlý 3 Gymnázium Havlíčkův Brod 1, Gymnázium Mnichovo Hradiště 2, Gymnázium Šumperk 3
Balmerova série F. Grepl 1, M. Benc 2, J. Stuchlý 3 Gymnázium Havlíčkův Brod 1, Gymnázium Mnichovo Hradiště 2, Gymnázium Šumperk 3 Grepl.F@seznam.cz Abstrakt: Metodou dělených svazků jsme určili lámavý
Více- Rayleighův rozptyl turbidimetrie, nefelometrie - Ramanův rozptyl. - fluorescence - fosforescence
ROZPTYLOVÉ a EMISNÍ metody - Rayleighův rozptyl turbidimetrie, nefelometrie - Ramanův rozptyl - fluorescence - fosforescence Ramanova spektroskopie Každá čára Ramanova spektra je svými vlastnostmi závislá
VíceCZ.1.07/2.2.00/28.0021)
Metody geoinženýrstv enýrství Ing. Miloš Cibulka, Ph.D. Brno, 2015 Cvičen ení č.. 1 Vytvořeno s podporou projektu Průřezová inovace studijních programů Lesnické a dřevařské fakulty MENDELU v Brně (LDF)
VíceLaboratorní práce č. 3: Měření vlnové délky světla
Přírodní vědy moderně a interaktivně SEMINÁŘ FYZIKY Laboratorní práce č. 3: Měření vlnové délky světla G Gymnázium Hranice Přírodní vědy moderně a interaktivně SEMINÁŘ FYZIKY Gymnázium G Hranice Test
VíceOvládání MZK Terminalu je jednoduché a intuitivní. Terminal se ovládá pěti tlačítky.
MZK terminal MZK terminal byl vyvinut nejen jako terminál k online zobrazování a ukládání telemetrických dat z modulu Twin k pozdější analýze, ale především jako víceúčelové zařízení, jehož funkce a možnosti
VíceAbsorpční fotometrie
Absorpční fotometrie - v ultrafialové (UV) a viditelné (VIS) oblasti přechody mezi elektronovými stavy +... - v infračervené (IČ) oblasti přechody mezi vibračními stavy +... - v mikrovlnné oblasti přechody
VíceSvětlo je elektromagnetické vlnění, které má ve vakuu vlnové délky od 390 nm do 770 nm.
1. Podstata světla Světlo je elektromagnetické vlnění, které má ve vakuu vlnové délky od 390 nm do 770 nm. Vznik elektromagnetických vln (záření): 1. při pohybu elektricky nabitých částic s nenulovým zrychlením
VícePostupné, rovinné, monochromatické vlny v lineárním izotropním nemagnetickém prostředí
Postupné, rovinné, monochromatické vlny v lineárním izotropním nemagnetickém prostředí Rovinné vlny 1 Při diskusi o řadě jevů je výhodné vycházet z rovinných vln. Vlny musí splňovat Maxwellovy rovnice
VíceJednopaprskové spektrofotometry
Jednopaprskové spektrofotometry Spektrofotometr V-5000 > Jednopaprskový VIS spektrofotometr s ručním nastavením > Tlačítko pro nastavení nuly a 100% T > LCD displej se zobrazením hodnoty transmitance,
VíceSoubory s reklamami musí mít stejný název jako ta výše uvedené. Stávající soubory reklam budou přepsány.
Příloha 5 Výroba a zadávání reklamních obrázků Program umožňuje zobrazovat až 10 reklamních obrázků na monitorech. Obrázky musí splňovat následující parametry: velikost 640 x 480 pixelů formát BMP s 16
Více