ZÁKLADY OBECNÉ A KLINICKÉ BIOCHEMIE

Transkript

1 ZÁKLADY OBECNÉ A KLINICKÉ BIOCHEMIE 2004 Technologie kvantitativních metod Petr Štern kapitola ve skriptech

2 Optické zdroje U V V I S I R Spektrální distribuční křivky W žárovky b.t. W ~ 3600 C Energie 2000 C 4000 C 3000 C vlnová délka [nm] 2

3 Optické zdroje Energie Rozdělení spektrální energie u nízkonapěťové deuteriové výbojky vlnová délka [nm] Relativní energie [arb.j.] 400 U V V I S I R Distribuce spektrální energie 200 vysokotlaké Xe 150 výbojky vlnová délka [nm] 3

4 Optické detektory K A Dopadající záření R L k zesilovači fotónka E Směr osvětlení ~ 90 V fotonásobič 1 3 k fotokatoda k 2 a a anoda 1, 2, 3 dynody 4 R R R R B A R odpory děliče napětí B zdroj konstantního napětí A měřič fotoelektrického proudu

5 Konfigurace optických prvků ve fotometrii Obvyklé uspořádání mřížka červené bílé světlo štěrbina rotující mřížka pro měření různých vlnových délek vzorek detektor modré bílé světlo všechny vlnové délky jsou měřeny současně Diodové pole mřížka vzorek červené diodové pole modré 5

6 Schéma vertikálního fotometru Monochromátor Eliptické vstupní zrcadlo Xe výbojka Vstupní štěrbina Filtry Konkávní holografická mřížka Eliptické zrcadlo Dělič paprsku Měřící fotodetektor Referenční fotodetektor Kyveta Referenční fotodetektor Eliptické zrcadlo 9 kanálů optických vláken Dělič paprsku 96 jamek mikrodestičky 6 Měřící fotodetektor

7 Principy detekce v reflexní fotometrii Vlákna - pulzující světlo LED dopadá na bílou vnitřní stěnu koule a je odráženo všemi směry Film měření reflexe se provádí z opačné strany, než byl aplikován vzorek 7

8 Plamenová atomová absorpční spektrofotometrie Fotonásobič Monochromátor Clonka Deutériová výbojka Zrcadla Referenční paprsek Měrný paprsek Hořák Dutá katodová výbojka 8

9 Schéma konstrukce kvalitního fluorimetru EMISNÍ MONOCHROMÁTORY EXCITAČNÍ MONOCHROMÁTORY MŘÍŽKA REFERENČNÍ FOTONÁSOBIČ MŘÍŽKA FOTONÁSOBIČ PRO VZOREK FILTR DIFÚZNÍ DESKA DĚLIČ PAPRSKU CLONKA KYVETA XENONOVÁ ŽÁROVKA 9

10 Schéma měřící komory pro elektroluminiscenci Rutheniový komplex Světlo Elektrody 2 V 10

11 Optické schéma turbidimetrie a nefelometrie TURBIDIMETRIE 11 NEFELOMETRIE

12 Elektrochemické metody dvojí konstrukce iontově-selektivních elektrod 12

13 Elektrochemické metody CO 2 elektroda Držadlo skleněné elektrody Plastikové pouzdro Plášť elektrody Referenční elektroda Ag/AgCl NaHCO 3 Vnitřní elektroda Ag/AgCl Fosfátový pufr Těsnící kroužek Vstup vzorku Výstup vzorku Skleněná membrána citlivá na ph Porézní vložka 13 Membrána propustná pro CO 2 (silikonová guma) Kyveta Skleněné okénko

14 Elektrochemické metody Clarkova O 2 elektroda Katoda 0,65 V Pt drát Skleněná tyč Plastikové pouzdro Kryt elektrody Anoda 0V Ag/AgCl Fosfátový pufr Těsnicí kroužek Vstup vzorku Výstup vzorku 14 Pt-katoda (odkrytý konec drátu) Polypropylenová membrána Kyveta propustná pro O 2 Skleněné okénko

15 Elektrochemické metody schéma coulometru pro stanovení chloridů 15

16 Elektroforéza zónová kapilární 16

17 Izotopové metody γ-počítač 17 Pipetovací jednotka Inkubační jednotka Promývací jednotka Detekční jednotka

18 Chromatografické metody Plynová chromatografie Vysoko účinná kapalinová chromatografie 18

19 Hmotnostní spektrometrie 19