Elektronová mikroskopie v p ím í é di diagnos tti ce a b kt kkter kt iá i l iál í n h c a virových infekcí

Rozměr: px

Začít zobrazení ze stránky:

Download "Elektronová mikroskopie WWW.DYNEX.CZ v p ím í é di diagnos tti ce a b kt kkter kt iá i l iál í n h c a virových infekcí"

Vlasta Němečková
před 8 lety
Počet zobrazení:

1 Elektronová mikroskopie v přímé diagnostice bakteriálních a virových infekcí Dagmar Hulínská NRL ELM, NRL LB, WHO Centrum, CLČ Státní zdravotní ústav Praha

2 Patogenní bakterie a viry- v NRL ELM Borrelia burgdorferi s.l. (ELM, ISEM) Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia sp Rickettsia helvetica, R. monacensis Bartonella henselae, Neisseria meningitis Rozpoznává: Virus TBE, Coronavirus, EBV, HSV, C6, vakcinia, Leukoviruses,Reoviruses, Adenoviruses, Poxviruses, Parvoviruses, Enterovirus, Myxoviruses Picornavirus,Paramyxovirus (Dr.J. Schramlová, CSc)

monacensis Bartonella henselae, Neisseria meningitis Rozpoznává: Virus TBE, Coronavirus, EBV, HSV,

3 ELM přímý průkaz v krátkém čase- přímo z léze, tělní tekutiny, biopsie, autopsie Negativní barvení PTA, MTA- rychlá, neselektivní morfologická identifikace frontline, open view method (P.R.Hazelton, R Emerg. Infect.Dis. 9, 3, 2003) Imunosorbentní mikroskopie ISEM- identifikace patogena polyklonální nebo monoklonální protilátkou Imunohistologie i na polosilných a ultratenkých řezech pro studium patogeneze Aplikace : v klinicky nebo epidemiologicky kritické situaci, při bioterorismu, kontrola kvality kontrola vakcin

9, 3, 2003) Imunosorbentní mikroskopie ISEM- identifikace patogena polyklonální nebo monoklonální protilátkou Imunohistologie i

4 Negativní barvení- PTA B. garinii a B. afzelii krev

5 ISEM diagnostika pomocí Mab

6 B. garinii centrifugace v x g, 20 min, -10 C, uvolnění mikrovesiklů

7 Vznik bakteriemie Bb z kůže do krveuvolní aktivní OspA mikrovesikly adhesin OspA a) Inhibuje fagosom- lysosom funkci makrofágu b) Aktivuje produkci IL 1 c) IL1- > dekorin Aktivace fibroblastů endocytosa

8 Lokalizova fáze Bb a HGA v kůži ANAPLASMA Hulínská et al. J.Basic.Microbiol. (NSR), 29, (1989) BORRELIA V endotelii

9 Uloha Bičíků : pohyb, dělení ztrátou vznik cysty L formy antigenní struktury x anti-axonální axonální protilátky- mimikry-persistentní neurologic dysfunction (Sigal, Williams, Infect Immun,2006) kůra Víko -obal rotor báse

protilátky- mimikry-persistentní neurologic dysfunction

10 důsledek ztráty bičíků - antigenní rozdíly povrchu Bb pod vlivem protilátek a antibiotik Plaky- mrtvé L formy

11 Vegetativní formy B. garinii vytvoření L formy - vliv hyperimunního séra ELM IFA

12 Vegetativní formy ( Nelson, 1999 Nelson, 1999; Duray 1994 McDonald, 2000; Cinco 2004) ) alterované Bb vlivem stresu (teplota, antibiotika, protilátky atd.)

13 ELM detekce alterovaných borrelií, cyst, granul a zárodků v klinických vzorcích X ISEM, Mab anti-ospa

14 Rozdělení Bb v germinativní zárodky CSF x Germinativní zárodky v CSF

15 Ixodes ricinus slinné žlázy Borrelia garinii- ultrathin section, Eppon, UALC, 54000x

17 Kontrola ELM Členství t í : Directory of Electronmicroscopy facilities for emergency, DEF,CA-USA External Quality Assessment (EQA) pro ELM,- Kochův Institut, Berlin EU Network in Diagnostic ELM in Infectious Diseses- EUROTOM7 PCR, RT-PCR, Sekvenace pozitivních vzorků Atlas ELM- CDC- NASA

Kochův Institut, Berlin EU Network in Diagnostic ELM in Infectious

18 Přímá sekvenační analýza produktů OspA různých kmenů Subtyp A01-K275 A05-2B 100 A04-3B Subtyp 2 A10-A541 strain-ba-93m A A A3 Subtyp A A A A3 176A_patient A3 100 A08-336M A07-K4 Subtyp A09-261M Subtyp 6 A06-K A3 Subtyp 5 99 strain57m Subtyp 4 strain-e50 B. bissettii

20 Vyšetření ELM- v r a 2006 (1 256 pacientů) Procento pozitivity v r.2006 podle měsíců - bílé sloupce, srovnání s rokem 2005 tmavé sloupce vpravo leden únor březen duben květen červen červec srpen

vpravo 25 23 20 19.07 17.13 17.13 16.3 15 14.2 13.97 13.8 10 11.82 10 11.

21 Kapilára Borrelie v endotelii a lumen krevní kapiláry v srdci

22 Bb ve stěně endotelie myokardu EN Bartůněk P., Hulínská D., Paleček P. Clin.Res.Cardiology 96,6: , 2007

23 SYNOVIUM- LA

24 EM jaterní biopsie, hepatitis hepatitis - cysty MAb anti OspA-peroxidase peroxidase-diaminobenzidine diaminobenzidine i idi makrofág jater Mab anti OspA v cystách Cysta se zárodky

25 Procento pozitivity PCR na LB tkání v r pozitivní 40 negativni 30 % srdce placenta kůže synovium tkáň jiná

26 2008 Spojitost výše m axim ální teploty a srážek v m m na pozitivitu DNA Borrelia burgdorferi s.l. u k líš at bøezen duben kvì ten èerven èervenec srpen max.tepl. srážky mm pozit.bb

27 Ko-infekce při LB- Anaplasma, Rickettsia spp.

28 Persistence : snížení imunity hostitele- těhotenstvím koinfekce- Anaplasma HGA

29 Anaplasma sp. Ko-infekce v srdci : myokard srdce DKMP (č.222)- PCR+,ELM+ Ložiska leukocytů v polosilném řezu s Mab P44 (histochemie Silver- methenamin) Bartunek P., Hulínská D., et al. Medical Res.2006,107:

30 RT-PCR maxima pozitivity klíšťat na HGA a Bb v r

31 Rickettsia helvetica sekvenací OmpA X PTA,UA,LC, x Rickettsia v endotelové buňce Rickettsia uvolněná v kultuře Vero buněk (x1100) Č.121,

32 RT-PCR kvantifikuje agens cykly versus logaritmus koncentrací gen r ompb Melting curve analysis Amplifikační lineární vztah ( logaritmus fluorescence versus počet cyklů)

33 Bartonella henselae z pacientů s endomyokarditidou ditid

34 Bartonella henselae izolovaná z klíšťat

35 Bartonella henselae (MVDr O.Melter)

36 Přímý průkaz virů v negativním barvení Rickettsia sp.+ TBE a neznámý virus v CSF X x

37 Virus chřipky a ptačí chřipky x X

38 Virus HIV, negativní barvení nativního preparátu a ultratenký řez lymfocytem X

39 negativní barvení PTA Virus příušnic Virus neštovic, X X

40 Virus klíšťové encefalitidy (TBE) X kůň Ebola- sbírka Koch Inc. X Dr.J. Schramlová

41 Viry přenosné ze zvířat ohrožující život x x Virus vztekliny Marbursky virus

42 Děkuji za pozornost

Podobné dokumenty

PCR diagnostika lymeské borreliózy. Mgr. D. Berenová, J. Hořejší, Ing. A. Lukavská, RNDr. P. Kodym, CSc. Národní referenční laboratoř pro lymeskou borreliózu Centrum epidemiologie a mikrobiologie Státní