Výzkumný ústav rostlinné výroby Praha Ruzyně. Metodika byla vypracována jako výstup výzkumného záměru MZe č Autor: Ing.

Rozměr: px
Začít zobrazení ze stránky:

Download "Výzkumný ústav rostlinné výroby Praha Ruzyně. Metodika byla vypracována jako výstup výzkumného záměru MZe č. 0002700602. Autor: Ing."

Transkript

1 Výzkumný ústav rostlinné výroby Praha Ruzyně Optimalizovaná metodika SDS-PAGE pro analýzu LMW podjednotek gluteninů pšenice Metodika byla vypracována jako výstup výzkumného záměru MZe č Autor: Ing. Jana Bradová Prosinec 2006

2 OPTIMALIZOVANÁ METODIKA SDS-PAGE PRO ANALÝZU LMW-PODJEDNOTEK GLUTENINŮ PŠENICE Metodika byla vypracována jako výstup výzkumného záměru MZe č Ing. Jana Bradová Vydal: Výzkumný ústav rostlinné výroby, Praha Text: 2006 J. Bradová Foto: 2006 J. Bradová, S. Sýkorová Grafická úprava: 2006 M. Sýkora Vydáno bez jazykové úpravy ISBN

3 OPTIMALIZOVANÁ METODIKA SDS-PAGE PRO ANALÝZU LMW PODJEDNOTEK GLUTENINŮ PŠENICE Obsah: 1. Úvod Metodika Technické vybavení Chemikálie Roztoky Pracovní postup Vyhodnocení experimentálních dat Literatura. 12 J. Bradová VÚRV Praha

4 1. Úvod Podjednotky gluteninů s nízkou molekulovou hmotností (LMW-GS) zaujímají asi jednu třetinu celkového semenného proteinu pšenice a představují po gliadinech druhou největší skupinu zásobních bílkovin. LMW gluteniny podobně jako gliadiny a HMWgluteniny tvoří alelické kombinace, na jejichž základě mohou být charakterizovány. Z literatury je známo, že LMW- gluteniny mohou hrát důležitou roli v určování některých významných vlastností pšeničné mouky. HMW- gluteniny jsou velmi dobře prostudovány. Důvodem je velká molekulová hmotnost, která je příčinou jejich nižší elektroforetické pohyblivosti ve srovnání s ostatními endospermálními proteiny. Naproti tomu LMW - gluteniny mají stejnou pohyblivost jako některé těžší gliadiny, a proto získání čistých gluteninových preparátů (např. gelovou filtrací), které by neobsahovaly interferující proteiny, je poněkud složitější. Proto je kladen tak velký důraz na výběr a pečlivost provedení extrakčního postupu LMW-GS, který je sestaven tak, aby byla pokud možno bezezbytku odstraněna gliadinová frakce. 2. Metodika 2.1. Technické vybavení Přístroje a zařízení Přístroj pro vertikální elektroforézu, zajišťující udržování konstantní teploty gelů (doporučená tloušťka gelu maximálně 1,5 mm) Zdroj stejnosměrného proudu (možnost nastavení jak konstantního proudu, tak i konstantního napětí) Chladicí termostat Laboratorní centrifuga Prosvětlovací panel Analytické váhy Laboratorní předvážky Třepačka Vortex Vodní lázeň Ultrazvuková lázeň Laboratorní digestoř Sklo, laboratorní pomůcky Běžné laboratorní sklo, nádoby na fixaci a barvení gelu, plastové centrifugační kyvety 2 ml, injekční stříkačka s jehlou, přesná syringe Hamilton, automatické pipety, osobní ochranné pracovní prostředky - rouška, rukavice! J. Bradová VÚRV Praha 4

5 2.2. Chemikálie Všechny chemikálie stupně analytical reagent (p.a.) nebo lepší Chemikálie pro extrakci proteinů Ethanol 2-Propanol Tris(hydroxymethyl) aminomethan (TRIS) Kyselina chlorovodíková (HCl) Dodecylsulfát sodný (SDS) Glycerol Bromfenolová modř 2-merkaptoethanol 1,4-dithiothreitol (DTT) 4-vinylpyridin(VP) Chemikálie pro elektroforézu Akrylamid (AA) Bisakrylamid (BIS) Tris(hydroxymethyl)aminomethan (Tris) Kyselina chlorovodíková (HCl) Bromfenolová modř Dodecylsulfát sodný (SDS) Persíran amonný (APS) TEMED (NNN'N' - tetramethylethylendiamin) Glycin Chemikálie pro fixaci, barvení a sušení gelů Kyselina trichloroctová (TCA) Ledová kyselina octová Glycerol Methanol Coomassie Brilliant Blue R-250 J. Bradová VÚRV Praha 5

6 2.3. Roztoky Extrakční roztoky č. Roztok Složky Množství poznámka Roztok A (60% Ethanol) 96% Ethanol 60ml 36ml lze skladovat Roztok B: 50% 2-Propanol v 0,08M Tris-HCl ph 8,0 2-Propanol 0,08M Tris-HCl (ph 8,0) viz ml 50ml lze skladovat ,08M Tris-HCl ph 8,0 Tris Vzorkový pufr SDS Glycerol Bromfenolová modř 2-Merkaptoetanol 0,08M Tris-HCl (ph 8,0) Roztok B + DTT DTT Roztok B Roztok B + VP VP Roztok B Zásobní roztoky pro elektroforézu 4,844g do 500ml 2g 40ml 0,02g 1ml do 100ml 40mg 4ml 60µl 4ml -upravit ph na 8,0 přidáním HCl -lze skladovat lze skladovat používat vždy čerstvý používat vždy čerstvý č. Roztok Složky Množství poznámka Gelový pufr 8,8: 0,75 M Tris-HCl ph 8,8 Tris 45,5 g Tris do 500ml -upravit ph na 8,8 přidáním HCl -skladovat Gelový pufr 6,8: 0,25M Tris-HCl ph 6,8 Tris Bromfenolová modř AA a BIS Akrylamid Bisakrylamid % roztok SDS SDS % roztok APS APS Zásobní elektrodový pufr: 0,25M Tris; 1,92M glycin ph 8,3 Tris Glycin SDS Provozní pufr Zásobní elektrodový pufr 6,1 g špetka do 200ml 150 g 4 g do 500ml 5g do 50 ml 0,5g do 5 ml 30,3 g 144 g 10 g do 1000ml 100ml 9000ml -upravit ph na 6,8 přidáním HCl -skladovat skladovat za lab. teploty skladovat za lab. teploty připravovat vždy čerstvý skladovat za lab. teploty připravovat vždy čerstvý J. Bradová VÚRV Praha 6

7 Roztoky pro fixaci, barvení a sušení gelů č. Roztok Složky Množství poznámka Fixační činidlo: 20 % TCA TCA 200 g do 1000 ml skladovat za lab. teploty Směsný roztok Methanol Kyselina octová 250 ml 100 ml 650 ml skladovat za lab. teploty Barvicí roztok Commassie Brilliant Blue R 250 Směsný roztok % roztok glycerolu Glycerol 0,25 g do 500 ml 20ml do 1000 ml skladovat za lab. teploty skladovat 2.4. Pracovní postup Příprava vzorků - extrakce(n.k. Singh at al.,1991) První den: 1) Jednotlivá zrna roztlouci pečlivě kladívkem a převést do centrifugačních kyvet (2ml) 2) přidat 0,5 ml extrakčního roztoku A (3.1.1.) 3) zamíchat na vortexu 4) nechat stát ve tmě přes noc Druhý den: 5) vložit na 10min do ultrazvukové lázně 6) 30min inkubovat ve vodní lázni při 65 C 7) 5min centrifugovat ( ot/min) 8) supernatant odstranit 9) k pevnému zbytku (peletě) přidat 0,5 ml extrakčního roztoku A (3.1.1.) 10) peletu dobře promíchat jehlou 11) krátce zamíchat na vortexu 12) vložit na 10min do ultrazvukové lázně 13) 30min inkubovat ve vodní lázni při 65 C 14) 5min centrifugovat ( ot/min) 15) supernatant odstranit 16) k pevnému zbytku (peletě) přidat 0,5 ml extrakčního roztoku A (3.1.1.) 17) peletu dobře promíchat jehlou 18) krátce zamíchat na vortexu 19) vložit na 10min do ultrazvukové lázně 20) 30min inkubovat ve vodní lázni při 65 C 21) 5min centrifugovat ( ot/min) 22) supernatant úplně odebrat a odstranit 23) přidat 100 µl roztoku B + DTT (3.1.5) 24) peletu dobře promíchat jehlou 25) krátce zamíchat na vortexu 26) vložit na 10min do ultrazvukové lázně 27) 30min inkubovat ve vodní lázni při 65 C 28) přidat 100 µl roztoku B + VP (3.1.6) J. Bradová VÚRV Praha 7

8 29) krátce zamíchat na vortexu 30) 15min inkubovat ve vodní lázni při 65 C 31) 3min centrifugovat ( ot/min) 32) 100 µl supernatantu přenést do nové centrifugační kyvety 33) přidat100 µl vzorkového pufru 34) 15min inkubovat ve vodní lázni při 65 C 35) 3min centrifugovat ( ot/min) Takto připravené extrakty lze skladovat několik týdnů Příprava gelu - Sestavit suché a čisté gelové kazety (dle typu přístroje) - Každý gel se skládá z dělicího a zaostřovacího gelu Příprava 10% dělicího gelu Za pomalého míchání jsou přidávány jednotlivé složky (množství dle typu přístroje a velikosti desek) Uvedená množství - pro přístroj OWL Pinguin 14x16 42 ml (AA a BIS) 63 ml (gelový pufr 8,8) 1,26 ml (SDS) 21 ml vody Polymerace se nastartuje přidáním: 75 µl TEMEDu 1,26 ml (APS) Gel se pečlivě nalije mezi skla tak, aby se netvořily vzduchové bublinky. Gelové kazety se naplní 30 mm pod okraj (prostor pro 30 mm vrstvu zaostřovacího gelu). Povrch gelu se převrství opatrně vodou (injekční stříkačkou), nechá se cca 30 minut polymerovat. Po skončení polymerace se voda slije, povrch gelu se osuší filtračním papírem a kazety se až po okraj naplní zaostřovacím gelem. Příprava 4,6 % zaostřovacího gelu: Za pomalého míchání jsou přidávány jednotlivé složky (množství dle typu přístroje a velikosti desek) 6 ml (AA a BIS) 20 ml (gelový pufr 6,8) 0,4 ml (SDS) 21 ml vody Polymerace se nastartuje přidáním: 16 µl TEMEDu 0,4 ml (APS) Gel se pečlivě nalije na spodní gel tak, aby se netvořily vzduchové bublinky, vloží se hřebeny pro tvorbu jamek. Polymerace probíhá cca 30 minut. Potom se hřebeny opatrně J. Bradová VÚRV Praha 8

9 vyjmou a jamky v gelu se promyjí a naplní elektrodovým pufrem Doporučuje se připravit si gely den předem před vlastní elektroforézou a skladovat je Nanášení vzorků Do každé jamky se nanáší 15µl extraktu (Postup dle 4.1.) Elektroforéza Podmínky SDS PAGE pro LMW-GS Elektrodový pufr Proud 0,2 ma/ mm 2 gelu (1gel- 14 cm šířka;1mm tloušťka = 28mA) Napětí max. 300 V Teplota 8 C Směr migrace od katody (-) k anodě (+) Doba dělení: Čelo markerovací barvy se nechá dojít na konec gelu a doba dělení se prodlouží cca o 30 minut Fixace, barvení, odbarvení, sušení Fixace: Barvení: Skleněné desky s gelem se vyjmou z přístroje, gel se sejme a ponechá cca 30 minut ve fixačním roztoku Roztok se slije a gel se přelije roztokem a ponechá se cca 30 minut. Slít roztok a přelít barvicím roztokem Ponechá se barvit přes noc (bez třepání). Odbarvení: Sušení Slít roztok a přelít roztokem , ponechat cca 30 minut. Slít roztok (odbarvit jej aktivním uhlím a lze jej znovu použít) a nakonec přelít gely destilovanou vodou. Připraví se skleněná deska (rozměry desky musí být větší než velikost výsledného PAGE gelu). Dále je nutno připravit dva obdélníky z celofánu (rozměry 1. obdélníku se rovnají rozměrům skleněné desky; (strany 2. obdélníku jsou cca o 2cm delší než strany skleněné desky). Takto připravený celofán a PAGE gel se ponoří do (cca 2 hodiny). Poté se 1. celofánový obdélník položí na skleněnou desku, na něj se umístí PAGE gel a přikryje se 2. celofánovým obdélníkem. Okraje celofánu se přehnou pod skleněnou desku a plocha se J. Bradová VÚRV Praha 9

10 eventuelně vyhladí plastovým válečkem (odstranění vzduchových bublin). Ponechá se sušit při laboratorní teplotě v dostatečné vzdálenosti od zdrojů tepla a světla Vyhodnocení experimentálních dat Na výsledném gelu lze současně identifikovat jak LMW-GS, tak HMW-GS alely Obrázek 1: Schématické znázornění elektroforetických mobilit jednotlivých LMW-GS alel kodovaných lokusem Glu-3(SDS PAGE), (Branlard et al. 2003) Glu - A3 Glu B3 Glu D4 Obrázek 2: Schématické znázornění elektroforetických mobilit jednotlivých HMW-GS alel kodovaných lokusem Glu-3 (Payne,Lawrence;1983) Glu - A1 Glu - A1 Glu - A1 Obrázek 3: Příklad výsledku SDS PAGE LMW GS a HMW GS J. Bradová VÚRV Praha 10

11 Optimalizovaná metodika SDS-PAGE pro analýzu LMW podjednotek gluteninů pšenice 1.Chinese Spring, 2.Clarus, 3.Gabo, 4. Ebi, 5.Jabiru, 6.Orca, 7.Clarus, 8.Kite, 9.Ebi, 10.Jufy Tabulka I: Alely HMW-GS a LMW-GS odrůd pšenice publikované Singhem et al. (1991) Alela Odrůda Chinese Spring Gabo Jabiru Orca Kite Jufy I Glu-1A c (0) b (2*) a (1) c (0) b (2*) c (0) HMW-GS Glu-1B b (7+8) i (17+18)? a (7) i (17+18) d (6+8) Glu-1D a (2+12) a (2+12) d (5+10) a (2+12) a (2+12) d (5+10) Glu-3A a b c d e e LMW-GS Glu-3B a b c d b i Glu-3D a b c e b d TabulkaII: Alely HMW-GS a LMW-GS odrůd pšenice registrovaných v ČR Alela Odrůda Clarus Ebi Glu-1A c (0) c (0) HMW-GS Glu-1B d (6+8) b (7+8) Glu-1D a (2+12) d (5+10) Glu-3A d d J. Bradová VÚRV Praha LMW-GS Glu-3B a f Glu-3D c c 11

12 3. Literatura G. Branlard, M. Dardevet, N. Amiour, G. Igrejas: Allelic Diversity of HMW and LMW Glutenin Subunits and Omega-Gliadins in French Bread Wheat (Triticum aestivum L.) Genetic Resources and Crop Evolution 50, 2003: P. I. Payne, G.J.Lawrence: Catalogue of A1leles for the Complex Gene Loci, Glu-A1, Glu-Bl, and Glu-D1, which code for High-Molecular-Weight Subunits of Glutenin in hexaploid Wheat. Cereal. Res. Commun.,11,1983: N.K. Singh, K.W. Shepherd, G.B. Cornish: A simplified SDS.PAGE Procedure for Separating LMW Subunits of Glutenin. Journal of Cereal Science 14,1991: J. Bradová VÚRV Praha 12

Výzkumný ústav rostlinné výroby Praha Ruzyně

Výzkumný ústav rostlinné výroby Praha Ruzyně Výzkumný ústav rostlinné výroby Praha Ruzyně Optimalizovaná metodika PAGE pro analýzu peroxidáz v hlízách brambor (Solanum tuberosum L.) Vypracovaná jako výstup projektu 1B 44011 VÝVOJ A TESTOVÁNÍ SYSTÉMU

Více

Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i., Praha 6 - Ruzyně, 2011 ISBN 978-80-7427-056-7

Výzkumný ústav rostlinné výroby, v.v.i., Praha 6 - Ruzyně, 2011 ISBN 978-80-7427-056-7 Metodika vznikla za finanční podpory MZe ČR a je výstupem řešení projektu NAZV QH92155 Využití biodiverzity zásobních proteinů pšenice s důrazem na nízkomolekulární gluteniny ve vztahu ke kvalitě produkce.

Více

SDS-PAGE elektroforéza

SDS-PAGE elektroforéza SDS-PAGE elektroforéza Příprava gelu... 1 Recept na 0.75 mm gel (1 gel/2 gely)... 2 Recept na 1.5 mm gel (1 gel/2 gely)... 2 Příprava vzorku... 3 Elektroforéza... 3 Barvení gelů Blue Silver... 4 Chemikálie

Více

Obsah Protein Gel Electrophoresis Kitu a jeho skladování

Obsah Protein Gel Electrophoresis Kitu a jeho skladování Obsah Protein Gel Electrophoresis Kitu a jeho skladování Protein Gel Electrophoresis Kit obsahuje veškerý potřebný materiál provádění vertikální polyakrilamidové gelové elektroforézy. Experiment provádějí

Více

(Triticum aestivum L.)

(Triticum aestivum L.) Výzkumný ústav rostlinné výroby Praha Ruzyně Optimalizace metod elektroforézy proteinů pro identifikaci odrůd pšenice (Triticum aestivum L.) Metodika vypracována jako výstup projektu NAZV QF 3050: Vývoj

Více

Výzkumný ústav rostlinné výroby Praha Ruzyně

Výzkumný ústav rostlinné výroby Praha Ruzyně Výzkumný ústav rostlinné výroby Praha Ruzyně Optimalizovaná metodika PAGE pro analýzu esteráz v hlízách brambor (Solanum tuberosum L.) Vypracovaná jako výstup projektu 1B 44011 VÝVOJ A TESTOVÁNÍ SYSTÉMU

Více

SDS polyakrylamidová gelová elektroforéza (SDS PAGE)

SDS polyakrylamidová gelová elektroforéza (SDS PAGE) SDS polyakrylamidová gelová elektroforéza (SDS PAGE) Princip SDS polyakrylamidová gelová elektroforéza slouží k separaci proteinů na základě jejich velikosti (molekulové hmotnosti). Zahřátím vzorku za

Více

Elektroforéza v přítomnosti SDS SDS PAGE

Elektroforéza v přítomnosti SDS SDS PAGE Elektroforéza v přítomnosti SDS SDS PAGE Elektroforéza v přítomnosti SDS SDS PAGE je jednoduchá, rychlá a reprodukovatelná metoda pro kvalifikovanou charakterizaci a srovnání bílkovin.tato metoda separuje

Více

ELEKTROFORETICKÉ METODY

ELEKTROFORETICKÉ METODY ELEKTROFORETICKÉ METODY ELEKTROFORETICKÁ SEPARACE AMINOKYSELIN NA PAPÍROVÉM NOSIČI Aminokyseliny lze rozdělit elektroforézou na papíře. Protože molekulová hmotnost jednotlivých aminokyselin není příliš

Více

PROTOKOL WESTERN BLOT

PROTOKOL WESTERN BLOT WESTERN BLOT 1. PŘÍPRAVA ELEKTROFORETICKÉ APARATURY Saponátem a vodou se důkladně umyjí skla, plastové vložky a hřebínek, poté se důkladně opláchnou deionizovanou/destilovanou vodou a etanolem a nechají

Více

PROTEINOVÁ DENATURUJÍCÍ ELEKTROFORÉZA (SDS PAGE)

PROTEINOVÁ DENATURUJÍCÍ ELEKTROFORÉZA (SDS PAGE) PROTEINOVÁ DENATURUJÍCÍ ELEKTROFORÉZA (SDS PAGE) Denaturující proteinová elektroforéza (SDS PAGE - SDS Protein Acrylamide Gel Electrophoresis) je metoda, která se používá k separaci proteinů podle velikosti,

Více

Výzkumný ústav rostlinné výroby Praha Ruzyně

Výzkumný ústav rostlinné výroby Praha Ruzyně Výzkumný ústav rostlinné výroby Praha Ruzyně Optimalizace metod elektroforézy proteinů pro identifikaci odrůd ječmene (Hordeum vulgare L.) Metodika vypracována jako výstup projektu NAZV QF 3050: Vývoj

Více

S filtračními papíry a membránou je nutno manipulovat pinzetou s tupým koncem.

S filtračními papíry a membránou je nutno manipulovat pinzetou s tupým koncem. Western Blotting Příprava blotovacího sendviče... 1 Blotování... 2 Kontrola přenesení proteinů na membránu... 2 Blokování membrány... 2 Aplikace protilátek... 2 Vizualizace... 3 Vyvolání filmu... 4 Chemikálie

Více

CHARAKTERIZACE GENOTYPŮ OVSA S VYUŽITÍM ELEKTROFORÉZY AVENINŮ V POLYAKRYLAMIDOVÉM GELU (A-PAGE)

CHARAKTERIZACE GENOTYPŮ OVSA S VYUŽITÍM ELEKTROFORÉZY AVENINŮ V POLYAKRYLAMIDOVÉM GELU (A-PAGE) Zemědělský výzkumný ústav Kroměříž, s.r.o. Agrotest fyto, s.r.o. CHARAKTERIZACE GENOTYPŮ OVSA S VYUŽITÍM ELEKTROFORÉZY AVENINŮ V POLYAKRYLAMIDOVÉM GELU (A-PAGE) Metodika Kroměříž, 2010 I. Polišenská, L.

Více

Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY

Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti ELEKTROMIGRAČNÍ METODY ELEKTROFORÉZA K čemu to je? kritérium čistoty preparátu stanovení molekulové hmotnosti makromolekul stanovení izoelektrického

Více

Sraz studentů v 8:00 před laboratoří A5/108, s sebou plášť a přezutí PRINCIP. Polyakrylamidová gelová elektroforéza v přítomnosti SDS (SDS-PAGE)

Sraz studentů v 8:00 před laboratoří A5/108, s sebou plášť a přezutí PRINCIP. Polyakrylamidová gelová elektroforéza v přítomnosti SDS (SDS-PAGE) PRINCIP Sraz studentů v 8:00 před laboratoří A5/108, s sebou plášť a přezutí Polyakrylamidová gelová elektroforéza v přítomnosti SDS (SDS-PAGE) SDS-PAGE slouží k separaci proteinů na základě jejich molekulové

Více

Obr. 1. Schematické znázornění 2D-PAGE (převzato z Lodish, H. a kol.: Molecular Cell Biology, 3. vyd., Freeman 1996)

Obr. 1. Schematické znázornění 2D-PAGE (převzato z Lodish, H. a kol.: Molecular Cell Biology, 3. vyd., Freeman 1996) Dvourozměrná elektroforéza (2D-PAGE) 2D-PAGE je vysoce efektivní separační metodou umožňující rozdělení komplikovaných směsí stovek různých bílkovin a představuje základní nástroj v novém rozvíjejícím

Více

Western blotting. 10% APS 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl

Western blotting. 10% APS 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl Western blotting 1. Příprava gelu složení aparatury hustotu gelu volit podle velikosti proteinů příprava rozdělovacího gelu: 10% 12% počet gelů 1 2 4 1 2 4 objem 6 ml 12 ml 24 ml 6 ml 12 ml 24 ml 40% akrylamid

Více

Identifikace mikroorganismů pomocí sekvence jejich genu pro 16S rrna

Identifikace mikroorganismů pomocí sekvence jejich genu pro 16S rrna Praktická úloha Identifikace mikroorganismů pomocí sekvence jejich genu pro 16S rrna Pro spolehlivou identifikaci mikroorganismů pomocí genetických metod se velmi často využívá stanovení nukleotidové sekvence

Více

laktoferin BSA α S2 -CN α S1 -CN Popis: BSA bovinní sérový albumin, CN kasein, LG- laktoglobulin, LA- laktalbumin

laktoferin BSA α S2 -CN α S1 -CN Popis: BSA bovinní sérový albumin, CN kasein, LG- laktoglobulin, LA- laktalbumin Aktivita KA 2340/4-8up Stanovení bílkovin v mléce pomocí SDS PAGE (elektroforéza na polyakrylamidovém gelu s přídavkem dodecyl sulfátu sodného) vypracovala: MVDr. Michaela Králová, Ph.D. Princip: Metoda

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - FUMONISIN B 1 A B 2

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - FUMONISIN B 1 A B 2 Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - FUMONISIN B 1 A B 2 1 Rozsah a účel Metoda je vhodná pro stanovení fumonisinů B 1 a B 2 v krmivech. 2 Princip Fumonisiny

Více

Výzkumný ústav rostlinné výroby Praha Ruzyně

Výzkumný ústav rostlinné výroby Praha Ruzyně Výzkumný ústav rostlinné výroby Praha Ruzyně METODIKA VYUŽITÍ ELEKTROFORÉZY HLÍZOVÝCH PROTEINŮ PRO IDENTIFIKACI ODRŮD BRAMBOR (SOLANUM TUBEROSUM) Vypracovaná jako výstup projektu NAZV QF 3050: Vývoj metod

Více

Elektromigrační metody

Elektromigrační metody Elektromigrační metody Princip: molekuly nesoucí náboj se pohybují ve stejnosměrném elektrickém Arne Tiselius rozdělil proteiny krevního séra na základě jejich rozdílných rychlostí pohybu v elektrickém

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - aflatoxin B1, B2, G1 a G2

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - aflatoxin B1, B2, G1 a G2 Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU LC-MS - aflatoxin B1, B2, G1 a G2 1 Rozsah a účel Metoda je vhodná pro stanovení aflatoxinů B1, B2, G1 a G2 v krmivech. 2 Princip

Více

Proteinový fingerprinting vaječného bílku

Proteinový fingerprinting vaječného bílku Proteinový fingerprinting vaječného bílku Proteinový fingerprinting je technika studia populací organizmů založená na izoelektrické fokuzaci (IEF). IEF spočívá v elektroforetickém dělení proteinů podle

Více

Protokoly Transformace plasmidu do elektrokompetentních buněk BL21 Pracovní postup:

Protokoly Transformace plasmidu do elektrokompetentních buněk BL21 Pracovní postup: Protokoly Pracovní potřeby, pufry a chemikálie jsou uvedeny na konci protokolu. Pracovní postupy jsou odvozeny od těchto kitů: Champion pet160 Directional TOPO Expression Kit with Lumio Technology (Invitrogen)

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - OCHRATOXIN A

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - OCHRATOXIN A Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MYKOTOXINŮ METODOU HPLC - OCHRATOXIN A 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení ochratoxinu A v krmivech. 1 Ochratoxin A patří mezi

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VÁPNÍKU MANGANOMETRICKY

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VÁPNÍKU MANGANOMETRICKY Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU VÁPNÍKU MANGANOMETRICKY 1 Rozsah a účel Tato metoda specifikuje podmínky pro stanovení celkového obsahu vápníku v krmivech, krmných směsích a premixech.

Více

ANALYTICKÝ SYSTÉM PHOTOCHEM

ANALYTICKÝ SYSTÉM PHOTOCHEM ANALYTICKÝ SYSTÉM PHOTOCHEM Analytický systém Photochem (firmy Analytik Jena, Německo) je vhodný pro stanovení celkové antioxidační kapacity (tj. celkové schopnosti vzorku vychytávat volné radikály) různých

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU SEMDURAMICINU METODOU HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU SEMDURAMICINU METODOU HPLC Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU SEMDURAMICINU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Postup specifikuje podmínky pro stanovení obsahu semduramicinu v krmivech metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC) v koncentračním

Více

Hmotnostní detekce biologicky významných sloučenin pro biotechnologie část 3 - Provedení štěpení proteinů a následné analýzy,

Hmotnostní detekce biologicky významných sloučenin pro biotechnologie část 3 - Provedení štěpení proteinů a následné analýzy, Laboratoř Metalomiky a Nanotechnologií Hmotnostní detekce biologicky významných sloučenin pro biotechnologie část 3 - Provedení štěpení proteinů a následné analýzy, vyhodnocení výsledků, diskuse Anotace

Více

Metodika stanovení kyselinové neutralizační kapacity v pevných odpadech

Metodika stanovení kyselinové neutralizační kapacity v pevných odpadech Metodika stanovení kyselinové neutralizační kapacity v pevných odpadech 1 Princip Principem zkoušky je stanovení vodného výluhu při různých přídavcích kyseliny dusičné nebo hydroxidu sodného a následné

Více

Aplikace elektromigračních technik Laboratorní úlohy

Aplikace elektromigračních technik Laboratorní úlohy Laboratorní úlohy Výukový materiál vznikl za finanční podpory Fondu rozvoje vysokých škol v rámci řešení projektu č. 1377/2013 Vytvoření demonstračních úloh sloužících k inovaci předmětu Aplikace elektromigračních

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU HPLC Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Tato metoda specifikuje podmínky pro stanovení vitamínu D v premixech pro výrobu krmných směsí metodou HPLC.

Více

CLP ANALYSIS OF MOLECULAR MARKERS GEL ELECTROPHORESIS OF ISOZYMES AND PROTEINS CZECH VERSION

CLP ANALYSIS OF MOLECULAR MARKERS GEL ELECTROPHORESIS OF ISOZYMES AND PROTEINS CZECH VERSION CLP ANALYSIS OF MOLECULAR MARKERS GEL ELECTROPHORESIS OF ISOZYMES AND PROTEINS CZECH VERSION ANALÝZA BIOCHEMICKÝCH MARKERŮ GELOVÁ ELEKTROFORÉZA ISOENZYMŮ A PROTEINŮ *** Extrakce proteinů pro SDS elektroforézu:,

Více

Protokol 04. pšeničná bílkovina. masné výrobky. zkrácená verze

Protokol 04. pšeničná bílkovina. masné výrobky. zkrácená verze 1 Popis vzorku Podle protokolu č. 04 lze vyšetřit vzorky různých druhů masných výrobků na přítomnost pšeničné bílkoviny. 2 Detekční limit vyšetření Přítomnost pšeničné bílkoviny lze spolehlivě prokázat,

Více

1. Metodika. Protokol č. F1-4 Metodika: Srovnávací analýza efektivity přípravy rekombinantního proteinu ve fermentoru

1. Metodika. Protokol č. F1-4 Metodika: Srovnávací analýza efektivity přípravy rekombinantního proteinu ve fermentoru Protokol č.: F1-4 Datum: 20.12.2010 Metodika: analýza efektivity přípravy výběr z výsledků ze zkušebních provozů výroby antigenů. Vypracoval: Ing. Václav Filištein, Mgr. Tereza Chrudimská, Spolupracující

Více

ELEKTROFORETICKÁ SEPARACE NUKLEOVÝCH KYSELIN

ELEKTROFORETICKÁ SEPARACE NUKLEOVÝCH KYSELIN ELEKTROFORETICKÁ SEPARACE NUKLEOVÝCH KYSELIN Fragmenty nukleových kyselin lze dle jejich velikosti rozdělit elektroforézou. Elektroforéza využívá rozdílné pohyblivosti jednotlivých fragmentů, danou právě

Více

Inkubace enzymů se substráty

Inkubace enzymů se substráty Inkubace enzymů se substráty Inkubace redukčních enzymů... 1 Inkubace oxidačních enzymů... 2 Extrakce látek z inkubační směsi... 2 Příprava vzorků k HPLC/UHPLC detekci... 3 Chemikálie a roztoky... 4 Substráty...

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ AKTIVITY FYTÁZY

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ AKTIVITY FYTÁZY Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ AKTIVITY FYTÁZY 1 Rozsah a účel Postup specifikuje stanovení fytázové aktivity ve vzorcích krmiva. Tímto postupem se nestanoví rozdíl mezi fytázou přidanou

Více

Laboratoře oboru (N352014) 1. ročník Mgr. 2011/2012, letní semestr

Laboratoře oboru (N352014) 1. ročník Mgr. 2011/2012, letní semestr Laboratoře oboru (N352014) 1. ročník Mgr. 2011/2012, letní semestr Práce č. 2: Kontrola jakosti jedlých mlýnských výrobků Náplň práce: 1. Stanovení vlhkosti mouky 2. Stanovení čísla poklesu 3. Stanovení

Více

Turnusové praktikum z biochemie

Turnusové praktikum z biochemie Turnusové praktikum z biochemie FÚ UK Turnusové praktikum z biochemie úloha název strana 1 Identifikace neznámého vzorku, aneb chemik detektivem 3-11 2 Izolace nukleových kyselin 12-13 3 Fluorescenční

Více

1. Příloha 1 Návod úlohy pro Pokročilé praktikum z biochemie I

1. Příloha 1 Návod úlohy pro Pokročilé praktikum z biochemie I 1. Příloha 1 Návod úlohy pro Pokročilé praktikum z biochemie I Vazba bromfenolové modři na sérový albumin Princip úlohy Albumin má unikátní vlastnost vázat menší molekuly mnoha typů. Díky struktuře, tvořené

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Stanovení obsahu celkového a volného tryptofanu metodou HPLC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Stanovení obsahu celkového a volného tryptofanu metodou HPLC Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU CELKOVÉHO A VOLNÉHO TRYPTOFANU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu celkového a volného tryptofanu v krmivech metodou vysokoúčinné kapalinové

Více

SLEDOVÁNÍ VZTAHU MEZI OBSAHEM ENZYMU RUBISCO A KONCENTRACÍ CO 2 V CHLOROPLASTU

SLEDOVÁNÍ VZTAHU MEZI OBSAHEM ENZYMU RUBISCO A KONCENTRACÍ CO 2 V CHLOROPLASTU SLEDOVÁNÍ VZTAHU MEZI OBSAHEM ENZYMU RUBISCO A KONCENTRACÍ CO 2 V CHLOROPLASTU Nikola Burianová Experimentální biologie 2.ročník navazujícího studia Katedra Fyziky Ostravská univerzita v Ostravě OBSAH

Více

Jednotné pracovní postupy testování odrůd STANOVENÍ OBSAHU TANINŮ V ČIROKU SPEKTROFOTOMETRICKY

Jednotné pracovní postupy testování odrůd STANOVENÍ OBSAHU TANINŮ V ČIROKU SPEKTROFOTOMETRICKY 5321.1 Stanovení obsahu taninů v čiroku Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU TANINŮ V ČIROKU SPEKTROFOTOMETRICKY 1 Účel a rozsah Postup je určen pro stanovení obsahu taninů v zrnech čiroku. 2 Princip Taniny se ze

Více

N217019 - Laboratoř hydrobiologie a mikrobiologie

N217019 - Laboratoř hydrobiologie a mikrobiologie ÚSTAV TECHNOLOGIE VODY A PROSTŘEDÍ N217019 - Laboratoř hydrobiologie a mikrobiologie Název úlohy: Hydrobiologie: Stanovení koncentrace chlorofylu-a Vypracováno v rámci projektu: Inovace a restrukturalizace

Více

Výzkumný ústav rostlinné výroby Praha - Ruzyně

Výzkumný ústav rostlinné výroby Praha - Ruzyně Výzkumný ústav rostlinné výroby Praha - Ruzyně Vypracovaná jako výstup Výzkumného záměru VÚRV č.0002700602. (Nové poznatky, metody a materiály pro genetické zlepšování biologického potenciálu plodin a

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MĚDI, ŽELEZA, MANGANU A ZINKU METODOU FAAS

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MĚDI, ŽELEZA, MANGANU A ZINKU METODOU FAAS Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MĚDI, ŽELEZA, MANGANU A ZINKU METODOU FAAS 1 Účel a rozsah Tato metoda specifikuje podmínky pro stanovení obsahu mědi, manganu, zinku a železa ve

Více

Úloha č. 1 Odměřování objemů, ředění roztoků Strana 1. Úkol 1. Ředění roztoků. Teoretický úvod - viz návod

Úloha č. 1 Odměřování objemů, ředění roztoků Strana 1. Úkol 1. Ředění roztoků. Teoretický úvod - viz návod Úloha č. 1 Odměřování objemů, ředění roztoků Strana 1 Teoretický úvod Uveďte vzorec pro: výpočet směrodatné odchylky výpočet relativní chyby měření [%] Použitý materiál, pomůcky a přístroje Úkol 1. Ředění

Více

Braf V600E StripAssay

Braf V600E StripAssay Braf V600E StripAssay Kat. číslo 5-570 20 testů 2-8 C Popis stripu: Pracovní postup 1. Izolace DNA Pro izolaci čerstvých nebo mražených biopsií použijte soupravy Qiagen QIAmp DNA Mini nebo Micro. Pro izolaci

Více

Tkáňový homogenizátor MagNA Lyser od společnosti Roche

Tkáňový homogenizátor MagNA Lyser od společnosti Roche Izolace RNA Pracovní postup Homogenizace: Pozn. Postup homogenizace platí pouze pro izolaci RNA z nativní tkáně, v případě izolace z buněčné suspenze je tento krok vynechán a začíná se přídavkem homogenizačního

Více

Spektrofotometrické stanovení fosforečnanů ve vodách

Spektrofotometrické stanovení fosforečnanů ve vodách Spektrofotometrické stanovení fosforečnanů ve vodách Úkol: Spektrofotometricky stanovte obsah fosforečnanů ve vodě Chemikálie: 0,07165 g dihydrogenfosforečnan draselný KH 2 PO 4 75 ml kyselina sírová H

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU A A VITAMÍNU E METODOU HPLC S UV DETEKCÍ

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU A A VITAMÍNU E METODOU HPLC S UV DETEKCÍ Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOENÍ OBSAHU ITAMÍNU A A ITAMÍNU E METODOU HPLC S U DETEKCÍ 1 Rozsah a účel Metoda je vhodná pro stanovení vitamínu A a vitamínu E v kompletních krmivech i premixech

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU NEPOVOLENÝCH DOPLŇKOVÝCH LÁTEK METODOU LC-MS

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU NEPOVOLENÝCH DOPLŇKOVÝCH LÁTEK METODOU LC-MS Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU NEPOVOLENÝCH DOPLŇKOVÝCH LÁTEK METODOU LC-MS 1 Účel a rozsah Tato metoda specifikuje podmínky pro stanovení nepovolených doplňkových látek Zn-bacitracinu,

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU LC/MS

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU LC/MS Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU VITAMÍNU D METODOU LC/MS 1 Účel a rozsah Tento postup specifikuje podmínky pro stanovení vitamínu D3 v krmivech metodou LC/MS. 2 Princip Zkušební

Více

Určení koncentrace proteinu fluorescenční metodou v mikrotitračních destičkách

Určení koncentrace proteinu fluorescenční metodou v mikrotitračních destičkách Určení koncentrace proteinu fluorescenční metodou v mikrotitračních destičkách Teorie Stanovení celkových proteinů Celkové množství proteinů lze stanovit pomocí několika metod; například: Hartree-Lowryho

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MELAMINU A KYSELINY KYANUROVÉ METODOU LC-MS

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU MELAMINU A KYSELINY KYANUROVÉ METODOU LC-MS Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU MELAMINU A KYSELINY KYANUROVÉ METODOU LC-MS 1 Rozsah a účel Postup je určen pro stanovení obsahu melaminu a kyseliny kyanurové v krmivech. 2 Princip

Více

Praktická cvičení z chemie pro studenty středních škol

Praktická cvičení z chemie pro studenty středních škol Praktická cvičení z chemie pro studenty středních škol Obsah: 1. Odměřování v chemii 2. Izolace DNA z vepřové sleziny a důkaz DNA 3. Nativní elektroforéza izoenzymů peroxidasy 4. Metoda odhalování otisků

Více

Ústřední kontrolní a zkušební ústav zemědělský. Národní referenční laboratoř. Bulletin 2006. Ročník X, číslo 2/ 2006

Ústřední kontrolní a zkušební ústav zemědělský. Národní referenční laboratoř. Bulletin 2006. Ročník X, číslo 2/ 2006 Ústřední kontrolní a zkušební ústav zemědělský Národní referenční laboratoř Bulletin 2006 Ročník X, číslo 2/ 2006 Brno 2006 Obsah 1. Optimalizace elektroforetické metody pro charakterizaci bramborových

Více

Vzdělávání středoškolských pedagogů a studentů středních škol jako nástroj ke zvyšování kvality výuky přírodovědných předmětů CZ.1.07/1.1.00/14.

Vzdělávání středoškolských pedagogů a studentů středních škol jako nástroj ke zvyšování kvality výuky přírodovědných předmětů CZ.1.07/1.1.00/14. Praktické cvičení z chemie 1) Stanovení lipofilních listových barviv pomocí adsorpční chromatografie. 2) Stanovení proteinů v roztoku. 3) Homogenizace rostlinného materiálu pomocí tekutého dusíku a stanovení

Více

α-globin StripAssay Kat. číslo 4-160 10 testů 2-8 C

α-globin StripAssay Kat. číslo 4-160 10 testů 2-8 C α-globin StripAssay Kat. číslo 4-160 10 testů 2-8 C Popis stripů: Pracovní postup Izolace DNA Doporučujeme použít následující kit pro izolaci DNA z plné krve nebo jiných typů vzorků: Spin Micro DNA Extraction

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU 5-VINYL - 2-THIOOXAZOLIDONU (GOITRINU) METODOU GC

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU 5-VINYL - 2-THIOOXAZOLIDONU (GOITRINU) METODOU GC Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU 5-VINYL - 2-THIOOXAZOLIDONU (GOITRINU) METODOU GC 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení vinylthiooxazolidonu (dále VOT) v krmivech.

Více

1 Popis vzorku. 2 Detekční limit vyšetření. 3 Časová náročnost. 4 Zpracování vzorku. 4.1 Množství vzorku. 4.2 Odběr vzorků

1 Popis vzorku. 2 Detekční limit vyšetření. 3 Časová náročnost. 4 Zpracování vzorku. 4.1 Množství vzorku. 4.2 Odběr vzorků 1 Popis vzorku Podle tohoto postupu se vyšetřují vzorky různých druhů masných výrobků. Pomocí histochemického barvení lze prokázat přítomnost škrobových zrn a na jejich základě vyslovit podezření o použití

Více

Polymorfismus délky restrikčních fragmentů

Polymorfismus délky restrikčních fragmentů Polymorfismus délky restrikčních fragmentů Princip: Chemikálie: PCR produkt z předchozího praktického cvičení Endonukleáza KpnI 10 U μl -1 Pufr pro KpnI 10 koncentrovaný (Tris-HCl 100 mmol l -1 ph 7,5,

Více

TESTOVÁNÍ GMO Praktikum fyziologie rostlin

TESTOVÁNÍ GMO Praktikum fyziologie rostlin Teoretický úvod: TESTOVÁNÍ GMO Praktikum fyziologie rostlin 1 Teoretický úvod: TESTOVÁNÍ GMO Obecně na úvod Určitě jste už slyšeli pojem geneticky modifikovaný organismus (GMO). Úprava vlastností přirozeně

Více

L 54/76 CS Úřední věstník Evropské unie 26.2.2009

L 54/76 CS Úřední věstník Evropské unie 26.2.2009 L 54/76 CS Úřední věstník Evropské unie 26.2.2009 7. Opakovatelnost Rozdíl mezi výsledky dvou paralelních stanovení provedených na stejném vzorku týmž laborantem nesmí překročit: 5 mg/kg v absolutní hodnotě

Více

Základní praktická cvičení z molekulární biologie

Základní praktická cvičení z molekulární biologie Univerzita Palackého Přírodovědecká fakulta Základní praktická cvičení z molekulární biologie Kolektiv autorů: Doc. RNDr. Milan Navrátil, CSc. RNDr. Lenka Uvírová Mgr. Petr Nádvorník, Ph.D. Ing. Marie

Více

Praktické cvičení: Izolace a purifikace rekombinantního proteinu

Praktické cvičení: Izolace a purifikace rekombinantního proteinu Praktické cvičení: Izolace a purifikace rekombinantního proteinu Toto blokové praktické cvičení spočívá v teoretickém i praktickém seznámení s rekombinantními proteiny, jejich izolací, purifikací a využitím.

Více

Příloha 1. Návod pro laboratorní úlohu

Příloha 1. Návod pro laboratorní úlohu Příloha 1. Návod pro laboratorní úlohu VYSOKÁ ŠKOLA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ V PRAZE ÚSTAV CHEMIE A ANALÝZY POTRAVIN Technická 5, 166 28 Praha 6 tel./fax.: + 420 224 353 185; jana.hajslova@vscht.cz Analýza

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU PROBIOTICKÝCH BAKTERIÍ RODU ENTEROCOCCUS

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU PROBIOTICKÝCH BAKTERIÍ RODU ENTEROCOCCUS Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU PROBIOTICKÝCH BAKTERIÍ RODU ENTEROCOCCUS 1 Rozsah a účel Postup slouží ke stanovení počtu probiotických bakterií v doplňkových látkách, premixech

Více

WESTERN BLOT. Velikost signálu je vyhodnocována srovnáním s naneseným proteinovým markerem, což je komerčně dostupná směs proteinů o známé velikosti.

WESTERN BLOT. Velikost signálu je vyhodnocována srovnáním s naneseným proteinovým markerem, což je komerčně dostupná směs proteinů o známé velikosti. WESTERN BLOT Western blot je metoda používaná pro kvalitativní nebo semikvantitativní detekci určitého proteinu ve vzorku. Metoda je tvořena třemi základními kroky: 1. elektroforetickou separací proteinů,

Více

CLP ANALYSIS OF MOLECULAR MARKERS ISOZYME AND PROTEIN MARKERS CZECH VERSION

CLP ANALYSIS OF MOLECULAR MARKERS ISOZYME AND PROTEIN MARKERS CZECH VERSION CLP ANALYSIS OF MOLECULAR MARKERS ISOZYME AND PROTEIN MARKERS CZECH VERSION ANALÝZA BIOCHEMICKÝCH MARKERŮ GELOVÁ ELEKTROFORÉZA ISOENZYMŮ A PROTEINŮ *** Extrakce proteinů pro SDS elektroforézu:, Při extrakci

Více

Stanovení celkové kyselosti nápojů potenciometrickou titrací

Stanovení celkové kyselosti nápojů potenciometrickou titrací Stanovení celkové kyselosti nápojů potenciometrickou titrací Princip metody U acidobazických titrací se využívají dva druhy indikace bodu ekvivalence - vizuální a instrumentální. K vizuální indikaci bodu

Více

Stanovení koncentrace složky v roztoku potenciometrickým měřením

Stanovení koncentrace složky v roztoku potenciometrickým měřením Laboratorní úloha B/1 Stanovení koncentrace složky v roztoku potenciometrickým měřením Úkol: A. Stanovte potenciometrickým měřením koncentraci HCl v dodaném vzorku roztoku. Zjistěte potenciometrickým měřením

Více

Laboratorní analytické metody. Petr Tůma

Laboratorní analytické metody. Petr Tůma Laboratorní analytické metody Petr Tůma Rozdělení analytických metod Metody separační Chromatografie kapalinová plynová Elektroforéza Metody spektrální absorpční spektrometrie v UV/VIS Metody elektrochemické

Více

167 ml Folinova činidla doplníme do 500 ml destilovanou vodou. Toto činidlo je nestabilní, je nutné připravit vždy čerstvé a uložit při 4 C.

167 ml Folinova činidla doplníme do 500 ml destilovanou vodou. Toto činidlo je nestabilní, je nutné připravit vždy čerstvé a uložit při 4 C. ROZTOKY 1. Činidlo A 12,5 g (NH 4 ) 6 MO 7 O 4. 4H 2 O rozpustíme ve 125 ml bidestilované vody; 0,5 g K(SbO)C 4 H 4 O 6. 0,5 H 2 O rozpustíme ve 20 ml bidestilované vody; Oba tyto roztoky důkladně promícháme

Více

EGFR XL StripAssay. Kat. číslo 5-630. 20 testů 2-8 C

EGFR XL StripAssay. Kat. číslo 5-630. 20 testů 2-8 C EGFR XL StripAssay Kat. číslo 5-630 20 testů 2-8 C Popis stripu Pracovní postup 1. Izolace DNA Pro izolaci DNA použijte vhodný izolační kit. Doporučené kity jsou následující: Pro izolaci čerstvých nebo

Více

L 54/32 CS Úřední věstník Evropské unie

L 54/32 CS Úřední věstník Evropské unie L 54/32 CS Úřední věstník Evropské unie 26.2.2009 Lineární rozsah přístroje je nutno zkontrolovat pro všechny aminokyseliny. Standardní roztok se ředí citrátovým tlumivým roztokem tak, aby se dosáhlo ploch

Více

STANOVENÍ ANTIOXIDAČNÍ KAPACITY METODOU FOTOCHEMILUMINISCENCE NA PŘÍSTROJI PHOTOCHEM

STANOVENÍ ANTIOXIDAČNÍ KAPACITY METODOU FOTOCHEMILUMINISCENCE NA PŘÍSTROJI PHOTOCHEM STANOVENÍ ANTIOXIDAČNÍ KAPACITY METODOU FOTOCHEMILUMINISCENCE NA PŘÍSTROJI PHOTOCHEM ANTIOXIDAČNÍ KAPACITA ČAJŮ Princip metodiky: Analyzátor Photochem je určen pro stanovení antioxidační kapacity vybraných

Více

Izolace genomové DNA ze savčích buněk, stanovení koncentrace DNA pomocí absorpční spektrofotometrie

Izolace genomové DNA ze savčích buněk, stanovení koncentrace DNA pomocí absorpční spektrofotometrie Izolace genomové DNA ze savčích buněk, stanovení koncentrace DNA pomocí absorpční spektrofotometrie IZOLACE GENOMOVÉ DNA Deoxyribonukleová kyselina (DNA) představuje základní genetický materiál většiny

Více

IZOLACE DNA PRO STANOVENÍ GMO METODOU PCR (KIT NUCLEOSPIN FOOD)

IZOLACE DNA PRO STANOVENÍ GMO METODOU PCR (KIT NUCLEOSPIN FOOD) 1252.1 Izolace DNA pro stanovení GMO metodou Strana 1 IZOLACE DNA PRO STANOVENÍ GMO METODOU PCR (KIT NUCLEOSPIN FOOD) 1 Účel a rozsah Postup slouží k získání deoxyribonukleové kyseliny (DNA) ze vzorku

Více

Možnosti využití elektromigračních technik při studiu vlastností mikroorganismů. Anna Kubesová

Možnosti využití elektromigračních technik při studiu vlastností mikroorganismů. Anna Kubesová Možnosti využití elektromigračních technik při studiu vlastností mikroorganismů Anna Kubesová Osnova Candida Kapilární elektromigrační techniky Výsledky Závěr Planární elektromigrační techniky Výsledky

Více

MUKOADHEZIVNÍ ORÁLNÍ FILMY

MUKOADHEZIVNÍ ORÁLNÍ FILMY Návod na cvičení pro skupinu č. 1 MUKOADHEZIVNÍ ORÁLNÍ FILMY Cílem praktické části cvičení je příprava a hodnocení dvou druhů MOF: MOF-A: 4 % sodná sůl karboxymethylcelulosy (NaCMC), 3 % glycerol, ad 100

Více

Dovednosti/Schopnosti. - orientuje se v ČL, který vychází z Evropského lékopisu;

Dovednosti/Schopnosti. - orientuje se v ČL, který vychází z Evropského lékopisu; Jednotka učení 4a: Stanovení obsahu Ibuprofenu 1. diferencování pracovního úkolu Handlungswissen Charakteristika pracovní činnosti Pracovní postup 2. HINTERFRAGEN 3. PŘIŘAZENÍ... Sachwissen Charakteristika

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU -KAROTENU METODOU HPLC 1 Účel a rozsah Postup specifikuje podmínky pro stanovení celkového -karotenu v krmivech a premixech metodou vysokoúčinné kapalinové

Více

Braf 600/601 StripAssay

Braf 600/601 StripAssay Braf 600/601 StripAssay Kat. číslo 5-560 20 testů 2-8 C Popis stripu: Pracovní postup Kit umožňuje detekci 9 mutací v genu BRAF (kodón 600 a 601) Další informace najdete v OMIM Online Mendelian Inheritance

Více

ÚLOHA 1: Stanovení koncentrace kyseliny ve vzorku potenciometrickou titrací

ÚLOHA 1: Stanovení koncentrace kyseliny ve vzorku potenciometrickou titrací UPOZORNĚNÍ V tabulkách pro jednotlivé úlohy jsou uvedeny předpokládané pomůcky, potřebné pro vypracování experimentální části úlohy. Některé pomůcky (lžička, váženka, stopky, elmag. míchadélko, tyčinka

Více

UŽIVATELSKÁ PŘÍRUČKA PRO ÚDRŽBU A USKLADNĚNÍ ELEKTROD

UŽIVATELSKÁ PŘÍRUČKA PRO ÚDRŽBU A USKLADNĚNÍ ELEKTROD UŽIVATELSKÁ PŘÍRUČKA PRO ÚDRŽBU A USKLADNĚNÍ ELEKTROD Děkujeme Vám, že jste si vybrali produkt od fi rmy Hanna Instruments. Před použitím elektrody si prosím pečlivě přečtěte tento instruktážní manuál.

Více

STANOVENÍ SIŘIČITANŮ VE VÍNĚ

STANOVENÍ SIŘIČITANŮ VE VÍNĚ STANOVENÍ SIŘIČITANŮ VE VÍNĚ CÍLE ÚLOHY: seznámit se s principy izotachoforézy a jodometrické titrace kvantitativně stanovit siřičitany v bílém víně oběma metodami POUŽITÉ VYBAVENÍ: Chemikálie: ITP 10mM

Více

Optimalizace chromatografického dělení proteinů z mouky. Miroslava Košťálová

Optimalizace chromatografického dělení proteinů z mouky. Miroslava Košťálová Optimalizace chromatografického dělení proteinů z mouky Miroslava Košťálová Bakalářská práce 2014 ABSTRAKT Bakalářská práce pojednává o významu, složení a zpracování mouky. Popisuje pšeničné bílkoviny,

Více

13/sv. 8 (85/503/EHS) Tato směrnice je určena členským státům.

13/sv. 8 (85/503/EHS) Tato směrnice je určena členským státům. 62 31985L0503 L 308/12 ÚŘEDNÍ VĚSTNÍK EVROPSKÝCH SPOLEČENSTVÍ 20.11.1985 PRVNÍ SMĚRNICE KOMISE ze dne 25. října 1985 o metodách pro analýzu potravinářských kaseinů a kaseinátů (85/503/EHS) KOMISE EVROPSKÝCH

Více

Komplement fixační antigen Influenza A (KF Ag Influenza A)

Komplement fixační antigen Influenza A (KF Ag Influenza A) Komplement fixační antigen Influenza A (KF Ag Influenza A) OD - 109 Návod k použití soupravy VÝROBCE : VIDIA spol. s r.o., Nad Safinou II/365, Vestec, 252 42 Jesenice u Prahy, tel.: 261090565 www.vidia.cz

Více

Kurz 1 Úvod k biochemickému praktiku

Kurz 1 Úvod k biochemickému praktiku Kurz 1 Úvod k biochemickému praktiku Pavla Balínová http://vyuka.lf3.cuni.cz/ Důležité informace Kroužkový asistent: RNDr. Pavla Balínová e-mailová adresa: pavla.balinova@lf3.cuni.cz místnost: 410 studijní

Více

CS Úřední věstník Evropské unie L 54/89

CS Úřední věstník Evropské unie L 54/89 26.2.2009 CS Úřední věstník Evropské unie L 54/89 c) při vlnové délce mezi 230 a 320 nm se nesmí spektrum vzestupné části, vrcholu a sestupné části píku zkoušeného vzorku lišit od ostatních částí spektra

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU NEUTRÁLNĚ DETERGENTNÍ VLÁKNINY (NDF) A NEUTRÁLNĚ DETERGENTNÍ VLÁKNINY PO ÚPRAVĚ VZORKU AMYLÁZOU (andf) 1 Rozsah a účel Tato metoda specifikuje podmínky

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU BÍLKOVIN

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU BÍLKOVIN Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU BÍLKOVIN 1 Účel a rozsah Tato metoda specifikuje podmínky pro stanovení bílkovin v krmivech. Metoda je použitelná pro všechna krmiva organického původu.

Více

IZOLACE, SEPARACE A DETEKCE PROTEINŮ I. Vlasta Němcová, Michael Jelínek, Jan Šrámek

IZOLACE, SEPARACE A DETEKCE PROTEINŮ I. Vlasta Němcová, Michael Jelínek, Jan Šrámek IZOLACE, SEPARACE A DETEKCE PROTEINŮ I Vlasta Němcová, Michael Jelínek, Jan Šrámek Studium aktinu, mikrofilamentární složky cytoskeletu pomocí dvou metod: detekce přímo v buňkách - fluorescenční barvení

Více

NRAS StripAssay. Kat. číslo 5-610. 20 testů 2-8 C

NRAS StripAssay. Kat. číslo 5-610. 20 testů 2-8 C NRAS StripAssay Kat. číslo 5-610 20 testů 2-8 C Popis stripu: Pracovní postup 1. Izolace DNA Pro izolaci DNA musí být použita vhodná metoda vzhledem k typu tkáně vzorku. Pro doporučení vhodné metody kontaktujte

Více

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU KADMIA A OLOVA METODOU FAAS

Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU KADMIA A OLOVA METODOU FAAS Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU KADMIA A OLOVA METODOU FAAS 1 Rozsah a účel Metoda specifikuje podmínky pro stanovení Cd a Pb v krmivech a minerálních premixech. Stanovení je určeno

Více