Enterotoxiny Staphylococcus aureus. Jana Kotschwarová Andrea Koťová

Transkript

1 Enterotoxiny Staphylococcus aureus Jana Kotschwarová Andrea Koťová

2 Obsah Charakteristika Staphylococcus aureus Vlastnosti Faktory virulence Enterotoxiny Patogeneze Výskyt Metody stanovení Prevence výskytu

3 Charakteristika Staphylococcus aureus Zlatý stafylokok nejvýznamnější druh rodu Staphylococcus (čeleď Staphylococcaceae) velikost 0,7 0,9 µm, tvoří hroznovité shluky G+ kok, fakultativně anaerobní, nepohyblivý zkvašuje manitol

4 Vlastnosti tvoří exopolysacharidy slizy tvoří biofilm pomocí adhezinu na krevním agaru může způsobovat úplnou hemolýzu MRSA (methicillin-rezistentní S. aureus)- kmeny rezistentní vůči atb. oxacilinu Podmínky Růst bakterií Produkce enterotoxinu (optimum/rozmezí) Teplota [ C] ph 4, ,5-9,6 aw 0,83-0,99 0,98 0,87-0,99

5 Faktory virulence produkce velkého množství biologicky aktivních látek a. Adhezivní faktory b. Propagační a transportní faktory- α hemolyzin c. Ochranné faktory a toxiny

6 Enterotoxiny toxické exoproteiny chránící koky bohaté na Lys, Asp, Glu a Tyr metabolické produkty při množení S. aureus vyvolávají alimentární onemocnění 20 typů enterotoxinů SEA SEU (značení genů) SEA-SEE způsobuje alimentární intoxikaci odolávají varu 20 min

7 Patogeneze přirozeně se vyskytuje na kůži a oblasti nosohltanu lidí a zvířat při oslabení organismu- kožní záněty, alimentární onemocnění, pneumonie, osteomyelitidy, STS, syndrom opařené kůže, abscesy, bakteriální endokarditidy a sepse

8 Stafylokoková enterotoxikóza infekční dávka S. aureus min KTJ.g -1 a koncentrace toxinu v potravině 1 ng.g -1 příznaky se objeví za 1-6 h po konzumaci příznaky: nevolnost, zvracení, bolest břicha, průjem (bez horečky) a bolest hlavy odeznění za 24 h mnoho případů stafylokokové enterotoxikózy nezaznamenáno pro rychlý průběh

9 Výskyt přirozeně osidluje pokožku a sliznice, běžná mikroflóra vemene kontaminace ze zvířat, prostředí, nebo lidí během výrobního procesu mléčné výrobky, lahůdky (šunka.), pudinky a salátové dresinky u výrobků s velkým podílem ruční práce

10 Metody stanovení enterotoxinů Přímé metody imunologické metody fyzikálně-chemické metody Nepřímé metody molekulárně biologické metody

11 Imunologické metody ELISA vazba antigenu a protilátky značené enzymem, který štěpením substrátu vyvolá barevnou změnu nejčastěji se využívá tzv. sandwich ELISA, kdy jsou na detekovaný antigen navázány 2 protilátky- imobilizovaná a enzymaticky značená ELFA princip je podobný jako u metody ELISA, rozdíl je v použitém substrátu, který je enzymem štěpen na fluorescenční produkt vzniklé chemické změny jsou detekovány pomocí fotodiodového fluorimetru

12 RPLA = reverzní pasivní latexová aglutinace aglutinační reakce založena na vysoce specifické vazebné reakci mezi antigenem a protilátkou, nosičem je barevná latexová částice provádí se v mikrotitračních destičkách hodnocení je semikvantitativní- podle mřížkové struktury vzniklé na dně jamek

13 Fyzikálně chemické metody SDS- PAGE separace proteinů dle jejich pohyblivosti (v závislosti na délce řetězce) v elektrickém poli polyakrylamidový gel s SDS LC-MS přesné stanovení proteinu na základě jeho molekulové hmotnosti a na základě pořadí AK po enzymatickém štěpení nedostupnost std. pro celé spektrum SEs

14 HPLC časově náročná příprava vzorků- složité extrakční postupy a následné čištění extraktů pomocí kolony se stacionární fází separujeme jednotlivé toxiny ověření identity toxinu imunologickou metodou nejsou dostupné standardy pro všechny SEs, zatím stanoveno jen SEA a SEB

15 Molekulárně biologické metody PCR denaturace DNA- rozvolnění vlákna hybridizace- nasednutí primerů syntéza- vznik nových vláken působením enzymu DNA- polymerázy

16 Prevence výskytu důsledná hygiena pracovníků a používání ochranných rukavic v potravinářském provozu zabránění množení bakterie a následné produkci toxinupasterace nenechávat potraviny dlouhodobě při pokojové teplotě

17 Zdroje oxiny phylococcus#staphylococcus_aureus