RUTINNÍ TESTY HLA PRO DIAGNOSTIKU CELIAKIE

Transkript

1 RUTINNÍ TESTY HLA PRO DIAGNOSTIKU CELIAKIE Vraná Milena Odd. HLA, Národní referenční laboratoř pro DNA diagnostiku, ÚHKT, Praha

2 ÚVOD Základní podmínkou vzniku celiakie je přítomnost některých kombinací genů HLA II. třídy Genotyp HLA většiny pacientů s celiakií obsahuje HLA-DQA1*05 a HLA-DQB1*02 (DQ2.5), HLA-DQA1*05 a HLA-DQB1*02 (DQ2.2) nebo HLA-DQA1*03 a DQB1*03:02 (DQ8). Přítomnost rizikového genotypu je nutnou, nikoliv však dostačující podmínkou rozvoje onemocnění. Predispoziční genotypy jsou přítomny u řádově 40% evropské populace, pouze kolem 1% osob chorobu vyvine. Genetické testy HLA mají podpůrný význam při diagnostice celiakie.

3 VÝHODY A NEVÝHODY GENETICKÉHO VYŠETŘENÍ HLA Výhody Vyšetření 1x za život Přesnější než serologické testy HLA Nezatěžuje pacienta Výsledek není závislý na dietě a medikaci Negativní výsledek vyloučí s vysokou pravděpodobností chorobu bez nutnosti dalších vyšetření Nevýhody Vysoká cena vyšetření (řádově tis. Kč) Pozitivní výsledek není v žádném případě potvrzením diagnosy bez dalších vyšetření (v populaci je mnoho zdravých jedinců, kteří nesou některé z testovaných predispozičních alel; pro potvrzení diagnosy lze výsledek použít pouze v kombinaci s dalšími vyšetřeními za přesně specifikovaných podmínek)

4 Podmínky vzniku celiakie HLA PŘESNÁ SPECIFIKACE HLA znaky podmiňující celiakii ALELY RIZIKO CELIAKIE VÝSKYT V ČESKÉ POPULACI DQ2 DQ2.5 DQA1*05+DQB1*02 VYSOKÉ častý DQ2 DQ2.2 DQA1*02+DQB1*02 MÍRNÉ častý DQ8 DQ8 DQA1*03+DQB1*03:02 VYSOKÉ málo častý EVROPSKÁ POPULACE: 40% - HLA-DQ predispozice x 1% - celiakie Genetika HLA DQ2/DQ8 non HLA CD Gluten, kojení, jiné Prostředí T-lymfo, CK protilátky, jiné Imunologie Molekuly HLA, které vážou gliadinové zbytky jsou nutným, nikoliv však dostačujícím, spouštěčem celiakie!!!

5 Varianty DQ 2.5 genotypu DQ 2.5 cis DQ 2.5 trans Obě predispoziční alely v jednom haplotypu Nejčastější alely DQA1*05:01, DQB1*02:01 Děděny jako celek Větší riziko vzniku celiakie u DQ2.5 homozygotů Každá z alel v jiném haplotypu Nejčastější alely DQA1*05:05, DQB1*02:02 Děděny každá od jiného rodiče Vždy v heterozygotním stavu

6 Materiál: periferní krev v EDTA nebo ACD (cca 2 ml) Nutný informovaný souhlas pacienta! Z periferní krve je izolována DNA pacienta, která může být dlouhodobě uložena a následně využita i pro případná další genetická vyšetření. Specifické HLA kity pro CD predispozici: Využívají různé principy (nejčastější PCR se sekvenčně specifickými primery + gelové ELFO); Výsledky jsou u běžných predispozičních genotypů HLA jednoznačné; Běžné diagnostické soupravy však obvykle nejsou schopny správně určit méně běžné genotypy HLA a určit DQ2.5 homozygozitu; Většina z běžně používaných souprav také není schopna rozlišit cis/trans varianty u DQ2.5 a určit případnou možnost dědičnosti predispozičních genotypů Kompletní genotypizace HLA: Jednoznačné určení všech HLA genotypů Popis genetického vyšetření Rozlišení DQ2.5 homozygotů a heterozygotů Díky přesnému určení alel lze rozlišit cis/trans varianty u DQ2.5 a určit případnou možnost dědičnost predispozičních genotypů Velmi nákladné, prováděné pouze ve specializovaných HLA laboratořích

7 POŽADAVKY NA FORMULACI VÝSLEDKŮ TESTŮ HLA PRO DIAGNOSTIKU CD dle konsensu z KOMPLETNÍ VÝSLEDEK OBSAHUJE: Nalezené alely (dle aktuální nomenklatury HLA) Správně stanovený genotyp HLA by měl jednoznačně identifikovat všechny predispoziční alely DQA1 a DQB1 lokusů. Jedná se o tyto alely/alelické skupiny: DQA1*02:01, DQA1*03:01, DQA1*05 a DQB1*02, DQB1*03:02 (nutno odlišit od DQB1*03:01 a DQB1*03:03) Vyjádření přítomnosti/nepřítomnosti predispozice pomocí serologických ekvivalentů U DQ 2 včetně upřesnění, zda se jedná o DQ 2.5 nebo DQ 2.2 Pro zpřesnění je vhodné uvádět i případnou negativitu DQ2, DQ8 Interpretace výsledku ve vztahu k celiakii včetně informace o výpovědní hodnotě vyšetření DQ2.5 nebo DQ8 (PŘÍPADNĚ OBA) : NALEZENÝ GENOTYP HLA JE ASOCIOVANÝ S RIZIKEM CELIAKIE Výsledek nelze samostatně interpretovat jako potvrzení celiakie vzhledem k jeho nízké specificitě pro tuto diagnosu DQ2.2: NALEZENÝ GENOTYP HLA JE ASOCIOVANÝ S MÍRNÝM/OJEDINĚLÝM RIZIKEM CELIAKIE Diagnosu celiakie nelze vyloučit. VŠECHNY OSTATNÍ GENOTYPY: NALEZENÝ GENOTYP HLA NENÍ ASOCIOVANÝ S RIZIKEM CELIAKIE Výsledek s vysokou pravděpodobností tuto diagnosu vylučuje.

8 PŘEHLED VYŠETŘENÍ PROVÁDĚNÝCH V ČR Genetické vyšetření HLA pro diagnostiku celiakie je v nabídce cca třiceti českých laboratoří, v převážné většině se jedná o laboratoře genetické. Některé z těchto laboratoří nabízejí toto vyšetření i pro samoplátce. Dotazníková akce zmapování počtu vyšetření od roku 2015: ROK CELKEM POČET LABORATOŘÍ POČET TESTŮ Vyšetření prováděno výhradně genetickými metodami s využitím CE-IVD kitů correct results wrong genotyping incorrect interpretation výsledky kontroly kvality v letech Kvalita a výpovědní hodnota prováděných vyšetření se neustále zvyšuje.

9 SOUHRN Základní význam vyšetření HLA v diagnostice celiakie: Nepřítomnost predispozičních HLA alel = Vyloučení rizika vzniku onemocnění Vhodné testovat pouze u osob z rizikových skupin Přítomnost predispozičních alel není samostatně potvrzením diagnosy Nutno vždy uvést u pozitivního nálezu vyšetření (zvláště pro samoplátce!) Kvalita HLA-DQ vyšetření nabízených v České republice se průběžně zvyšuje, stále však není zcela bez nedostatků Přehledová publikace: Vraná M., Kelifová S., Ratajová E., Szitanyi P.: Genetické vyšetření HLA pro diagnostiku celiakie, Postgraduální gastroenterologie a hepatologie 2017, 3, č. 2

10 PODĚKOVÁNÍ SPOLUPRACOVNÍKŮM Spolupracující laboratoře: CGB laboratoř a.s., Ostrava Genetika Plzeň, s.r.o. Centrum lékařské genetiky s.r.o., České Budějovice Laboratoř molekulární diagnostiky, IFCOR-99, s.r.o., Brno Laboratoře AGEL a.s., Laboratoř lékařské genetiky úsek molekulární biologie, Nový Jičín GHC GENETICS, Praha Cytogenetická laboratoř Brno, s.r.o. GENLABS - Poliklinika Medipont, České Budějovice Institut reprodukční medicíny a genetiky, Karlovy Vary Bioptická laboratoř, s.r.o. Plzeň Genomac výzkumný ústav, s.r.o. Praha Gennet, s.r.o. Praha Nemocnice České Budějovice Laboratoř molekulární biologie a genetiky Klinické laboratoře TO, Krajská zdravotní a.s., Masarykova nemocnice, Ústí nad Labem Klinická imunologie a alergologie laboratoř, ÚLBLD, VFN a 1. LF UK, Praha OKB, Krajská nemocnice Liberec, a.s. Nemocnice Jihlava - Laboratoř molek. genetiky, odd. OKBMI Zdravotní ústav se sídlem v Ústí nad Labem - Centrum imulogie a mikrobiologie Zdravotní ústav se sídlem v Ostravě, Oddělení molekulární biologie HLA/DNA laboratoř, Krevní centrum FN Ostrava HLA laboratoř, Transfuzní a tkáňové oddělení FN Brno HLA laboratoř, Ústav imunologie, FN Olomouc FN Plzeň - HLA laboratoř Laboratoř HLA systému a PCR diagnostiky, TO FN Hradec Králové IKEM OIG, Praha Uherskohradišťská nemocnice, a.s. Nemocnice České Budějovice LMBG Laboratoře klin. Imunologie Aeskulab k.s. Antonij Slavčev František Mrázek Marie Dobrovolná Zuzana Ambrůzová Libor Kolesár Výbor imunogenetická sekce ČSAKI Peter Szitanyi Klinika dětského a dorostového lékařství VFN Praha Renáta Macnerová, Sára Nazarová, Věra Šiffnerová, Milena Melková, Hana Vondráčková, Kateřina Šimonová Eva Ratajová Šárka Půbalová Barbora Kinská Oddělení HLA - NRL pro DNA diagnostiku ÚHKT Praha

11 DĚKUJI VŠEM ZA POZORNOST A TĚŠÍM SE NA DALŠÍ SPOLUPRÁCI!