VYŠETŘENÍ HLA PRO VAZBU S CHOROBAMI

Transkript

1 VYŠETŘENÍ HLA PRO VAZBU S CHOROBAMI PŘEHLED A KVALITA TESTŮ PROVÁDĚNÝCH V ČR Vraná Milena Odd. HLA, Národní referenční laboratoř pro DNA diagnostiku, ÚHKT, Praha

2 ÚVOD Choroby vázané s HLA = autoimunitní onemocnění/složky onemocnění Vazba HLA s různými diagnosami je známa již mnoho let V současné době je referována u více než sta onemocnění Mechanismus vzniku není vždy zcela objasněn Žádná z asociací není absolutní Pouze některé známé vazby HLA s chorobami lze smysluplně využít pro diagnostiku těchto onemocnění Vždy se jedná pouze o podpůrné testy, které doplňují specifická vyšetření pro sledované diagnózy

3 VÝHODY A NEVÝHODY VYŠETŘENÍ HLA Výhody Vyšetření 1x za život Přesnější než serologické testy HLA Nezatěžuje pacienta Výsledek není závislý na dietě a medikaci Negativní výsledek vyloučí s vysokou pravděpodobností chorobu bez nutnosti invazivních a dalších pacienta zatěžujících vyšetřeních (např. celiakie - při negativním výsledku HLA vyloučení diagnosy bez biopsie) Nevýhody Vysoká cena vyšetření (řádově tis. Kč) Pozitivní výsledek není jednoznačným potvrzením diagnosy bez dalších vyšetření (v populaci je mnoho zdravých jedinců, kteří nesou některé z testovaných predispozičních alel; pro potvrzení diagnosy lze výsledek použít pouze v kombinaci s dalšími vyšetřeními za přesně specifikovaných podmínek)

4 PŘEHLED VYŠETŘENÍ PROVÁDĚNÝCH V ČR Dotazníková akce zmapování počtu vyšetření pro jednotlivé diagnosy provedených v roce 2015 Průzkumu se zúčastnilo 29 laboratoří z celé České republiky Nejčastěji prováděná vyšetření: HLA-B*27 pro diagnostiku revmatických onemocnění HLA-DQ pro diagnostiku celiakie další vyšetření: HLA-DQB1*06 pro diagnostiku narkolepsie HLA-DRB1*04 pro diagnostiku IDDM typu I HLA-DRB1*04 pro diagnostiku limeské artritidy HLA-B*13, HLA-B*17 pro revmatologické indikace Farmakogenetika: HLA-B*57 prevence HSR před podáním Abacaviru u HIV+ pacientů Provádějící laboratoře: Laboratoře molekulární genetiky a dalších specializací laboratoře, které testují HLA i pro jiné účely a jsou lépe obeznámeny s jeho specifitami - pouze ¼

5 PŘEHLED GENETICKÝCH TESTŮ V ROCE 2015 Přehled vzorků vyšetřených v roce 2015 vyšetření Počet vzorků B*27 (započítány pouze genetické testy) Celiakie Narkolepsie 250 Jiné (např. IDDM I. typu, DRB1*04, HLA-B*13, HLA-B*17, HLA- A,B,DR a B*57 před podáním Abacaviru) 450 Počet pracovišť podle množství zpracovaných vzorků Počet zpracovaných vzorků B*27 Celiakie Narkolepsie Jiné (včetně B*57) a více Celkem Hlavní zaměření laboratoří, které vyšetření nabízejí zaměření HLA 7 genetika 13 imunologie 3 biochemie 2 jiné (cytologie, mikrobiologie, transfuzní služba) počet laboratoří 3

6 Vyšetření přítomnosti HLA-B*27 Vyšetření prováděno masivně genetickými metodami (nejčastěji PCR-SSP, PCR-SSO) nebo na úrovni stanovení antigenu serologicky či průtokovou cytometrií, většinou pro diagnostiku AS Využití CE-IVD diagnostik i in-house metod Vyšetření je součástí diagnostického standardu Kvalita a výpovědní hodnota prováděných vyšetření je dobrá V roce 2015 testováno genetickými metodami cca 5000 jedinců

7 Podmínky vzniku celiakie HLA HLA znaky podmiňující celiakii PŘESNÁ SPECIFIKACE ALELY PREVALENCE CELIAKIE DQ2 DQ2.5 DQA1*05+DQB1*02 VYSOKÁ DQ2 DQ2.2 DQA1*02+DQB1*02 MÍRNÁ DQ8 DQ8 DQA1*03+DQB1*03:02 VYSOKÁ EVROPSKÁ POPULACE: 40% - HLA-DQ predispozice x 1% - celiakie Genetika HLA DQ2/DQ8 non HLA CD Gluten, kojení, jiné Prostředí T-lymfo, CK protilátky, jiné Imunologie Molekuly HLA, které vážou gliadinové zbytky jsou nutným, nikoliv však dostačujícím, spouštěčem celiakie!!!

8 Vyšetření HLA-DQA1+DQB1 pro diagnostiku celiakie Doporučení ESPGHAN pro diagnostiku celiakie: Za přesně specifikovaných podmínek lze bez použití biopsie stanovit diagnosu celiakie s využitím vyšetření HLA Přítomnost predispozičních alel NENÍ SAMOSTATNĚ POTVRZENÍM DIAGNOSY Testování přítomností HLA-DQ2 a HLA-DQ8 je užitečný nástroj pro vyloučení diagnosy v případě nepřítomnosti obou markerů Testování HLA by mělo být poskytnuto jako test první linie pro jedince s rizikem vzniku celiakie, pokud je dostupné Testování HLA u rizikových skupin není součástí diagnostických standardů v ČR Vyšetření prováděno výhradně genetickými metodami s využitím CE-IVD kitů correct results wrong genotyping incorrect interpretation výsledky kontroly kvality v letech Kvalita a výpovědní hodnota prováděných vyšetření není vždy dostatečná V roce 2015 testováno cca jedinců

9 Narkolepsie Patří do skupiny CENTRÁLNÍCH HYPERSOMNIÍ: tedy neurologických poruch spánku charakterizovaných nadměrnou denní spavostí, která nevzniká špatnou kvalitou nočního spánku ztráta schopnosti regulace cyklů spánku a bdění Multifaktoriální onemocnění - vliv genetiky a prostředí Tři hlavní diagnostické skupiny: narkolepsie typu 1 (NT1, narkolepsie s kataplexií) narkolepsie typu 2 (NT2, narkolepsie bez kataplexie) idiopatická hypersomnie (IH) NARKOLEPSIE TYPU 1 Příznaky: nadměrná denní spavost, nekvalitní noční spánek, kataplexie (náhlá ztráta svalového napětí při plném vědomí), spánková obrna, hypnogagické halucinace Charakterizováno nedostatkem hypokretinu (orexinu) v mozkomíšním moku Pravděpodobný mechanismus je autoimunitní útok na hypokretin produkující neurony v hypothalamu Prevalence 0,02-0,18 % běžné populace

10 Vyšetření DQB1*06 pro diagnostiku narkolepsie Asociace známa od 80. let 20. století HLA-DQB1*06:02 - predispoziční alela HLA-DQB1*06:03 - silně protektivní - frekvence výskytu v ČR: přítomna u cca 24 % běžné populace - NT1 - téměř 100 % pacientů - NT2 - zvýšená frekvence výskytu (40-60 %) - IH - není známa souvislost - frekvence v populaci ČR: 0,08 (14 % populace) (populační data uvedena na Význam vyšetření: Přítomnost DQB1*06:02 potvrzení NT1 bez invazivního vyšetření hladiny hypokretinu v mozkomíšním mokuu pacientů s typickými příznaky této diagnosy (především referovaná kataplexie) Nepřítomnost DQB1*06:02 diagnosa NT1 s vysokou pravděpodobností vyloučena Vyšetření prováděno výhradně genetickými metodami s využitím CE-IVD kitů Kvalita a výpovědní hodnota prováděných vyšetření je dobrá V roce 2015 testováno cca 250 jedinců Většina v naší laboratoři ve spolupráci se spánkovým centrem neurologické kliniky VFN Výsledky publikovány v: Vrana, Siffnerova et al.:distribution of HLA-DQB1 in Czech Patients with Central Hypersomnias, Archivum Immunologiae et Therapiae Experimentalis, 64(1), DOI /s

11 Diabetes mellitus 1. typu (DM1T) inzulin-dependentní diabetes mellitus (IDDM) Imunitně podmíněný diabetes - vzniká buněčnou autoimunitní destrukcí -buněk pankreatických ostrůvků geneticky predisponovaných jedinců Příčinou onemocnění je absolutní nedostatek endogenní sekrece inzulínu až její úplné chybění Postihuje 5-10 % všech diabetiků bělošské populace ve vyspělých zemích Manifestuje se u dětí a mladých jedinců, ale může postihnout osoby jakéhokoliv věku. Heterogenní multifaktoriální polygenní onemocnění Cca 50% genetického vlivu geny HLA-DRB1, -DQA1 a DQB1 Vysoce rizikové genotypy: DQA1*03 - DQB1*03:02 (DR4-DQ8) DQA1*05 - DQB1*02 (DR3-DQ2) vyskytuje se u cca 95 % pacientů s IDDM DQA1*03 DQB1*02 (DR4-DQ2) Červeně označeny: genotypy rizikové i pro vznik celiakie V ČR testováno pouze omezeně v roce 2015 referováno cca 100 vyšetření provedených jednou laboratoří

12 SOUHRN Vyšetření HLA-B*27 pro diagnostiku revmatických onemocnění je v ČR využíváno, má dobrou výpovědní hodnotu Vyšetření HLA-DQ pro diagnostiku celiakie je v ČR využíváno (otázka zda nelze využít více) má nižší výpovědní hodnotu Je potřebná další standardizace a osvěta Další vyšetření HLA pro diagnostiku chorob jsou v ČR využívána spíše sporadicky v závislosti na spolupráci laboratoří a kliniků Otázka standardizace a možností využití zůstává otevřená DOTAZ UVEŘEJNĚNÍ SEZNAMU LABORATOŘÍ??

13 PODĚKOVÁNÍ SPOLUPRACOVNÍKŮM Účastníci průzkumu: CGB laboratoř a.s., Ostrava Genetika Plzeň, s.r.o. Centrum lékařské genetiky s.r.o., České Budějovice Laboratoř molekulární diagnostiky, IFCOR-99, s.r.o., Brno Laboratoře AGEL a.s., Laboratoř lékařské genetiky úsek molekulární biologie, Nový Jičín GHC GENETICS, Praha Cytogenetická laboratoř Brno, s.r.o. GENLABS - Poliklinika Medipont, České Budějovice Institut reprodukční medicíny a genetiky, Karlovy Vary Bioptická laboratoř, s.r.o. Plzeň Genomac výzkumný ústav, s.r.o. Praha Gennet, s.r.o. Praha Nemocnice České Budějovice Laboratoř molekulární biologie a genetiky Klinické laboratoře TO, Krajská zdravotní a.s., Masarykova nemocnice, Ústí nad Labem Klinická imunologie a alergologie laboratoř, ÚLBLD, VFN a 1. LF UK, Praha OKB, Krajská nemocnice Liberec, a.s. Klinická imunologie a alergologie laboratoř, ÚLBLD, VFN a 1. LF UK, Praha Nemocnice Jihlava - Laboratoř molek. genetiky, odd. OKBMI Zdravotní ústav se sídlem v Ústí nad Labem - Centrum imulogie a mikrobiologie Zdravotní ústav se sídlem v Ostravě, Oddělení molekulární biologie HLA/DNA laboratoř, Krevní centrum FN Ostrava HLA laboratoř, Transfuzní a tkáňové oddělení FN Brno HLA laboratoř, Ústav imunologie, FN Olomouc FN Plzeň - HLA laboratoř Laboratoř HLA systému a PCR diagnostiky, TO FN Hradec Králové IKEM OIG, Praha Uherskohradišťská nemocnice, a.s. Nemocnice České Budějovice LMBG Laboratoře klin. Imunologie Aeskulab k.s. Antonij Slavčev František Mrázek Marie Dobrovolná Zuzana Ambrůzová Libor Kolesár Výbor imunogenetická sekce ČSAKI Peter Szitanyi Klinika dětského a dorostového lékařství VFN Praha Karel Šonka Oddělení neurologie VFN Praha Renáta Macnerová, Sára Nazarová, Věra Šiffnerová, Milena Melková, Hana Vondráčková, Kateřina Šimonová Eva Ratajová Šárka Půbalová Barbora Kinská Oddělení HLA - NRL pro DNA diagnostiku ÚHKT Praha

14 DĚKUJI VŠEM ZA POZORNOST A TĚŠÍM SE NA DALŠÍ SPOLUPRÁCI!