BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX ) BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base)

Transkript

1 POKYNY K POUŽITÍ MÉDIA NA MISKÁCH K OKAMŽITÉMU POUŽITÍ PA Rev.: Sep 2011 BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX ) ÚČEL POUŽITÍ BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) a BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) jsou základní média pro izolaci a kultivaci náročných mikroorganismů, zejména druhů Neisseria a Haemophilus, z různých klinických vzorků. ZÁSADY A VYSVĚTLENÍ POSTUPU Mikrobiologická metoda. Carpenter a Morton popsali vylepšené médium pro izolaci gonokoku za 24 hodin. 1 Účinnost tohoto média, agaru GC doplněného o hemoglobin a kvasničný koncentrát, byla prokázána ve výzkumu s dvanácti médii používaných k izolaci tohoto organismu. 2 Později bylo provedeno několik vylepšení tohoto média. 3-5 V agaru BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) pocházejí výživné látky z báze GC II, která obsahuje kasein a vybrané masové peptony jako zdroj dusíku, fosfáty pro udržení ph a kukuřičný škrob pro neutralizaci toxických mastných kyselin, které mohou být v agaru přítomny. Hemoglobin poskytuje faktor X (hemin). Obohacení BD IsoVitaleX je definovaný doplněk, který dodává faktor V (nikotinamid adenin dinukleotid, NAD), který je nezbytný pro druhy Haemophilus, a vitamíny, aminokyseliny, koenzymy, glukózu, železité ionty a další faktory, které zlepšují růst patogenních Neisseria a dalších náročných organismů. Pro zlepšení růstu Gram negativních bakterií byl přidán pyridoxal a specifické růstové faktory a pro podporu druhů Granulicatella a Abiotrophia byl (=nutričně odlišné streptokoky) byl přidán pyridoxal. 6-9 Čokoládový agar (báze krevního agaru č. 2) je alternativní médium pro izolaci náročných organismů z klinických vzorků. 7 obsahuje pepton proteózu, výtažek z jater a kvasničný výtažek jako zdroje dusíku a vitamínů. Chlorid sodný udržuje osmotickou stálost. Zahřátá (horkem denaturovaná ) koňská krev poskytuje faktor X (hem) a také, protože neobsahuje NADázu, faktor V (níkotinamid adenin dinukleotid, NAD) potřebný pro růst Haemophilus influenzae a dodává další výživné látky. ČINIDLA Vzorce* na litr deionizované vody BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) Pankreatická natrávenina kaseinu 7,5 g Pepton proteóza č. 3 15,0 g Vybraný masový pepton 7.5 Výtažek z jater 2.5 Kukuřičný škrob 1.0 Kvasničný výtažek 5.0 Hydrogenfosforečnan draselný 4.0 Chlorid sodný 5.0 Fosforečnan draselný 1.0 Koňská krev (zahřátá) 7% Chlorid sodný 5.0 ph 7,4 ± - 0,2 Agar 12.0 Hemoglobin 10.0 Obohacení IsoVitaleX 12,0 ml Pyridoxal 0,01 g Faktory růstu 0.5 ph 7,2 ± - 0,2 *Upraveno anebo doplněno dle požadavků tak, aby byla splněna kritéria výkonu. PA

2 Obohacení BD IsoVitalex obsahuje následující faktory růstu (vzorec* na litr deionizované vody): Vitamín B 12 0,01 g L-glutamin 10.0 Adenin 1.0 Guanin hydrochlorid 0.03 Kyselina p-aminobenzoová Nikotinamid adenin dinukleotid (NAD) 0.25 Thiamin pyrofosfát 0.1 Dusičnan železitý 0.02 Thiamin hydrochlorid Cystein hydrochlorid 25.9 L-cystin 1.1 Glukóza *Upraveno anebo doplněno dle požadavků tak, aby byla splněna kritéria výkonu. BEZPEČNOSTNÍ OPATŘENÍ. Pouze pro odborné použití. Misky nepoužívejte, pokud vykazují známky mikrobiální kontaminace, změny zabarvení, vysušení, popraskání nebo jiné známky poškození. Pokyny pro aseptickou manipulaci, biologické nebezpečí a likvidaci použitého produktu naleznete v dokumentu VŠEOBECNÉ POKYNY K POUŽITÍ. SKLADOVÁNÍ A ŽIVOTNOST Po převzetí skladujte misky až do doby těsně před použitím v originálním pouzdru, v temnu a při teplotě 2 až 8 C. Systém nesmí zmrznout nebo se přehřát. Misky lze očkovat až do data platnosti (viz štítek na obalu) a inkubovat je lze po doporučenou dobu inkubace. Misky z otevřených sad po 10 kusech lze použít po dobu jednoho týdne, pokud jsou uloženy v čistém prostředí při teplotě 2 až 8 C. KONTROLA KVALITY UŽIVATELEM Naočkujte reprezentativní vzorky následujícími kmeny (podrobnosti naleznete v dokumentu VŠEOBECNÉ POKYNY K POUŽITÍ. Inkubujte misky při 35 ± 2 C v aerobním prostředí doplněném oxidem uhličitým. Misky odečtěte po 18 až 24 hodinách a po 42 až 48 hodinách od inkubace. Kmeny* Haemophilus influenzae ATCC Neisseria gonorrhoeae ATCC Neisseria meningitidis ATCC Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 Slepý vzorek BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) a Uspokojivý až vynikající růst Čokoládově čokoládový, neprůhledný, může být mírně nehomogenní * Dále lze BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) testovat pomocí Granulicatella (Abiotrophia) adiacens DSM 9848 a zjistit tak růst nutričně odlišných streptokoků. 8,9 POSTUP Dodané materiály BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) nebo BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base), obojí v miskách Stacker o velikosti 90mm. Mikrobiologicky kontrolováno. Materiál, který není součástí dodávky Pomocné živné půdy, činidla a laboratorní vybavení dle potřeby. PA

3 Druhy vzorků Tato média lze v zásadě použít pro všechny druhy vzorků z infekcí, u kterých je podezření, že obsahují náročné organismy, mimo jiné především vzorky z primárně sterilních míst těla (např. mozkomíšní mok, abscesy). Jejich hlavní využití spočívá v základní izolaci Neisseria, Haemophilus a ostatních bakterií, které nemohou růst na běžně používaných agarových médiích, jako je agar Columbia s 5% ovčí krve. Kromě toho lze BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) použít také pro izolaci druhů Abiotrophia a Globicatella (=nutričně odlišné streptokoky). 8,9 Tato media se také používají jako dceřinou kulturu z krevních kultur. (viz také VÝKONOVÉ CHARAKTERISTIKY A OMEZENÍ POSTUPU). Odběr a přeprava vzorků Neisseria gonorrhoeae, N. meningitidis, Haemophilus a ostatní náročné organismy jsou citlivé na nepříznivé podmínky prostředí. Proto je pro všechny vzorky nutné zajistit vhodná přepravní média. Vzorky musí být co nejrychleji odeslány do laboratoře a nesmí být starší než 24 hodin, a to ani v případě použití přepravních médií. Optimální přepravní teplota je 20 až 25 C. Chraňte před chladem! 10,11 Provedení testu Pokud možno co nejdříve po převzetí v laboratoři rozočkujte vzorek na BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) nebo. Miska s nátěrem se používá především k izolaci čistých kultur ze vzorků obsahujících smíšenou flóru. Nebo pokud je materiál kultivován přímo z výtěru, otřete výtěr o malou plochu na okraji a poté proveďte rozočkování z takto naočkovaného místa. Pokud byl vzorek odebrán z tělesného místa obsahujícího normální flóru, měl by také být inokulován na vhodné selektivní médium v závislosti na původci choroby, který má být izolován. U Neisseria gonorrhoeae je potřeba použít misku s agarem BD Martin-Lewis Agar, modified nebo BD GC-Lect Agar a pro Haemophilus je nutno použít misku s agarem BD Chocolate Agar with IsoVitaleX a Bacitracinem. Inkubujte destičky při 35 ± 2 C v aerobním prostředí doplněném oxidem uhličitým. Misky odečtěte po 18 až 24 hodinách a po 42 až 48 hodinách od inkubace. Výsledky Typická morfologie kolonií je následující: ORGANISMY BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) a Haemophilus influenzae Malé (1mm), vlhké, granulované s charakteristickým zápachem myšiny Neisseria gonorrhoeae Malé, šedobílé až bezbarvé, slizovité Neisseria meningitidis Střední až velké, modrošedé, slizovité Streptococcus pneumoniae Malé, ploché nebo větší slizovité nazelenalé kolonie, kolonie obklopující médium mohou být nazelenalé Granulicatella (Abiotrophia) Malé šedozelené kolonie, kolonie obklopující médium mohou adiacens* být nazelenalé VÝKONOVÉ CHARAKTERISTIKY A OMEZENÍ POSTUPU BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) a BD Chocolate Agar (Blood Agar No. 2 Base) jsou obohacená základní média, na kterých rostou náročné a nenáročné bakterie včetně normální flóry. Proto doporučujeme očkovat vzorky z takových míst na těle, která obsahují normální flóru, také na vhodná selektivní média. Termín citlivé bakterie označuje takové bakterie, které nerostou nebo nerostou dobře na běžně používaných primárních izolačních médiích obsahujících ovčí krev, např. Haemophilus, patogenní Neisseria a několik dalších organismů. Podrobný popis typu vzorků, které je nutno očkovat na tato média, a typu organismů, pro které se tato média za účelem izolace používají, naleznete v odkazech. 8,9,11,12 Existuje velký počet a mnoho typů druhů bakterií, které se vyskytují jako původci infekcí. Proto se tato média běžně používají pro ojediněle izolované nebo nově popsané organismy. Jejich vhodnost musí uživatel nejprve vyzkoušet kultivací čistých kultur dotyčného organismu. PA

4 Dosud nebylo vyzkoušeno, zda podporuje růst druhů Abiotrophia a dalších nutričně odlišných streptokoků. Pojednání o nutričně odlišných streptokocích naleznete v odkazech. 6,8,9,13 CITACE 1. Carpenter, C.M., and H.E. Morton An improved medium for isolation of the gonococcus in 24 hours. Proc. N.Y. State Assoc. Public Health Labs. 27: Carpenter, C.M., M.A. Bucca, T.C. Buck, E.P. Casman, C.W. Christensen, E. Crowe, R. Drew, J. Hill, C.E. Lankford, H.E. Morton, L.R. Peizer, C.I. Shaw, and J.D. Thayer Evaluation of twelve media for the isolation of the gonococcus. Am. J. Syphil. Gonorrh. Venereal Diseases 33: Power, D.A. (ed.), and P.J. McCuen Manual of BBL products and laboratory procedures, 6th ed. Becton Dickinson Microbiology Systems, Cockeys ville, Md. 4. Martin, J.E., T.E. Billings, J.F. Hackney, and J.D. Thayer Primary isolation of N. gonorrhoeae with a new commercial medium. Public Health Rep. 82: Vastine, D.W., C.R. Dawson, I. Hoshiwara, C. Yonega, T. Daghfous, and M. Messadi Comparison of media for the isolation of Haemophilus species from cases of seasonal conjunctivitis associated with severe endemic trachoma. Appl. Microbiol. 28: Ruoff, L.R Aerococcus, Abiotrophia, and other infrequently isolated aerobic catalasenegative, gram-positive cocci. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8thed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 7. Anonymous DIFCO Manual, 11th edition. DIFCO Laboratories, Division of Becton Dickinson and Co. Sparks, MD, USA. 8. Reimer, L.G., and L.B. Reller Growth of nutritionally variant streptococci on common laboratory and 10 commercial blood culture media. J. Clin. Microbiol. 14: Collins, M.D., and P.A. Lawson The genus Abiotrophia (Kawamura et al.) is not monophyletic: proposal of Granulicatella gen. nov., Granulicatella adiacens comb. nov., Granulicatella elegans comb. nov. and Granulicatella balaenopterae comb. nov. Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 50: Thomson, R.B., and J.M. Miller Specimen collection, transport, and processing: bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 11. Forbes, B.A., and P.A. Granato Processing specimens for bacteria. In P.R. Murray, E.J. Baron, M.A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 12. Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.) Manual of clinical microbiology, 8thed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 13. Ruoff, K.L Aerococcus, Abiotrophia, and other infrequently isolated aerobic catalasenegative, gram-positive cocci. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. BALENÍ/DOSTUPNOST: BD Chocolate Agar (GC II Agar with IsoVitaleX) Kat. č Médium na miskách k okamžitému použití, cpu 20 Kat. č Médium na miskách k okamžitému použití, cpu 120 Kat. č Kat. č Médium na miskách k okamžitému použití, cpu 20 Médium na miskách k okamžitému použití, cpu 120 DALŠÍ INFORMACE Další informace vám poskytne místní zástupce společnosti BD. PA

5 Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are the property of Becton, Dickinson and Company BD PA