BD BBL CHROMagar Salmonella

Transkript

1 NÁVOD K POUŽITÍ MÉDIA NA MISCE K OKAMŽITÉMU POUŽITÍ PA Verze: April 2013 BD BBL CHROMagar Salmonella *Číslo patentu (USA): 5,098,832 5,194,374 ÚČEL POUŽITÍ Médium BBL CHROMagar Salmonella je selektivní a rozlišovací médium určené pro izolaci a pravděpodobnou identifikaci druhu Salmonella z klinických vzorků stolice. Médium BBL CHROMagar Salmonella bylo rovněž schváleno organizací AOAC Research Institute v rámci programu Performance Tested Methods výhradně k analýze syrového mletého hovězího masa, syrových kuřat, syrových ryb, hlávkového salátu a vajec ve skořápce. Ke srovnávacím testům metod byly použity metody ISO, USDA FSIS a FDA BAM. 1-3 Podle výsledků je médium BBL CHROMagar Salmonella ekvivalentní s médii na miskách doporučovaných v metodách ISO, FDA a USDA. ZÁSADY A VYSVĚTLENÍ POSTUPU Mikrobiologická metoda. Salmonella se běžně vyskytuje v populacích živých tvorů a obvykle se nachází v intestinálním traktu zvířat i lidí. Jde o jeden z nejrozšířenějších organismů vyvolávající choroby způsobené potravou, u něhož se často udává živočišný původ. 4 Choroby způsobené Salmonellou byly spojovány s drůbeží, hovězím masem, čokoládovými a mléčnými výrobky a zeleninou. 5 Médium BBL CHROMagar Salmonella je určeno k izolaci a diferenciaci kmene Salmonella. Chromogenní substráty obsažené v médiu usnadňují zjišťování kmene Salmonella v jiné flóře. Médium BBL CHROMagar Salmonella vyvinul původně A. Rambach, CHROMagar, Paříž. Na základě licenční smlouvy společnost BD tento preparát zdokonalila s využitím autorsky chráněných postupů používaných při výrobě média na miskách BBL CHROMagar Salmonella a dehydratovaného kultivačního média Difco CHROMagar Salmonella. Výživné látky do média BBL CHROMagar Salmonella dodávají speciálně vybrané peptony. Gram-pozitivní organismy jsou obvykle vlivem selektivní báze média inhibovány. Přísada fungicidního činidla brání růstu kmene Candida a další antimikrobiální prostředky slouží k potlačení růstu gram-negativních baktérií nefermentujících glukózu a kmene Proteus, které by mohly přerůst kolonie Salmonelly. V médiu je obsažena směs chromogenů. Vlivem rozdílů v metabolismu za přítomnosti vybraných chromogenů se kolonie kmene Salmonella jeví jako světle fialové (růžové až purpurové), přičemž nežádoucí baktérie jsou buď potlačeny, nebo tvoří modrozelené či bezbarvé kolonie. ČINIDLA Složení** na litr deionizované vody Chromopepton 22,0 g Směs chromogenů 0,34 g Inhibitory 0,02 g Agar 15,0 g ph 7,7 +/-0,2 **Upraveno a/nebo doplněno dle požadavků tak, aby byla splněna funkční kritéria. *NEZÁVISLÉ ZKOUŠKY VZORKŮ TESTOVACÍ SADY TOHOTO TYPU, PROVEDENÉ AOAC RESEARCH INSTITUTE, POTVRDILY, ŽE FUNKCE TESTOVACÍ SADY ODPOVÍDÁ ÚDAJŮM, KTERÉ VÝROBCE UVÁDÍ V PŘILOŽENÉM POPISU. VÝROBCE STVRZUJE, ŽE TATO SADA VE VŠECH OHLEDECH SPLŇUJE PARAMETRY, KTERÉ VÝZKUMNÝ ÚSTAV AOAC HODNOTIL TAK, JAK JE UVEDENO V OSVĚDČENÍ ČÍSLO PROGRAMU Performance Tested Methods sm. PA Strana 1 z 11

2 DŮLEŽITÉ RADY. Pouze pro odborné použití. Zjistíte-li nadměrnou vlhkost, položte obrácenou spodní část na sejmutou horní část a nechte na vzduchu vyschnout, aby se dolní a horní části misky při inkubaci vzduchotěsně nespojily. Při sušení chraňte před světlem. Viz SKLADOVÁNÍ A ŽIVOTNOST. Aby se uživatel seznámil s chromogenními (barevnými) reakcemi, jaké lze očekávat u Salmonelly, doporučuje se, aby provedl inokulaci typickými kmeny, které se v dané instituci obvykle nacházejí. Doporučují se tyto kmeny: Salmonella ser. Typhimurium, ATCC 14028; Salmonella ser. Dublin, ATCC 15480; Salmonella ser. Typhi, ATCC a Salmonella enterica poddr. arizonae, ATCC V klinických vzorcích mohou být přítomny patogenní mikroorganismy, včetně virů hepatitidy a viru lidské imunodeficience (HIV). Proto dodržujte při práci s veškerým materiálem kontaminovaným krví a jinými tělními tekutinami Standardní bezpečnostní opatření 6-9 a předpisy instituce. Podrobné údaje a pokyny pro aseptickou manipulaci, informace týkající se biologického nebezpečí a pokyny pro likvidaci použitého produktu naleznete v dokumentu VŠEOBECNÉ POKYNY K POUŽITÍ. SKLADOVÁNÍ A ŽIVOTNOST Po převzetí skladujte misky až do doby těsně před použitím v originálním pouzdru, v temnu a při teplotě 2 až 8 C. Systém nesmí zmrznout nebo se přehřát. Misky lze očkovat až do data platnosti (viz štítek na obalu) a inkubovat je lze po doporučenou dobu inkubace. Misky z otevřených sad po 10 kusech lze použít po dobu jednoho týdne, pokud jsou uloženy v čistém prostředí při teplotě 2 až 8 C. Zhoršování kvality produktu Nepoužívejte misky, které vykazují známky mikrobiální kontaminace, změny zabarvení, vysušení, popraskání nebo jiné známky poškození. KONTROLA JAKOSTI UŽIVATELEM Podle části Zhoršování kvality produktu zkontrolujte, zda jsou misky v použitelném stavu. Zkontrolujte účinnost inokulací reprezentativního vzorku misek čistými kulturami stabilních kontrolních organismů, které vykazují známé požadované reakce. Doporučujeme použít tyto testovací kmeny: Kmeny Výsledky růstu Salmonella Typhimurium ATCC Střední až intenzivní růst kolonií zbarvených světle fialově až fialově (růžově až purpurově) Salmonella Enteritidis ATCC Růst; fialové (růžové až purpurové) kolonie Citrobacter freundii ATCC 8090 Střední až intenzivní růst kolonií zbarvených světle modrozeleně až modrozeleně Escherichia coli ATCC Částečná až úplná inhibice; modrozelené kolonie Klebsiella pneumoniae ATCC Částečná inhibice; modrozelené kolonie Proteus mirabilis ATCC Částečná až úplná inhibice Enterococcus faecalis ATCC Částečná až úplná inhibice; malé modrozelené kolonie Staphylococcus aureus ATCC Inhibice (částečná až úplná) Vzhled nenaočkovaného média Bezbarvý až světle žlutý, průhledný Poznámka : Požadavky na kontrolu kvality musí být splněny v souladu s platnými místními předpisy a/nebo zákony nebo požadavky na akreditaci a se standardními kontrolními postupy vaší laboratoře. POSTUP Dodaný materiál BBL CHROMagar Salmonella (90 mm misky Stacker ) Mikrobiologicky kontrolováno.

3 Nutný, ale nedodávaný materiál Pomocná kultivační média, činidla, organismy pro kontrolu jakosti a další laboratorní vybavení nutné pro konkrétní laboratorní postup, jako např. ISO 7218, USDA FSIS MLG, FDA BAM nebo váš konkrétní postup. Odběr vzorků Podrobné informace o odběru vzorků a manipulaci s nimi najdete rovněž v příslušných příručkách. 1-5 Typy vzorků Toto médium lze použít na klinické vzorky stolice a nejrůznější vzorky potravin (syrové mleté hovězí, syrové kuřecí maso, syrové ryby, hlávkový salát a vejce ve skořápce). Provedení testu Dodržujte aseptické postupy. Povrch agaru by měl být hladký a vlhký, ale bez nadměrné vlhkosti. Před inokulací počkejte, až se médium ohřeje na pokojovou teplotu. Klinické vzorky: Co nejdříve po převzetí vzorku v laboratoři inokulujte vzorek na misku s médiem BBL CHROMagar Salmonella a proveďte nátěr k izolaci. Je-li vzorek kultivován přímo z výtěru, otřete výtěr jemně o malou plochu povrchu na okraji a poté proveďte rozočkování z tohoto místa pomocí smyčky. Postupy platné ve vaší instituci mohou vyžadovat k izolaci Salmonelly a zjištění dalších enterických patogenů inokulaci dodatečných médií. Obrácené misky (stranou s agarem nahoru) inkubujte v aerobních podmínkách 24 h při teplotě 35 ± 2 C. Je-li výsledek po 24 h negativní, inkubujte před ohlášením konečných výsledků ještě dalších 24 h. Po zbarvení kolonií už může BBL CHROMagar Salmonella přijít na světlo. Typické kolonie Salmonelly by se měly ještě dát potvrdit biochemickými nebo sérologickými testy. Médium BBL CHROMagar Salmonella lze použít také k subkultivaci z předem obohacených médií, např. ze selenitové nebo tetrathionanové živné půdy. Vzorky potravin: Postupujte podle metodologie přípravy vzorků uvedené v příručce vydané USDA FSIS Microbiology Laboratory Guidebook: Isolation and Identification of Salmonella from Meat, Poultry, and Egg Products (Izolace a identifikace Salmonelly z masných, drůbežích a vaječných výrobků), podle kapitoly FDA BAM o Salmonelle, podle směrnic ISO nebo závazných postupů platných pro typ vzorku a danou geografickou lokalitu. Inokulujte inkubovaný vzorek obohacené živné půdy na misku s médiem BBL CHROMagar Salmonella. Proveďte nátěr k izolaci a obrácené misky (stranou s agarem nahoru) inkubujte v aerobních podmínkách 24 h při teplotě 35 ± 2 C. Je-li výsledek po 24 h negativní, inkubujte před ohlášením konečných výsledků ještě dalších 24 h. Typické kolonie Salmonelly vypěstované na médiubbl CHROMagar Salmonella by se měly ještě dát potvrdit testy, jak je uvedeno v postupech ISO, USDA FSIS a FDA BAM. 1-3 Výsledky Po správné inkubaci vyhodnoťte misky proti bílému podkladu. Salmonella typhimurium a jiné druhy Salmonelly se jeví jako kolonie zbarvené světle fialově až fialově, s výjimkou poddruhu arizonae druhu Salmonella enterica a jiných druhů Salmonelly pozitivních na laktózu a betaglucosidázu. Tyto izoláty se jeví jako modrofialové nebo purpurové kolonie. Citrobacter a další koliformy se jeví jako světle modrozeleně až modrozeleně zbarvené kolonie. Některé organismy, které nehydrolyzují žádnou z chromogenních sloučenin, mohou vypadat jako bezbarvé kolonie. PROVEDENÍ A OMEZENÍ POSTUPU BBL CHROMagar Salmonella je selektivní diferenční médium určené pro izolaci a pravděpodobnou identifikaci druhu Salmonella z klinických vzorků stolice a nejrůznějších vzorků potravin. Očekávané výsledky Druh Salmonella se na tomto médiu jeví jako světle fialové až fialové (= růžové až purpurové) kolonie, s výjimkou druhů Salmonella pozitivních na laktózu a beta-glukosidázu. Tyto izoláty se jeví jako modrofialové nebo purpurové kolonie.

4 Při interním a externím vyhodnocování klinických a průmyslových vzorků byly na médiu BBL CHROMagar Salmonella izolovány následující organismy: Salmonella 8, (20):-:26 Salmonella ser. Javiana Salmonella enterica poddr. arizonae Salmonella ser. Johannesburg Salmonella enterica poddr. diarizonae Salmonella ser. Kentucky Salmonella ser. Abony Salmonella ser. London Salmonella ser. Adelaide Salmonella ser. Mbandaka Salmonella ser. Agona Salmonella ser. Michigan Salmonella ser. Anatum Salmonella ser. Minnesota Salmonella ser. Bareilly Salmonella ser. Montevideo Salmonella ser. Berta Salmonella ser. Muenster Salmonella ser. Brandenburg Salmonella ser. Newport Salmonella ser. California Salmonella ser. Oranienburg Salmonella ser. Cerro Salmonella ser. Panama Salmonella ser. Choleraesuis Salmonella ser. Paratyphi A Salmonella ser. Cubana Salmonella ser. Paratyphi B Salmonella ser. Derby Salmonella ser. Pomona Salmonella ser. DT 104 Salmonella ser. Poona Salmonella ser. Dublin Salmonella ser. Potsdam Salmonella ser. Enteritidis Salmonella ser. Pullorum Salmonella ser. Essen Salmonella ser. Rubislaw Salmonella ser. Gallinarum Salmonella ser. Schwarzengrund Salmonella ser. Gaminara Salmonella ser. Senftenberg Salmonella ser. Hadar Salmonella ser. St. Paul Salmonella ser. Hartford Salmonella ser. Thompson Salmonella ser. Heidelberg Salmonella ser. Typhi Salmonella ser. Illinois Salmonella ser. Typhimurium Salmonella ser. Infantis Salmonella ser. Typhimurium (pozitivní na laktózu)) Salmonella ser. Iverness Salmonella ser. Weltevreden Funkční charakteristiky 10 Klinické testování: Médium BBL CHROMagar Salmonella se testovalo ve velké diagnostické laboratoři. Na médiu BBL CHROMagar se testovalo celkem 150 známých negativních a 110 známých pozitivních klinických vzorků stolice a porovnávalo s výsledky médií XLD a Hektoen Enteric. Citlivost a procento specificity média BBL CHROMagar Salmonella po inkubaci h činily 76% a 99% a po inkubaci 48 h 90% a 94%. Citlivost a procento specificity se při subkultivaci z živné půdy Selenite F zvýšily na 99% a 97%. Srovnatelné hodnoty citlivosti a procenta specifičnosti činily u média XLD po inkubaci h 71% a 97%, po inkubaci 48 h 78% a 95%; hodnoty citlivosti a procenta specifičnosti činily u média Hektoen Enteric po inkubaci h 71% a 94%, po inkubaci 48 h 79% a 93%. Testování zemědělských produktů: Metody USDA a FDA Médium BBL CHROMagar Salmonella bylo použito v interních a externích laboratořích schálených AOAC k prokázání Salmonelly v syrovém kuřecím mase, syrovém mletém hovězím, syrových rybách, hlávkovém salátu a vejcích ve skořápce. Syrové kuřecí maso a mleté hovězí byly zpracovány podle referenčních metod USDA FSIS. Syrové ryby, hlávkový salát a vejce ve skořápce byly zpracovány podle postupů FDA BAM. Selektivní průkaznost Salmonelly média BBL CHROMagar Salmonella se porovnávala s médii použitými v referenčních metodách. Ze syrového kuřecího masa bylo získáno celkem 16 pozitivních kultur, 17 ze syrového mletého hovězího, 18 ze syrových ryb a hlávkového salátu a 11 ze vzorků vajec ve skořápce. S médiem BBL CHROMagar Salmonella bylo dosaženo výsledků srovnatelných s referenčními metodami u všech živných půd, tedy stoprocentní shody mezi metodami.

5 Dvacet kuřecích vzorků s přídavkem se testovalo referenční metodou USDA FSIS. Do kuřecího masa bylo přidáno inokulum v malé dávce 8 CFU na 25 g vzorku a ve vysoké dávce 50 CFU na 25 g vzorku. Médium BBL CHROMagar Salmonella prokázalo 100% (20/20) nízké i vysoké dávky přidané Salmonelly. Při přídavku inokula nižším než 1 CFU/25 g se výsledky prokázaly částečně. Testovalo se kuřecí maso kontaminované přirozeným způsobem. Prokázalo se 100% Salmonelly a nejpravděpodobnější počet (MPN)/g činil 0,23. Sto osmnáct (118) izolátů Salmonelly původem z potravin včetně různých sérotypů bylo po 24 h kultivováno v laktózové živné půdě a pak po 24 h subkultivováno v tetrathionanové živné půdě. Tetrathionanové živné půdy byly subkultivovány na médiích BBL CHROMagar Salmonella a inkubovány při 35 C. V případě, že se po 24 h neukázaly světle fialově zbarvené kolonie, misky se nechaly inkubovat dalších 24 h. Na médiu BBL CHROMagar Salmonella se prokázalo 111 izolátů. Tetrathionanová živná půda inhibovala čtyři kmeny, které nebyly prokázány na médiu BBL CHROMagar Salmonella ani na neselektivní kontrolní misce. U dalších izolátů stejného sérotypu jako čtyři negativní vzorky vznikly typické kolonie, takže absence pozitivní reakce byla dána kmenem, nikoli sérotypem. Celková citlivost média BBL CHROMagar Salmonella činila 94% (111 ze 118 izolátů). Šedesát pět (65) izolátů jiných než Salmonella bylo kultivováno v infúzní živné půdě z mozku a srdce při 35 C po dobu 24 h a subkultivováno na médiu BBL CHROMagar Salmonella při 35 C po 24 h 94%. Negativní misky se nechaly inkubovat celkem 48 h. Šedesát jedna (61) z 65 izolátů (procento specificity 9%) nejevilo na médiu BBL CHROMagar Salmonella světle fialové zabarvení. Čtyři kmeny jiné než Salmonella, které se jevily světle fialově, byly inokulovány do tetrathionanové živné půdy (doporučená obohacená živná půda pro metody USDA a FDA). Po 24 h inkubaci byly tetrathionanové živné půdy subkultivovány na médiu BBL CHROMagar Salmonella. Po 48 h inkubace se kolonie jednoho kmene zbarvily světle fialově a tři kmeny byly inhibovány. Na základě výsledků s živnou půdou obohacenou tetrathionanem činilo podle této studie celkové procento specificity média BBL CHROMagar Salmonella 98%. Metoda ISO Selektivní průkaznost Salmonelly média BBL CHROMagar Salmonella se porovnávala s médii použitými v referenčních metodách na vzorcích syrového kuřecího masa, syrového mletého hovězího, syrových ryb, hlávkového salátu a vajec ve skořápce. Všechny živné půdy byly zpracovány podle kultivační metody ISO. Ze syrového kuřecího masa bylo získáno celkem 16 pozitivních kultur, 17 ze syrového mletého hovězího, 9 ze syrových ryb, 19 z hlávkového salátu a vzorků vajec ve skořápce. S médiem BBL CHROMagar Salmonella bylo dosaženo výsledků srovnatelných s referenčními metodami u všech živných půd, tedy stoprocentní shody mezi metodami. Ke dvaceti (20) vzorkům syrového hovězího masa, syrových ryb, hlávkového salátu a vajec ve skořápce byly přidány menší dávky inokula Salmonelly a analyzovány podle kultivačního postupu ISO. Dvacet (20) vzorků syrového kuřecího masa kontaminovaného přirozeným způsobem bylo analyzováno podle kultivační procedury ISO. K sadě referenčních médií bylo pro každou testovanou živnou půdu s potravinami přidáno médium BBL CHROMagar Salmonella. Shoda metod byla u média BBL CHROMagar Salmonella a ostatních testovaných referenčních médií 100%. Nízké hodnoty inokula se pohybovaly v rozmezí 0,0036 až 0,23 MPN/g. Sto dvacet sedm (127) izolátů Salmonelly původem z potravin bylo kultivováno 18 h v pufrovaném peptonovém roztoku, a pak subkultivováno 24 h na médiu Rappaport-Vassiliades se sójou (RVS). Živné půdy RVS byly subkultivovány na médiích BBL CHROMagar Salmonella a inkubovány 24 h při 35 C. V případě, že se po 24 h neukázaly světle fialově zbarvené kolonie, misky se nechaly inkubovat dalších 24 h. Na médiu BBL CHROMagar Salmonella se prokázalo 123 izolátů. Prokazování 4 kmenů, které se nenamnožily na médiu BBL CHROMagar Salmonella, neproběhlo na neselektivních kontrolních médiích úspěšně. Celková citlivost u média BBL CHROMagar Salmonella byla 96,8% (123 z 127 izolátů).

6 Omezení postupu Někdy se může stát, že kmeny druhů Aeromonas hydrophila, Hafnia alvei, Pseudomonas aeruginosa, P. putida, Stenotrophomonas maltophilia, Acinobacter nebo Candida nejsou beze zbytku inhibovány a jejich kolonie se mohou zbarvit do světle fialova až fialova. Při ověřovacích testech, které jako indikátor využívají fialovou nebo purpurovou barvu, může být kolonie konkrétní barvy obtížně interpretovatelná. Může se stát, že na tomto médiu se nebudou množit vůbec nebo jen omezeně následující vzácné kmeny organismů: S. Typhi, S. Paratyphi A, S. Typhimurium, S. Choleraesuis, S. Minnesota, S. enterica poddr. arizonae a S. Pullorum. Je to záležitost konkrétního kmene a většina kmenů testovaných na každý z těchto sérovarů se prokázala. Médium BBL CHROMagar Salmonella není určeno k izolaci jiných střevních patogenů než Salmonella. Při testování některých vzorků lze pozorovat změnu barvy média do purpurového odstínu bez zjistitelného namnožení kolonií. To je třeba považovat za negativní výsledek. Před inkubací a během ní minimalizujte působení světla na médium BBL CHROMagar Salmonella, neboť světlo může zničit chromogeny. Misky po celou dobu skladování uchovávejte v původním obalu a kartonu. Inkubace v CO 2 se nedoporučuje. LITERATURA 1. Rose, Bonnie E Isolation and identification of Salmonella from meat, poultry and egg products. In: Microbiology laboratory guidebook, 3 rd ed., Food Safety and Inspection Service, U.S. Department of Agriculture, Washington, D.C. 2. U.S. Food and Drug Administration Bacteriological analytical manual (online), AOAC International, Gaithersburg, MD. 3. International Organization for Standards (ISO). Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the detection of Salmonella spp., 4 th Edition, ISO 6579: Bopp, Brenner, Fields, Wells and Strockbine Escherichia, Shigella, and Salmonella. In Murray, Baron, Jorgensen, Pfaller, and Yolken (ed.), Manual of clinical microbiology, 8 th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 5. D Aoust, Mauer and Bailey Salmonella species. In: Doyle, Beuchat and Montville (ed.), Food microbiology: fundamentals and frontiers, 2 nd ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C. 6. National Committee for Clinical Laboratory Standards Approved Guideline M29-A2. Protection of laboratory workers from occupationally acquired infections, 2 nd ed. NCCLS, Wayne, Pa. 7. Garner, J.S Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control Hospital Epidemiol. 17: U.S. Department of Health and Human Services Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS Publication (CDC), 4 th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C. 9. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p Archivní data, BD Diagnostic Systems. BALENÍ/DOSTUPNOST BBL CHROMagar Salmonella REF Médium na miskách k okamžitému použití, 20 kusů v balení DALŠÍ INFORMACE Další informace získáte u nejbližšího zástupce BD.

7 Becton Dickinson GmbH Tullastrasse 8 12 D Heidelberg/Germany Phone: Fax: Reception_Germany@europe.bd.com AOAC is a trademark and Performance Tested is a service mark of AOAC International. CHROMagar is a trademark of Dr. A. Rambach. Difco is a trademark of Difco Laboratories, subsidiary of Becton, Dickinson and Company. ATCC is a trademark of the American Type Culture Collection BD, BD Logo and all other trademarks are property of Becton, Dickinson and Company BD