Validační protokol LT CRP HS II (ADVIA 1800)

Transkript

1 Validační protokol LT CRP HS II (ADVIA 1800) Datum vydání: Zpracoval: Ing. Luděk Šprongl Pracoviště: Centrální laboratoř, Šumperská nemocnice a.s.

2 Validační protokol LT CRP HS II 1. CÍL, PŘEDMĚT A PROVEDENÍ VALIDACE Cíl: Ověření analytických znaků soupravy LT CRP-HS II, které jsou uvedeny v pracovním návodu, při použití soupravy na biochemickém analyzátoru ADVIA 1800 Předmět validace: Použití reagencie LT CTP-HS II (Wako Pure Chemical Industries, Osaka, Japonsko) na analyzátoru ADVIA 1800 (Siemens Medical Solutions, Tarrytown, USA). Místo validace: Centrální laboratoř, Šumperská nemocnice a.s. Odpovědná osoba: Ing. Luděk Šprongl, sprongl@nemspk.cz Doba provedení: duben POUŢITÝ MATERIÁL Přístroj: ADVIA 1800 (Siemens Medical Solutions, Tarrytown, USA). Validovaná reagencie: LT CRP-HS II (Wako Pure Chemical Industries, Osaka, Japonsko) Princip metody: Souprava na stanovení C-reaktivního proteinu imunoturbidimetrickou metodou je založena na reakci tohoto proteinu se specifickou protilátkou proti lidskému C-reaktivnímu proteinu za přítomnosti latexových částic. Vznikající imunokomplexy způsobují růst zákalu, který je přímo úměrný koncentraci C-reaktivního proteinu ve vzorku a lze jej měřit při 340 nm. Kalibrační materiál: LT CRP-HS Calibrator Set (Wako Pure Chemical Industries, Osaka, Japonsko) Kontrolní materiály: Liquicheck Immunology controls (BioRad, Irvine, USA) Reagencie pro srovnání: CRP II ADVIA (Siemens Medical Solutions, Tarrytown, USA). Reagencie pro hodnocení inerferencí: Hemoglobin (Sigma, USA), Bilirubin,mixed isomers (Sigma, USA), Intralipid (Infusia, ČR) Vzorky: Vybraná anonymní séra a jejich pooly z provozu CL Šumperské nemocnice a.s. 3. VÝSLEDKY Jednotlivé údaje jsou uvedeny v přílohách. Shrnutí výsledků: 3.1. MEZ DETEKCE Změří se 20 krát v sérii blank, vypočte se směrodatná odchylka výsledků měření. Trojnásobek směrodatné odchylky přepočítaný pomocí kalibračního faktoru na koncentraci daného analytu je považován za mez detekce. L D = 3 s bl, S bl = 0,00026 tj. 0,04 mg/l

3 Výsledná mez detekce je 0,12 mg/l 3.2. MEZ STANOVITELNOSTI - mez stanovitelnosti vyjádřena jako L Q = 9,12 s bl, (hodnota nejistoty = 10%) S bl = 0,00026 tj. 0,04 mg/l Výsledná mez stanovitelnosti je 0,39 mg/l 3.3. LINEARITA Jako vzorky se použily pacientské vzorky. Základem byl vzorek o nulové koncentraci měřeného analytu, označený jako L (low) a vzorek o extrémně vysoké koncentraci, která je v oblasti předpokládané horní meze pracovního rozsahu měření, označený jako H (high). Připravila se řada 5 vzorků: vzorek 1 jen H vzorek 2 75 % H + 25 % L vzorek 3 50 % H + 50 % L vzorek 4 25 % L + 75 % L vzorek 5 jen L Každý vzorek se změřil 3 krát. Vypočítány byly průměrné hodnoty každého ze 3 měření a byl sestrojen se graf (příloha) Zjištěná linearita byla minimálně do 420 mg/l 3.4. VÝTĚŢNOST K pacientskému vzorku o nízké koncentraci se přidalo známé jednak 10% objemu vzorku o známé vysoké koncentraci a jednak 10% nulového kalibrátoru Takto se připravil 5 dvojic vzorků, měřilo se v dubletu. Spočítána byla se výtěžnost R v procentech. Zjištěná výtěžnost je 99,5 % 3.5. OPAKOVATELNOST Použity pacientské vzorky - 20 měření každého vzorku během jednoho dne, v singletu - vypočten se průměr, směrodatná odchylka SD a variační koeficient CV Výsledky

4 INTRA- ASSAY n = 20 Průměr SD Validační protokol CV (%) Vzorek 1 6,585 0,106 1,61 Vzorek 2 51,01 0,333 0, MEZILEHLÁ PRECIZNOST Měřeno na kontrolních materiálech s deklarovanou cílovou hodnotou na 2 různých koncentracích. Měření bylo provedeno v průběhu 10 všedních dnů po sobě ve dvou sériích s časovým rozdílem minimálně 2 hodiny. Následně vypočten průměr, SD a CV INTER- ASSAY Průměr SD CV (%) n = 20 Vzorek 1 6,48 0,089 1,38 Vzorek 2 49,30 0,36 0, PRAVDIVOST (bias) Využity výsledky z měření výtěžnosti Výsledky: -0,5 % 3.8. SROVNÁNÍ - měření na 40 vzorcích pacientů - Každý vzorek se oběma metodami analyzoval 2 krát, a to jako 2 různé vzorky ve 2 různých bězích (tj. ne hned za sebou). Doba měření byla 5 dní, - vyhodnocení: lineární regresní analýza podle Passing-Babloka Výsledky: N = 40 r = 0,999 y = 1,008x + 0,88 mg/l 3.9. INTERFERENCE Bilirubin do 1,0 g/l Hemoglobin do 10 g/l TG do 5 mmol/l 3.10.STABILITA V PŘÍSTROJI Bylo prováděno měření kontrol na dvou hladinách s nedoplňovanou a neměněnou reagencií a hodnoceno, zda odchylka od cílové hodnoty nepřekračuje 10%. Stabilita reagencie v přístroji je minimálně 6 týdnů. Po celou dobu není nutné metodu rekalibrovat.

5 4. ZÁVĚR Bylo ověřeno, ţe souprava LT CRP-HS II při pouţití na analyzátoru ADVIA 1800 splňuje všechny analytické znaky garantované výrobcem v pracovním návodu. Metoda současně odpovídá veškerým poţadavkům, kladeným na soupravu při jejím pouţití v laboratořích klinické biochemie. Zpracoval: Ing. Luděk Šprongl V Šumperku