Současné možnosti turbidimetrie a nefelometrie
|
|
- Dominik Staněk
- před 9 lety
- Počet zobrazení:
Transkript
1 Klin. Biochem. Metab., 14 (35), 2006, No. 3, p Současné možnosti turbidimetrie a nefelometrie Štern P. Ústav klinické biochemie a laboratorní diagnostiky VFN a 1. LF UK, Katedra klinické biochemie IPVZ, Praha SOUHRN Edukační článek popisuje podrobně techniku turbidimetrie a nefelometrie. Jsou diskutovány jednotlivé světelné zdroje a praktické problémy, se kterými se laboratorní pracovník u těchto metod setkává. Samostatná kapitola se zabývá možnostmi detekce nadbytku antigenu, a tedy rozpoznání hook efektu na Heidelberger-Kendallově křivce. Přehled současné přístrojové techniky v oblasti nefelometrie (Quick Read, Turbox Plus, Minineph, BN Pro Spec, Nephelometer II, Array 360, Array Protein System, Immage, Immage 800, Delta, Nepheloskan Ascent, NEPHELOstar) je doplněn stručnou technickou charakteristikou a výkladem použitých imunochemických principů. Klíčová slova: turbidimetrie, nefelometrie, nadbytek antigenu, nefelometry. SUMMARY Štern P: Current possibilities of turbidimetry and nephelometry Educational article describing the instrumentation of turbidimetry and nephelometry. The light sources, as well as functional problems, technicians face using these methods, are discussed. A separate chapter concerns the possibilities of an antigen excess detection and thus hook effect recognition on Heidelberger-Kendall curve. The survey of contemporary instrumentation in the area of nephelometry (Quick Read, Turbox Plus, Minineph, BN Pro Spec, Nephelometer II, Array 360, Array Protein System, Immage, Immage 800, Delta, Nepheloskan Ascent, NEPHELOstar) includes a brief technical description and a presentation of used immunoassay principles. Key words: turbidimetry, nephelometry, antigen excess, nephelometers. Úvod Turbidimetrické a nefelometrické postupy jsou běžné analytické metody, které se v klinické biochemii používají zejména ke stanovení velké skupiny bílkovin, souhrnně zvané specifické proteiny. Turbidimetrie Optická metoda založená na měření procházejícího světla zeslabeného rozptylem na částicích se nazývá turbidimetrie. V klinické biochemii je celá řada metod založených na měření stupně zákalu turbidity. Nejvýznamnější z nich je soubor imunochemických metod, které využívají precipitační reakce mezi antigenem (Ag) a protilátkou (Ab). Při turbidimetrických měřeních je důležité získat reprodukovatelně suspenzi měřené reakční směsi, která je dostatečně stálá. K tomu účelu se používají ochranné polymery (nejčastěji polyetylenglykol). Absorpce záření po průchodu nehomogenním prostředím, tj. koloidním roztokem nebo roztokem zakaleným jemnou sraženinou, se měří absorpčními fotometry a spektrofotometry. Jednoúčelové turbidimetry s kvalitní optikou se už dnes nepoužívají, nicméně schéma takového přístroje je zajímavé (obr. 1), zejména při porovnání s optikou moderních automatických analyzátorů. Fotometrická citlivost je nepřímo úměrná vlnové délce. Proto se např. specifické proteiny často stanovují při nejkratší vlnové délce dosažitelné standardním fotometrem, tj. při 340 nm v blízké UV oblasti. Do střední UV oblasti nelze dál postupovat, i kdyby to spektrofo- Fig. 1. Turbidimeter (chart) tometr technicky umožňoval, neboť se začne projevovat absorpce nezreagovaných bílkovin, která může hrubě zkreslit měření zákalu imunokomplexu. Nicméně největší citlivosti turbidimetrických metod se dosahuje modrým světlem ( nm), protože halogenová žárovka svítí při 340 nm poměrně slabě a její světlo musí být zesíleno násobičem, což způsobuje zvýšení šumu. Naproti tomu je svítivost v oblasti modrého světla dostatečně silná a tím kompenzuje sníženou fotometrickou citlivost vzhledem k 340 nm. V měřicím rozsahu je vztah mezi absorbancí a koncentrací částic pro malé částice obvykle lineární, ale často to neplatí pro imunochemické reakce. Lineární odezva se však může měnit na nelineární se změnou vlnové délky záření. Také jakýkoliv vliv, který způsobí vznik částic odlišné velikosti, bude měnit výsledky měření absorbance. Při turbidimetrii ruší hemolýza a ikte- 146 Klinick biochemie a metabolismus 3/2006
2 rus méně než při nefelometrii. Turbiditu lze měřit na jakémkoliv fotometru nebo spektrofotometru za předpokladu, že suspenze je bezbarvá. Je třeba snížit na minimum vliv interferujících látek i za cenu snížení citlivosti reakce. Závislost intenzity prošlého záření na vlastnostech absorbujícího prostředí je exponenciální: I t = I 0. exp (- τl) kde I t = intenzita prošlého záření, I 0 = intenzita světelného zdroje, τ = turbiditní koeficient, L = světelná dráha kyvetou. V ředěných opalescentních roztocích je přechod mezi turbidancí a absorbancí pozvolný. Při zákalových metodách je třeba pečlivě sledovat všechny možné proměnné hodnoty, např. poměr přidaných činidel, způsob míchání, protřepání apod. Hodnota blanku by měla být < 0,25 A. Při srovnávání výsledků z různých přístrojů je třeba pamatovat na to, že různé tvary kyvet poskytují různé hodnoty absorbance. Přestože všechny automatické analyzátory střední cenové kategorie jsou vybaveny programy umožňujícími nelineární kalibrace, jen málokdy dosahují fotometrickou citlivost < 0,02 ma, která je nutná pro vysoce kvalitní turbidimetrii. Turbidimetrické metody na analyzátorech mají reprodukovatelnost ~ 5% a neměly by se používat tam, kde je zapotřebí velká přesnost a správnost stanovení. V běžné laboratorní praxi je výhodné mít možnost kvantifikovat sraženinu bez jejího oddělení od roztoku, když je žádoucí rychlé stanovení a není dostupná žádná jiná vhodná metoda. V klinické biochemii je i mimo oblast imunochemie několik metod založených na měření stupně zákalu. Při stanovení je největším problémem donutit měřenou složku ke srážení ve formě jemně rozptýlených částic o vhodné velikosti. Jako příklady lze uvést test s kyselinou sulfosalicylovou (Extonovo činidlo) pro stanovení bílkovin v moči a moku, stanovení fibrinogenu nebo vyčeřovací metodu ke stanovení lipázy (LPS). Posledně uvedené stanovení vyčeření emulze tuků po hydrolýze je výbornou jednoduchou ilustrací problémů turbidimetrie. Princip, kdy micely tuku absorbují a rozptylují náhodné světlo a hydrolýzou triacylglycerolů v micelách dochází k vyjasnění roztoku, což se projevuje snížením zákalu emulze, je dobře srozumitelný. V praxi jsou problémy se stálostí a reprodukovatelností substrátu, vhodným počátečním nastavením zákalu, přípravou a skladováním substrátu a také s kalibrací ať už titrací volných mastných kyselin roztokem hydroxidu sodného, nebo použitím sérového kalibrátoru s titrovanou LPS aktivitou. Může se projevit rozdílná rychlost štěpení LPS v blanku a ve vzorku a také vysoký revmatoidní faktor, kdy dochází ke srážení abnormálních sérových bílkovin. Nefelometrie Optická metoda se zabývá měřením intenzity difuzně rozptýleného světla na dispergovaných částicích, jak ilustruje obrázek 2. Fig. 2. Nephelometer (chart) Rozptýlené (tzv. Tyndallovo) světlo vychází z roztoku všemi směry a měří se pod úhlem, který je odlišný od směru dopadajícího záření. Pro tyto účely slouží buď nefelometrický nástavec k fotometru, u něhož se Tyndallovo světlo sleduje pod úhlem 90 stupňů, nebo mnohem častěji speciálními přístroji nefelometry které mohou být plně automatizovány. Rozdíly mezi nefelometrií a turbidimetrií ilustruje obrázek 3). Fig. 3. The differences between nephelometry and turbidimetry Laserový nefelometr používá jako světelného zdroje helium neonového nebo argonového laseru. Tento zdroj monochromatického světla je mimořádně intenzivní a má vysoký stupeň směrovosti. Laserový paprsek prochází přes kyvetu s měřeným roztokem a rozptýlené světlo se sleduje detektorem (fotonkou nebo fotonásobičem), obvykle nastaveným pod úhlem 5 35 stupňů (lineárně uspořádané přístroje) nebo stupňů (víceúčelové laserové přístroje nebo konvenční nefelometry). Konvenční nefelometry používají jako světelné zdroje žárovku s halogenovou atmosférou nebo xenonovou výbojku. Optika těchto přístrojů obsahuje navíc interferenční filtr, protože světelný zdroj poskytuje polychromatické světlo. Detektor je nastaven pod úhlem stupňů, protože stupeň směrovosti světla z konvenčního zdroje je nízký. Nefelometry mohou měřit také rychlost změny rozptylu světla kinetiku, která je přímo úměrná rychlosti vzniku imunokomplexu Ag-Ab. Nefelometrie je v E.P. provedení o řád citlivější (obvykle přibližně 0,1 mg/l) než turbidimetrie, ale v kinetické verzi (doba měření běžně 1 min) je nefelometrie srovnatelná co do citlivosti s turbidimetrii. Klinick biochemie a metabolismus 3/
3 Vlnová délka difuzně rozptýleného záření a záření dopadajícího ze zdroje je stejná, protože jen v malé míře dochází k emisi záření na částicích (emitované záření má díky tepelným ztrátám delší vlnovou délku). Optimální poměr mezi vlnovou délkou dopadajícího záření a poloměrem částic je 10 : 1, pak je rozptyl kulový (IgG 20 nm), avšak agregáty Ag-Ab o poloměru nm mají eliptický rozptyl. Protože osa elipsoidu je rovnoběžná se směrem dopadajícího záření, upřednostňuje se měření pod úhlem 30 stupňů. Intenzita rozptýleného záření je definována Rayleighovým vztahem: I r = I 0.K.N.v 2 /λ 4 kde I r = intenzita rozptýleného záření, I 0 = intenzita světelného zdroje, K = konstanta indexu lomu částic, N = počet částic, v = objem částic, l = vlnová délka záření. Problém nefelometrické analýzy spočívá v tom, že se poměrně často pro stejný vzorek naměří různými přístroji, kalibrovanými tímtéž standardem, rozdílné hodnoty. Spolehlivost stanovení obecně závisí na: uchovávání reakčního produktu během měření, osvětlení, teplotě měření, druhu materiálu reakční kyvety a tvaru reakční kyvety. Nefelometrie má v biochemii omezené použití, neboť je upotřebitelná jen pro aglutinační nebo vyčeřovací reakce. Nicméně nefelometry jsou přístroje ideální pro konsolidované laboratoře, protože řada metod v hematologii využívá také koagulační reakce a tyto přístroje lze úspěšně použít i v mikrobiologii při sledování růstu mikrobiálních buněk. Fig. 5. Ag or Ab excess by post-reaction Jinou možností je přidat malé množství vzorku k činidlu před vlastní reakcí. Je-li po krátké inkubaci překročen koncentrační práh zjištěný při kalibraci (obr. 6), vzorek se měří automaticky znovu při nejblíže vyšším ředění a opět se kontroluje na přebytek Ag; postup se opakuje až k dosažení optimální koncentrace Ag. Detekce nadbytku Ag Sofistikované nefelometry používají několik způsobů jak detegovat nadbytek Ag a umožnit, aby aglutinace probíhala v pracovní části Heidelberger-Kendallovy křivky (obr. 4). Fig. 6. Ag excess reliability by pre-reaction Fig. 4. Optimized Heidelberger-Kendall curve Kontrola přídavkem naředěného kalibrátoru po imunoreakci. Pokud probíhá reakční křivka podle typu 2 (obr. 5), následuje automatické opakování analýzy s vyšším ředěním. Dvojsmyslnost Heidelberger-Kendallovy křivky je možné také odstranit pomocí trojrozměrné referenční křivky (obr. 7). Křivka vystihuje závislost maximální reakční rychlosti V max reakce Ag s Ab a doby reakce tv max na koncentraci Ag. Hodnoty V max + tv max jednoznačně definují koncentraci Ag, protože každému páru těchto hodnot odpovídá pouze jediná koncentrace Ag (obr. 8). K dispozici jsou komerční soupravy pro více než 50 analytů, převážně pro specifické proteiny. K dispozici je také řada souprav pro stanovení léků (digoxin, antiepileptika, aminoglykosidová antibiotika, teofylin a další) na principu imunoanalýzy na částicích s detekcí v blízkém infračerveném spektru. Z hematologických vyšetření lze uvést např. antithrombin III, plasminogen, fibrinogen, protrombin a další. Výrobci mají 148 Klinick biochemie a metabolismus 3/2006
4 Turbox Plus Jednoduchý manuální nefelometr od stejné firmy, na kterém lze změřit až 100 testů za hodinu. Přístroj je určen pro stanovení specifických proteinů a několika hematologických parametrů. Zdrojem světla je LED 635 nm. Spotřeba vzorku je µl, podle typu analýzy. Detektorem rozptýleného světla jsou dvě fotodiody. Tovární kalibrace je na magnetické kartě a pro konkrétní přístroj se adjustuje analýzou firemního kalibrátoru. Minineph Malý laserový nefelometr (dioda 670 nm) firmy The Binding Site je vybaven, podobně jako předchozí přístroj, možností kalibrace pomocí magnetické karty. Rozptýlené světlo je měřeno pod úhlem 18 stupňů v režimu E.P. Přístroj měří vždy individuální blank a CV v sérii i mezi sériemi (uváděný výrobcem) je lepší než 5 %. Poněkud neobvyklá je inkubační teplota v měřící kyvetě (18 30 o C). Minimální měřený objem je 200 µl a obvyklá spotřeba antiséra je 20 µl na 1 stanovení. K dispozici je přibližně 25 firemních metod, avšak uživatel může také programovat vlastní nefelometrické postupy. Fig. 7. Three-dimensional Heidelberger-Kendall curve Fig. 8. Responsibility among max. reaction rate, time to this fruition and Ag concentration pochopitelně zájem, aby uživatelé pracovali s jejich reagenciemi, ale přesto mají dnešní sofistikované nefelometry možnost volně programovatelných metod, kterých může být v některých případech až 50 (Immage a Immage 800). Pro naše ordinace a laboratoře se nabízí poměrně široký sortiment přístrojů: Quick Read Jednoduchý turbidimetr firmy Orion Diagnostica je určen ke stanovení CRP v intervalu koncentrací mg/l a ke stanovení mikroalbuminurie, zejména v ordinacích lékařů. Zdrojem světla jsou světlo emitující diody (LED) 654 a 950 nm. Přístroj může pracovat na síťový nebo bateriový pohon a stanovení lze provést z 20 µl krve nebo séra za 4 minuty. Jednoúčelové zkumavky obsahují navážku specifické protilátky a u každého vzorku se měří individuálně blank. Software kalibrace je na magnetické kartě. BN Pro Spec Automatizovaný nefelometr firmy Dade-Behring má zásobník pro 45 vzorků. Pracuje v režimu po vzorcích, s možností přednostní analýzy statimových vzorků. Je možné použít různé velikosti vzorkovnic s využitím adaptérů. Dále je k dispozici stojan k ředění jednotlivých vzorků. Reagenční disk udržuje činidla při teplotě 8 o C. Každý z jeho 15 segmentů může obsahovat dvě činidla nebo tři kontrolní materiály. Reakční disk obsahuje 10 jednoúčelových segmentů po 9 kyvetách. Analyzátor provádí automaticky ředění vzorků, kontrol a standardů. K dispozici je více než 60 metod. Maximální provozní rychlost analyzátoru je 80 analýz za hodinu. Nephelometer II Je to starší, ale rychlejší systém od stejného výrobce. V režimu E.P. nebo dvoubodové kinetiky je naprogramováno více než 60 metod ke stanovení bílkovin, mezi nimž nechybí ani hematologické parametry (antithrombin III, fibrinogen, plasminogen). 40 metod je volně programovatelných. Zdrojem světla je LED 840 nm a detektorem křemíková fotodioda se zesilovačem. Nefelometrická měření jsou pod úhlem stupňů při teplotě 37 o C. Délka inkubace je 6 12 minut. Vzorkovnice i nádoby s činidly lze přidávat za provozu. Přístroj má hladinové senzory pro vzorky i činidla a umožňuje používat primární i sekundární zkumavky nebo kepy. Dávkování vzorků a činidel se provádí separátními pipetory. V analyzátoru lze umístit 100 vzorků, 35 činidel, jakož i stojany pro 8 standardů nebo kontrolní materiály. Reakční disk sestává z 60 polystyrénových kyvet pro opakované použití. Spotřeba antiséra je průměrně 40 µl. Rozsah ředění je od 1 : 1 do 1 : a pro tyto účely je k dispozici 264 kepů. Průměrná rychlost analyzátoru je 180 analýz za hodinu a maximální rychlost až 280 testů za hodinu. Array 360 Nefelometr s klasickým zdrojem světla (halogenová žárovka nm), firmy Beckman-Coulter, provádí měření v kinetickém režimu rychlostí analýz za hodinu a k detekci rozptýleného světla používá křemíkovou fotonku. K dispozici je přibližně 60 firem- Klinick biochemie a metabolismus 3/
5 ních programů pro specifické proteiny a léky. V programu jsou některé sérologické testy (ASLO, RF) a také antithrombin III. Pracovní teplota přístroje je pouze 26,7 o C. Analyzátor umožňuje přednostní zpracování statimových vzorků. V jedné sérii lze zpracovat 40 vzorků (aspirační objem µl) pro 20 metod. Analyzátor má poměrně velký mrtvý objem, takže i když je spotřeba séra pouze 7 až na 20 µl, je třeba dodat 325 µl ve zkumavce. Je ovšem možné použití adaptéru s kepem a také lze používat primární zkumavky ihned po centrifugaci. Spotřeba antiséra je 47 µl/1 stanovení. Stabilita kalibrace je 14 dní a firemní programy umožňují jednobodovou rekalibraci pro stanovení bílkovin a dvoubodovou pro analýzy léků. Použitelnost činidel je 18 měsíců. Array Protein System Je varianta předchozího typu, určená pouze k nefelometrickému stanovení bílkovin. Immage Analyzátor pracuje v kinetickém režimu a může využívat buď nefelometrický, nebo turbidimetrický princip. Obrázek 9 ukazuje optické schéma přístroje. Fig. 9. Optics for rate nephelometry and rate NIPIA 1 Light emit diode (NIPIA = near infrared particle immunoassay) 2 Laser light source 3 Focus lens 4 Beam splitter 5 Reaction cuvette 6 Nephelometric detector (90 o incident laser beam) 7 Laser light bounces into light trap 8 NIPIA detector (~0 o angle to the incident LED beam) LED zdroj pro NIPIA (imunoanalýza na částicích v blízké infračervené oblasti) poskytuje paprsek 940 nm a laserový zdroj pro nefelometrii dává monochromatické světlo 670 nm. Kinetická nefelometrie využívá dynamického blanku ke snížení úrovně pozadí. V pravidelných časových intervalech se měří rozdíly přírůstku intenzity rozptýleného světla v důsledku tvorby imunokomplexů během reakce Ab-Ag. Maximální přírůstek rozptýleného světla je přímo úměrný koncentraci analytu ve vzorku. Analyzátor používá kapalné reagencie a některé kalibrátory slouží pro více metod. Kinetická inhibice nefelometrie se využívá ke stanovení léků, přičemž množství léku ve vzorku je nepřímo úměrné maximálnímu přírůstku rozptýleného světla. Ag na částicích se váže specifickou Ab za vzniku nerozpustných agregátů. Ag ve vzorku, který není navázán na částicích, soutěží o vazebná místa Ab a tak inhibuje vznik nerozpustných agregátů. Kinetická NIPIA je citlivá imunoanalytická metoda, využívající částice jako indikátoru, s detekcí prováděnou v blízké IR oblasti (940 nm) se zvýšenou citlivostí (až 1000krát pro digoxin nebo feritin). Na částici potaženou Ab se váže Ag ze vzorku za vzniku nerozpustných agregátů vyvolávajících zákal. Rychlost tvorby agregátů je přímo úměrná koncentraci Ag ve vzorku. Při kinetické inhibici NIPIA je rychlost shlukování částic nepřímo úměrná koncentraci Ag ve vzorku. Částice potažená Ag váže specifickou Ab za vzniku nerozpustných agregátů, které způsobí zákal. Ag ve vzorku soutěží s Ag na částici o vazebná místa Ab a tím inhibuje tvorbu nerozpustných agregátů. Turbidimetrie při 940 nm se používá např. ke stanovení digoxinu, feritinu, atd. Analyzátor Immage má karusel pro 24 reagencií (chlazení na 15 o C) a 4 pufry (bez chlazení). Vzorky jsou umístěny v plastových kyvetách (8 stojánků po 9 vzorcích). Ředění vzorků probíhá v dilučních jamkách a po ředění jsou vzorky dávkovány na reakční talíř, který obsahuje 39 reakčních a jednu referenční kyvetu (pro definici rozptylu) a je temperován na 37 o C. Vzorky a činidla jsou identifikovány čárovým kódem. Kalibrační křivka výrobce má 8 12 bodů. Data firemních metod jsou uložena na kartě s čárovým kódem, zákazník provádí pouze jednobodové ověření kalibrace. V sérii lze provést 12 metod, ale softwarová kapacita je 50 metod. Úplná softwarová kapacita je také volně programovatelná zákazníkem. Při pracovním kroku 5 s umožňují dávkovače vzorků a činidel provést až 180 testů za hodinu. Analyzátor je vybaven mycí stanicí. Immage 800 Rozšíření softwaru proti předchozímu modelu umožňuje přidat nebo odebrat vzorek za chodu, udržovat v paměti poslední čtyři kalibrace pro každou metodu a provádět jednobodové rekalibrace i u zákaznických metod. Delta Nefelometr firmy Radim pro stanovení bílkovin v séru, likvoru a moči má provozní režimy umožňující organizovat analýzy jak po vzorcích, tak po metodách v E.P. režimu nebo kineticky ve fixním čase. Kontinuální vstup vzorků je užitečný zejména pro statimová vyšetření. K dispozici jsou technologie imunoprecipitace, imunoaglutinace a zesílení signálu latexovými částicemi. Zdrojem světla je laser 670 nm. Talíř pro vzorky (identifikované pomocí čárového kódu) má čtyři sektory po 20 zkumavkách (minimální objem vzorku 50 µl) a ve středu 240 zkumavek pro ředění. Statimová sekce je samostatná. Chlazený talíř je pro 54 reagencií (35 metod) se stabilitou 6 18 měsíců. Průměrná spotřeba reagencií pro jednu analýzu je 40 µl. Reakční disk má 120 omyvatelných kyvet v šesti sektorech vyhřívaných na 37 o C. Nefelometr má software pro 100 metod a dosahuje CV < 3 %. Letmá rychlost je 150 analýz za hodinu (startovací čas 30 minut, ukončovací čas 15 minut). 150 Klinick biochemie a metabolismus 3/2006
6 Nepheloskan Ascent Jde o vertikální nefelometr firmy LabSystems ke stanovení bílkovin, bakterií a léků. Vyhodnocují se standardní mikrotitrační destičky (96 jamek). Zdrojem světla nm je křemenná halogenová lampa. Měří se rozptýlené světlo pod úhlem > 30 stupňů (obr. 10) rychlostí jedna destička za 25 s. Součástí zařízení je mixér a inkubátor (5 40 o C). NEPHELOstar Vertikální fotometr firmy BMG Labtech měří mikrotitrační destičku v základním nastavení stejně jako předchozí model. Má možnost integrace signálu z jednotlivých jamek v intervalu 20 ms až 1 s. Rovněž má integrovaný mixér. Sofistikovaný trojdimenzionální dávkovač Microlab S Workstation od firmy Hamilton nebo robot RV-2AJ od firmy Mitsubishi mají univerzální použití pro všechny nefelometry měřící mikrotitrační destičky. Literatura Fig. 10. Nepheloskan Ascent 1 Light source 2 Filter 3 Sample 4 Shade 5 Photomultiplier tube 1. SEKK a Katedra klinické biochemie IPVZ Praha Encyklopedie 5 laboratorní medicíny pro klinickou praxi. CD ROM SEKK : Pardubice 2005, ISBN Schneiderka, P. et al. Kapitoly z klinické biochemie. Praha : Karolinum 2004, ISBN X. 3. Štern, P. et al. Obecná a klinická biochemie. Praha : Karolinum 2005, ISBN Burtis, C. A., Ashwood, E. R., Bruns, D. E. Tietz Textbook of Clinical Chemistry and Molecular Diagnostics. 4 rd Edition, St. Louis : Elsevier Saunders 2006, ISBN Do redakce došlo Adresa pro korespondenci: Doc. RNDr. Petr Štern, CSc. ÚKBLD VFN a 1. LF UK Karlovo nám Praha petr.stern@vfn.cz Tematický plán kurzů Katedry klinické biochemie IPVZ pro období leden červen 2007 (část 2) Specializační kurz v klinické biochemii 7. analytická část: Statistika Určeno pro biochemiky analytiky ve specializační průpravě, případně lékaře v přípravě k evropské atestaci z klinické biochemie a analytiky jiných laboratorních oborů. Program: Základní statistické pojmy, statistika při validaci a kontrole metod. Hodnocení laboratorních zkoušek. Kvalitativní a kvantitativní proměnné, korelace a regrese. Referenční testy, biologická variabilita. Práce se statistickými programy, základy pravděpodobnosti. Vedoucí: ing. L. Šprongl Místo konání: Praha 4, Budějovická 15 Kurzovné: 1250, Kč Termín konání: Specializační kurz v klinické biochemii 4. analytická část: Instrumentální analýza Určeno pro biochemiky-analytiky ve specializační průpravě, případně lékaře v přípravě k evropské atestaci z klinické biochemie a analytiky jiných laboratorních oborů. Program: Analytické přístrojové techniky v klinické laboratoři. Současný stav instrumentace s důrazem na automatizaci, miniaturizaci a využití výpočetní techniky. Trendy budoucnosti ve vztahu k předpokládanému vývoji organizace řízení klinických laboratoří. Vedoucí: doc. RNDr. P. Štern, CSc. Místo konání: Praha 4, Budějovická 15 Kurzovné: 1250, Kč Termín konání: (pokračování na s. 167) Klinick biochemie a metabolismus 3/
Příklady biochemických metod turbidimetrie, nefelometrie. Miroslav Průcha
Příklady biochemických metod turbidimetrie, nefelometrie Miroslav Průcha Příklady optických technik Atomová absorpční spektrofotometrie Absorpční spektrofotometrie Absorpční spektrofotometrie kinetická
Katedra laboratorních metod LF MU Mgr. Jana Gottwaldová
Optické metodyturbidimetrie, nefelometrie Katedra laboratorních metod LF MU Mgr. Jana Gottwaldová Turbidimetrie a nefelometrie Patří mezi běžné analytické optické metody v klinické biochemii se používají
Parametry metod automatické fotometrické analýzy
Parametry metod automatické fotometrické analýzy Každá metoda prováděná automatickým biochemickým analyzátorem má v softwaru řídícího počítače nadefinované parametry: číslo (aplikační kód) metody název
Refraktometrie, interferometrie, polarimetrie, nefelometrie, turbidimetrie
Refraktometrie, interferometrie, polarimetrie, nefelometrie, turbidimetrie Refraktometrie Metoda založená na měření indexu lomu Při dopadu paprsku světla na fázové rozhraní mohou nastat dva jevy: Reflexe
Fluorescence (luminiscence)
Fluorescence (luminiscence) Patří mezi luminiscenční metody fotoluminiscence. Luminiscence efekt, kdy excitované molekuly či atomy vyzařují světlo při přechodu z excitovaného do základního stavu. Podle
Laboratorní cvičení 9
Laboratorní cvičení 9 TURBIDIMETRIE A NEFELOMETRIE Soustava, která obsahuje alespoň dva druhy hmoty, přičemž jeden druh je rozptýlen ve druhém ve formě více nebo méně jemných částic. Rozptýlený druh se
Optické metody. Mgr. Jana Gottwaldová
Optické metody Mgr. Jana Gottwaldová Optické analytické metody Fyzikální metody, které získávají potřebné informace z měření optických vlastností a spekter zkoumaných látek. využívá interakce analytu se
HPLC - Detektory A.Braithwaite and F.J.Smith; Chromatographic Methods, Fifth edition, Blackie Academic & Professional 1996 Colin F. Poole and Salwa K.
Vysokoúčinná kapalinová chromatografie - Detektory - I Příprava předmětu byla podpořena projektem OPPA č. CZ.2.17/3.1.00/33253 HPLC - Detektory A.Braithwaite and F.J.Smith; Chromatographic Methods, Fifth
Precipitační a aglutinační reakce
Základy imunologických metod: Precipitační a aglutinační reakce Ústav imunologie 2.LF UK a FN Motol Metody, ve kterých se používají protilátky Neznačený antigen/protilátka Precipitace Aglutinace Značený
VYUŽITÍ A VALIDACE AUTOMATICKÉHO FOTOMETRU V ANALÝZE VOD
Citace Kantorová J., Kohutová J., Chmelová M., Němcová V.: Využití a validace automatického fotometru v analýze vod. Sborník konference Pitná voda 2008, s. 349-352. W&ET Team, Č. Budějovice 2008. ISBN
Precipitace, radioimunodifúze (RID), nefelometrie, turbidimetrie
Precipitace, radioimunodifúze (RID), nefelometrie, turbidimetrie RNDr. Jana Nechvátalová, Ph.D. Ústav klinické imunologie a alergologie FN u sv. Anny v Brně Reakce Ag - Ab primární fáze rychlá; vznik vazby
Kalibrace analytických metod. Miroslava Beňovská s využitím přednášky Dr. Breineka
Kalibrace analytických metod Miroslava Beňovská s využitím přednášky Dr. Breineka Měřící zařízení (zjednodušeně přístroje) pro měření fyzikálních veličin musí být výrobci kalibrovaná Objem: pipety Teplota
Metody testování humorální imunity
Metody testování humorální imunity Co je to humorální imunita? Humorální = látková Buněčné produkty Nespecifická imunita příklady:» Lysozym v slinách, slzách» Sérové proteiny (proteiny akutní fáze)» Komplementový
ZÁKLADY OBECNÉ A KLINICKÉ BIOCHEMIE
ZÁKLADY OBECNÉ A KLINICKÉ BIOCHEMIE 2004 Technologie kvantitativních metod Petr Štern kapitola ve skriptech - 4.2.2 Optické zdroje U V V I S I R Spektrální distribuční křivky W žárovky b.t. W ~ 3600 C
ZÁKLADNÍ ČÁSTI SPEKTRÁLNÍCH PŘÍSTROJŮ
ZÁKLADNÍ ČÁSTI SPEKTRÁLNÍCH PŘÍSTROJŮ (c) -2008, ACH/IM BLOKOVÉ SCHÉMA: (a) emisní metody (b) absorpční metody (c) luminiscenční metody U (b) monochromátor často umístěn před kyvetou se vzorkem. Části
12. seminář. Nefelometrie a turbidimetrie Chiroptická aktivita (Polarimetrie) Interferometrie Fotoluminiscenční spektroskopie
Otázky: 12. seminář Nefelometrie a turbidimetrie Chiroptická aktivita (Polarimetrie) Molární refrakce Interferometrie Fotoluminiscenční spektroskopie Cirkulární dichroismus 1. Princip metody 2. Aplikace
MĚŘENÍ ABSORPCE SVĚTLA SPEKOLEM
MĚŘENÍ ABSORPCE SVĚTLA SPEKOLEM Průchodem světla homogenním prostředím se jeho intenzita zmenšuje podle Lambertova zákona. Klesne-li intenzita monochromatického světla po projití vrstvou tloušťky l z hodnoty
nano.tul.cz Inovace a rozvoj studia nanomateriálů na TUL
Inovace a rozvoj studia nanomateriálů na TUL nano.tul.cz Tyto materiály byly vytvořeny v rámci projektu ESF OP VK: Inovace a rozvoj studia nanomateriálů na Technické univerzitě v Liberci Experimentální
Přístroje v hematologické laboratoři
Přístroje v hematologické laboratoři 1) Koagulometry Dělení podle automatizace Poloautomatické Automatické Dělení dle typu detekce mechanická optická háček kulička plátek optický paprsek Koagulační metody
Analytické znaky laboratorní metody Interní kontrola kvality Externí kontrola kvality
Analytické znaky laboratorní metody Interní kontrola kvality Externí kontrola kvality RNDr. Alena Mikušková FN Brno Pracoviště dětské medicíny, OKB amikuskova@fnbrno.cz Analytické znaky laboratorní metody
DELFIA Dissociation-Enhanced Lanthanide Fluorescent ImmunoAssay
DELFIA Dissociation-Enhanced Lanthanide Fluorescent ImmunoAssay Fluoroimunoanalytická metoda vyvinutá finskou firmou Wallac Oy (LKB Pharmacia), velmi citlivá a specifická metoda pro stanovení nízko- i
Určení koncentrace proteinu fluorescenční metodou v mikrotitračních destičkách
Určení koncentrace proteinu fluorescenční metodou v mikrotitračních destičkách Teorie Stanovení celkových proteinů Celkové množství proteinů lze stanovit pomocí několika metod; například: Hartree-Lowryho
Metody testování humorální imunity
Metody testování humorální imunity Co je to humorální imunita? Humorální = látková Buněčné produkty Nespecifická imunita příklady:» Lysozym v slinách, slzách» Sérové proteiny (proteiny akutní fáze)» Komplementový
Precipitace, radioimunodifúze (RID), nefelometrie, turbidimetrie
Precipitace, radioimunodifúze (RID), nefelometrie, turbidimetrie Mgr. Jana Nechvátalová Ústav klinické imunologie a alergologie FN u sv. Anny Ag - Ab hypervariabilní oblasti - antigen vazebná aktivita
2) Připravte si 3 sady po šesti zkumavkách. Do všech zkumavek pipetujte 0.2 ml roztoku BAPNA o různé koncentraci podle tabulky.
CVIČENÍ Z ENZYMOLOGIE 1) Stanovení Michaelisovy konstanty trypsinu pomocí chromogenního substrátu. Aktivita trypsinu se určí změřením rychlosti hydrolýzy chromogenního substrátu BAPNA (Nα-benzoyl-L-arginin-p-nitroanilid)
Spektroskopické metody. převážně ve viditelné, ultrafialové a blízké infračervené oblasti
Spektroskopické metody převážně ve viditelné, ultrafialové a blízké infračervené oblasti Elektromagnetické záření Elektromagnetické záření je postupné vlnění elektromagnetického pole složeného z kombinace
Instructions for use. PeliClass human IgG subclass Plus kit PeliClass sheep anti human IgG2 Plus. PeliClass latex sheep anti human IgG4 Plus
Instructions for use Sanquin Reagents B.V. Plesmanlaan 125 1066 CX Amsterdam The Netherlands PeliClass human IgG subclass Plus kit PeliClass sheep anti human IgG1 Plus PeliClass sheep anti human IgG2 Plus
Základy fotometrie, využití v klinické biochemii
Základy fotometrie, využití v klinické biochemii Základní vztahy ve fotometrii transmitance (propustnost): T = I / I 0 absorbance: A = log (I 0 / I) = log (1 / T) = log T Lambertův-Beerův zákon A l = e
Validace sérologických testů výrobcem. Vidia spol. s r.o. Ing. František Konečný IV/2012
Validace sérologických testů výrobcem Vidia spol. s r.o. Ing. František Konečný IV/2012 Legislativa Zákon č. 123/2000 Sb. o zdravotnických prostředcích ve znění pozdějších předpisů Nařízení vlády č. 453/2004
SPEKTROSKOPICKÉ VLASTNOSTI LÁTEK (ZÁKLADY SPEKTROSKOPIE)
SPEKTROSKOPICKÉ VLASTNOSTI LÁTEK (ZÁKLADY SPEKTROSKOPIE) Elektromagnetické vlnění SVĚTLO Charakterizace záření Vlnová délka - (λ) : jednotky: m (obvykle nm) λ Souvisí s povahou fotonu Charakterizace záření
laboratorní technologie
Evaluace imunoanalytického systému Olympus AU3000i Firma OLYMPUS uvedla na trh imunoanalytický systém AU3000i. Přístroj pracuje na principu heterogenní imunoanalýzy s technologií paramagnetických mikročástic
METODY BEZ VÝMĚNY ENERGIE MEZI ZÁŘENÍM A VZORKEM
METODY BEZ VÝMĚNY ENERGIE MEZI ZÁŘENÍM A VZORKEM REFRAKTOMETRIE POLARIMETRIE SPEKTROMETRIE VYUŽÍVAJÍCÍ ROZPTYL MĚŘENÍ VELIKOSTI ČÁSTIC (c) -2012 REFRAKTOMETRIE Metoda založená na měření indexu lomu látek
ABSORPČNÍ A EMISNÍ SPEKTRÁLNÍ METODY
ABSORPČNÍ A EMISNÍ SPEKTRÁLNÍ METODY 1 Fyzikální základy spektrálních metod Monochromatický zářivý tok 0 (W, rozměr m 2.kg.s -3 ): Absorbován ABS Propuštěn Odražen zpět r Rozptýlen s Bilance toků 0 = +
Fyzikální metody, které získávají potřebné. vlastností molekul a atomů měřené soustavy může jít o změnu barvy či její intenzity, luminiscenci,
Optické metody Mgr. Jana Gottwaldová Optické analytické metody Fyzikální metody, které získávají potřebné informace z měření optických vlastností a spekter zkoumaných látek. využívá interakce analytu se
ÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE
LABORATOŘ OBORU I ÚSTAV ORGANICKÉ TECHNOLOGIE (111) F Imobilizace na alumosilikátové materiály Vedoucí práce: Ing. Eliška Leitmannová, Ph.D. Umístění práce: laboratoř F07, F08 1 Úvod Imobilizace aktivních
přesnost (reprodukovatelnost) správnost (skutečná hodnota)? Skutečná hodnota použití různých metod
přesnost (reprodukovatelnost) správnost (skutečná hodnota)? Skutečná hodnota použití různých metod Měření Pb v polyethylenu 36 různými laboratořemi 0,47 0 ± 0,02 1 µmol.g -1 tj. 97,4 ± 4,3 µg.g -1 Měření
Vstup do nové dimenze: kvalita se snoubí s efektivitou
Vstup do nové dimenze: kvalita se snoubí s efektivitou Spektrofotometr DR 6000 UV-VIS Kvalita spojená s úsporou nákladů Nový spektrofotometr DR 6000 UV-VIS nabízí špičkový výkon pro rutinní analýzy i pro
- Rayleighův rozptyl turbidimetrie, nefelometrie - Ramanův rozptyl. - fluorescence - fosforescence
ROZPTYLOVÉ a EMISNÍ metody - Rayleighův rozptyl turbidimetrie, nefelometrie - Ramanův rozptyl - fluorescence - fosforescence Ramanova spektroskopie Každá čára Ramanova spektra je svými vlastnostmi závislá
Spektroskopie v UV-VIS oblasti. UV-VIS spektroskopie. Roztok KMnO 4. pracuje nejčastěji v oblasti 200-800 nm
Spektroskopie v UV-VIS oblasti UV-VIS spektroskopie pracuje nejčastěji v oblasti 2-8 nm lze měřit i < 2 nm či > 8 nm UV VIS IR Ultra Violet VISible Infra Red Roztok KMnO 4 roztok KMnO 4 je červenofialový
Validace stanovení volných monoklonálních lehkých řetězců v České republice
Validace stanovení volných monoklonálních lehkých řetězců v České republice Vávrová, J., Tichý, M., Friedecký, B., Maisnar, V., Hájek, R., Čermáková, Z., Dastych, M., Gottwaldová, J., Kučera, P., Krotká,
Kalibrace analytických metod
Kalibrace analytických metod Petr Breinek BC_Kalibrace_2010 Měřící zařízení (zjednodušeně přístroje) pro měření fyzikálních veličin musí být výrobci kalibrovaná Objem: pipety Teplota (+37 C definovaná
DETEKTORY pro kapalinovou chromatografii. Izolační a separační metody, 2018
DETEKTORY pro kapalinovou chromatografii Izolační a separační metody, 2018 Detektory v kapalinové chromatografii Typ detektoru Zkratka Měřená veličina Refraktometrický detektor RID index lomu Spektrofotometrický
Plamenová fotometrie, AAS, elektrochemické metody
4. Instrumentální analýza Suchá chemie Průběh reakce, technologie, celulózová impregnovaná vlákna, reflexní fotometrie, Ulbrichtova koule, stanovení glykémie, atypické technologie, hysteresní křivka, skleněná
NÁVOD K POUŽITÍ VÁPNÍK 600 KATALOGOVÉ ČÍSLO 207
NÁVOD K POUŽITÍ VÁPNÍK 600 KATALOGOVÉ ČÍSLO 207 POUŽITÍ Souprava Vápník 600 se používá ke kvantitativnímu stanovení koncentrace vápenatých iontů v séru a moči. SOUHRN V lidském organismu je vázána převážná
Molekulová spektroskopie 1. Chemická vazba, UV/VIS
Molekulová spektroskopie 1 Chemická vazba, UV/VIS 1 Chemická vazba Silová interakce mezi dvěma atomy. Chemické vazby jsou soudržné síly působící mezi jednotlivými atomy nebo ionty v molekulách. Chemická
Validační protokol LT CRP HS II (ADVIA 1800)
Validační protokol LT CRP HS II (ADVIA 1800) Datum vydání: 9.5.2011 Zpracoval: Ing. Luděk Šprongl Pracoviště: Centrální laboratoř, Šumperská nemocnice a.s. Validační protokol LT CRP HS II 1. CÍL, PŘEDMĚT
Sbohem, paní Bradfordová
Sbohem, paní Bradfordová aneb IČ spektroskopie ve službách kvantifikace proteinů Mgr. Stanislav Kukla Merck spol. s r. o. Agenda 1 Zhodnocení současných možností kvantifikace proteinů Bradfordové metoda
Stanovení koncentrace (kvantifikace) proteinů
Stanovení koncentrace (kvantifikace) proteinů Bioanalytické metody Prof. RNDr. Pavel Peč, CSc. Úvod Kritéria výběru metod stanovení koncentrace proteinů jsou založena na možnostech pro vlastní analýzu,
2) Připravte si 7 sad po pěti zkumavkách. Do všech zkumavek pipetujte 0.2 ml roztoku BAPNA o různé koncentraci podle tabulky.
CVIČENÍ Z ENZYMOLOGIE 1) Stanovení Michaelisovy konstanty trypsinu pomocí chromogenního substrátu. Aktivita trypsinu se určí změřením rychlosti hydrolýzy chromogenního substrátu BAPNA (Nα-benzoyl-L-arginin-p-nitroanilid)
Principy a instrumentace
Průtoková cytometrie Principy a instrumentace Ing. Antonín Hlaváček Úvod Průtoková cytometrie je moderní laboratorní metoda měření a analýza fyzikálních -chemických vlastností buňky během průchodu laserovým
Protokol o srovnání POCT EUROLyser CRP s akreditovanou metodou stanovení CRP imunoturbidimetricky na analyzátoru Unicel DxC 800
Protokol o zkoušce č.j. 3/2016, počet stran 8, strana číslo 1 Referenční laboratoř pro klinickou biochemii při Ústavu lékařské biochemie a laboratorní diagnostiky VFN Karlovo nám. 32, 121 11 Praha 2, tel.:
Rozdělení imunologických laboratorních metod
Rozdělení imunologických laboratorních metod Aglutinace Mgr. Petr Bejdák Ústav klinické imunologie a alergologie Fakultní nemocnice u sv. Anny a Lékařská fakulta MU Rozdělení imunologických laboratorních
Aplikace AAS ACH/APAS. David MILDE, Úvod
Aplikace AAS ACH/APAS David MILDE, 2017 Úvod AAS: v podstatě 4atomizační techniky: plamenová atomizace (FA), elektrotermická atomizace (ETA), generování těkavých hydridů (HG), určené pro stanovení As,
Biochemická laboratoř
Biochemická laboratoř školní rok 2013/14 Ing. Jarmila Krotká 3. LF UK, Klinická biochemie, bakalářské studium Hlavní úkol biochemické laboratoře Na základě požadavku lékaře vydat co nejdříve správný výsledek
Plamenová fotometrie
Plamenová fotometrie Doc. MUDr. Petr Schneiderka CSc. Tvorba a ověření e-learningového prostředí pro integraci výuky preklinických a klinických předmětů na LF UP a FZV UP Reg. č.: CZ.1.07/2.2.00/15.0313
Suchá chemie. Miroslava Beňovská (vychází z přednášky doc. Šterna)
Suchá chemie Miroslava Beňovská (vychází z přednášky doc. Šterna) Využití Močová analýza diagnostické proužky POCT imunoanalytické kazety, diagnostické proužky Automatické analyzátory řada analyzátorů
Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU SELENU METODOU ICP-OES
Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU SELENU METODOU ICP-OES 1 Rozsah a účel Postup specifikuje podmínky pro stanovení celkového obsahu selenu v minerálních krmivech a premixech metodou optické emisní spektrometrie
Úvod do spektrálních metod pro analýzu léčiv
Evropský sociální fond Praha & EU: Investujeme do vaší budoucnosti Úvod do spektrálních metod pro analýzu léčiv Pavel Matějka, Vadym Prokopec pavel.matejka@vscht.cz pavel.matejka@gmail.com Vadym.Prokopec@vscht.cz
STŘEDNÍ ODBORNÁ ŠKOLA a STŘEDNÍ ODBORNÉ UČILIŠTĚ, Česká Lípa, 28. října 2707, příspěvková organizace
Název školy: Číslo a název projektu: Číslo a název šablony klíčové aktivity: Označení materiálu: Typ materiálu: STŘEDNÍ ODBORNÁ ŠKOLA a STŘEDNÍ ODBORNÉ UČILIŠTĚ, Česká Lípa, 28. října 2707, příspěvková
Bakteriální bioluminiscenční test. Stanovení účinnosti čištění odpadních vod pomocí bakteriálního bioluminiscenčního testu
Bakteriální bioluminiscenční test Stanovení účinnosti čištění odpadních vod pomocí bakteriálního bioluminiscenčního testu BBTT Cíl: Stanovit účinek odpadních vod na bakterie Vibrio fischeri. Principem
Písemná zpráva zadavatele
Písemná zpráva zadavatele o veřejné zakázce zadávané dle zákona č. 137/2006 Sb., o veřejných zakázkách, ve znění účinném ke dni zahájení zadávacího řízení (dále jen ZVZ ). Veřejná zakázka Název: Spektrofotometry
Radioimunolýza (RIA)
Radioimunolýza (RIA) Doc. MUDr. Petr Schneiderka, CSc. Tvorba a ověření e-learningového prostředí pro integraci výuky preklinických a klinických předmětů na LF UP a FZV UP Reg. č.: CZ.1.07/2.2.00/15.0313
Měření koncentrace roztoku absorpčním spektrofotometrem
Měření koncentrace roztoku absorpčním spektrofotometrem Teoretický úvod Absorpční spektrofotometrie je metoda stanovení koncentrace disperzního podílu analytické disperze, založená na měření absorpce světla.
FOTOAKUSTIKA. Vítězslav Otruba
FOTOAKUSTIKA Vítězslav Otruba 2010 prof. Otruba 2 The spectrophone 1881 A.G. Bell návrh a Spektrofonu (spectrophone) pro účely posouzení absorpčního spektra subjektů v těch částech, které jsou neviditelné.
ROZDĚLENÍ SNÍMAČŮ, POŽADAVKY KLADENÉ NA SNÍMAČE, VLASTNOSTI SNÍMAČŮ
ROZDĚLENÍ SNÍMAČŮ, POŽADAVKY KLADENÉ NA SNÍMAČE, VLASTNOSTI SNÍMAČŮ (1.1, 1.2 a 1.3) Ing. Pavel VYLEGALA 2014 Rozdělení snímačů Snímače se dají rozdělit podle mnoha hledisek. Základním rozdělení: Snímače
Spektroskopické é techniky a mikroskopie. Spektroskopie. Typy spektroskopických metod. Cirkulární dichroismus. Fluorescence UV-VIS
Spektroskopické é techniky a mikroskopie Spektroskopie metody zahrnující interakce mezi světlem (fotony) a hmotou (elektrony a protony v atomech a molekulách Typy spektroskopických metod IR NMR Elektron-spinová
Spektrometrické metody. Reflexní a fotoakustická spektroskopie
Spektrometrické metody Reflexní a fotoakustická spektroskopie odraz elektromagnetického záření - souvislost absorpce a reflexe Kubelka-Munk funkce fotoakustická spektroskopie Měření odrazivosti elmg záření
Imunochemické metody. na principu vazby antigenu a protilátky
Imunochemické metody na principu vazby antigenu a protilátky ANTIGEN (Ag) specifická látka (struktura) vyvolávající imunitní reakci a schopná vazby na protilátku PROTILÁTKA (Ab antibody) molekula bílkoviny
Základy NIR spektrometrie a její praktické využití
Nicolet CZ s.r.o. The world leader in serving science Základy NIR spektrometrie a její praktické využití NIR praktická metoda molekulové spektroskopie, nahrazující pracnější, časově náročnější a dražší
IMUNOENZYMOVÉ METODY EIA
IMUNOENZYMOVÉ METODY EIA RIA zdravotní riziko krátký poločas rozpadů izotopů nákladné zařízení na měření radioaktivity EIA místo radioaktivity se měří enzymová aktivita není zdravotní riziko není nutné
Optické metody Absorpční fotometrie
Optické metody Absorpční fotometrie Kvantitativní hodnocení změny intenzity záření po průchodu analytickým prostředím Zákon Lambert-Beerův: log Φ o = A = a. c. l Φ Φ o = světlo vstupující do měřeného prostředí
Správná laboratorní praxe v chemické laboratoři. 4. Měření. Ing. Branislav Vrana, PhD.
Správná laboratorní praxe v chemické laboratoři 4. Měření Ing. Branislav Vrana, PhD. vrana@recetox.muni.cz VALIDACE ANALYTICKÝCH METOD VALIDACE ANALYTICKÝCH METOD Replikace Testy výtěžnosti Slepý vzorek
INSTRUMENTÁLNÍ METODY
INSTRUMENTÁLNÍ METODY ACH/IM David MILDE, 2014 Dělení instrumentálních metod Spektrální metody (MILDE) Separační metody (JIROVSKÝ) Elektroanalytické metody (JIROVSKÝ) Ostatní: imunochemické, radioanalytické,
Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv STANOVENÍ OBSAHU DEKOCHINÁTU METODOU HPLC
Národní referenční laboratoř Strana 1 STANOVENÍ OBSAHU DEKOCHINÁTU METODOU HPLC 1 Rozsah a účel Tato metoda specifikuje podmínky pro stanovení dekochinátu metodou vysokoúčinné kapalinové chromatografie
Koloidní zlato. Tradiční rekvizita alchymistů v minulosti sofistikovaný (nano)nástroj budoucnosti?
Koloidní zlato Tradiční rekvizita alchymistů v minulosti sofistikovaný (nano)nástroj budoucnosti? Dominika Jurdová Gymnázium Velké Meziříčí, D.Jurdova@seznam.cz Tereza Bautkinová Gymnázium Botičská, tereza.bautkinova@gybot.cz
Chyby spektrometrických metod
Chyby spektrometrických metod Náhodné Soustavné Hrubé Správnost výsledku Přesnost výsledku Reprodukovatelnost Opakovatelnost Charakteristiky stanovení 1. Citlivost metody - směrnice kalibrační křivky 2.
K čemu slouží záznam provedených výkonů logbook?
K čemu slouží záznam provedených výkonů logbook? Předkládaný Záznam provedených výkonů ve specializačním vzdělávání neboli logbook je součástí vzdělávacího programu a slouží k evidenci průběhu odborné
STANOVENÍ ANTIOXIDAČNÍ KAPACITY METODOU FOTOCHEMILUMINISCENCE NA PŘÍSTROJI PHOTOCHEM
STANOVENÍ ANTIOXIDAČNÍ KAPACITY METODOU FOTOCHEMILUMINISCENCE NA PŘÍSTROJI PHOTOCHEM ANTIOXIDAČNÍ KAPACITA ČAJŮ Princip metodiky: Analyzátor Photochem je určen pro stanovení antioxidační kapacity vybraných
Optická spektrometrie
Optická spektrometrie http://www.medgadget.com 2010 Vladan Bernard Biofyzikální ústav, Lékařská fakulta MU http://www.pangolin.com Optické metody Obecně fyzikální laboratorní metody založené na interakci
SPEKTRÁLNÍ METODY. Ing. David MILDE, Ph.D. Katedra analytické chemie Tel.: ; (c) David MILDE,
SEKTRÁLNÍ METODY Ing. David MILDE, h.d. Katedra analytické chemie Tel.: 585634443; E-mail: david.milde@upol.cz (c) -2008 oužitá a doporučená literatura Němcová I., Čermáková L., Rychlovský.: Spektrometrické
Průtokové metody (Kontinuální měření v proudu kapaliny)
Průtokové metody (Kontinuální měření v proudu kapaliny) 1. Přímé měření: analyzovaná kapalina většinou odvětvena + vhodný detektor 2. Kapalinová chromatografie (HPLC) Stanovení po předchozí separaci 3.
IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE CYTOMEGALOVIROVÉ INFEKCE
INFEKČNÍ SÉROLOGIE Virologie IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE CYTOMEGALOVIROVÉ INFEKCE Cytomegalovirus ELISA soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy IgA, IgG a IgM v lidském
MĚŘENÍ ABSOLUTNÍ VLHKOSTI VZDUCHU NA ZÁKLADĚ SPEKTRÁLNÍ ANALÝZY Measurement of Absolute Humidity on the Basis of Spectral Analysis
MĚŘENÍ ABSOLUTNÍ VLHKOSTI VZDUCHU NA ZÁKLADĚ SPEKTRÁLNÍ ANALÝZY Measurement of Absolute Humidity on the Basis of Spectral Analysis Ivana Krestýnová, Josef Zicha Abstrakt: Absolutní vlhkost je hmotnost
Fotoelektronová spektroskopie Instrumentace. Katedra materiálů TU Liberec
Fotoelektronová spektroskopie Instrumentace RNDr. Věra V Vodičkov ková,, PhD. Katedra materiálů TU Liberec Obecné schéma metody Dopad rtg záření emitovaného ze zdroje na vzorek průnik fotonů několik µm
Luminiscence. emise světla látkou, která je způsobená: světlem (fotoluminiscence) fluorescence, fosforescence. chemicky (chemiluminiscence)
Luminiscence Luminiscence emise světla látkou, která je způsobená: světlem (fotoluminiscence) fluorescence, fosforescence chemicky (chemiluminiscence) teplem (termoluminiscence) zvukem (sonoluminiscence)
Chemická analýza moče
Chemická analýza moče automatizace od 80. let minulého století přístroje využívají stanovení parametrů pomocí diagnostických proužků (suchá chemie) semikvantitativní stanovení bilirubinu, urobilinogenu,
Odměrná analýza, volumetrie
Odměrná analýza, volumetrie metoda založená na měření objemu metoda absolutní: stanovení analytu ze změřeného objemu roztoku činidla o přesně známé koncentraci, který je zapotřebí k úplné a stechiometricky
Vybrané spektroskopické metody
Vybrané spektroskopické metody a jejich porovnání s Ramanovou spektroskopií Předmět: Kapitoly o nanostrukturách (2012/2013) Autor: Bc. Michal Martinek Školitel: Ing. Ivan Gregora, CSc. Obsah přednášky
ÚVOD DO IMUNOCHEMICKÝCH METOD
ÚVOD DO IMUNOCHEMICKÝCH METOD Imunochemické metody antigen + protilátka biospecifická haptén vazba komplement protein A + protilátka nespecifická vazba Fc receptory Význam imunochemických metod důkaz přítomnosti
FLUORIMETRICKÉ STANOVENÍ FLUORESCEINU
FLUORIMETRICKÉ STANOVENÍ FLUORESCEINU návod vznikl jako součást bakalářské práce Martiny Vidrmanové Fluorimetrie s využitím spektrofotometru SpectroVis Plus firmy Vernier (http://is.muni.cz/th/268973/prif_b/bakalarska_prace.pdf)
METROLOGIE V CHEMII DAVID MILDE, 2013. Metrologie = věda o měření a jeho aplikaci
METROLOGIE V CHEMII DAVID MILDE, 2013 Metrologie = věda o měření a jeho aplikaci Měření - proces experimentálního získávání jedné nebo více hodnot veličiny (měření = porovnávání, zjišťování počtu entit).
Zdroje optického záření
Metody optické spektroskopie v biofyzice Zdroje optického záření / 1 Zdroje optického záření tepelné výbojky polovodičové lasery synchrotronové záření Obvykle se charakterizují zářivostí (zářivý výkon
vzorek1 0.0033390 0.0047277 0.0062653 0.0077811 0.0090141... vzorek 30 0.0056775 0.0058778 0.0066916 0.0076192 0.0087291
Vzorová úloha 4.16 Postup vícerozměrné kalibrace Postup vícerozměrné kalibrace ukážeme na úloze C4.10 Vícerozměrný kalibrační model kvality bezolovnatého benzinu. Dle následujících kroků na základě naměřených
INFRAČERVENÁ SPEKTROMETRIE A BIOSLOŽKY PALIV
VYSOKÁ ŠKOLA CHEMICKO-TECHNOLOGICKÁ V PRAZE Fakulta technologie ochrany prostředí Ústav technologie ropy a alternativních paliv INFRAČERVENÁ SPEKTROMETRIE A BIOSLOŽKY PALIV Laboratorní cvičení ÚVOD V několika
EXPERIMENTÁLNÍ METODY I 11. Měření světelných veličin
FSI UT v Brně, Energetický ústav Odbor termomechaniky a techniky prostředí prof. Ing. Milan Pavelek, CSc. EXPERIMENTÁLNÍ METODY I 11. Měření světelných veličin OSNOA 11. KAPITOLY Úvod do měření světelných
STANOVENÍ ETHANOLU V ALKOHOLICKÉM NÁPOJI POMOCÍ NIR SPEKTROMETRIE
STANOVENÍ ETHANOLU V ALKOHOLICKÉM NÁPOJI POMOCÍ NIR SPEKTROMETRIE Úvod Infračervená spektrometrie v blízké oblasti (Near-Infrared Spectrometry NIR spectrometry) je metoda molekulové spektrometrie, která
Analýza potravin a krmiv
Analýza potravin a krmiv Moderní společnost vyžaduje bezpečné potraviny, které jsou snadno vysledovatelné a správně označené. Současné předpisy a normy (ISO, BRC, IFS) se používají k zajištění bezpečnosti
Optické a elektroforetické metody v biochemii 1
Optické a elektroforetické metody v biochemii 1 Spektrofotometrie absorbance, transmitance, Lambertův-Beerův zákon. Zákalové metody nefelometrie, turbidimetrie. Elektroforéza princip, elektroforetická
METODIKA MĚŘENÍ. návody a měřící plán
METODIKA MĚŘENÍ návody a měřící plán Ochrana ovzduší - Zvyšování kvalifikace absolventů v oblasti enviromentu Ochrona powietrza - Podnoszenie kwalifikacji absolwentów w dziedzinie edukacji ekologicznej
ZJIŠŤOVÁNÍ CUKERNATOSTI VODNÝCH ROZTOKŮ OPTICKÝMI METODAMI
ZJIŠŤOVÁNÍ CUKERNATOSTI VODNÝCH ROZTOKŮ OPTICKÝMI METODAMI FILÍPEK Josef, ČR DETERMINATION OF SUGAR CONTENT IN WATER SOLUTIONS BY OPTICAL METHODS Abstract The content of saccharose in water solution influences