METODA RLB (REVERSE LINE BLOT) V DETEKCI ARBOVIRŮ
|
|
- Šimon Šimek
- před 7 lety
- Počet zobrazení:
Transkript
1 METODA RLB (REVERSE LINE BLOT) V DETEKCI ARBOVIRŮ MVDr. Petra Drzewnioková; MVDr. Tomáš Csank, PhD.; prof. MVDr. Juraj Pistl, PhD. Katedra mikrobiológie a imunológie Univerzita veterinárskeho lekárstva a farmácie v Košiciach Komenského 73, Košice, Slovensko
2 Úvod Název arbovirus je akronymem anglického ARthropod BOrne VIRus členovci přenášený virus. Po celém světě je známo více než 500 arbovirů, které většinou způsobují zoonózy. Některé infikují člověka pouze příležitostně, nebo způsobují mírné onemocnění, zatímco jiné mají velký medicínský význam a způsobují rozsáhlé epidemie se závažnou mortalitou. Mezi nejvýznamnější zástupce arbovirů ve střední Evropě patří viry z čeledě Flaviviridae, avšak v Evropě se zaznamenal výskyt i dalších, mnohdy opomíjených arbovirů. V naši práci jsme se zaměřili na flaviviry vyskytující se ve střední Evropě, a to na virus klíšťové encefalitidy (Tick-borne encephalitis virus; TBEV), virus západonilské horečky (West Nile virus; WNV) a Usutu virus (USUV). Reverse Line Blot (RLB) neboli reverzní hybridizace je hybridizační metoda, která umožňuje detekovat v relativně krátkém časovém úseku poměrně velké množství vzorků najednou na přítomnost hned několika virů, respektive jejich genů.
3 Materiál a metody V metodě reverzní hybridizace (RLB) jsou nezbytné tyto kroky: IZOLACE RNA Reverzní transkripce PCR. RLB
4 Vzorky Při standardizaci metody RLB nám posloužili tyto 3 referenční kmeny: kmen WNV 578/10 (Dr. Bakonyi Tamás; Oddělení mikrobiologie a infekčních onemocnění, Univerzita Szent István, Maďarsko) kmen TBEV Hypr (RNDr. Boris Klempa, DrSc., Virologický ústav BMC SAV, Slovensko) kmen USUV 939/01 (Prof. Nowotny Norbert, Dr.phil. Virologický ústav, UVM, Vídeň)
5 Izolace RNA Izolace RNA byla provedena za pomocí komerčně vyráběné soupravy QIAamp cador Pathogen Mini Kit (QIAGEN) dle manuálu výrobce. Koncentrace RNA byla změřena na Nanodropu ND Celý NS5 gen referenčních kmenů WNV, USUV a TBEV byl amplifikovaný, vyřezaný z gelu, izolovaný a naředěný na koncentrace kopií/µl.
6 Reverzní transkripce a PCR Maximálně 5µg extrahované RNA bylo použito na reverzní transkripci, která proběhla dle podmínek udaných výrobcem. Z výsledné cdna jsme použili 1 µl, který nám sloužil jako templát do PCR reakce. Biotinylované primery označují úsek 599 bp, který je konzervativní pro rod Flavivirus a nachází se v rámci jeho genu NS5.
7 Výsledek jsme si ověřili na 1,5% agarozovém gelu La W5 W0 U5 U0 T5 T0 100 bp lader WNV kopií/µl USUV kopií/µl TBEV kopií/µl Vyhodnocení: Senzitivita PCR reakce je 10 3 kopií/µl pro USUV a WNV a 10 4 kopií/µl pro TBEV.
8 Reverzní hybridizace (RLB) 1. Aktivace membrány a navazování sond Nylonovou membránu Biodyne C jsme aktivovali 16% roztokem EDAC a následně ji opláchli v deionizované vodě. Námi navrhnuté sondy WNVinNS5-Probe4, USUVinNS5-Probe1 a TBEVinNS5-Probe1 byly navrhnuté jako specifické sondy pro detekci jednotlivých flavivirů v rámci vymezeného úseku genu NS5. Sondy, které jsou 5 konci modifikované s C6 aminolinkerem, jsme naředili v 0,5 M NaHCO 3 na koncentraci 5, 2.5 a 1.25 µm a následně jsme je navázali na aktivovanou membránu duplicitně v klesajících koncentracích. Do první a poslední jamky jsme napipetovali čistý roztok 0,5 M NaHCO 3. Membránu s napipetovanými sondami jsme nechali inkubovat. Následovali promývací kroky pomocí roztoků v následujícím pořadí: 0,1 M NaOH, 2x SSPE a na závěr 2x SSPE/0,1% SDS.
9 Reverzní hybridizace (RLB) 2. Hybridizace K 20µl z každého PCR produktu značeného biotinem jsme přidali 150µl 2x SSPE/0,1% SDS a následně jsme je dali denaturovat. Takto denaturované PCR produkty jsme navázali na membránu, kolmo na navázané sondy. Do první jamky a posledních jamek jsme navázali čisté 2x SSPE/0,1% SDS, do ostatních vzorky a kontroly. Následně jsme nechali inkubovat. Po hybridizaci následovalo dvojí promývání s 2x SSPE/0,5% SDS. Po promývání se membrána inkubovala se streptavidínem značeným peroxidázou, který má silnou afinitu k biotinu navázanému na PCR produktech. Následovalo promývání s 2x SSPE/0,5% SDS a s 2x SSPE.
10 Reverzní hybridizace (RLB) 2. Vizualizace Reakce se vizualizovala pomocí chemiluminiscenčního roztoku Amersham ECL Western Blotting Detection Reagent (GE Healthcare Life Sciences), který byl přidaný k membráně. Vizualizačný roztok se vylil, membránu jsme vložili do plastikového sáčku a přenesli do tmavé komory, kde jsme jiumístili do kazety s fotocitlivým RTG filmem. Po expozici se film v tmavé komoře vybral a vyvolal za pomocí vývojky (Fomadon P, FOMA) a ustalovače (Fomafix P, FOMA).
11 Reverzní hybridizace (RLB) 3. Výsledek Název sondy Konc. Sond (µm) A-G: WNV kopií/µl; H-N: USUV kopií/µl; O-U: TBEV kopií/µl; V: Negativní kontrola 1,2 5 7,8 5 13,14 5 3,4 WNVinNS5- Probe4 2,5 5,6 1 9,10 USUVinNS5- Probe1 2,5 11, ,16 TBEVinNS5- Probe1 2,5 17,18 1
12 Reverzní hybridizace (RLB) 3. Závěr Slabší signál v případě WNV kopií/µl byl pravděpodobně způsobený zlým navázáním vizualizačního roztoku nebo přesycením vazebných míst vysokým množstvím PCR produktu. Citlivost PCR reakce a metody reverzní hybridizace na základě NS5 genu je pro WNV a USUV kopií/µl a pro TBEV kopií/µl. Nespecifické skvrny (malé tečky mimo místa navázaných sond) vznikly pravděpodobně nevhodným vymýváním. Jako vhodná koncentrace sondy byla vybraná koncentrace 2.5 µm. Sonda WNVinNS5-Probe4 zachytí jak WNV tak i USUV, ale na základě sondy USUVinNS5-Probe1 jsme schopni tyto dva viry odlišit.
13 Vyšetření klinických vzorek metodou reverzní hybridizace Stejný postup byl zopakovaný na klinických vzorcích použitých bylo 16 klinických vzorek (ptačí výtěry), kontrola izolace (WNV) a kontrola PCR (USUV). Pro kontrolu správně provedené reverzní hybridizace a snadnější orientaci na membráně byly použité všechny 3 referenční kmeny v koncentraci 10 6 kopií/µl (WNV, USUV a TBEV). 2.5 µm sondy byly na membránu navázané duplicitně, do prvních linií a mezi sondy bylo pipetované NaHCO 3. Abychom se zbavili nespecifických skvrn byly přidané promývací kroky a prodloužený čas v případě některých promývání.
14 Výsledek Vzorky vyšli negativně. Sonda WNVinNS5-Probe4 zachytila kontroly WNV 10 6 kopií/µl, USUV 10 6 kopií/µl, WNV (kontrola izolace) a USUV (kontrola PCR). Pomocí sondy USUVinNS5-Probe1 jsme zachytili USUV 10 6 kopií/µl a USUV (kontrola PCR). Sondou TBEVinNS5-Probe1 jsme detekovali pouze kontrolu TBEV 10 6 kopií/µl. Negativní kontroly vyšli negativně. 1 2xSSPE/ 2 2xSSPE/ 3 WNV xSSPE/ 5 USUV xSSPE/ 7 TBEV xSSPE/ 9 Vzorka 1 10 Vzorka 2 11 Vzorka 3 12 Vzorka 4 13 Vzorka 5 14 Vzorka 6 15 Vzorka 7 16 Vzorka 8 17 Vzorka 9 18 Vzorka Vzorka Vzorka Vzorka Vzorka Vzorka xSSPE/ 26 PK izol. - WNV 27 2xSSPE/ 28 PK PCR - USUV 29 2xSSPE/ 30 NK (izol) 31 2xSSPE/ 32 NTC (RT) 33 2xSSPE/ 34 NK PCR xSSPE/
15 Závěr Metoda RLB je vhodnou metodou k vyšetření většího množství patogenů najednou na přítomnost nukleové sekvence několika vybraných virů. My jsme se zaměřili na detekci flavivirů vyskytujících se ve střední Evropě a podařilo se nám navrhnout specifické sondy pro WNV, USUV a TBEV. Citlivost PCR reakce a metody reverzní hybridizace na základě NS5 genu je pro WNV a USUV kopií/µl a pro TBEV kopií/µl. Zvýšení citlivosti máme v plánu pomocí nested PCR.
16 Závěr Na počátku standardizace metody RLB jsme měli problém s nečistotami na membráně, avšak přidáním promývacích kroků a prodloužením některých promývacích časů jsme dosáhli lepší čistoty membrány. Vyšetřené vzorky vyšli negativně, avšak k definitivnímu vyhodnocení (ne)přítomnosti virů ve vzorkách nebylo doposud vyšetřené dostatečné množství vzorek.
17 Následující kroky 1. Stanovení senzitivity metody vyjádřené v TCID 50, anebo PFU počínající od izolace RNA. 2. Druhově specifické sondy nacházející se v jiném genu jsou již navrženy a budou otestovány. 3. Navrhnout sondy, za pomocí kterých bychom byli schopni odlišit jednotlivé podtypy, resp. linie. 4. Navrhnout sondy vhodné na detekci ostatních arbovirů vyskytující se ve střední Evropě.
18 Děkuji za pozornost! Studie byla podpořena grantem VEGA 1/0729/16 a ITMS (INFEKTZOON).
Konečná zpráva hodnocení různých způsobů přípravy vzorků pro AMPLICOR HPV test firmy Roche
Konečná zpráva hodnocení různých způsobů přípravy vzorků pro AMPLICOR HPV test firmy Roche Charakteristika testu: Set AMPLICOR HPV vyráběný firmou Roche je určený pro detekci vysoko-rizikových typů lidských
MagPurix Blood DNA Extraction Kit 200
MagPurix Blood DNA Extraction Kit 200 Kat. č. ZP02001-48 Doba zpracování: 50-60 minut pro MagPurix 12S 50-70 minut pro MagPurix 24 Použití Souprava MagPurix Blood DNA Extraction Kit 200 je určena pro izolátor
Hybridizace nukleových kyselin
Hybridizace nukleových kyselin Tvorba dvouřetězcových hybridů za dvou jednořetězcových a komplementárních molekul Založena na schopnosti denaturace a renaturace DNA. Denaturace DNA oddělení komplementárních
Výzkumné centrum genomiky a proteomiky. Ústav experimentální medicíny AV ČR, v.v.i.
Výzkumné centrum genomiky a proteomiky Ústav experimentální medicíny AV ČR, v.v.i. Systém pro sekvenování Systém pro čipovou analýzu Systém pro proteinovou analýzu Automatický sběrač buněk Systém pro sekvenování
Specifická izolace microrna pomocí magnetizovatelných mikročástic
Název: Školitel: Specifická izolace microrna pomocí magnetizovatelných mikročástic Veronika Vlahová Datum: 21. 3. 214 Reg.č.projektu: CZ.1.7/2.3./2.148 Název projektu: Mezinárodní spolupráce v oblasti
Metody studia exprese mrna. jádro a genová exprese 2007
Metody studia exprese mrna Buněčné jádro a genová exprese 2007 Aktivita genu je primárn ě vyjád ř ena jeho transkripcí-prvním krokem vedoucím k syntéze kódovaného proteinu. Cíle metod Ur č ení mno ž ství
Seminář izolačních technologií
Seminář izolačních technologií Zpracoval: Karel Bílek a Kateřina Svobodová Podpořeno FRVŠ 2385/2007 a 1305/2009 Úpravy a aktualizace: Pavla Chalupová ÚMFGZ MZLU v Brně 1 Lokalizace jaderné DNA 2 http://www.paternityexperts.com/basicgenetics.html
MagPurix Viral/Pathogen Nucleic Acids Extraction Kit B
MagPurix Viral/Pathogen Nucleic Acids Extraction Kit B Kat. č. ZP02012 Doba zpracování: 45-60 minut pro MagPurix 12S 45-65 minut pro MagPurix 24 Použití Souprava MagPurix Viral/Pathogen Nucleic Acids Extraction
DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KOLOREKTÁLNÍHO KARCINOMU
Úvod IntellMed, s.r.o., Václavské náměstí 820/41, 110 00 Praha 1 DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KOLOREKTÁLNÍHO KARCINOMU Jednou z nejvhodnějších metod pro detekci minimální
EGFR XL StripAssay. Kat. číslo 5-630. 20 testů 2-8 C
EGFR XL StripAssay Kat. číslo 5-630 20 testů 2-8 C Popis stripu Pracovní postup 1. Izolace DNA Pro izolaci DNA použijte vhodný izolační kit. Doporučené kity jsou následující: Pro izolaci čerstvých nebo
DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KARCINOMU PANKREATU
Úvod IntellMed, s.r.o., Václavské náměstí 820/41, 110 00 Praha 1 DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIDUÁLNÍ CHOROBY U KARCINOMU PANKREATU Jednou z nejvhodnějších metod pro detekci minimální reziduální
Implementace laboratorní medicíny do systému vzdělávání na Univerzitě Palackého v Olomouci. reg. č.: CZ.1.07/2.2.00/
Implementace laboratorní medicíny do systému vzdělávání na Univerzitě Palackého v Olomouci reg. č.: CZ.1.07/2.2.00/28.0088 Hybridizační metody v diagnostice Mgr. Gabriela Kořínková, Ph.D. Laboratoř molekulární
Diagnostika infekce Chlamydia trachomatis pomocí molekulárně genetické metody real time PCR nejen u pacientek z gynekologických zařízení
Diagnostika infekce Chlamydia trachomatis pomocí molekulárně genetické metody real time PCR nejen u pacientek z gynekologických zařízení Mgr. Klára Vilimovská Dědečková, Ph.D. Synlab genetics s.r.o. Molekulární
Ověřená technologie 4940/2018
Ověřená technologie 4940/2018 Produkce matek prostých specifických patogenů: Postup odběru a zpracování vzorků určených k detekci vybraných virových patogenů včely medonosné (Apis mellifera L.) v matkách
Jednotné pracovní postupy zkoušení krmiv
Národní referenční laboratoř Strana KVANTITATIVNÍ STANOVENÍ GENETICKÝCH MODIFIKACÍ METODOU qpcr POMOCÍ ROTOR-GENE PROBE PCR KITU Účel a rozsah Postup slouží ke kvantitativnímu stanovení genetických modifikací
Braf 600/601 StripAssay
Braf 600/601 StripAssay Kat. číslo 5-560 20 testů 2-8 C Popis stripu: Pracovní postup Kit umožňuje detekci 9 mutací v genu BRAF (kodón 600 a 601) Další informace najdete v OMIM Online Mendelian Inheritance
IZOLACE DNA (KIT DNeasy Plant Mini)
17.1 Izolace DNA (kit DNeasy Plant Mini) Strana 1 IZOLACE DNA (KIT DNeasy Plant Mini) 1 Účel a rozsah Postup slouží k získání deoxyribonukleové kyseliny (DNA) ze vzorku pomocí komerčního kitu DNeasy Plant
MagPurix Viral Nucleic Acid Extraction Kit
MagPurix Viral Nucleic Acid Extraction Kit Kat. č. ZP02003 Doba zpracování: 40-55 minut pro MagPurix 12S 40-60 minut pro MagPurix 24 Použití Souprava MagPurix Viral Nucleic Acid Extraction Kit je určena
DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIUDÁLNÍ CHOROBY MRD EGFR
Úvod IntellMed, s.r.o., Václavské náměstí 820/41, 110 00 Praha 1 DIAGNOSTICKÝ KIT PRO DETEKCI MINIMÁLNÍ REZIUDÁLNÍ CHOROBY MRD EGFR Jednou z nejvhodnějších metod pro detekci minimální reziduální choroby
NÁVOD K POUŽITÍ PRO HER2 DNA QUANTIFICATION KIT
IČ: 80 DIČ: CZ80 sales@intellmed.eu NÁVOD K POUŽITÍ PRO HER DNA QUANTIFICATION KIT IČ: 80 DIČ: CZ80 sales@intellmed.eu OBSAH Návod k použití pro HER DNA QUANTIFICATION KIT.... Úvod.... Označení.... Rozsah
West Nile Virus, aneb je třeba být připraven
West Nile Virus, aneb je třeba být připraven RNDr. Eva Křížová, Ph.D Transfuzní a tkáňové oddělení Fakultní nemocnice Brno Taxonomické zařazení a charakteristika WNV Rod: Flavivirus Charakteristika: RNA
DIAGNOSTIKA A MONITOROVÁNÍ INFEKCÍ ZPŮSOBENÉ LIDSKÝMI PAPILLOMAVIRY VYSOCE RIZIKOVÉHO TYPU POMOCÍ REAL TIME PCR
DIAGNOSTIKA A MONITOROVÁNÍ INFEKCÍ ZPŮSOBENÉ LIDSKÝMI PAPILLOMAVIRY VYSOCE RIZIKOVÉHO TYPU POMOCÍ REAL TIME PCR Michaela Kavanová, DiS. tel.: +420 221 985 476 mobil: +420 725 004 523 e-mail: michaela.kavanova@synlab.cz
Magnetické částice, izolace a detekce chřipky (hemaglutininu)
Název: Magnetické částice, izolace a detekce chřipky (hemaglutininu) Školitel: Ludmila Krejčová, MVDr. Datum: 7.11. 2013 Reg.č.projektu: CZ.1.07/2.4.00/31.0023 Název projektu: Partnerská síť centra excelentního
Aplikace molekulárně biologických postupů v časné detekci sepse
Aplikace molekulárně biologických postupů v časné detekci sepse Mgr. Jana Ždychová, Ph.D. IKEM PLM - LLG Sepse je častou příčinou úmrtí během hospitalizace. Včasné nasazení odpovídající ATB terapie je
Hybridizace. doc. RNDr. Milan Bartoš, Ph.D. bartosm@vfu.cz
Hybridizace doc. RNDr. Milan Bartoš, Ph.D. bartosm@vfu.cz Přírodovědecká fakulta MU, 2013 Obsah přednášky 1) Způsoby provedení hybridizace 2) Hybridizace v roztoku 3) Příprava značených sond 4) Hybridizace
S filtračními papíry a membránou je nutno manipulovat pinzetou s tupým koncem.
Western Blotting Příprava blotovacího sendviče... 1 Blotování... 2 Kontrola přenesení proteinů na membránu... 2 Blokování membrány... 2 Aplikace protilátek... 2 Vizualizace... 3 Vyvolání filmu... 4 Chemikálie
Laboratorní diagnostika klíšťové encefalitidy a dalších
Laboratorní diagnostika klíšťové encefalitidy a dalších flavivirových neuroinfekcí Hana Zelená Jan Raszka Jiří Januška Zdravotní ústav se sídlem v Ostravě Centrum klinických laboratoří Virologické i oddělení
Braf V600E StripAssay
Braf V600E StripAssay Kat. číslo 5-570 20 testů 2-8 C Popis stripu: Pracovní postup 1. Izolace DNA Pro izolaci čerstvých nebo mražených biopsií použijte soupravy Qiagen QIAmp DNA Mini nebo Micro. Pro izolaci
Mendelova univerzita v Brně Agronomická fakulta Ústav biologie rostlin
Mendelova univerzita v Brně Agronomická fakulta Ústav biologie rostlin Inovace laboratorních úloh genetických předmětů metodikami pracujícími s ribonukleovými kyselinami pšenice Metodické návody pro laboratorní
Zkušenosti s laboratorní diagnostikou infekcí virem Zika. Hana Zelená NRL pro arboviry Zdravotní ústav se sídlem v Ostravě
Zkušenosti s laboratorní diagnostikou infekcí virem Zika Hana Zelená NRL pro arboviry Zdravotní ústav se sídlem v Ostravě Základní charakteristika viru Zika Čeleď Flaviviridae, rod Flavivirus obalený RNA
GENOTOXICITA A ZMĚNY V GENOVÉ EXPRESI
GENOTOXICITA A ZMĚNY V GENOVÉ EXPRESI INDUKOVANÉ PŮSOBENÍM ORGANICKÝCH LÁTEK Z PRACHOVÝCH ČÁSTIC V OVZDUŠÍ Kateřina Hanzalová Oddělení genetické ekotoxikologie Ústav experimentální medicíny AV ČR v.v.i.
Western blotting. 10% APS 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl 20,28 µl 40,56 µl 81,12 µl
Western blotting 1. Příprava gelu složení aparatury hustotu gelu volit podle velikosti proteinů příprava rozdělovacího gelu: 10% 12% počet gelů 1 2 4 1 2 4 objem 6 ml 12 ml 24 ml 6 ml 12 ml 24 ml 40% akrylamid
NRAS StripAssay. Kat. číslo 5-610. 20 testů 2-8 C
NRAS StripAssay Kat. číslo 5-610 20 testů 2-8 C Popis stripu: Pracovní postup 1. Izolace DNA Pro izolaci DNA musí být použita vhodná metoda vzhledem k typu tkáně vzorku. Pro doporučení vhodné metody kontaktujte
Virus klíšťové encefalitidy (TBEV)
Virus klíšťové encefalitidy (TBEV) Imunoenzymatické soupravy k diagnostice klíšťové encefalitidy ELISA soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy a IgM v lidském séru, plazmě nebo
Určeno pro obecné laboratorní užití. Není určeno pro použití v diagnostických postupech. POUZE PRO POUŽITÍ IN VITRO.
Určeno pro obecné laboratorní užití. Není určeno pro použití v diagnostických postupech. POUZE PRO POUŽITÍ IN VITRO. PCR Nucleotide Mix Předem připravený roztok ultračistých PCR deoxynukleotidů (datp,
IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE KLÍŠŤOVÉ ENCEFALITIDY
INFEKČNÍ SÉROLOGIE Virologie IMUNOENZYMATICKÉ SOUPRAVY K DIAGNOSTICE KLÍŠŤOVÉ ENCEFALITIDY Virus klíšťové encefalitidy (TBEV) ELISA soupravy jsou určeny ke stanovení specifických protilátek třídy a IgM
cdna synthesis kit First-Strand cdna Synthesis System Verze 1.2
cdna synthesis kit First-Strand cdna Synthesis System Verze 1.2 Obsah soupravy a její skladování Tato souprava pro reverzní transkripci obsahuje reagencie potřebné k provedení reverzní transkripce (RT)
Inovace studia molekulární a buněčné biologie
Inovace studia molekulární a buněčné biologie Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem České republiky. MBIO1/Molekulární biologie 1 Tento projekt je spolufinancován
4. Souhrny výsledků. LEGENDA chyba detekce - test neumožňuje stanovení LR HPV typů laboratoř získala certifikát
4. Souhrny výsledků Tabulka č.2: Přehled výsledků testů uvedených laboratořemi, které používají neamplifikační metody detekce HPV, včetně bodového hodnocení TEST KÓD LAB VZOREK č.1 VZOREK č.2 VZOREK č.3
VÝZNAM NĚKTERÝCH FAKTORŮ PREANALYTICKÉ FÁZE V MOLEKULÁRNÍ BIOLOGII
VÝZNAM NĚKTERÝCH FAKTORŮ PREANALYTICKÉ FÁZE V MOLEKULÁRNÍ BIOLOGII Plíšková L., Hrochová K., Kutová R. Ústav klinické biochemie a diagnostiky FN Hradec Králové PREANALYTICKÁ FÁZE V MOLEKULÁRNÍ BIOLOGII
Mikročipy v mikrobiologii
Mikročipy v mikrobiologii doc. RNDr. Milan Bartoš, Ph.D. bartosm@vfu.cz Přírodovědecká fakulta MU, 2014 Obsah přednášky 1) Charakteristika biočipů, DNA microarrays a DNA chip 2) Výroba čipů, charakteristika
Izolace RNA. doc. RNDr. Jan Vondráček, PhD..
Izolace RNA doc. RNDr. Jan Vondráček, PhD.. Metodiky izolace RNA celková buněčná RNA ( total RNA) zahrnuje řadu typů RNA, které se mohou lišit svými fyzikálněchemickými vlastnostmi a tedy i nároky na jejich
PAROTITIDA VRACEJÍCÍ SE ONEMOCNĚNÍ. Vlasta Štěpánová 1, Miroslav Fajfr 1,2, Lenka Plíšková 3
PAROTITIDA VRACEJÍCÍ SE ONEMOCNĚNÍ Vlasta Štěpánová 1, Miroslav Fajfr 1,2, Lenka Plíšková 3 Ústav klinické mikrobiologie 1, Ústav klinické biochemie a diagnostiky 3, Fakultní nemocnice Hradec Králové,
Plíšková L. Ústav klinické biochemie a diagnostiky LF a FN Hradec Králové
PCR v diagnostice Lymeské boreliózy Plíšková L. Ústav klinické biochemie a diagnostiky LF a FN Hradec Králové obtížná Diagnostika lymeské boreliózy klinický obraz velmi rozmanitý anamnestické údaje (přisátí
Izolace nukleových kyselin
Izolace nukleových kyselin Požadavky na izolaci nukleových kyselin V nativním stavu z přirozeného materiálu v dostatečném množství požadované čistotě. Nukleové kyseliny je třeba zbavit všech látek, které
- Dynex 407 0,37. 0,23 4 hc2 HR HPV Test Qiagen, - - Dynex 528 9,13. 1,85/1,22 8 hc2 HR HPV Test Qiagen, - - Dynex 696
4. Souhrny výsledků Tabulka č. 2: Přehled výsledků testů uvedených laboratořemi, které používají neamplifikační metody detekce HPV, včetně bodového hodnocení TEST KÓD LAB VZOREK č.1 VZOREK č.2 VZOREK č.3
Enterotoxiny Staphylococcus aureus. Jana Kotschwarová Andrea Koťová
Enterotoxiny Staphylococcus aureus Jana Kotschwarová Andrea Koťová Obsah Charakteristika Staphylococcus aureus Vlastnosti Faktory virulence Enterotoxiny Patogeneze Výskyt Metody stanovení Prevence výskytu
Metody testování humorální imunity
Metody testování humorální imunity Co je to humorální imunita? Humorální = látková Buněčné produkty Nespecifická imunita příklady:» Lysozym v slinách, slzách» Sérové proteiny (proteiny akutní fáze)» Komplementový
Inovace studia molekulární a buněčné biologie reg. č. CZ.1.07/2.2.00/
Inovace studia molekulární a buněčné biologie reg. č. CZ.1.07/2.2.00/07.0354 Genomika (KBB/GENOM) Analýza transkriptomu Ing. Hana Šimková, CSc. Cíl přednášky - seznámení s moderními metodami komplexní
Změny sazebníku výkonů pro mikrobiologické obory
Změny sazebníku výkonů pro mikrobiologické obory Ing. Hana Hrbáčková LTK CEM SZÚ 2011 - Původní návrh MZ Grant Evropského fondu pro regionální rozvoj Vítěznou nabídku na řešení Kultivace Seznamu zdravotních
KLÍŠŤOVÁ ENCEFALITIDA pohledem epidemiologa
KLÍŠŤOVÁ ENCEFALITIDA pohledem epidemiologa MUDr. Renata Vaverková Krajská hygienická stanice Jihomoravského kraje se sídlem v Brně HVD - Hradec Králové 4. 10. 2013 KLÍŠŤOVÁ ENCEFALITIDA je nákazou s přírodní
Inovace studia molekulární a buněčné biologie
Investice do rozvoje vzdělávání Inovace studia molekulární a buněčné biologie Tento projekt je spolufinancován Evropským sociálním fondem a státním rozpočtem České republiky. Investice do rozvoje vzdělávání
Pokročilé biofyzikální metody v experimentální biologii
Pokročilé biofyzikální metody v experimentální biologii Ctirad Hofr 1/1 Proč biofyzikální metody? Biofyzikální metody využívají fyzikální principy ke studiu biologických systémů Poskytují kvantitativní
PROTOKOL NORTHERNOVA HYBRIDIZACE
! NORTHERNOVA HYBRIDIZACE Vzhledem k tomu, že se při Northern hybridizaci pracuje s RNA a RNA je extrémně citlivá na působení RNáz, je zapotřebí se vyvarovat jakékoliv kontaminace RNázami. Pro snížení
Molekulárně biologické metody v mikrobiologii. Mgr. Martina Sittová Jaro 2014
Molekulárně biologické metody v mikrobiologii Mgr. Martina Sittová Jaro 2014 Harmonogram 1. den Izolace DNA 2. den Měření koncentrace DNA spektrofotometricky, real-time PCR 3. den Elektroforéza Molekulární
PCR diagnostika lymeské borreliózy. Mgr. D. Berenová, J. Hořejší, Ing. A. Lukavská, RNDr. P. Kodym, CSc. Národní referenční laboratoř pro lymeskou borreliózu Centrum epidemiologie a mikrobiologie Státní
α-globin StripAssay Kat. číslo 4-160 10 testů 2-8 C
α-globin StripAssay Kat. číslo 4-160 10 testů 2-8 C Popis stripů: Pracovní postup Izolace DNA Doporučujeme použít následující kit pro izolaci DNA z plné krve nebo jiných typů vzorků: Spin Micro DNA Extraction
MOLEKULÁRNĚ BIOLOGICKÉ METODY V ENVIRONMENTÁLNÍ MIKROBIOLOGII. Martina Nováková, VŠCHT Praha
MOLEKULÁRNĚ BIOLOGICKÉ METODY V ENVIRONMENTÁLNÍ MIKROBIOLOGII Martina Nováková, VŠCHT Praha MOLEKULÁRNÍ BIOLOGIE V BIOREMEDIACÍCH enumerace FISH průtoková cytometrie klonování produktů PCR sekvenování
Column DNA Lego Kit UNIVERZÁLNÍ SOUPRAVY PRO RYCHLOU IZOLACI ČISTÉ DNA (Katalogové číslo D201 + D202)
Column DNA Lego Kit UNIVERZÁLNÍ SOUPRAVY PRO RYCHLOU IZOLACI ČISTÉ DNA (Katalogové číslo D201 + D202) Popis Column DNA Lego Kit je základ moderní stavebnicové (Lego) soupravy pro izolaci čisté DNA různého
Polymerázová řetězová reakce. Základní technika molekulární diagnostiky.
Polymerázová řetězová reakce Základní technika molekulární diagnostiky. Kdo za to může? Kary Mullis 1983 Nobelova cena 1993 Princip PCR Polymerázová řetězová reakce (polymerase chain reaction PCR) umožňuje
MagPurix Bacterial DNA Extraction Kit
MagPurix Bacterial DNA Extraction Kit Kat. č. ZP02006 Doba zpracování: 55-65 minut pro MagPurix 12S 55-75 minut pro MagPurix 24 Použití Souprava MagPurix Bacterial DNA Extraction Kit je určena pro izolátor
Funkční vzorek 5473/2017
Funkční vzorek 5473/2017 Metoda detekce protilátek proti viru klíšťové encefalitidy v séru malých přežvýkavců RNDr. Jiří Salát, Ph.D. Mgr. Petra Formanová RNDr. Luděk Eyer, Ph.D. Doc. RNDr. Daniel Růžek,
Stanovení Ct hodnoty. Stanovení míry variability na úrovni izolace RNA, reverzní transkripce a real-time PCR
Stanovení Ct hodnoty Ct hodnotu (číselný výstup real-time PCR) stanovíme z amplifikačního grafu (grafický výstup real-time PCR) proložením thresholdu skrze lineární část amplifikační křivky. V bodě protnutí
PRO MOLEKULÁRNÍ BIOLOGII REAGENCIE. SLEVA 10 % na nákup nad , bez DPH. Polymerázy a mastermixy GENEDIREX Nejlepší poměr cena/výkon
REAGENCIE PRO MOLEKULÁRNÍ BIOLOGII 092018 SLEVA 10 % na nákup nad 20 000, bez DPH Polymerázy a mastermixy GENEDIREX Nejlepší poměr cena/výkon Taq DNA polymeráza a mastermix skladování a tepelná odolnost:
Amplifikační metody umožňují detekovat. k dispozici minimálně kopií DNA,
Diagnostické amplifikační metody nevyužívající PCR Amplifikační metody umožňují detekovat jedinou kopii cílové DNA, zatímco při hybridizačních metodách musí být k dispozici minimálně 10 4-10 5 kopií DNA,
Diagnostika retrovirů Lentiviry - HIV. Vladislava Růžičková
Diagnostika retrovirů Lentiviry - HIV Vladislava Růžičková VI. Třída RNA-viry se zpětnou transkriptázou RT Čeleď: Retroviridae (hostitelé: Obratlovci) Rody: Alpharetrovirus Betaretrovirus Gammaretrovirus
1. Metodika. Protokol č. F1-4 Metodika: Srovnávací analýza efektivity přípravy rekombinantního proteinu ve fermentoru
Protokol č.: F1-4 Datum: 20.12.2010 Metodika: analýza efektivity přípravy výběr z výsledků ze zkušebních provozů výroby antigenů. Vypracoval: Ing. Václav Filištein, Mgr. Tereza Chrudimská, Spolupracující
NAT testování dárců krve v ÚVN Praha
Oddělení hematologie a krevní transfuze NAT testování dárců krve v ÚVN Praha Ludmila Landová Organizace laboratorního vyšetření dárců krve - OHKT ÚVN Praha Konsolidované řešení ZVÝŠENÍ bezpečnosti pro
NEKOPÍROVAT. Eva Hamšíková NRL pro papillomaviry Oddělení imunologie ÚHKT
Eva Hamšíková NRL pro papillomaviry Oddělení imunologie ÚHKT Odborná konference KONZULTAČNÍ DEN, 9. června 2015 IGA MZ ČR NT12372 2011-2014 epidemiologická surveillance HPV infekcí prevalence typů HPV,
MagPurix Forensic DNA Extraction Kit
MagPurix Forensic DNA Extraction Kit Kat. č. ZP02010 Doba zpracování: 40-50 minut pro MagPurix 12S 40-60 minut pro MagPurix 24 Použití Souprava MagPurix Forensic DNA Extraction Kit je určena pro izolátor
Vzdělávání zdravotních laborantek v oblasti molekulární biologie
Vzdělávání zdravotních laborantek v oblasti molekulární biologie Beránek M., Drastíková M. Ústav klinické biochemie a diagnostiky, Lékařská fakulta UK a Fakultní nemocnice Hradec Králové beranek@lfhk.cuni.cz
Příprava vektoru IZOLACE PLASMIDU ALKALICKÁ LYZE, KOLONKOVÁ IZOLACE DNA GELOVÁ ELEKTROFORÉZA RESTRIKČNÍ ŠTĚPENÍ. E. coli. lyze buňky.
Příprava vektoru IZOLCE PLSMIDU LKLICKÁ LYZE, KOLONKOVÁ IZOLCE DN E. coli plasmidová DN proteiny proteiny + + vysrážená plasmidová lyze buňky + snížení ph chromosomální DN centrifugace DN chromosomální
DY D NE N X Hana Vlastníková
DYNEX Hana Vlastníková Molekulární biologie: Vybavení laboratoře na klíč Přístrojová technika Kompatibilní diagnostické soupravy Profesionální přístup SOP Technická podpora Servis Přístrojové vybavení:
Sada artus HBV QS-RGQ
Sada artus HBV QS-RGQ Výkonnostní charakteristiky Sada artus HBV QS-RGQ, verze 1, 4506363, 4506366 Před samotným testem si ověřte dostupnost nových revizí elektronického značení na adrese www.qiagen.com/products/artushbvrgpcrkitce.aspx.
Havarijní plán PřF UP
Havarijní plán PřF UP v němž se nakládá s geneticky modifikovanými organismy (GMO), zpracovaný podle 20, odst. 4 zákona č. 78/2004 Sb. pro pracoviště kateder Buněčné biologie a genetiky a Oddělení molekulární
Infekce virem západonilské horečky
Infekce virem západonilské horečky Přehled aktuálních informací a algoritmus diagnostiky infekce virem západonilské horečky F. Stejskal, H. Zelená, H. Orlíková, F. Rettich, 6. 3. 2019 Autoři MUDr. RNDr.
Vizualizace DNA ETHIDIUM BROMID. fluorescenční barva interkalační činidlo. do gelu do pufru barvení po elfu SYBR GREEN
ETHIDIUM BROMID fluorescenční barva interkalační činidlo do gelu do pufru barvení po elfu Vizualizace DNA SYBR GREEN Barvení proteinů Coommassie Brilliant Blue Coomassie Blue x barvení stříbrem Porovnání
Lékařská mikrobiologie II
Publikováno z 2. lékařská fakulta Univerzity Karlovy (https://www.lf2.cuni.cz) LF2 > Lékařská mikrobiologie II Lékařská mikrobiologie II Napsal uživatel Marie Havlová dne 8. Březen 2013-0:00. Sylabus praktických
Nákazová situace u zvířat v Ústeckém kraji
Krajská veterinární správa Státní veterinární správy pro Ústecký kraj Sebuzínská 38 403 21 Ústí nad Labem Nákazová situace u zvířat v Ústeckém kraji Spolupráce SVS a KHS MVDr, Petr Pilous, Ústí nad Labem
laboratorní technologie
Využití real-time PCR v urgentní diagnostice bakteriálních meningitid J. Mrázek Bakteriální meningitidy Bakteriální meningitidy patří k nejzávažnějším akutním infekčním onemocněním. Průběh bakteriální
Problematika molekulárněmikrobiologické diagnostiky
Problematika molekulárněmikrobiologické diagnostiky Jaroslav Hrabák Téma jednání 1. Nepodkročitelná minima vybavení molekulárněmikrobiologické laboratoře Schválení dokumentu 1. Vzdělávání v molekulární
Mendelova univerzita v Brně Agronomická fakulta Ústav biologie rostlin
Mendelova univerzita v Brně Agronomická fakulta Ústav biologie rostlin Využití techniky RACE (Rapid amplification of complementary DNA ends) pro identifikaci genů pro metalothioneiny Metodické návody pro
VÝSKYT PROTILÁTEK TŘÍDY IgM PO VAKCINACI PROTI VIROVÉ HEPATITIDĚ A
VÝSKYT PROTILÁTEK TŘÍDY IgM PO VAKCINACI PROTI VIROVÉ HEPATITIDĚ A Ing. František Štumr, Ph.D., RNDr. Stanislava Fabiánová, Ing. Barbara Štumrová, MUDr. Zuzana Kala Grofová PharmDr. Jiří Skalický, Ph.D.
Interakce viru klíšťové encefalitidy s hostitelským organismem a patogeneze infekce
Parazitologický ústav, Akademie věd České republiky Laboratoř interakcí vektor-hostitel České Budějovice Interakce viru klíšťové encefalitidy s hostitelským organismem a patogeneze infekce Daniel Růžek,
2. Srovnání postupů izolace DNA kolonky vs. paramagnetické částice
2. Srovnání postupů izolace DNA kolonky vs. paramagnetické částice A) Izolace DNA na kolonkách Izolace DNA z jakéhokoliv materiálu je dnes základním postupem v laboratořích zabývajících se molekulárně-biologickými
VÝVOJ DNA ČIPŮ PRO DETEKCI GENETICKY MODIFIKOVANÝCH ORGANISMŮ
VÝVOJ DNA ČIPŮ PRO DETEKCI GENETICKY MODIFIKOVANÝCH ORGANISMŮ Lucie Vištejnová 2, Jan Hodek 1, Patrik Sekerka 2, Jaroslava Ovesná 1, Kateřina Demnerová 2 1. Výzkumný ústav rostlinné výroby, Drnovská 507,
ZDRAVOTNÍ NEZÁVADNOST POTRAVIN
ZDRAVOTNÍ NEZÁVADNOST POTRAVIN Možnosti stanovení Listeria monocytogenes popis metod a jejich princip Mária Strážiková Aleš Holfeld Obsah Charakteristika Listeria monocytogenes Listerióza Metody detekce
Tkáňový homogenizátor MagNA Lyser od společnosti Roche
Izolace RNA Pracovní postup Homogenizace: Pozn. Postup homogenizace platí pouze pro izolaci RNA z nativní tkáně, v případě izolace z buněčné suspenze je tento krok vynechán a začíná se přídavkem homogenizačního
Průkaz viru influenzy u vakcinovaných koní v ČR v roce 2008 Souhrn Úvod
Průkaz viru influenzy u vakcinovaných koní v ČR v roce 2008 Doc. MVDr. Petr Lány, Ph.D., Mgr. Kateřina Rosenbergová, Ph.D., Mgr. Vojtěch Baláž* Ústav infekčních chorob a mikrobiologie, FVL, VFU Brno, *Ústav
Funkční vzorek 5456/2017. Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních. látek u Enterococcus spp.
Funkční vzorek 5456/2017 Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních látek u Enterococcus spp. Autoři: MVDr. Kateřina Nedbalcová, Ph.D., Výzkumný ústav veterinárního lékařství,
DYNEX nabízí komplexní řešení v oblasti zpracování a analýzy biologických materiálů pomocí molekulárně biologických metod.
DYNEX nabízí komplexní řešení v oblasti zpracování a analýzy biologických materiálů pomocí molekulárně biologických metod. Od 1.1.2014 DYNEX jediným OFICIÁLNÍM (autorizovaným) distributorem společnosti
2 Inkompatibilita v systému Rhesus. Upraveno z A.D.A.M.'s health encyclopedia
2 Inkompatibilita v systému Rhesus Upraveno z A.D.A.M.'s health encyclopedia 3 Inkompatibilita v systému Rhesus Úkol 7, str.119 Které z uvedených genotypových kombinací Rh systému u manželů s sebou nesou
Praktický kurz Pokročilé biofyzikální přístupy v genomice a proteomice. 12.-13. května 2010
www.modernibiofyzika.cz Oddělení funkční genomiky a proteomiky Ústav experimentální biologie, Přírodovědecká fakulta Masarykova univerzita Praktický kurz Pokročilé biofyzikální přístupy v genomice a proteomice
Veronika Janů Šárka Kopelentová Petr Kučera. Oddělení alergologie a klinické imunologie FNKV Praha
Veronika Janů Šárka Kopelentová Petr Kučera Oddělení alergologie a klinické imunologie FNKV Praha interakce antigenu s protilátkou probíhá pouze v místech epitopů Jeden antigen může na svém povrchu nést
Imunochemické metody. na principu vazby antigenu a protilátky
Imunochemické metody na principu vazby antigenu a protilátky ANTIGEN (Ag) specifická látka (struktura) vyvolávající imunitní reakci a schopná vazby na protilátku PROTILÁTKA (Ab antibody) molekula bílkoviny
Praktický kurz Příprava buněčného lyzátu, izolace celkové RNA pomocí kolonek/tripure reagent, stanovení koncentrace RNA
Laboratoř Metalomiky a Nanotechnologií Praktický kurz Příprava buněčného lyzátu, izolace celkové RNA pomocí kolonek/tripure reagent, stanovení koncentrace RNA Vyučující: Mgr. Monika Holubová, Bc. Petr
Analýza DNA. Co zjišťujeme u DNA DNA. PCR polymerase chain reaction. Princip PCR PRINCIP METODY PCR
o zjišťujeme u DN nalýza DN enetickou podstatu konkrétních proteinů Mutace bodové (sekvenční delece nebo inzerce nukleotidů), chromosomové aberace (numerické, strukturální) Polymorfismy konkrétní mutace,
Sure-MeDIP II. with agarose beads and Mse I. www.krd.cz
Sure-MeDIP II with agarose beads and Mse I www.krd.cz 1 Obsah soupravy a skladování MeDIP souprava obsahuje reagencie na provedení 25 reakcí. Souprava je rozdělen do dvou částí, jedna je distribuována
Funkční vzorek 5454/2017. Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních. látek u Pseudomonas spp.
Funkční vzorek 5454/2017 Set ke stanovení minimálních inhibičních koncentrací antimikrobiálních látek u Pseudomonas spp. Autoři: MVDr. Kateřina Nedbalcová, Ph.D., Výzkumný ústav veterinárního lékařství,