MINICAP PROTEIN(E) 6 Ref. 2203 Ref. 2223* 2009/04
POUŽITÍ SADY Sada MINICAP PROTEIN(E) 6 je určena pro separaci proteinů v lidském séru kapilární elektroforézou systémem MINICAP v alkalickém tlumicím roztoku (ph 9,9). Proteiny v normálním séru se rozdělí na šest hlavních frakcí. MINICAP provádí všechny operace automaticky a výsledkem je profil bílkovin pro kvalitativní nebo kvantitativní analýzu. Bílkoviny jsou separované v křemenných kapilárách a jsou přímo detekovány při 200 nm. Elektroforetické záznamy mohou interpretovány pro vyšetření z hlediska abnormalit vizuálně. Přímá detekce slouží k přesnému kvantitativnímu určení jednotlivých frakcí bílkovin. Pro diagnostické použití In Vitro. PRINCIP TESTU (1-11) Elektroforéza bílkovin je zavedená technika běžně používaná v klinických laboratořích pro vyšetření vzorků pro zjištění proteinových abnormalit (1, 2, 3, 10). MINICAP byl vyvinut ke kompletní automatizaci s rychlým dělením a přijatelným rozlišením. Tuto techniku lze z mnoha hledisek zařadit mezi klasickou zónovou elektroforézu a kapalinovou chromatografii (1, 3, 8, 11). Systém MINICAP používá princip kapilární elektroforézy ve volném roztoku. Elektricky nabité molekuly jsou separovány podle elektroforetické pohyblivosti ve 100 µm kapilárách v alkalickém pufru o určitém ph. Separace je rovněž závislá na ph elektrolytu a elektroosmotickém toku. Systém MINICAP má 2 kapiláry v paralelním zapojení, což umožňuje 2 paralelní analýzy. Ředění vzorku pufrem je připraveno a vpraveno aspirací na anodickém konci kapiláry. Potom následuje vysokonapěťová separace bílkovin a jejich přímá detekce při 200 nm na katodickém konci kapiláry. Kapiláry jsou ihned promývány promývacím roztokem a promytím pufrem připraveny k další analýze. Proteiny jsou detekovány v následujícím pořadí : gama globuliny, beta-2 globuliny, beta-1 globuliny, alfa-2 globuliny, alfa-1 globuliny a albumin s tím, že každá zóna obsahuje jeden či více proteinů. REAGENTY A MATERIÁLY DODÁVANÉ V SADĚ MINICAP PROTEIN(E) 6 POLOŽKY PN 2203 PN 2223* Pufr (ihned k použití) 2 lahvičky, 250 ml každá 6 lahvičky, 250 ml každá Promývací roztok (zásobní roztok) 1 lahvička, 25 ml 3 lahvičky, 25 ml každá Reagenční nádobky 1 balení po 125 kusech 3 balení po 125 kusech Filtry 3 filtry 3 filtry Kontejnery na použité nádobky 4 kontejnerů 12 kontejnerů Víka na kontejnery 4 vík 12 vík * MINICAP PROTEIN(E) MAXI-KIT PRO OPTIMÁLNÍ VÝSLEDKY : Všechny reagenty ze stejné sady musí být vždy používány společně a podle pokynů v příbalovém letáku. PROSÍME, ČTĚTE PEČLIVĚ PŘÍBALOVÝ LETÁK. VAROVÁNÍ : Nepoužívejte standardně prodávanou deionizovanou vodu, jako např. na žehlení (nebezpečí poškození důležitých kapilár). Používejte výhradně ultračistou vodu, jako je např. voda pro čistoty pro nástřik. 1. TLUMÍCÍ ROZTOK Příprava Pufr je připraven k použití. Obsahuje : alkalický pufr o ph 9,9 ; přídavné látky nezbytně nutné pro optimální provedení, v koncentracích pro člověka neškodných. Pufr k analýze proteinů kapilární elektroforézou. Skladování, stabilita a známky znehodnocení roztoku Pufr skladujte při pokojové teplotě (15 až 30 C) nebo v chladničce (2 až 8 C). Roztok je stabilní do data expirace vyznačeného na obalu sady nebo na štítku lahvičky pufru. Neskladovat v blízkosti okna nebo tepelného zdroje. POZNÁMKA : Pokud je pufr skladován při 2-8 C, doporučuje se nechat jej vytemperovat před použitím pro analýzu na pokojovou teplotu. NEMRAZIT Zředěný pufr zneškodněte, pokud se změní jeho vzhled, například se stane zakaleným v důsledku bakteriální kontaminace. 2. PROMÝVACÍ ROZTOK Příprava Lahvička zásobního promývacího roztoku může být zředěna až do 250 ml destilovanou nebo deionizovanou vodou. VAROVÁNÍ : Promývací roztok obsahuje hydroxid sodný. Žíravina. Způsobuje vážné poleptání. Udržujte mimo dosah dětí. V případě zasažení očí vypláchněte okamžitě velkým množstvím vody a vyhledejte lékařskou pomoc. Potřísněný oděv okamžitě svlečte. Noste vhodný oděv a ochranu očí/obličeje. K promývání kapilár po elektroforetické separaci bílkovin. DŮLEŽITÉ : Před naplněním nádoby promývacím roztokem se doporučuje promýt otevřenou nádobu, konektor a zkumavku velkým množstvím destilované nebo neionizované vody, aby se zabránilo tvorbě usazenin soli. Skladování, stabilita a známky znehodnocení roztoku Zásobní i pracovní roztok se skladuje při pokojové teplotě nebo v chladničce v těsně uzavřených nádobách. Zásobní promývací roztok je stabilní do data exspirace vyznačeného na obalu sady nebo na štítku lahvičky promývacího roztoku. Pracovní promývací roztok je stabilní 3 měsíců. Pracovní promývací roztok zneškodněte, pokud se změní jeho vzhled, například se zakalí v důsledku bakteriální kontaminace. - 113 - SEBIA NÁVOD - Czech
3. REAGENČNÍ NÁDOBKY Nádobky pro jedno použití pro ředění vzorků séra a migraci v automatizovaném zařízení. Umístnění nádobek MINICAP na automatizovaná zásobovací systém Jedna nádobka je zamýšlena pro analýzu dvou vzorků séra. VAROVÁNÍ : S reagenčními nádobkami obsahujícími biologické vzorky se musí nakládat s opatrností. 4. FILTRY Filtry na jedno použití k filtraci pufru pro analýzu, pracovního promývacího roztoku a destilované vody (používá se k vyplachování kapilár). DŮLEŽITÉ : Při výměně sady vyměňte vždy všechny tři filtry. Našroubujte jeden filtr na konektor umístěný na konci každé zkumavky ponořené do lahviček s pufrem, promývacím roztokem nebo s deionizovanou vodou. Při vkládání filtrů do systému MINICAP opláchněte konektory a zkumavky s destilovanou nebo deionizovanou vodou. Použité filtry musí být před odstraněním opláchnuty. Filtr určený pro analytický pufr musí být použit k filtraci obou lahviček s pufrem ; další dva filtry jsou určeny k filtraci pracovního promývacího roztoku a destilované nebo deionizované vody (k výplachu kapilár). Skladování Filtry skladujte v originálních, utěsněných obalech, na suchém místě, při pokojové teplotě nebo v chladničce. 5. KONTEJNERY NA POUŽITÉ NÁDOBKY Kontejnery slouží k automatickému sběru použitých reagenčních nádobek v systému MNICAP. Umístění v systému MINICAP v místě zamýšleného použití. VAROVÁNÍ : S kontejnery obsahujícími reagenční nádobky s biologickými vzorky se musí nakládat s opatrností. 6. VÍKA PRO KONTEJNERY NA POUŽITÉ NÁDOBY Víka na uzavírání kontejnerů s použitými nádobkami. MINICAP PROTEIN(E) 6-2009/04 POTŘEBNÉ REAGENTY NEOBSAŽENÉ V BALENÍ 1. DESTILOVANÁ NEBO DEIONIZOVANÁ VODA K vyplachování kapilár v automatickém systému MINICAP, SEBIA, pro elektroforézu. Před použitím se doporučuje destilovanou nebo deionizovanou vodu filtrovat na 0,45 µm filtru. Vodu je nutno denně měnit, aby nedošlo k mikrobiální kontaminaci. Pro delší skladování přidejte 3,5 µl/dl roztoku ProClin 300. DŮLEŽITÉ : Vyplachovací nádobu je před naplněním nutno vymýt větším množstvím destilované nebo deionizované vody. 2. CAPICLEAN Složení Lahvička koncentrovaného roztoku CAPICLEAN (SEBIA, PN 2058, 1 lahvička, 25 ml) obsahuje : proteolytické enzymy, povrchově aktivní láky a aditiva v koncentracích vhodných pro optimální účinnost. VAROVÁNÍ : Roztok CAPICLEAN může způsobit podráždění nebo popáleniny kůže, očí a sliznic. Ke každotýdennímu čištění kapilár a vzorkovací sondy v automatickém systému MINICAP, SEBIA, pro elektroforézu. Viz návod k CAPICLEAN, SEBIA. DŮLEŽITÉ : Pro správné použití roztoku CAPICLEAN v systému MINICAP je nutné použít stejný čárový kód používané šarže jako má roztok i u hamolyzační zkumavky, jež drží mikrozkumavku obsahující naředěný roztok CAPICLAEN (před použitím odřízněte víčko mikrozkumavky). Skladování, stabilita a známky znehodnocení roztoku Roztok CAPICLEAN skladujte v chladničce (2 až 8 C). Stabilní do data exspirace vyznačeného na štítku lahvičky antiséra. NEMRAZIT. Roztok CAPICLEAN nesmí obsahovat sraženiny. Roztok CAPICLEAN zneškodněte, pokud se změní jeho vzhled, například se stane zakaleným v důsledku bakteriální kontaminace. Pro pozdější použití skladujte zkumavka s naředěným roztokem při teplotě 2 8 C. Roztok musí být použit do jednoho dne. 3. ROZTOK CHLORNANU SODNÉHO (k čištění vzorkovací sondy) Příprava Připravte 9 chlorovaný roztok chlornanu sodného (2 až 3 % chlorid) naředěním 250 ml 36 chlorovaný koncentrovaného roztoku (9,6 % chlorid) do 1 litru studené destilované nebo deionizované vody. Pro čištění vzorkovací sondy systému MINICAP (každotýdenní údržba pro odstranění proteinů nasorbovaných na sondu). Viz. návod k systému SEBIA MINICAP. 500 µl mikrozkumavky obsahující dříve připravený naředěný chlorovaný roztok. Uřízněte víčko mikrozkumavky. Umístněte mikrozkumavky, uloženou v nové hemolyzační zkumavku sloužící jako podpora (se stejným čárovým kódem jako roztok chlornanu sodného), do pozice č. 1 na otočném autosampleru systému MINICAP. - 114 -
Novou reagenční nádobku umístněte na automatický podávací systém nádobek MINICAP (pokud bude reagenční nádobka chybět, zobrazí se zpráva). Zasuňte otočný autosampler do systému MINICAP. Zavřete dvířka systému MINICAP a čistící sekvence se zahájí automaticky. DŮLEŽITÉ : Pro správné použití roztoku chlornanu sodného v systému MINICAP je nutné použít stejný čárový kód používané šarže jako má roztok i u hamolyzační zkumavky jež drží mikrozkumavku obsahující naředěný roztok (před použitím odřízněte víčko mikrozkumavky). Skladování, stabilita a známky znehodnocení roztoku Skladujte pracovní chlorovaný roztok v uzavřené nádobě při teplotě místnosti. Roztok je stabilní 3 měsíce. Roztok neskladujte na slunečním světle, blízko tepelného nebo zápalného zdroje, kyselin a amoniaku. 4. PROMÝVACÍ ROZTOK CAPILLARYS / MINICAP Příprava Každá lahvička promývacího roztoku CAPILLARYS / MINICAP (SEBIA, kat č. 2052, 2 lahvičky, 75 ml) může být destilovanou nebo deionizovanou vodou zředěna na 750 ml. Pro systém MINICAP je vhodné naředit pouze 25 ml zásobního roztoku destilovanou nebo deionizovanou vodou zředěna na 250 ml. VAROVÁNÍ : Promývací roztok obsahuje hydroxid sodný. Žíravina. Způsobuje vážné poleptání. Udržujte mimo dosah dětí. V případě zasažení očí vypláchněte okamžitě velkým množstvím vody a vyhledejte lékařskou pomoc. Potřísněný oděv okamžitě svlečte. Noste vhodný oděv a ochranu očí/obličeje. Pro promývání kapilár systému MINICAP. DŮLEŽITÉ : Před naplněním nádoby promývacím roztokem se doporučuje promýt otevřenou nádobu, konektor a zkumavku velkým množstvím destilované nebo neionizované vody, aby se zabránilo tvorbě usazenin soli. Skladování, stabilita a známky znehodnocení roztoku Zásobní i pracovní roztok se skladuje při pokojové teplotě nebo v chladničce v těsně uzavřených nádobách. Zásobní promývací roztok je stabilní do data exspirace vyznačeného na obalu sady nebo na štítku lahvičky promývacího roztoku. Pracovní promývací roztok je stabilní 3 měsíců. Pracovní promývací roztok zneškodněte, pokud se změní jeho vzhled, například se zakalí v důsledku bakteriální kontaminace. POTŘEBNÉ VYBAVENÍ A PŘÍSLUŠENSTVÍ MINICAP PROTEIN(E) 6-2009/04 1. MINICAP Systém, SEBIA, PN 1230. 2. Otočný autosampler dodávaný spolu se systémem MINICAP. 3. Souprava nádob dodávaná se systémem MINICAP : Promývací nádobka (na destilovanou či deionizovanou vodu) a nádobka na odpad. 4. MINICAP Reagenční nádobky, SEBIA (250 kusů), PN 2280. 5. Kontejnery na použité nádobky, SEBIA (20 kusů), PN 2285. VZORKY PRO ANALÝZU Odběr a skladování vzorků Nejlepších výsledků se dosahuje analýzou čerstvých vzorků séra. Séra musí být odebrána v souladu se zavedenými metodami používanými v klinických laboratořích. Při teplotě 2-8 C lze vzorky séra skladovat až 10 dní. Pro delší skladování je nutno vzorky séra zmrazit do 8 hodin od odběru. Mražené vzorky séra jsou stabilní nejméně 1 měsíc. V nesprávně skladovaných vzorcích probíhá degradace bílkovin, zvláště se snižuje beta-2 frakce a může být zdeformována malými frakcemi, objevujícími se již v zóně gama a / nebo v beta-1 zóně. Rovněž může dojít k lehké deformaci frakce alfa-2. Po deseti dnech skladování v chladničce (2-8 C) lze pozorovat zvýšenou beta-1 frakci. Frakce beta-2 může zcela chybět. POZNÁMKA: Během přepravy mohou být vzorky uchovávány při pokojové teplotě až po dobu 5 dní. Důrazně se doporučuje přepravovat je při 2-8 C. Příprava vzorků Používejte neředěné vzorky séra. Při skladování v chladničce při 2 až 8 C nebo po zmrazení se některá séra mohou stát viskózními nebo vznikne zákal. Při pokojové teplotě mohou být tyto vzorky přímo analyzovány. Vzorky obsahující polymerizovaný imunoglobulin mohou být použity bez další úpravy. Doporučuje se pozorovat chování vzorku před analýzou (hemolýza, kryoglobuliny nebo zákal). Vzorky, které není vhodné používat Nepoužívejte hemolyzované vzorky. Hemolýza zvyšuje dvojitou zónu alfa-2. Nepoužívejte stará, nesprávně skladovaná séra - obsah beta-2 frakce by mohl být snížený. Nepoužívejte vzorky plazmy. Fibrinogen migruje na polohu beta-2 (hrb v poloze beta-2 nebopřekryv se zónou beta-2 s možným nárůstem této frakce). Pokud je přítomný v některých vzorcích (plasma, ne zcela defibrinované sérum, nebo pacient podrobující se antikoagulační léčbě), fibrinogen může nevhodně interferovat (podezření na nárůst monoklonálního pásu nebo beta-2 frakce). Při analýze starších vzorků plasmy (není doporučeno), C3 funkční skupiny, které se mohou s časem měnit, jsou částečně degradovány, beta- zóna odpovídá fibrinogenu. POSTUP Systém MINICAP je multiparametrické zařízení, určené k analýze sérových proteinů ve dvou paralelních kapilárách v následující sekvenci : Načtení čárového kódu (až 28 zkumavek) se sérem a kódu otočného autosampleru ; Naředění vzorku ze zkumavek do reagenčních nádobek ; Promývání kapilár ; Nástřik naředěných vzorků ; Analýza proteinů s jejich přímou detekcí na kapilárách. - 115 -
Manuální kroky zahrnují : Vložení zkumavek se vzorkem do otočného autosampleru ; Vložení otočného autosampleru do zařízení MINICAP ; Odstranění zkumavek se vzorky po analýze ; Odstranění a uzavření kontejnerů s použitými nádobkami. PEČLIVĚ SI PROSTUDUJTE NÁVOD K POUŽITÍ. I. PŘÍPRAVA ELEKTROFORETICKÉ ANALÝZY 1. Zapněte přístroj MINICAP a počítač. 2. Pro zahájení práce zařízení umístněte alespoň jednu reagenční nádobku do automatického podávacího systému pro nádobky MINICAP (pokud nádobka není přítomna, zobrazí se zpráva). 3. Nastavte program a zařízení automaticky zahájí analýzu. 4. Sada MINICAP PROTEIN(E) 6 slouží k provádění analýz podle programu "PROTEIN(E) 6" na zařízení MINICAP. Pro volbu programu analýzy "PROTEIN(E) 6" a umístnění lahvičky s pufrem MINICAP PROTEIN(E) 6 do zařízen si přečtěte návod k obsluze zařízení MINICAP. 5. Otočný autosampler má 28 poloh pro umístnění zkumavek se vzorky. Umístněte 28 zkumavek se vzorkem do autosampleru tak, aby první vzorek byl v poloze č. 1. Čárová kód zkumavky musí být vidět v průhledech na otočném autosampleru. DŮLEŽITÉ : Pokud není první zkumavka v poloze č.1 autosampleru, analýze nezačne (zobrazí se zpráva, že v poloze č.1 chybí zkumavka se vzorkem). POZNÁMKA : Pro použití kontrolního séra je nutné použít specifický čárový kód. 6. Novou reagenční nádobku umístněte na automatický podávací systém nádobek MINICAP (pokud bude reagenční nádobka chybět, zobrazí se zpráva). 7. Nový kontejner na použité nádobky umístněte na zařízení MINICAP do míst jeho použití. 8. Zasuňte otočný autosampler do systému MINICAP. 9. Zavřete dvířka systému MINIAP a analýze se automaticky zahájí. 10. Po končení analýzy odstraňte otočný autosampler a již analyzované zkumavky se vzorky. 11. Opatrně vyjměte kontejner obsahující použité reagenční nádobky, pevně jej uzavřete odpovídajícím uzávěrem a vhoďte jej. VAROVÁNÍ : S kontejnery obsahujícími reagenční nádobky s biologickými vzorky se musí nakládat s opatrností. ŘEDĚNÍ - MIGRACE - POPIS AUTOMATIZOVANÝCH ČINNOSTÍ 1. Čárové kódy jak na zkumavce se vzorkem tak na otočném autosampleru jsou načteny. 2. Vzorky jsou naředěny pufrem a vzorkovací sonda je po každém vzorku opláchnuta. 3. Kapiláry jsou promyty. 4. Zředěné vzorky jsou nastříknuty do kapilár. 5. Migrace probíhá za konstantního napětí po dobu 4 minut, při konstantní teplotě a je řízena Peltiérovým jevem. 6. Proteiny jsou detekovány přímo, skenováním při 200 nm a na obrazovce systému se objeví elektroforetický profil. POZNÁMKA : Tyto kroky jsou popsány pro první dvě analyzované zkumavky se vzorky. Výsledky elektroforézy se objeví po 10 minutách. Pro následující zkumavky se vzorky se první dva kroky (čtení čárového kódu a ředění vzorků), provádí během analýzy předchozích dvou vzorků. II. VÝSLEDEK ANALÝZY Ke konci analýzy je automaticky určeno relativní zastoupení jednotlivých zón a mohou být analyzovány profily. Po zadání koncentrace celkové bílkoviny systém vypočítá koncentraci každé frakce. Elektroforetické záznamy jsou interpretovány z hlediska abnormalit vizuálně. Elektroforetické profily jsou vizualizovány pomocí standardního překreslovacího profilu : pak je frakce alfa-1 blíž k albuminu. Standardní technika umožňuje vizualizovat původní křivku s neupravenými údaji. PEČLIVĚ SI PROSTUDUJTE NÁVOD K POUŽITÍ. III. UKONČENÍ SÉRIE ANALÝZ Po ukončení každé série analyzovaných vzorků musí operátor systém MINICAP vypnout nebo přepnout do pohotovostního režimu, aby byly zabezpečeny optimální podmínky pro uložení kapilár. DŮLEŽITÉ : Novou reagenční nádobku umístněte na automatický podávací systém nádobek MINICAP (pokud bude reagenční nádobka chybět, zobrazí se zpráva). IV. PLNĚNÍ REAGENČNÍCH NÁDOB MINICAP automaticky kontroluje přítomnost reagentů. DŮLEŽITÉ : Dodržujte instrukce pro výměnu reagenčních nádob s ohledem na barevný kód pro lahvičky a spojovací části. V případě nezbytného provedení následujících úkonů bude zobrazena zpráva : Vložte novou lahvičku z pufrem a / nebo, Naplňte nádobu pracovním promývacím roztokem a / nebo, Naplňte nádobu filtrovanou destilovanou nebo deionizovanou vodou k vyplachování kapilár a / nebo, Vyprázdněte kontejner s odpadem. VAROVÁNÍ : Nepoužívejte standardně prodávanou deionizovanou vodu, jako např. na žehlení (nebezpečí poškození důležitých kapilár). Používejte výhradně ultračistou vodu, jako je např. voda pro čistoty pro nástřik. DŮLEŽITÉ : Vyplachovací nádobu je před naplněním nutno vymýt větším množstvím destilované nebo deionizované vody. PEČLIVĚ SI PROSTUDUJTE NÁVOD K POUŽITÍ. - 116 -
VÝSLEDKY Kontrola kvality Je doporučováno do každé sekvence zahrnout i kontrolní sérum. Hodnoty Přímá detekce při 200 nm v kapilárách dává relativní koncentrace (procentuální hodnoty) pro jednotlivé proteinové zóny. Normální hodnoty (průměr ± 2 relativní odchylky) pro jednotlivé hlavní elektroforetické zóny systému MINICAP byly zvoleny pomocí 246 sér zdravých dospělých osob (mužů i žen) s normálními hladinami triacylglycerolů : MINICAP PROTEIN(E) 6 Albumin 55.8 66.1 % Alfa-1 globuliny 2.9 4.9 % Alfa-2 globuliny 7.1 11.8 % Beta-1 globuliny 4.7 7.2 % Beta-2 globuliny 3.2 6.5 % Gama globuliny 11.1 18.8 % Doporučuje se, aby každá laboratoř určila své vlastní normální hodnoty. POZNÁMKA : Normální hodnoty byly stanoveny za použití standardních parametrů přístrojového software (vyhlazení 2, automatický posun). Interpretace C4 funkční skupiny migrují mezi zónami beta-1 a beta-2 ; CRP migruje v poloze beta-2, viz. ELEKTROFORETICKÉ VZORY. Relativní nárůst v zóně beta-2 ve srovnání se zónou beta-1 bez rozumného klinického zdůvodnění o onemocnění zánětlivého typu musí být varovným signálem pro provedení dalších srovnávacích měření. Objeví-li se na obrazovce následující varování, může být podezření na výskyt monoklonální složky v séru "Warning : Migration centering is out of range" (Varování : centrování migrace mimo rozsah). Totéž platí v případě opožděného nebo deformovaného elektroforetického typu. Pro potvrzení přítomnosti monoklonální složky v sérovém vzorku je nutné ošetřit vzorek β-merkaptoethanolem a opakovat analýzu vzorku po tomto redukčním zpracování. V takovém případě (i) připravte 1 % β-merkaptoethanol (BME nebo 2-merkaptoethanol, 2 ME) v roztoku Fluidil (SEBIA, kat. č. 4587, 1 lahvička 5 ml), (ii) přidejte 100 µl tohoto redukčního roztoku k 300 µl čistého séra, (iii) promíchejte na vortexu a vyčkejte nejméně 15 minut (a maximálně 30 minut) a potom zopakujte standardní postup. DŮLEŽITÉ : Po redukční úpravě pomocí β-merkaptoethanolu musí být vzorek neprodleně analyzován. V systému MINICAP nesmí žádná poloha čekat na analýzu. Doporučuje se provést identifikaci monoklonálních nebo oligoklonálních složek. - imunotypizací pomocí sady SEBIA CAPILLARYS IMMUNOTYPING nebo, - imunofixací pomocí sad SEBIA HYDRAGEL IF. Pro pomoc při interpretaci výsledků elektroforézy sérových bílkovin, viz LITERATURA. Zóna alfa 2 : V některých vzorcích a v souladu s fenotypem haptoglobinu se může zóna alfa-2 rozštěpit, viz. ELEKTROFORETICKÉ VZORY. Interference a omezení Viz ANALYZOVANÉ VZORKY Lipoproteiny / triglyceridy nebo biliární pigmenty (s charakteristickou žlutozelenou barvou séra) mohou při vysokých koncentracích ve vzorku způsobit podle elektroforetického vzoru zdání bisalbuminemie. Vzhledem k omezené rozlišovací schopnosti a citlivosti zónové elektroforézy je možné, že některé monoklonální komponenty nebudou touto metodou detekovány. V případě hypergammaglobulinemie a v závislosti na pozici polyklonálního pozadí nemusí být monoklonální komponenty detekovány. Pokud se v elektroforetickém vzoru objeví distorze (pozorovaná při vyhlazování 0) je doporučeno provést imunotypickou analýzu vzorku po jeho redukčním úpravě a pokud nejistota trvá potvrdit výsledek imunofixační technikou na agarosový gel. Odstraňování problémů Pokud při dodržení veškerých instrukcí pro přípravu, skladování a provedení testu uvedených v příbalovém letáku testy nevycházejí, kontaktujte technickou podporu společnosti SEBIA. Bezpečnostní listy pro reagenty a informace o zneškodňování odpadu jsou k dispozici prostřednictvím technické podpory dodavatele. ÚDAJE O VÝKONU Výsledky získané metodou MINICAP PROTEIN(E) 6 vykazují velmi dobrou reprodukovatelnost kvantitativní analýzy s průměrem CV% kolem 2,1 % pro každou frakci proteinů. Výsledky uvedené níže byly stanoveny za použití standardních parametrů přístrojového software MINICAP (vyhlazení 2, automatický posun). Reprodukovatelnost mezi sekvencemi a jednotlivými analýzami Čtyři (4) různé vzorky sér byly měřeny na 2 zařízení MINICAP pomocí postupu MINICAP PROTEIN(E) 6 a za použití stejné šarže pufru. Každý vzorek byl měřen pět krát na obou kapilárách obou dvou systémů. Pro každou zónu a šarži byly vypočteny průměry, SD a CV (n = 10). - 117 -
Tabulka ukazuje hodnoty 4 testovaných vzorků, rozdělených na jednotlivé frakce za použití 2 systémů MINICAP. Frakce Albumin Alfa1 Alfa2 Beta 1 Beta 2 Gama Sérum A : systém č. 1 - systém č. 2 PRŮMĚR (%) 59.2-58.6 5.0-5.2 8.6-8.6 4.9-5.1 4.5-4.5 17.8-18.0 SD 0.53-0.74 0.14-0.16 0.28-0.16 0.21-0.15 0.11-0.13 0.29-0.30 CV % 0.9-1.3 2.8-3.0 3.2-1.9 4.3-3.0 2.5-2.9 1.6-1.7 Sérum B : systém č. 1 - systém č. 2 PRŮMĚR (%) 60.7-59.7 3.5-3.6 8.9-9.2 6.7-7.1 5.2-5.0 15.0-15.5 SD 0.55-0.45 0.09-0.10 0.23-0.15 0.18-0.11 0.17-0.15 0.20-0.24 CV % 0.9-0.8 2.7-2.7 2.5-1.6 2.7-1.5 3.3-3.0 1.3-1.6 Sérum C : systém č. 1 - systém č. 2 PRŮMĚR (%) 55.4-54.1 3.6-3.7 10.1-10.5 5.7-5.8 3.8-3.9 21.3-22.1 SD 0.73-0.49 0.14-0.14 0.27-0.16 0.13-0.05 0.11-0.13 0.45-0.25 CV % 1.3-0.9 3.8-3.8 2.7-1.5 2.3-0.9 2.8-3.3 2.1-1.1 Sérum F : systém č. 1 - systém č. 2 PRŮMĚR (%) 60.9-60.9 4.7-4.2 9.0-9.6 6.3-6.2 4.5-4.5 14.6-14.7 SD 0.38-0.46 0.10-0.10 0.21-0.18 0.18-0.13 0.14-0.12 0.20-0.20 CV % 0.6-0.7 2.2-2.5 2.3-1.9 2.9-2.1 3.0-2.7 1.4-1.4 SD MAX 1.2 0.4 0.7 0.7 0.5 0.5 CV (%) MAX 2.0 7.0 7.0 7.0 7.0 4.0 Reprodukovatelnost mezi analýzami Pět (5) různých vzorků sér bylo měřeno deset krát pomocí postupu MINICAP PROTEIN(E) 6 na třech různých systémech MINICAP a s pufrem z jedné šarže. Pro každou zónu a šarži byly vypočteny průměry, SD a CV (n = 10). Tabulka ukazuje limitní hodnoty pro 5 testovaných vzorků na 3 systémech a průměrné CV spočítané z CV každé frakce (n = 15). FRAKCE PRŮMĚR (%) SD CV % PRŮMĚR CV (%) Albumin 52.4-61.1 0.21-0.60 0.4-1.0 0.7 % Alfa1 3.4-4.9 0.06-0.28 1.8-6.6 3.1 % Alfa2 9.1-12.5 0.09-0.29 0.8-3.0 1.4 % Beta 1 5.4-6.7 0.05-0.17 1.0-2.7 1.9 % Beta 2 3.5-6.8 0.04-0.16 1.3-3.7 2.4 % Gama 14.1-18.5 0.06-0.44 0.4-2.4 1.4 % Reprodukovatelnost mezi systémy Pět (5) různých vzorků sér bylo měřeno deset krát pomocí postupu MINICAP PROTEIN(E) 6 na třech různých systémech MINICAP a s pufrem z jedné šarže. Pro každý vzorek, zónu a šarži na 3 systémech byly vypočteny průměry, SD a CV (n = 30). Tabulka ukazuje limitní hodnoty pro 5 testovaných vzorků na 3 systémech a průměrné CV spočítané z CV každé frakce (n = 5). FRAKCE PRŮMĚR (%) SD CV % PRŮMĚR CV (%) Albumin 52.6-60.5 0.39-1.00 0.7-1.7 1.2 % Alfa1 3.5-4.8 0.13-0.31 2.9-7.0 4.4 % Alfa2 9.5-12.2 0.12-0.36 1.0-3.8 2.7 % Beta 1 5.4-6.5 0.10-0.31 1.8-4.9 3.1 % Beta 2 3.7-6.8 0.13-0.21 1.9-5.6 3.7 % Gama 14.2-18.2 0.15-0.45 1.0-3.0 2.0 % Přesnost Různé vzorky patologických a normálních sér (n = 60) byly analyzovány postupem MINICAP PROTEIN(E) 6 a dalším komerčně dostupným systémem používající princip kapilární elektroforézy. Korelační parametry spočítané pro jednotlivé zóny z dat naměřených postupem MINICAP PROTEIN(E) 6 proti srovnávacímu systému kapilární elektroforézy (y = MINICAP PROTEIN(E) 6) byly následující : Frakce Korelační koeficient y-úsek Sklon Rozsah hodnot (%) MINICAP PROTEIN(E) 6 Albumin 0.996 0.046 0.985 37.4-74.0 Alfa1 0.987 0.032 1.012 3.1-13.0 Alfa2 0.993 0.347 1.024 7.8-23.5 Beta 1 0.944 0.686 0.911 3.1-10.2 Beta 2 0.986-0.232 1.035 1.9-14.4 Gama 0.999 0.222 0.986 3.5-34.7-118 -
Citlivost Postupně ředěný vzorek séra s monoklonální bílkovinou o koncentraci 0,103 g/dl byl elektroforeticky analyzován pomocí postupu MINICAP PROTEIN(E) 6. Největší zředění s rozpoznatelným monoklonálním pásem odpovídal hodnotě : 4. nebo koncentraci 26 mg/dl monoklonálního proteinu. POZNÁMKA : V závislosti na umístění monoklonální komponenty a polyklonálního pozadí v gama zóně, se může detekční limit lišit. Linearita Bylo určeno, že test MINICAP PROTEIN(E) 6 je lineární nejméně do hodnoty 5,2 g/dl albuminu a 3,1 g/dl gamaglobulinu. - 119 -
BIBLIOGRAPHIE / BIBLIOGRAPHY 1. Clark R et al. Rapid capillary electrophoretic analysis of human serum proteins : qualitative comparison with high-throughput agarose gel electrophoresis. J. Chromatogr. A, 744, 205-213 (1996). 2. Henskens Y et al. Detection and identification of monoclonal gammopathies by capillary electrophoresis. Clin. Chem., 44, 1184-1190 (1998). 3. Jellum E et al. Diagnostic applications of chromatography and capillary electrophoresis. J. Chromatogr. B, 689, 155-164 (1997). 4. Jenkins MA and Guerin MD. Quantification of serum proteins using capillary electrophoresis. Ann. Clin. Biochem., 32, 493-497 (1995). 5. Jenkins MA et al. Evaluation of serum protein separation by capillary electrophoresis : prospective analysis of 1000 specimens. J. Chromatogr. B, 672, 241-251 (1995). 6. Jenkins MA and Guerin MD. Capillary electrophoresis procedures for serum protein analysis : comparison with established techniques. J. Chromatogr. B, 699, 257-268 (1997). 7. Jenkins MA and Ratnaike S. Five unusual serum protein presentations found by capillary electrophoresis in the clinical laboratory. J. Biochem. Biophys. Methods, 41, 31-47 (1999). 8. Katzmann JA et al. Identification of monoclonal proteins in serum : A quantitative comparison of acetate, agarose gel, and capillary electrophoresis. Electrophoresis, 18, 1775-1780 (1997). 9. Landers JP. Clinical Capillary Electrophoresis. Clin. Chem., 41, 495-509 (1995). 10. Oda RP et al. Capillary electrophoresis as a clinical tool for the analysis of protein in serum and other body fluids. Electrophoresis, 18, 1715-1723 (1997). 11. Wijnen PA and van Dieijen-Visser M. Capillary Electrophoresis of serum proteins : Reproducibility, comparison with agarose gel electrophoresis and a review of the literature. Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 34, 535-545 (1996). 12. Wendling A. Procédures de diagnostic ou de dépistage : Justification et validité d un test de diagnostic ou de dépistage-sensibilité-spécificité. Impact-Internat, 1986 ; Sept : 93-97. - 148 -
SCHÉMAS / FIGURES PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES - ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 1 Albumin Gamma Beta-2 Beta-1 Alpha-2 Alpha-1 Gammaglobulins C3 Complement CRP C4 Complement Transferrin Hemopexin 2-2 Haptoglobin phenotype Alpha-2 macroglobulin Prealbumin Albumin α-lipoproteins preß-lipoproteins ß-lipoproteins Alpha-1 acid glycoprotein Alpha-1 antitrypsin Figure 2 1-1 Haptoglobin phenotype Gamma Beta-2 Beta-1 Alpha-2 Alpha-1 Albumin - 149 -
SCHÉMAS / FIGURES PROFILS ÉLECTROPHORÉTIQUES - ELECTROPHORETIC PATTERNS Figure 3 1-2 Haptoglobin phenotype Gamma Beta-2 Beta-1 Alpha-2 Alpha-1 Albumin - 150 -