MINICAP Hb A1c. Ref /09

Transkript

1 MINICAP Hb A1c Ref /09

2 ÚČEL POUŽITÍ MINICAP Hb A1c /09 Sada MINICAP Hb A1c je navržena pro separaci a kvantifikaci glykolizované frakce hemoglobinu HbA 1c v lidské krvi kapilární elektroforézou v zásaditém tlumivém roztoku (ph 9,4) přístrojem MINICAP FLEX-PIERCING. Přístroj MINICAP FLEX-PIERCING je automatický analyzátor, který provádí kompletní profil hemoglobinu pro kvantitativní analýzu frakce HbA 1c. Hemoglobiny dělené v křemenných kapilárách jsou přímo detekovány absorbancí při 415 nm. Analýza se provádí na hemolyzátu vzorků plné krve odebraných do zkumavek s obsahem K 2 EDTA nebo K 3 EDTA jako antikoagulantu. Kvantitativní stanovení hemoglobinu A 1c je účinným prostředkem při střednědobém sledování krevní glukózy u diabetiků. Postup MINICAP Hb A1c prováděný přístrojem MINICAP FLEX-PIERCING byl certifikován v rámci Národního programu standardizace glykohemoglobinu (National Glycohemoglobin Standardization Program, NGSP). Pro diagnostické použití in vitro. PRINCIP TESTU Glykolování hemoglobinu je neenzymatická reakce mezi glukózou obsaženou v erytrocytech a koncovou N-amino skupinou hemoglobinového ß řetězce. Tato reakce probíhá během celého života červených krvinek. Rychlost vytváření glykolovaného hemoglobinu závisí na glykémii v míře, v jaké koncentrace glukózy v erytrocytech nezávisí na insulinu, ale pouze na glykémii. Hromadí se červených krvinkách během 120 dní jejich života. Hladina glykolovaného hemoglobinu odpovídá "integraci" všech glykemických odchylek během předchozích týdnů. Proto je možné ji použít jako ukazatel kontroly diabetu. Tato kvantifikace umožňuje vyhodnotit střednědobou účinnost léčby. Elektroforéza je dobře zavedená technika běžně používaná v klinických laboratořích pro měření složek v krevních tekutinách, včetně glykolyzované frakce HbA 1c. Přístroj MINICAP FLEX-PIERCING byl vyvinut ke kompletní automatizaci s rychlým dělením a přijatelným rozlišením. Tuto techniku lze z mnoha hledisek zařadit mezi klasickou zónovou elektroforézu a kapalinovou chromatografii. Přístroj MINICAP FLEX-PIERCING používá princip kapilární elektroforézy ve volném roztoku. Elektricky nabité molekuly jsou děleny podle elektroforetické pohyblivosti v alkalickém tlumivém roztoku o určitém ph. Separace je rovněž závislá na ph elektrolytu a elektroosmotickém toku. Zařízení MINICAP FLEX-PIERCING je vybaveno křemennými kapilárami pracujícími paralelně, které umožňují 2 simultánní analýzy kvantifikace HbA 1c ze vzorků plné krve. Ředění vzorku hemolyzačním roztokem je připraveno a nastříknuto aspirací na anodovém konci kapiláry. Potom následuje vysokonapěťové dělení bílkovin a přímá detekce hemoglobinů se provádí na katodovém konci kapiláry při 415 nm, což je vlnová délka absorbance specifická pro hemoglobiny. Kapiláry jsou před každým stanovením promývány promývacím roztokem a promytím tlumivým roztokem připraveny k další analýze. Přímá detekce slouží k přesnému kvantitativnímu určení jednotlivých frakce hemoglobinu A 1c. Kromě toho umožňuje postup MINICAP Hb A1c kvantifikaci HbA 1c, a to dokonce i v přítomnosti labilního HbA 1c, karbamylovaných a acetylovaných hemoglobinů a hlavních variant hemoglobinu. Za využití zásaditého tlumivého roztoku se normální a abnormální (nebo varianty) hemoglobinu detekují v následujícím pořadí od katody k anodě : A2/C, E, S/D, F, A0, jiné Hb (včetně menšího Hb A1) a potom A 1c. REAGENTY A MATERIÁLY DODÁVANÉ V SADĚ MINICAP Hb A1c VAROVANÍ : Viz bezpečnostní listy. POLOŽKY PN 2215 Tlumivý roztok (připravený k použití) 2 lahvičky, 250 ml každá Hemolyzační roztok (připravený k použití) 1 lahvička, 225 ml Promývací roztok (zásobní roztok) 1 lahvička, 25 ml Reagenční nádobky 1 balení po 125 kusech Filtry 3 filtry Kontejnery na použité nádobky 4 kontejnery Štítky s čárovými kódy pro hemolyzační roztok 5 listů po 4 štítcích Během přepravy může být souprava uchována bez zmražení (15 až 30 C) až po dobu 15 dní bez nepříznivého vlivu na vlastnosti. OPTIMÁLNÍ ŘÍZENÍ VYSLEDOVATELNOSTI : Všechna činidla ze stejné sady se musejí používat společně. DOSAŽENÍ OČEKÁVANÝCH VÝKONŮ : Musí se dodržovat pokyny z příbalového letáku. VAROVANÍ : Nepoužívejte standardně prodávanou deionizovanou vodu, jako např. na žehlení (nebezpečí poškození důležitých kapilár). Používejte výhradně ultračistou vodu, jako je např. voda používaná k výrobě injekčních roztoků. 1. TLUMIVÝ ROZTOK Příprava Tlumivý roztok je připraven k použití. Obsahuje : tlumivý roztok s ph 9,4 ± 0,5 ; přídavné látky nezbytně nutné pro optimální provedení, v koncentracích pro člověka neškodných. Tlumivý roztok k analýze HbA 1c kapilární elektroforézou SEBIA NÁVOD - Czech

3 Skladování, stabilita a známky zhoršování Tlumivý roztok skladujte v chladničce (2 až 8 C). Roztok je stabilní do data exspirace vyznačeného na obalu sady nebo na štítku lahvičky tlumivého roztoku. Neskladujte dlouhodobě při pokojové teplotě nebo v blízkosti okna nebo tepelného zdroje. NEZMRAZUJTE. DŮLEŽITÉ : Při skladování při 2-8 C a před použitím je nutné nechat roztok temperovat na pokojovou teplotu. Pro plnou lahvičku to znamená dobu nejméně 3 hodiny. Pokud není tento pokyn dodržován, mohou být ovlivněny výsledky. VAROVANÍ : Nepředehřívejte tlumivý roztok v horké vodě. Po každém použití musí být tlumivý roztok nutně ihned uložen do chladničky (2 až 8 C), pak je stabilní do data exspirace vyznačeného na štítku lahvičky s tlumivým roztokem. Pokud se lahvička s tlumivým roztokem spotřebuje do 20 dnů, může se skladovat při pokojové teplotě. Po otevření lahvičky s roztokem a jejím vložení do přístroje MINICAP FLEX-PIERCING je roztok stabilní při pokojové teplotě (15 až 30 C) nejméně 20 dnů (akumulovaný). DŮLEŽITÉ : Akumulovaný čas skladování tlumivého roztoku při pokojové teplotě nesmí překročit 20 dní. Doba 20 dní zahrnuje i dobu potřebnou pro temperování tlumivého roztoku na pokojovou teplotu. Zředěný tlumivý roztok zlikvidujte, pokud se změní jeho vzhled, například se zakalí v důsledku bakteriální kontaminace. POZNÁMKA : Během skladování může mít tlumivý roztok mírné zabarvení bez jakéhokoli negativního vlivu na jeho vlastnosti. 2. HEMOLYZAČNÍ ROZTOK Příprava Hemolyzační roztok je připraven k použití. Obsahuje : složky nezbytně nutné pro optimální provedení, v koncentracích pro člověka neškodných. K ředění a hemolyzaci celé krve. Skladování, stabilita a známky zhoršování Hemolyzační roztok skladujte při pokojové teplotě (15 až 30 C) nebo v chladničce (2 až 8 C). Roztok je stabilní do data exspirace vyznačeného na obalu sady nebo na štítku lahvičky hemolyzačního roztoku. NEZMRAZUJTE. Hemolyzační roztok zlikvidujte, pokud se změní jeho vzhled, například se zakalí v důsledku bakteriální kontaminace. POZNÁMKA : Během skladování se může barva hemolyzačního roztoku změnit na žlutou, což nemá nepříznivý vliv na jeho vlastnosti. 3. PROMÝVACÍ ROZTOK Příprava Lahvička zásobního promývacího roztoku může být zředěna až do 250 ml destilovanou nebo deionizovanou vodou. Po zředění vznikne promývací roztok obsahující zásaditý roztok ph 12. K promývání kapilár před a po elektroforéze HbA 1c. DŮLEŽITÉ : Před naplněním nádoby na promývací se roztok se doporučuje vymýt otvor nádoby a zkumavku větším množstvím destilované nebo deionizované vody, aby se zabránilo srážení solí. Skladování, stabilita a známky zhoršování Zásobní i pracovní roztok skladujte v uzavřených nádobách při pokojové teplotě nebo v chladničce. Zásobní promývací roztok je stabilní do data exspirace vyznačeného na obalu sady nebo na štítku lahvičky promývacího roztoku. Pracovní promývací roztok je stabilní 3 měsíce. Pracovní promývací roztok zlikvidujte, pokud se změní jeho vzhled, například se zakalí v důsledku mikrobiální kontaminace. 4. REAGENČNÍ NÁDOBKY Nádobky pro jedno použití pro ředění vzorků krve a migraci v automatizovaném zařízení. Umístnění nádobek MINICAP FLEX-PIERCING na automatický podávací systém. Jedna nádobka je zamýšlena pro analýzu dvou vzorků krve. VAROVANÍ : Při manipulaci s reagenčními nádobkami obsahujícími biologické vzorky je třeba si počínat se zvýšenou opatrností. 5. FILTRY Jednorázové filtry k filtraci tlumivého roztoku pro analýzu, pracovního promývacího roztoku a destilované nebo deionizované vody (používá se k vyplachování kapilár). DŮLEŽITÉ : Při výměně soupravy systematicky vyměňte všechny filtry. Při manipulaci a instalaci filtrů noste čisté rukavice. Našroubujte jeden filtr na konektor umístěný na konci každé zkumavky ponořené do lahviček s tlumivým roztokem, promývacím roztokem nebo s deionizovanou vodou. Při vkládání filtrů do přístroje MINICAP FLEX-PIERCING opláchněte konektory a zkumavky destilovanou nebo deionizovanou vodou. Skladování Filtry skladujte v originálních, utěsněných obalech, na suchém místě, při pokojové teplotě nebo v chladničce. 6. KONTEJNERY NA POUŽITÉ NÁDOBKY Kontejnery slouží k automatickému sběru použitých reagenčních nádobek v systému MNICAP FLEX-PIERCING. Umístění v systému MINICAP FLEX- PIERCING v místě zamýšleného použití. VAROVANÍ : S kontejnery obsahujícími reagenční nádobky s biologickými vzorky se musí nakládat s opatrností. 7. ŠTÍTKY S ČÁROVÝMI KÓDY PRO HEMOLYZAČNÍ ROZTOK Štítky pro identifikaci zkumavek obsahujících hemolyzační roztok (HEMOLYZAČNÍ ROZTOK HbA1c)

4 POTŘEBNÉ REAGENTY NEOBSAŽENÉ V BALENÍ MINICAP Hb A1c /09 VAROVANÍ : Viz bezpečnostní listy. 1. KALIBRAČNÍ ROZTOKY Hb A1c CAPILLARY Složení Kalibrační roztoky Hb A1c CAPILLARY (SEBIA, kat. č. 4755) jsou získány ze zásobních vzorků lidské krve. Obsahují stabilizační a konzervační látky pro udržení stability frakcí hemoglobinu. Kalibrační roztoky jsou ve stabilizované lyofilní formě. Kalibrační roztok Hb A1c CAPILLARY 1 představuje normální hladinu HbA 1c a kalibrační roztok Hb A1c CAPILLARY 2 má zvýšenou hladinu HbA 1c. Účel použití Kalibrační roztoky Hb A1c CAPILLARY 1 a 2 jsou určeny ke kalibraci a kontrole migrace lidského glycinem ošetřeného hemoglobinu A 1c při kvantifikaci elektroforetickým postupem MINICAP Hb A1c prováděného na automatickém přístroji MINICAP FLEX-PIERCING na provádění kapilární elektroforézy s cílem dosáhnout výsledky u krevních vzorků pacientů, které jsou srovnatelné se studií DCCT a mají návaznost na referenční systém IFCC. Doporučení pro kalibraci jsou následující : Proveďte 3 po sobě jdoucí série analýz s oběma kalibračními roztoky : - pro první použití programu analýzy "Hb A1c" přístroje MINICAP FLEX-PIERCING ; - po změně kapiláry ; - po změně čísla šarže kalibračních roztoků. Proveďte 1 sérii analýz na obou kalibračních roztocích a potom s 1 ze 2 kontrolních roztoků před zahájením nové posloupnosti analýzy : - po změně čísla šarže tlumivého roztoku pro analýzu ; - po technickém zákroku ; - v případě, že analýzy kontrolních roztoků poskytnou hodnoty HbA 1c mimo očekávané hodnoty (a po potvrzení této odchylky analýzou druhého kontrolního roztoku krve) ; - nejméně každé 2 měsíce. POZNÁMKA : Není zapotřebí kalibrovat přístroj po změně čísla šarže hemolyzačního roztoku. DŮLEŽITÉ : - Pro optimální použití každého kalibračního roztoku Hb A1c CAPILLARY s přístrojem MINICAP FLEX-PIERCING je nezbytné použít jednu specifickou zkumavku navrženou pro krevní kontrolní roztoky a odpovídající víčko ("POŽADOVANÉ VYBAVENÍ A PŘÍSLUŠENSTVÍ", Zkumavky a víčka pro kontrolní roztoky) a označte tuto zkumavku odpovídajícím štítkem s čárovým kódem kalibračního roztoku. - Pro účinnou kalibraci je nezbytně nutné analyzovat oba kalibrační roztoky : pořadí analýzy obou kalibračních roztoků se může měnit, ale musí být analyzovány týž pracovní den. - Nařeďte každou lahvičku s lyofilizovaným roztokem kalibračního roztoku Hb A1c CAPILLARY Calibrator 1 a 2 přesným objemem destilované nebo deionizované vody a postupem uvedeným v příbalovém letáku kalibračních roztoků Hb A1c CAPILLARY Calibrator. Lehce promíchejte lahvičku kalibračního roztoku, aby se rozpustila lyofilizovaná krve, přičemž by žádná kapalina neměla přijít do kontaktu s víčkem. Nechte 30 minut stát při teplotě 2-8 C a lehce zamíchejte (zamezte tvorbu pěny). POZNÁMKA : Přesnost rekonstituovaného objemu by měla být udržována v rozmezí ± 1,0 %. - Každý rozpuštěný kalibrační roztok použijte ve zkumavce určené pro kontrolní roztok krve. - Zavřete zkumavku víčkem. - Označte zkumavku štítkem se specifickým čárovým kódem kalibračního roztoku. - Analýza každého kalibračního roztoku musí být prováděna stejným postupem, jaký je popsán níže. - Pro každý kalibrační roztok umístěte zkumavku (identifikovanou čárovým kódem kalibračního roztoku), do pozice č. 28 v otočném automatického podavače vzorků systému MINICAP FLEX-PIERCING (pozice "kontrola" se středovým kroužkem). - Nalijte 5 ml hemolyzačního roztoku MINICAP Hb A1c do hemolyzační zkumavky (označené štítkem se stejným čárovým kódem hemolyzačního roztoku), bez vzduchových bublin a umístěte ji do pozice č. 27 v otočném automatického podavače vzorků (pozice "ředicího roztoku / roztoku" bez středového kroužku) (pokud zkumavka nebo hemolyzační roztok chybí, zobrazí se zpráva). DŮLEŽITÉ : Ověřte, že se nevytvořila žádná pěna dříve, než vložíte zkumavku do otočného automatického podavače vzorků. - Nedávejte žádnou zkumavku do pozic č. 1 až 26 v otočném automatického podavače vzorků. - Zasuňte otočný automatický podavač vzorků do přístroje MINICAP FLEX-PIERCING. - Zavřete dvířka systému MINICAP FLEX-PIERCING, analýza se automaticky spustí. - Do okna, které se zobrazí na obrazovce, zadejte parametry analyzovaného kalibrátoru, uvedené v příbalovém letáku kontrolních roztoků Hb A1c CAPILLARY : hladinu HbA 1c v mmol/mol, číslo šarže a datum exspirace, zvolte počet analýz kalibrátoru, které se mají provést podle výše popsaných označeních, a validujte. POZNÁMKA : Koncentrace HbA 1c je uvedena v jednotce IFCC (mmol/mol). VAROVANÍ : Nezadávejte hladinu HbA 1c v procentech. - Výsledky jsou potom automaticky vyhodnoceny softwarem pro analýzu dat. - Jakmile se objeví okno označující vyjmutí zkumavky, vyjměte zkumavku s kalibračním roztokem z pozice č Po dokončení analýzy prvního kalibračního roztoku proveďte stejně analýzu druhé kalibračního roztoku. VAROVANÍ : Po zavření dvířek přístroje se spustí analýza druhého kalibračního roztoku : - čekejte, dokud přístroj nezkontroluje nepřítomnost zkumavky v pozici č. 1, - klikněte na blikající tlačítko pro otevření okna "Informačních zpráv", ukazujícího nepřítomnost zkumavky v pozici č. 1, - zavřete okno "Informačních zpráv", - tlačítkem "Klepnutí pro spuštění kontroly na pozici 28" spusťte analýzu

5 DŮLEŽITÉ : Pro nejlepší použití kalibračního roztoku Hb A1c CAPILLARY je nutné použít jeden štítek s čárovým kódem pro identifikaci zkumavky, která obsahuje kalibrační roztok (před použitím zavřete zkumavku specifickým víčkem). Software zobrazí hodnotu HbA 1c pro oba kalibrační roztoky, které byly zadané operátorem. Skladování, stabilita a známky zhoršování Viz příbalový leták kalibračních roztoků Hb A1c CAPILLARY. VAROVANÍ : Žádná zkušební metoda nemůže poskytnout absolutní důkaz o nepřítomnosti HIV, hepatitidy B nebo C a dalších infekčních činitelů. S kalibračními roztoky Hb A1c CAPILLARY je proto nutné zacházet jako s nebezpečným biologickým materiálem. Tyto šarže krví jsou negativní na základě zkoušek schválené FDA nebo ekvivalentním regulatorním orgánem EU : - proti povrchovému antigenu hepatitidy B ; - na protilátky k HCV ; - na protilátky k HIV1 a HIV2. 2. VÍCENÁSOBNÝ SYSTÉM KONTROLNÍ ROZTOKY Hb A1c CAPILLARY (2) Složení Kontrolní roztoky Hb A1c CAPILLARY 1 a 2 jsou určeny ke kontrole migrace a kvality lidského glycinem ošetřeného hemoglobinu A 1c při kvantifikaci elektroforetickým postupem MINICAP Hb A1c prováděným na automatickém přístroji MINICAP FLEX-PIERCING na provádění kapilární elektroforézy. Získané hodnoty musí být v rozsahu poskytnutém pro každou šarži. Účel použití Kontrolní roztoky Hb A1c CAPILLARY 1 a 2 jsou určeny ke kontrole kvality lidského glycinem ošetřeného hemoglobinu A 1c při kvantifikaci elektroforetickým postupem MINICAP Hb A1c prováděného na automatickém přístroji MINICAP FLEX-PIERCING na provádění kapilární elektroforézy. Získané hodnoty musí být v rozsahu poskytnutém pro každou šarži. DŮLEŽITÉ : Pro optimální použití každého kontrolního roztoku Hb A1c CAPILLARY s přístrojem MINICAP FLEX-PIERCING je nezbytné použít jednu specifickou zkumavku navrženou pro krevní kontrolní roztoky a odpovídající víčko ("POŽADOVANÉ VYBAVENÍ A PŘÍSLUŠENSTVÍ", Zkumavky a víčka pro kontrolní roztoky) a označte tuto zkumavku odpovídajícím štítkem s čárovým kódem. Určení vlastních hodnot pro kontrolní roztoky Hb A1c MINICAP : Každá laboratoř si musí stanovit hodnoty pro kontrolní roztoky Hb A1c CAPILLARY 1 a 2, které jsou specifické pro automatický přístroj MINICAP FLEX- PIERCING postupem uvedeným v příbalovém letáku kontrolních roztoků Hb A1c CAPILLARY. VAROVANÍ : Vždy se musí provést určení kontrolních hodnot : - po první kalibraci přístroje MINICAP FLEX-PIERCING, - po výměně jedné nebo obou kapilár, - po změně čísla šarže kalibračních nebo kontrolních roztoků. Každý kontrolní roztok musí být analyzován 3krát v poloze č. 28, viz příbalový leták kontrolních roztoků Hb A1c CAPILLARY. Kontrola kvality : Doporučení provést analýzu jednoho nebo dvou kontrolních roztoků na obou kapilárách jsou následující : - po aktivaci kapilár ; - po každé kalibraci přístroje provedené pomocí kalibračních roztoků Hb A1c CAPILLARY ; - po sekvenci čištění kapilár roztokem CAPICLEAN ; - před zahájením nové posloupnosti analýzy ; - po analýze celého automatického podavače vzorků při střídání kontrolních roztoků Hb A1c CAPILLARY 1 a 2 v testovacích laboratořích s vysokými objemy. Nařeďte každou lahvičku s lyofilizovaným roztokem kontrolního roztoku Hb A1c CAPILLARY Control 1 a 2 přesným objemem destilované nebo deionizované uvedeným v příbalovém letáku kontrolních roztoků Hb A1c CAPILLARY Control. Nechte 30 minut stát a lehce zamíchejte (zamezte tvorbě pěny). POZNÁMKA : Přesnost rekonstituovaného objemu by měla být udržována v rozmezí ± 1,0 %. Každý rozpuštěný kontrolní roztok použijte ve zkumavce určené pro kontrolní roztok krve. Zavřete zkumavku víčkem. Označte zkumavku štítkem se specifickým čárovým kódem kontrolního roztoku. Analýza každé kontroly musí být prováděna stejným postupem, jaký je popsán níže. Pro každou kontrolu umístěte zkumavku (identifikovanou štítkem s čárovým kódem kontrolního roztoku) do pozice č. 28 v otočném automatického podavače vzorků systému MINICAP FLEX-PIERCING (pozice "kontrola" se středovým kroužkem). Nalijte 5 ml hemolyzačního roztoku MINICAP Hb A1c do hemolyzační zkumavky (označené štítkem se stejným čárovým kódem hemolyzačního roztoku), bez vzduchových bublin a umístěte ji do pozice č. 27 v otočném automatického podavače vzorků (pozice "ředicího roztoku / roztoku" bez středového kroužku) (pokud zkumavka nebo hemolyzační roztok chybí, zobrazí se zpráva). DŮLEŽITÉ : Ověřte, že se nevytvořila žádný pěna dřív, než vložíte zkumavku do otočného automatického podavače vzorků. Zasuňte otočný automatický podavač vzorků do přístroje MINICAP FLEX-PIERCING. Zavřete dvířka systému MINICAP FLEX-PIERCING, analýza se automaticky spustí. V okně, které se objeví na obrazovce, vyberte pro provedení a ověření počet analýz Hb A1c CAPILLARY. Výsledky jsou potom automaticky vyhodnoceny softwarem pro analýzu dat. Jakmile se objeví okno označující vyjmutí zkumavky, vyjměte zkumavku s kontrolním roztokem z pozice č

6 Podle téhož postupu proveďte analýzu druhého kontrolního roztoku. VAROVANÍ : Po zavření dvířek přístroje, když probíhá analýza druhého kontrolního vzorku krve v týž den jako analýza prvního kontrolního vzorku krve, spusťte tuto analýzu tlačítkem "Klepnutí pro spuštění kontroly na pozici 28". Nedávejte žádnou zkumavku do pozic č. 1 až 26 v otočném automatického podavače vzorků. Zkontrolujte hladiny koncentrací a procenta frakce HbA 1c získané z analýzy kontrolních roztoků s určenými uživatelskými hodnotami přístroje. Musí být v rozmezí stanoveném pro každou šarži. Pokud nikoli, proveďte novou kalibraci přístroje kalibračními roztoky Hb A1c CAPILLARY Calibrator (viz odstavec "Kalibrační roztoky Hb A1c CAPILLARY Calibrator"). POZNÁMKA : Koncentrace HbA 1c zobrazená softwarem je uvedena v mmol/mol bez jakéhokoli desetinného místa v souladu s doporučením IFCC. Desetinná místa jsou však zvažována při charakterizaci vzorku (jako normální vzorek nebo vzorek se zvýšenou hladinou HbA 1c ), statistice a Levey Jenningsově grafech. DŮLEŽITÉ : Pro nejlepší použití kontrolního roztoku Hb A1c CAPILLARY Control je nutné použít jeden štítek s čárovým kódem pro identifikaci zkumavky, která obsahuje kontrolní roztok krve (před použitím zavřete zkumavku specifickým víčkem). Skladování, stabilita a známky zhoršování Viz příbalový leták kontrolních roztoků Hb A1c CAPILLARY Control 1 a 2. VAROVANÍ : Žádná zkušební metoda nemůže poskytnout absolutní důkaz o nepřítomnosti HIV, hepatitidy B nebo C a dalších infekčních činitelů. Proto je nutné zacházet s kontrolními roztoky Hb A1c CAPILLARY Control jako s nebezpečným biologickým materiálem. Tyto šarže krví jsou negativní na základě zkoušek schválené FDA nebo ekvivalentním regulatorním orgánem EU : - proti povrchovému antigenu hepatitidy B ; - na protilátky k HCV ; - na protilátky k HIV1 a HIV2. 3. DESTILOVANÁ NEBO DEIONIZOVANÁ VODA K vyplachování kapilár v automatickém přístroji MINICAP FLEX-PIERCING, SEBIA, pro kapilární elektroforézu. Je doporučeno používat filtrovanou, destilovanou nebo deionizovanou vodu (na filtr o porozitě 0,45 μm) a s vodivostí nižší než 3 µs/cm, což odpovídá rezistivitě vyšší než 0,33 MΩ x cm. Vodu je nutno denně měnit, aby nedošlo k mikrobiální kontaminaci. Pro nejlepší provoz přidejte 35 μl/dl roztoku CLEAN PROTECT (SEBIA, KAT. Č. 2059, 1 lahvička o objemu 5 ml), do destilované nebo deionizované vody nebo použijte přímo roztok CAPIprotect připravený k použití (SEBIA, KAT. Č : 2 nádoby o objemu 5 L destilované vody s CLEAN PROTECT). DŮLEŽITÉ : Před naplněním se doporučuje vyplachovací nádobu vymýt větším množstvím destilované nebo deionizované vody. 4. MINICAP FLEX-PIERCING CAPICLEAN Složení Lahvička koncentrovaného roztoku CAPICLEAN ((MINICAP FLEX-PIERCING CAPICLEAN, SEBIA, kat. č. 2251, 25 ml) obsahuje proteolytické enzymy, povrchově aktivní činidla a aditiva, která nejsou nebezpečná v používaných koncentracích, nezbytných pro optimální výkon. K čištění vzorkovací sondy v automatickém přístroji SEBIA MINICAP FLEX-PIERCING pro kapilární elektroforézu během čištění CAPICLEAN. DŮLEŽITÉ : Čisticí sekvenci CAPICLEAN spusťte alespoň jednou týdně a nejvýše jednou denně nebo po každých 500 analýzách, pokud jsou provedeny za méně než jeden týden. Viz návod k MINICAP FLEX-PIERCING CAPICLEAN, SEBIA. VAROVANÍ : Nepoužívejte zavíčkovanou zkumavku. DŮLEŽITÉ : Pro správné použití roztoku CAPICLEAN v přístroji MINICAP FLEX-PIERCING je nutné použít jeden čárový kód určený pro označení 100 mm zkumavky, která obsahuje naředěný roztok CAPICLEAN. Skladování, stabilita a známky zhoršování Roztok CAPICLEAN skladujte v chladničce (2 až 8 C). Je stabilní do data exspirace vyznačeného na štítku lahvičky. NEZMRAZUJTE. V lahvičce roztoku CAPICLEAN může být vidět sraženina nebo částice spojené v suspenzi (vločky) bez nežádoucích účinků na jeho použitelnost. Nerozpouštějte tuto sraženinu ani částice. Doporučuje se shromáždit pouze supernatant. Pro pozdější použití skladujte zkumavku s naředěným roztokem při teplotě 2-8 C. Musí se použít během jednoho dne. 5. ROZTOK CHLORNANU SODNÉHO (k čištění vzorkovací sondy) Příprava Připravte 9 chlorovaný roztok chlornanu sodného (2 až 3 % chlorid) naředěním 250 ml 9,6 % chlorovaného koncentrovaného roztoku v 1 litru studené destilované nebo deionizované vody. Pro čištění vzorkovací sondy přístroje MINICAP FLEX-PIERCING (týdenní údržba pro odstranění proteinů nasorbovaných na sondu ze vzorku). Viz návod k systému SEBIA MINICAP FLEX-PIERCING. VAROVANÍ : Nepoužívejte zavíčkovanou zkumavku. Aplikujte do 100 mm zkumavky 2 ml zředěného dříve připraveného chlorovaného roztoku. Umístěte 100 mm zkumavku (se stejným čárovým kódem jako roztok chlornanu sodného) na otočný autosampler přístroje MINICAP FLEX- PIERCING. Novou reagenční nádobku umístěte na automatický podávací systém nádobek MINICAP (pokud bude reagenční nádobka chybět, zobrazí se zpráva)

7 Zasuňte otočný automatický podavač vzorků do přístroje MINICAP FLEX-PIERCING. Zavřete dvířka systému MINICAP FLEX-PIERCING, čisticí sekvence se automaticky spustí. DŮLEŽITÉ : Pro správné použití roztoku chlornanu sodného v přístroji MINICAP FLEX-PIERCING je nutné použít jeden čárový kód určený k označení 100 mm zkumavky, která obsahuje roztok. Skladování, stabilita a známky zhoršování Pracovní chlorovaný roztok skladujte v uzavřené nádobě při teplotě místnosti. Roztok je stabilní 3 měsíce. Roztok neskladujte na slunečním světle, blízko tepelného nebo zápalného zdroje, kyselin a amoniaku. 6. PROMÝVACÍ ROZTOK CAPILLARYS / MINICAP Příprava Každá lahvička promývacího roztoku CAPILLARYS / MINICAP (SEBIA, kat č. 2052, 2 lahvičky, 75 ml) může být zředěna destilovanou nebo deionizovanou vodou na 750 ml. Po zředění vznikne promývací roztok obsahující zásaditý roztok ph 12. Pro systém MINICAP FLEX-PIERCING je vhodné naředit pouze 25 ml zásobního roztoku destilovanou nebo deionizovanou vodou na 250 ml. Pro promývání kapilár systému MINICAP FLEX-PIERCING. DŮLEŽITÉ : Před naplněním nádoby na promývací se roztok se doporučuje vymýt otvor nádoby a zkumavku větším množstvím destilované nebo deionizované vody, aby se zabránilo srážení solí. Skladování, stabilita a známky zhoršování Zásobní i pracovní roztok skladujte v uzavřených nádobách při pokojové teplotě nebo v chladničce. Zásobní promývací roztok je stabilní do data exspirace vyznačeného na obalu sady nebo na štítku lahvičky promývacího roztoku. Pracovní promývací roztok je stabilní 3 měsíce. Pracovní promývací roztok zlikvidujte, pokud se změní jeho vzhled, například se zakalí v důsledku mikrobiální kontaminace. POZNÁMKY : Zkoušky provedené pro ověření reagentů prokázaly, že pro různé roztoky a použití přizpůsobeného vybavení pro rekonstituci objemu, nemají odchylky objemu ± 5 % z konečného objemu vliv na výsledek analýzy. Destilovaná nebo deionizovaná voda používaná k ředění roztoků musí být prostá bakteriální proliferace a plísní (použijte filtr 0,45 µm) a musí mít vodivost nižší než 3 µs/cm, což odpovídá rezistivitě vyšší než 0,33 MΩ x cm. POTŘEBNÉ VYBAVENÍ A PŘÍSLUŠENSTVÍ 1. Přístroj MINICAP FLEX-PIERCING, SEBIA, PN Aktualizovaná sada HbA1c pro MINICAP FLEX-PIERCING, SEBIA, PN Otočný automatický podavač vzorků dodávaný se systémem MINICAP FLEX-PIERCING vybavený středovými kroužky pro MINICAP FLEX-PIERCING (specifické pro postup MINICAP Hb A1c) pro zkumavky s průměrem 13 mm. 4. Středové kroužky MINICAP FLEX-PIERCING pro zkumavky s průměrem 11 mm, SEBIA (27 jednotek), PN Sada nádobek dodávaná se systémem MINICAP FLEX-PIERCING : Promývací nádobka (na destilovanou či deionizovanou vodu) a nádobka na odpad. 6. Odběrné zkumavky s průměrem 13 mm s odpovídajícími víčky (maximální délka zkumavky s víčkem : 100 mm, maximální průměr víčka : 17 mm) : například zkumavky BD Vacutainer, Terumo Venosafe 5 ml, Greiner Bio-One Vacuette 1, 2, 3 nebo 4 ml nebo zkumavky Sarstedt S-Monovette 4 ml (13 x 75 mm), nebo odběrné zkumavky s průměrem 11 mm s odpovídajícími víčky (maximální délka zkumavky s víčkem : 100 mm, maximální průměr víčka : 17 mm) : například zkumavky Sarstedt S-Monovette 2,7 ml nebo Kabe Labortechnik Primavette S 2,6 ml (11 x 66 mm), nebo zkumavky s ekvivalentními rozměry schválené pro klinické analýzy. 7. Zkumavky a víčka pro kontrolní roztoky, SEBIA, PN 9202 (20 jednotek) nebo PN 9205 (500 jednotek) : kónické zkumavky s víčky pro analýzu kalibračních roztoků, kontrolních roztoků krve a konkrétních vzorků (s objemem do 1 ml) na přístroji MINICAP FLEX-PIERCING. 8. Hemolyzační zkumavky (o průměru 8 až 16 mm a délce 50 až 100 mm). 9. Štítky s čárovým kódem "AUTOMATIC LOW VOLUME" (Automatický, nízký objem), SEBIA (20 kusů), kat. č : štítky jsou určeny pro identifikaci vzorků s objemem nižším než 1 ml pro analýzu v režimu "automatického ředění". 10. Štítky s čárovým kódem "MANUAL LOW VOLUME" (Ruční, nízký objem), SEBIA (20 kusů), kat. č : štítky jsou určeny pro identifikaci vzorků s objemem nižším než 1 ml pro analýzu v režimu "ručního ředění". 11. Reagenční nádobky MINICAP / 125 (3), SEBIA, kat. č Víčka na kontejnery na použité nádobky činidel, SEBIA (12 kusů), kat. č : víka na uzavírání kontejnerů s použitými nádobkami. VZORKY PRO ANALÝZU Odběr a skladování vzorků Pro analýzu jsou doporučeny čerstvě antikoagulované vzorky plné krve odebrané do zkumavek s obsahem K 2 EDTA nebo K 3 EDTA jako antikoagulantu. Odběr krve musí být v souladu se zavedenými postupy používanými pro testování v klinických laboratořích. Vzorky lze uchovávat maximálně 7 dní při teplotách mezi 2 C a 8 C nebo maximálně 18 hodin při pokojové teplotě (mezi 15 a 30 C). Na delší skladování by měly být vzorky zmražené na - 70 / - 80 C do 8 hodin po odběru bez jakékoli přípravy. Vzorky plné krve jsou při - 70 / - 80 C stabilní 3 měsíce. DŮLEŽITÉ : Krevní vzorky se optimálně skladují při - 70 / - 80 C. Neskladujte při - 20 C

8 Příprava vzorků Použijte přímo vzorky plné krve. Zkontrolujte, že všechny zkumavky obsahují minimálně 1 ml krve a jsou dobře uzavřeny. Krevní vzorky skladované při teplotě 2-8 C jeden týden nebo při - 70 / - 80 C míchejte 5 s (na vortexu). VAROVANÍ : Zkumavky musí být uzavřeny odpovídajícími víčky určenými pro postup MINICAP Hb A1c v přístroji MINICAP FLEX-PIERCING (viz POTŘEBNÉ VYBAVENÍ A PŘÍSLUŠENSTVÍ). Zvláštní případy : DŮLEŽITÉ : Následující vzorky musí být označeny štítkem s čárovým kódem "LOW VOLUME AUTO" nebo "LOW VOLUME MANUAL" ; tyto štítky umožňují, aby přístroj použil příslušný režim automatického nebo ručního ředění podle postupu přípravy vzorku. Tyto vzorky musí být umístěny do otočného automatického podavače vzorků na počátku série analýz tak, aby byl čárová kód každé zkumavky vidět v průhledech na otočném automatického podavače vzorků. Bez štítku s čárovým kódem by mohly být ovlivněny výsledky analýzy. Analýza vzorků s objemem pod 1 ml : - Míchejte vzorek plné krve na vortexu po dobu 5 sekund a připravte vzorek podle jeho objemu podle jednoho ze 2 protokolů. 1. Objem vzorku je od 200 µl do 1 ml : - Naneste nejméně 200 µl plné krve k analýze do kónické zkumavky na kontrolní roztok (označené štítkem s čárovým kódem "LOW VOLUME AUTO") a zkumavku zavíčkujte. - Dejte zkumavku na automatický podavač vzorků přístroje MINICAP FLEX-PIERCING na začátku série analýz a zasuňte automatický podavač vzorků do přístroje, abyste začali analýzu bez jakékoli prodlevy. - Zavřete dvířka systému MINICAP FLEX-PIERCING, analýza se automaticky spustí. nebo 2. Objem vzorku pod 200 µl : - Naneste nejméně 50 µl plné krve k analýze do kónické zkumavky na kontrolní roztok (označené štítkem s čárovým kódem "LOW VOLUME AUTO") a 250 µl hemolyzačního roztoku MINICAP Hb A1c a zkumavku zavíčkujte. - Míchejte (na vortexu) po dobu 5 sekund. - Dejte zkumavku na automatický podavač vzorků přístroje MINICAP FLEX-PIERCING na začátku série analýz a zasuňte automatický podavač vzorků do přístroje, abyste začali analýzu bez jakékoli prodlevy. - Zavřete dvířka systému MINICAP FLEX-PIERCING, analýza se automaticky spustí. Výsledky jsou potom automaticky vyhodnoceny softwarem pro analýzu dat. POZNÁMKY : Minimální objem vzorku k analýze v konické zkumavce je 200 µl. Bez štítku s čárovým kódem na kónické zkumavce nemůže být vzorek identifikován a režim ředění (automatický nebo manuální podle postupu přípravy vzorku) se nemůže použít. Vzorky, které není vhodné používat Vyvarujte se koagulovaným krevním vzorkům. Nepoužívejte staré, nevhodně skladované krevní vzorky ; automatická hemolýza vzorků by mohla být narušena viskózními shluky červených krvinek. Rozkladné produkty (nebo jejich zbytky) by potom mohly ovlivnit elektroforetický záznam : další frakce při analýze takových vzorků může migrovat zejména do polohy Hb A2 nebo více k anodické straně než Hb A0 (v poloze "jiné než Hb A"). V těchto 2 předchozích případech by shluky červených krvinek mohly ovlivnit odběr vzorku sondou. Neanalyzujte přímo zkumavky obsahující méně než 1 ml krevního vzorku, protože by mohla být ovlivněna analýza (viz konkrétní případy). POSTUP Systém MINICAP FLEX-PIERCING je multiparametrické zařízení určené k analýze hemoglobinů v paralelních kapilárách. Zkouška hemoglobinů používá pro analýzu vzorků 2 kapiláry. Sekvence automatizovaných kroků je následující : Načtení čárového kódu (až 26 zkumavek) otočného automatického podavače vzorků a zkumavek se vzorkem (až pro 26 zkumavek) ; Míchání vzorků krve před analýzou ; Hemolýza vzorku a zředění pro primární zkumavky v reagenčních nádobkách ; Promytí kapilár ; Injekce hemolyzovaných vzorků ; Dělení hemoglobinu a přímá detekce rozdělených hemoglobinů v kapilárách. Manuální kroky zahrnují : Vložení zkumavek se vzorky (s víčky) do stojanů otočného automatického podavače vzorků v pozicích 1 až 26 ; Vložení nezavíčkované zkumavky s hemolyzačním roztokem do otočného automatického podavače vzorků do pozice 27 ; Vložení kalibračních a kontrolních roztoků Hb A1c do pozice 28 v otočném automatického podavače vzorků ; Vložení otočného automatického podavače vzorků do zařízení MINICAP FLEX-PIERCING ; Odstranění zkumavek se vzorky po analýze ; Odstranění a uzavření kontejnerů s použitými nádobkami. PEČLIVĚ SI PROSTUDUJTE NÁVOD K POUŽITÍ PRO MINICAP FLEX-PIERCING

9 I. PŘÍPRAVA ANALÝZY MINICAP 1. Zapněte přístroj MINICAP FLEX-PIERCING a počítač. 2. Aby se přístroj spustil, umístěte alespoň jednu novou reagenční nádobku do automatického podávacího systému nádobek MINICAP FLEX- PIERCING (pokud není nádobka přítomna, zobrazí se zpráva). 3. Nastavte program a přístroj se automaticky spustí. 4. Sada MINICAP Hb A1c slouží k provádění analýz podle programu "Hb A1c" na přístroji MINICAP FLEX-PIERCING. Pro volbu programu analýzy "Hb A1c" a umístnění lahvičky s tlumivým roztokem MINICAP Hb A1c v pozici "B2" v zařízení si přečtěte pozorně návod k obsluze zařízení MINICAP FLEX-PIERCING a postupujte dle pokynů zobrazených na obrazovce. 5. Novou reagenční nádobku umístěte do automatického podávacího systému nádobek MINICAP FLEX-PIERCING (pokud bude reagenční nádobka chybět, zobrazí se zpráva). 6. Nový kontejner na použité nádobky umístěte na zařízení MINICAP FLEX-PIERCING do míst určených k tomuto účelu. 7. Zkontrolujte hladinu náplně reagenčních nádobek a pokud je to nutné, doplňte činidlo a vyprázdněte odpadní nádobu. V okně "Kontrola hladiny činidel", aktualizujte software posunutím tlačítek kurzoru. 8. Otočný automatický podavač vzorků má 28 pozic pro umístnění zkumavek se vzorkem : Vložte až 26 zavíčkovaných zkumavek se vzorkem plné krve do otočného automatického podavače vzorků se specifickými středovými kroužky (polohy č. 1 až 26), musí být vidět čárový kód každé zkumavky v otevřeném otočném automatického podavače vzorků. Nalijte hemolyzační roztok MINICAP Hb A1c do nezavíčkované hemolyzační zkumavky označené štítkem s čárovým kódem hemolyzačního roztoku, aniž by došlo ke vniknutí vzduchových bublin : 2 ml pro analýzu 1 nebo 2 vzorků, 5 ml pro analýzu 12 vzorků. Dejte tuto zkumavku do polohy č. 27 bez středového kroužku v rotačním automatického podavače vzorků (poloha "ředicího roztoku / roztoku"). POZNÁMKA : 5 ml hemolyzačního roztoku použitého ve zkumavce 13 x 75 mm umožňuje provádět 12 analýz ; 10 ml hemolyzačního roztoku použitého ve zkumavce 16 x 100 mm umožňuje provést 24 analýz. DŮLEŽITÉ : Ověřte, že se nevytvořila žádný pěna dřív, než vložíte zkumavku do otočného automatického podavače vzorků. Do polohy č. 28 v rotačním automatického podavače vzorků (pozice pro "kontrolu") vložte jeden ze 2 kontrolních roztoků Hb A1c Capillary a zvolte počet analýz, které se mají provést, podle dříve popsaných indikací, viz oddíl "kontrolní roztoky Hb A1c Capillary", část "kontrola kvality". DŮLEŽITÉ : Chybí-li zkumavka v poloze č. 1 (zkumavka se vzorkem), v poloze č. 27 (hemolysing solution tube) zkumavka s hemolyzačním roztokem) a v poloze č. 28 (zkumavka s kontrolní krví), analýzu se nespustí a zobrazí se zpráva. POZNÁMKA : Pro použití kontrolní krve nebo kalibračního roztoku je nutné použít specifický čárový kód. 9. Zasuňte otočný automatický podavač vzorků do přístroje MINICAP FLEX-PIERCING. 10. Zavřete dvířka systému MINICAP FLEX-PIERCING, analýza se automaticky spustí. 11. Po skončení analýzy vyjměte otočný automatický podavač vzorků a s analyzovanými zkumavkami se vzorky. 12. Pokud je to nutné, opatrně vyjměte kontejner obsahující použité reagenční nádobky, pevně jej uzavřete odpovídajícím uzávěrem a vyhoďte jej. VAROVANÍ : Při manipulaci s kontejnery obsahujícími reagenční nádobky s biologickými vzorky je třeba si počínat se zvýšenou opatrností. ŘEDĚNÍ - MIGRACE - POPIS AUTOMATICKÝCH KROKŮ 1. Načtou se čárové kódy na otočném automatického podavače vzorků a na zkumavkách se vzorkem. 2. Míchání zkumavek. 3. Vzorky jsou naředěny hemolyzačním roztokem a vzorkovací sonda je po každém vzorku opláchnuta. 4. Kapiláry jsou promyty. 5. Zředěné vzorky jsou nastříknuty do kapilár. 6. Migrace probíhá za konstantního napětí po dobu asi 9 minut a teplota se ovládá Peltiérovým jevem. 7. Hemoglobiny se detekují přímo, skenováním při 415 nm a na obrazovce systému se objeví elektroforetický profil. POZNÁMKA : Tyto automatizované kroky jsou popsány pro první dvě analyzované zkumavky se vzorky. Záznamy z elektroforézy se objeví asi za 20 minut po spuštění analýzy. Pro následující zkumavky se vzorky se první tři kroky (čtení čárového kódu, míchání a hemolýza vzorků krve), provádí během analýzy předchozích dvou vzorků. II. VÝSLEDEK ANALÝZY Ke konci analýzy je automaticky určeno relativní zastoupení frakce HbA 1c. Koncentrace HbA 1c jsou standardizované a uvedené v procentech (s jedním desetinným místem) a v mmol/mol (bez jakéhokoli desetinného místa) v souladu s doporučeními IFCC (Ragnar Hanas et al, 2010). POZNÁMKA : Protože je vzorek charakterizován jako normální nebo se zvýšenou hladinou HbA1c na základě skutečné hodnoty koncentrace HbA 1c v mmol/mol (celé číslo vypočtené pro analýzu dat přístrojem), může se objevit nesoulad pro hladiny HbA 1c blízko mezní hodnoty. Identifikace normálních krevních vzorků a vzorků krve se zvýšeným HbA 1c je prováděna automaticky a profily je možné rozpoznat v okně křivky podle záznamů modrou čarou pro normální vzorky a oranžovou barvou pro vzorky se zvýšeným HbA 1c : - Normální krevní vzorky s "normální" koncentrací HbA 1c nižší nebo rovnou 42 mmol/mol (6,0 %) jsou označeny modrou barvou. - Krevní vzorky se zvýšenou koncentrací HbA 1c vyšší než 42 mmol/mol (6,0 %) jsou označeny oranžovou barvou. Elektroforetické záznamy s abnormalitou (například další frakce nebo smazání normální frakce mezi HbA 1c, jiné frakce Hb A, Hb A0 a Hb A2) jsou označeny fialovou barvou s označením "Atypický profil" a "Hb A1c (*)". Záznam je automaticky upraven s ohledem na frakci Hb A0 pro usnadnění interpretace. Následující tabulka uvádí varovné a informační signály, které se zobrazují pro analyzovaný vzorek :

10 Varovný signál Analyzovaný vzorek Kalibrační roztoky označené čárovým kódem Kontrolní roztoky označené čárovým kódem Krevní vzorek od pacienta!!!! Hodnota HbA 1c mimo meze specifikací pro kalibrační roztoky Žádná detekce frakce Hb A0 nebo HbA 1c Nedostatečná optická hustota pro frakci Hb A0 "Atypický profil" (přítomnost dalších frakcí nebo smazání normální frakce) Zprávy s upozorněním : "analysis of the calibrator not in conformity" (analýza kalibračního roztoku není ve shodě) : analyzujte kontrolní vzorek krve v poloze 28 nebo opakujte kalibraci [v případě neplatné kalibrace na jedné kapiláře (nebo 2 kapilárách), kapilára(y) je (jsou) neaktivní, hladina HbA 1c vzorků krve a kontrol na předmětné kapiláře (nebo kapilárách) se potom nezobrazí] Nezobrazila se žádná hodnota HbA 1c (na ramenu HbA 1c nebo Hb A0) / / Nezobrazila se hodnota HbA 1c / / Zprávy s upozorněním : "analysis of the control not in conformity" (analýza kontrolního roztoku není ve shodě) : 1. Opakujte analýzu se stejnou lahvičkou v poloze 28, 2. Opakujte analýzu s novou lahvičkou, 3. Zavolejte Technické služby SEBIA, pokud je porucha potvrzena. Podezření na přítomnost varianty Hb nebo selhání úpravy elektroforetických záznamů, opakujte analýzu pro potvrzení. Zprávy s upozorněním : "too low OD" (příliš nízké OD) (< 0,07) pro krevní vzorek, který není abnormální, zopakujte analýzu : Pokud je výsledek potvrzen, je možné oznámit hladinu HbA 1c. "atypický profil" a "Hb A1c (*)" : podezření na přítomnost varianty Hb. Hodnota HbA 1c mimo meze očekávaných hodnot pro kontrolní roztoky analyzované v režimu Kontrola kvality (QC) / V režimu Kontrola kvality : Označení "+" nebo "-" podle hladiny HbA 1c ve srovnání s vlastními hodnotami zadanými operátorem. V režimu kontroly kvality, pokud se zobrazí "analysis of the control not in conformity" (analýza kontrolního roztoku není ve shodě), zopakujte kalibraci. / Když má vzorek více než 3,0 % Hb A2, zobrazí se u názvu frakce vykřičník ("Hb A2!"). Pak může být podezření na syndrom beta-talasemie, který by mohl ovlivňovat syntézu HbA 1c (v případě fyziopatologického rušení). Doporučuje se analyzovat vzorek postupem MINICAP HEMOGLOBIN(E), aby se ověřila procentuální hodnota Hb A2 a nastudovaly klinické údaje pacienta. Kvantifikace HbA 1c však představuje užitečný relativní index pro stejného pacienta. PEČLIVĚ SI PROSTUDUJTE NÁVOD K POUŽITÍ PRO MINICAP FLEX-PIERCING. III. UKONČENÍ SÉRIE ANALÝZ Po ukončení každé sekvence analýzy musí operátor zahájit postup "stand by" (přepnutí do pohotovostního režimu) nebo "shut down" (vypnutí) přístroje MINICAP FLEX-PIERCING, aby se kapiláry uložily v optimálních podmínkách. DŮLEŽITÉ : Novou reagenční nádobku umístěte na automatický podávací systém nádobek MINICAP FLEX-PIERCING (pokud bude reagenční nádobka chybět, zobrazí se zpráva). IV. PLNĚNÍ REAGENČNÍCH NÁDOB Přístroj MINICAP FLEX-PIERCING automaticky kontroluje přítomnost reagentů. DŮLEŽITÉ : Dodržujte pokyny pro výměnu reagenčních nádob s ohledem na barevný kód pro lahvičky a spojovací části. V případě nezbytného provedení jednoho z následujících úkonů bude zobrazena zpráva : Vložte novou lahvičku s tlumivým roztokem a / nebo Naplňte nádobu pracovním promývacím roztokem a / nebo Naplňte nádobu filtrovanou destilovanou nebo deionizovanou vodou k vyplachování kapilár a / nebo Vyprázdněte odpadní nádobu. VAROVANÍ : Nepoužívejte standardně prodávanou deionizovanou vodu, jako např. na žehlení (nebezpečí poškození důležitých kapilár). Používejte výhradně ultračistou vodu, jako je např. voda používaná k výrobě injekčních roztoků. DŮLEŽITÉ : Před naplněním se doporučuje vyplachovací nádobu vymýt větším množstvím destilované nebo deionizované vody. PEČLIVĚ SI PROSTUDUJTE NÁVOD K POUŽITÍ PRO MINICAP FLEX-PIERCING

11 KONTROLA KVALITY MINICAP Hb A1c /09 Doporučuje se analyzovat kontrolní roztoky Hb A1c CAPILLARY 1 a 2, SEBIA, kat. č. 4768, po každé aktivaci kapiláry, po provedení každé kalibrace přístroje kalibračními roztoky Hb A1c CAPILLARY, po sekvenci čištění kapilár roztokem CAPICLEAN a před zahájením nové sekvence analýz. Navíc se pro laboratoře s vysokou četností analýzy doporučuje analyzovat střídavě jeden ze dvou kontrolních vzorků Hb A1c CAPILLARY 1 nebo 2 po analýze celého otočného automatického podavače vzorků. VAROVANÍ : Pokud kontrolní hodnoty spadají mimo rozsah vlastních hodnot, musí být vzorky analyzované na daných kapilárách od poslední validované kontroly kvality analyzovány znovu. DŮLEŽITÉ : K optimálnímu použití krevních kontrolních roztoků v přístroji MINICAP FLEX-PIERCING je nezbytné používat specifické konické zkumavky na kontrolní roztoky s odpovídajícími víčky (viz "POŽADOVANÉ VYBAVENÍ A PŘÍSLUŠENSTVÍ") a štítky s čárovým kódem určené k označení zkumavek na kontrolní roztoky obsahující kontrolní vzorky krve k analýze. VÝSLEDKY Hodnoty Přímá detekce při 415 nm v kapilárách dává relativní koncentrace (procentuální hodnoty) pro jednotlivé zóny hemoglobinů a speciálně kalibrovaná koncentrace HbA 1c. Normální hodnoty hemoglobinu A 1c : 42 mmol/mol (6,0 %) (Geistanger et al, 2008). VAROVANÍ : Hodnotu HbA 1c získanou pro vzorek, představující variantu hemoglobinu, nelze srovnávat s normální hodnotou HbA 1c k určování diagnózy. Normální hodnota byla ve skutečnosti stanovena, podle doporučení IFCC a NGSP, pro jedince bez jakékoli hemoglobinopatie. Pro atypické vzorky (s variantou a) software nezobrazí normální hodnotu HbA 1c, ale kvantitativní stanovení HbA 1c představuje užitečný relativní index pro stejného pacienta. Interpretace Viz ELEKTROFORETICKÉ TYPY. Rušení POZNÁMKA : Běžné rušivé faktory postupu MINICAP Hb A1c (triglyceridy, bilirubin, kyselina askorbová, močovina, revmatoidní faktor, glibenklamid, karbamylovaný a acetylovaný hemoglobin a labilní HbA 1c ) byly hodnoceny ve studiích založených na směrnici Institutu pro klinické laboratorní standardy (CLSI - USA) číslo EP7-A2 "Interference Testing in Clinical Chemistry" (Rušení při zkoušení v klinické chemii). Výsledky jsou sumarizovány dále. Nebylo zjištěno žádné rušení postupu MINICAP Hb A1c v důsledku vysoké koncentrace vzorku krve následujících rušivých faktorů testovaných na stejných koncentracích uvedených níže : Faktor rušení Triglyceridy Bilirubin Kyselina askorbová Močovina Revmatoidní faktor Glibenklamid Koncentrace 3,07 g/dl (35,1 mm) 25,8 mg/dl (442 µm) 60 mg/dl (3,41 mm) 291 mg/dl (48,5 mm) 2178 IU/mL 3 mg/dl Nebylo zjištěno žádné rušení postupu MINICAP Hb A1c v důsledku přítomnosti karbamylovaného hemoglobinu ( 8,7 %) a labilního HbA 1c ( 14,8 %). Acetylovaný hemoglobin může migrovat do menší zóny migrace hemoglobinů, přičemž nebylo pozorováno žádné rušení kvantifikace frakce HbA 1c v důsledku přítomnosti acetylovaného hemoglobinu ( 3,0 %). Hladiny Hb F (nebo varianty) ve vzorku krve do 23 % neruší kvantifikaci frakce HbA 1c. V případě, že je hladina Hb F (nebo varianty) vyšší než 23 %, je softwarem nahlášen výsledek s varovným signálem "Atypical profile Possible quantitative interference if Hb F or variant > 23 %"(Atypický profil Možné kvantitativní rušení, je-li hladina Hb F nebo varianty > 23 %). Analýza variant hemoglobinu : - Nebylo pozorováno žádné rušení kvantifikace frakce HbA 1c v důsledku přítomnosti hlavních abnormálních hemoglobinů Hb S ( 40,5 %), Hb C ( 37,0 %), Hb D ( 41,0 %) a Hb E ( 24,7 %) (s výjimkou Bartova hemoglobinu). V důsledku množství variant je přesto možné pozorovat v migrační zóně HbA 1c přítomnost jiné varianty hemoglobinu. V případě větve na HbA 1c nehlásil software žádné výsledky. - Glykolyzované formy běžných variant hemoglobinu (například Hb S, Hb C, Hb D nebo Hb E) společně migrují s frakcí Hb A0 nebo menšími frakcemi Hb A1 ("jiné frakce Hb A") bez jakékoli úpravy výsledku HbA 1c. - Některé varianty hemoglobinu se mohou jevit jako větev frakce Hb A0, kterou software nemusí detekovat. Detekci této větve umožní jedině vizuální posouzení elektroforetického záznamu. Je nezbytné analyzovat hematologický stav a provést doplňkové studie, aby se potvrdila přítomnost varianty. - Navíc mezi variantami, které migrují blízko Hb A0 nebo se připojují k Hb A0, se mohou některé vykazovat další frakci ("X1c"), která migruje odděleně od HbA 1c. Elektroforetický záznam bude identifikován jako "Atypický profil". V tomto případě nehlaste žádný výsledek HbA 1c. - Při analyzování vzorků bez jakéhokoli Hb A (například od pacientů homozygotních nebo s heterozygotními variantami S/S nebo S/C) a v přítomnosti Hb F, může dojít ke zmatení s Hb A0 vzhledem k podobným migračním pozicím. Software nenahlásí žádný výsledek HbA 1c z důvodu absence HbA 1c v tomto typu vzorku

12 Osoby, u kterých došlo v nedávné době k velké ztrátě krve mohou vykazovat falešně nízké hodnoty HbA 1c vzhledem k vyšší hladině nových erytrocytů. Abnormální životnost červených krvinek, například v případě hemolytické anémie nebo polycytémie, může ovlivnit hladiny HbA 1c. Tyto hodnoty však představují užitečný relativní index pro stejného pacienta. U pacientů s hyperleukocytózou může být rychlost migrace vzorku urychlena, což může způsobit posun profilu a vést k tomu, že nedojde k rozpoznání zón. Omezení použití Viz VZORKY PRO ANALÝZU. Analyzujte pouze vzorky krve v odběrných zkumavkách uvedených v odstavci "POTŘEBNÉ VYBAVENÍ A PŘÍSLUŠENSTVÍ" nebo zkumavky s ekvivalentními rozměry schválenými pro klinické analýzy. Zavolejte technický servis SEBIA, pokud potřebujete další informace o těchto zařízeních. Neanalyzujte přímo zkumavky obsahující méně než 1 ml krevního vzorku. Vyvarujte se starým, nesprávně skladovaným krevním vzorkům ; rozkladné produkty (nebo jejich zbytky) mohou ovlivnit elektroforetický záznam po 7 dnech skladování. Další frakce při analýze takových vzorků může migrovat zejména do polohy Hb A2 nebo více k anodické straně než Hb A0 (v poloze "jiné než Hb A"). Po 10 dnech skladování se mohou objevit viskózní shluky červených krvinek, které je před analýzou nutné odstranit. V některých vzorcích krve A/C heterozogytoních pacientů s Hb F, může být frakce Hb A0 kvantifikována nepřesně. Vzhledem k omezené rozlišovací schopnosti a citlivosti zónové elektroforézy je možné, že v přítomnosti všech variant hemoglobinu nemusí být HbA 1c touto metodou kvantifikován. Sada MINICAP Hb A1c by neměla být použita : - pro vyšetření "Point-of-Care" (u pacienta), - pro diagnózu diabetu mellitus, - pro každodenní sledování hladiny glukózy, - jako náhrada za každodenní domácí testování hladiny glukózy v moči a krvi, - pro analýzu vzorků pacientů s onemocněním způsobujícím zkrácení doby přežití červených krvinek, jako jsou hemolytická onemocnění, těhotenství a významná akutní nebo chronická ztráta krve a - pro analýzu vzorků pacientů s celkovou hladinou hemoglobinu méně než 2,5 nebo více než 31,1 g/dl a hemoglobinopatiemi které by mohli testy rušit. Varianty hemoglobinu sledované při postupech Hb A1c nebo HEMOGLOBIN(E) : V důsledku odlišného složení tlumicích roztoků Hb A1c a HEMOGLOBIN(E) se může lišit elektroforetická mobilita některých variant hemoglobinu. Odstraňování závad a řešení problémů Pokud při dodržení veškerých instrukcí pro přípravu, skladování a provedení testu uvedených v příbalovém letáku testy nevycházejí, kontaktujte technickou podporu společnosti SEBIA. Bezpečnostní datové listy soupravy činidel a informace o čištění a likvidaci odpadů, označování a bezpečnostní pravidla používaná společností SEBIA, obaly pro přepravu biologických vzorků a informace o čistění přístroje jsou k dispozici na webových stránkách SEBIA : ÚDAJE O VÝKONU Přesnost Přesnost postupu MINICAP Hb A1c byla ověřena podle směrnice Institutu pro klinické laboratorní standardy (Clinical Laboratory Standards Institute, CLSI - USA) číslo EP5-A2 "Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurements Methods" (Posouzení přesnosti metod kvantitativního měření). Průměry, standardní odchylky a koeficienty variace (CV %) (n = 120) byly spočteny pro koncentrace HbA 1c (mmol/mol) a procento (%) pro každý vzorek statistickými nástroji doporučenými CLSI. Reprodukovatelnost mezi šaržemi a přístroji Bylo analyzováno osm (8) různých krevních vzorků postupem MINICAP Hb A1c na obou kapilárách 3 různých přístrojů MINICAP FLEX-PIERCING a 3 šarží ze sady MINICAP Hb A1c. Analyzované vzorky krve zahrnovaly 3 vzorky s normální hladinou HbA 1c (č. 1, 2 a 3), 1 vzorek s hladinou HbA 1c blízko mezní hodnoty (č. 4) a 4 vzorky se zvýšenou hladinou HbA 1c (č. 5, 6, 7 a 8). V této studii byl každý vzorek krve analyzován na obou kapilárách každého přístroje, což představovalo 60 analýz během 10 pracovních dní (ve 2 různé denní doby). V každé analýze byly vzorky analyzovány duplicitně. Následující tabulky shrnují rozsah variačního koeficientu v % v rámci analýzy a v rámci přístroje a činidel pro koncentrace HbA 1c (v mmol/mol) a procentech. Střední hodnota (koncentrace HbA 1c - Reprodukovatelnost v rámci analýzy Celková reprodukovatelnost mmol/mol) CV min (%) CV max (%) Celkové CV min (%) Celkové CV max (%) Č. vzorku ,9 3,5 0,9 3,5 Č. vzorku ,1 4,0 1,2 4,0 Č. vzorku ,0 3,0 1,4 3,3 Č. vzorku ,2 2,6 1,3 2,6 Č. vzorku ,7 1,6 0,7 2,2 Č. vzorku ,0 1,4 0,0 1,4 Č. vzorku ,3 1,3 0,3 1,4 Č. vzorku ,4 1,4 0,6 2,2 CV (%) rozsahy 0,0 4,0 0,0 4,