Proteiny. Glykoproteiny. Biochemický ústav LF MU (J.D.) 2013

Podobné dokumenty
Biochemický ústav LF MU (J.D.) 2008

PROTEINY. Biochemický ústav LF MU (H.P.)

Bílkoviny - proteiny

Struktura proteinů. - testík na procvičení. Vladimíra Kvasnicová

BÍLKOVINY. V organismu se nedají nahradit jinými sloučeninami, jen jako zdroj energie je mohou nahradit sacharidy a lipidy.

V organismu se bílkoviny nedají nahradit žádnými jinými sloučeninami, jen jako zdroj energie je mohou nahradit sacharidy a lipidy.

Aminokyseliny. Peptidy. Proteiny.

Přírodní polymery proteiny

Inovace studia molekulární a buněčné biologie

Testové úlohy aminokyseliny, proteiny. post test

Bílkoviny. Bílkoviny. Bílkoviny Jsou

Bílkoviny. Charakteristika a význam Aminokyseliny Peptidy Struktura bílkovin Významné bílkoviny

Výukový materiál zpracován v rámci projektu EU peníze školám Registrační číslo projektu: CZ.1.07/1.5.00/

8. Polysacharidy, glykoproteiny a proteoglykany

Aminokyseliny, struktura a vlastnosti bílkovin. doc. Jana Novotná 2 LF UK Ústav lékařské chemie a klinické biochemie

ÚVOD DO BIOCHEMIE. Dělení : 1)Popisná = složení org., struktura a vlastnosti látek 2)Dynamická = energetické změny

Aminokyseliny, peptidy a bílkoviny

Gymnázium Vysoké Mýto nám. Vaňorného 163, Vysoké Mýto

Struktura aminokyselin, peptidů a bílkovin.

Biologie buňky. systém schopný udržovat se a rozmnožovat

I N V E S T I C E D O R O Z V O J E V Z D Ě L Á V Á N Í

Molekulární biofyzika

Biopolymery. struktura syntéza


Proteiny Genová exprese Doc. MVDr. Eva Bártová, Ph.D.

Lodish et al, Molecular Cell Biology, 4-6 vydání Alberts et al, Molecular Biology of the Cell, 4 vydání

Aminokyseliny. Gymnázium a Jazyková škola s právem státní jazykové zkoušky Zlín. Tematická oblast Datum vytvoření Ročník Stručný obsah Způsob využití

Názvosloví cukrů, tuků, bílkovin

USPOŘÁDEJTE HESLA PODLE PRAVDIVOSTI DO ŘÁDKŮ

Metabolismus bílkovin. Václav Pelouch

aminokyseliny a proteiny

STRUKTURA PROTEINŮ

Biochemie I. Aminokyseliny a peptidy

Struktura, chemické a biologické vlastnosti aminokyselin, peptidů a proteinů

Oligobiogenní prvky bývají běžnou součástí organismů, ale v těle jich již podstatně méně (do 1%) než prvků makrobiogenních.

Biochemie I 2016/2017. Makromolekuly buňky. František Škanta

AMINOKYSELINY Substituční deriváty karboxylových kyselin ( -COOH, -NH 2 nebo -NH-) Prolin α-iminokyselina

PEPTIDY, BÍLKOVINY. Reg. č. projektu CZ.1.07/1.1.00/

5. Proteiny. Peptidy. Struktura proteinů. Primární struktura proteinů. Sekundární struktura proteinů

Obecná struktura a-aminokyselin

Přírodní polymery. struktura syntéza

Typy molekul, látek a jejich vazeb v organismech

BÍLKOVINY = PROTEINY Polymery aminokyselin propojených peptidovou vazbou

Struktura a funkce biomakromolekul KBC/BPOL

1. Napište strukturní vzorce aminokyselin D a Y a vzorce adenosinu a thyminu

Genomické databáze. Shlukování proteinových sekvencí. Ivana Rudolfová. školitel: doc. Ing. Jaroslav Zendulka, CSc.

BIOLOGICKÁ MEMBRÁNA Prokaryontní Eukaryontní KOMPARTMENTŮ

Aminokyseliny, struktura a vlastnosti bílkovin

Metabolismus aminokyselin - testík na procvičení - Vladimíra Kvasnicová

Aminokyseliny, Peptidy, Proteiny

Struktura a funkce biomakromolekul KBC/BPOL

Bílkoviny a rostlinná buňka

Metabolismus aminokyselin. Vladimíra Kvasnicová

Proteiny globulární a vláknité a jejich funkce. Metabolismus aminokyselin

DUM č. 15 v sadě. 22. Ch-1 Biochemie

MOLEKULOVÉ MODELOVÁNÍ - STRUKTURA. Monika Pěntáková Katedra Farmaceutické chemie

AMINOKYSELINY Substituční deriváty karboxylových kyselin ( -COOH, -NH 2 nebo -NH-) Prolin α-iminokyselina

Bílkoviny příručka pro učitele. Obecné informace:

Intermediární metabolismus. Vladimíra Kvasnicová

NUKLEOVÉ KYSELINY. Základ života

Aminokyseliny příručka pro učitele. Obecné informace: Téma otevírá kapitolu Bílkoviny, která svým rozsahem překračuje rámec jedné vyučovací hodiny.

Biosyntéza a degradace proteinů. Bruno Sopko

Metabolizmus aminokyselin II

Mechanismy hormonální regulace metabolismu. Vladimíra Kvasnicová

Vazebné interakce protein s DNA

CHEMIE. Pracovní list č žákovská verze Téma: Bílkoviny. Mgr. Lenka Horutová

Aminokyseliny. Aminokyseliny. Peptidy & proteiny Enzymy Lipidy COOH H 2 N. Aminokyseliny. Aminokyseliny. Postranní řetězec

VÝZNAM FUNKCE PROTEINŮ V MEDICÍNĚ

AMINOKYSELINY REAKCE

Inovace bakalářského studijního oboru Aplikovaná chemie

strukturní (součástmi buněčných struktur) metabolická (realizují b. metabolizmus) informační (jako signály či receptory signálů)

Biologie buňky. proteiny, nukleové kyseliny, procesy genom, architekura,funkce, mitoza, buněčná smrt, kmenové buňky, diferenciace

Určení molekulové hmotnosti: ESI a nanoesi

Chemická reaktivita NK.

Toxikologie PřF UK, ZS 2016/ Toxikodynamika I.

Aminokyseliny a dlouhodobá parenterální výživa. Luboš Sobotka

Publikováno z 2. lékařská fakulta Univerzity Karlovy v Praze (

TEST + ŘEŠENÍ. PÍSEMNÁ ČÁST PŘIJÍMACÍ ZKOUŠKY Z CHEMIE bakalářský studijní obor Bioorganická chemie 2010

VÝSKYT, SLOŽENÍ A ZMĚNY BÍLKOVIN V POTRAVINÁCH ŽIVOČIŠNÉHO A ROSTLINNÉHO PŮVODU

Aminokyseliny, proteiny, enzymologie

Metabolizmus aminokyselin II

Chemie nukleotidů a nukleových kyselin. Centrální dogma molekulární biologie (existují vyjímky)

Autorem přednášky je Mgr. Lucie Mandelová, Ph.D. Přednáška se prochází klikáním nebo klávesou Enter.

Přehled energetického metabolismu

Struktura a funkce biomakromolekul

Glykolýza Glukoneogeneze Regulace. Alice Skoumalová

Glykoproteiny a Muciny. B.Sopko

*Ivana FELLNEROVÁ, PřF UP Olomouc*

METABOLISMUS SACHARIDŮ

Vzdělávací materiál. vytvořený v projektu OP VK CZ.1.07/1.5.00/ Anotace. Metabolismus sacharidů. VY_32_INOVACE_Ch0216.

Vybrané funkční vlastnosti bílkovin v potravinách. Aleš Rajchl Ústav konzervace potravin

OPVK CZ.1.07/2.2.00/

Regulace translace REGULACE TRANSLACE BÍLKOVINY A JEJICH POSTTRANSLAČNÍ MODIFIKACE. Bílkoviny - aminokyseliny. 1. Translační aparát. 2.

9. Lipidy a biologické membrány

Eva Benešová. Dýchací řetězec

Hemoglobin a jemu podobní... Studijní materiál. Jan Komárek

L-aminokyselina chirální (asymetrický) uhlík

Metabolismus krok za krokem - volitelný předmět -

molekula obsahující jeden nebo více navázaných na bílkovinu (glykoproteiny)

Transkript:

Proteiny & Glykoproteiny Biochemický ústav LF MU (J.D.) 2013 1

Proteiny jsou polypeptidy (anhydropolymery L-aminokyselin) RH H HR C C N C C N C hlavn řetěz HR H postranní řetězce mají identickou páteř: peptidové vazby oddělené uhlíky 2

Úrovně popisu struktury proteinů primární struktura sekundární struktura [supersekundární struktura] všechny proteiny terciární struktura kvartérní struktura jen oligomerní 3

Primární struktura určuje počet a pořadí aminokyselin číslování začíná na N-konci acyly AK napojené jeden na druhý N-konec C-konec 4

Názvy acylů AK: přípona -in/-an/-át se nahradí příponou -yl PZR: tři výjimky; u kyselých AK jsou dva možné acyly Ala Arg Asn Asp Cys Gln Glu Gly His Iso alanyl arginyl asparaginyl α-aspartyl / β-aspartyl cysteinyl glutaminyl α-glutamyl / γ-glutamyl glycyl histidyl isoleucyl Leu Lys Met Phe Pro Ser Thr Trp Tyr Val leucyl lysyl methionyl fenylalanyl prolyl seryl threonyl tryptofyl tyrosyl valyl 5

Srovnejte Alanylglycin Glycylalanin H 3 C CH NH 2 C NH CH 2 CH CH 2 NH 2 C CH 3 NH CH CH alanyl (acyl alaninu) glycyl (acyl glycinu) 6

Zjistíme počet peptidových vazeb. Najdeme N-konec a vytvoříme acyl N-koncové AK. U dipeptidu přidáme název C-koncové AK. U tripeptidu apod. přidáme ještě další acyl(y), zakončíme názvem C-koncové AK. H H H 2 N N C N NH 2 CH 3 CH3 H C H 7

Příklady biologicky významných peptidů (číslo v závorce udává počet AK) Gastrointestinální peptidy gastrin (17), sekretin (27), cholecystokinin (33) Vasoaktivní peptidy vasoaktivní intestinální peptid (VIP, 28), angiotensin II (8), bradykinin (9), endothelin (21), vasopresin (ADH, 9) Hormony kalcitonin (32), glukagon (29), inzulin (51) somatostatin (14), thyroliberin (TRH, 3), adrenokortikotropin (ACTH, 39), atriální natriuretický peptid (ANP, 28) Neuropeptidy β-endorfin (31), Leu-enkefalin (5) Toxiny amatoxiny (8), fallotoxiny (7), mellitin (26) Antibiotika bacitracin (16), valinomycin (6) 8

Glutathion (GSH) je γ-glutamylcysteinylglycin HC NH 2 H N CH 2 SH N H CH redukční činidlo = antioxidant redukuje H 2 2 a RH (glutathionperoxidasa) redukuje různé kyslíkové radikály regeneruje -SH skupiny proteinů a koenzymu A podílí se na regeneraci tokoferolu a askorbátu 9

Inzulin a glukagon Charakteristika Inzulin Glukagon Vznik β-buňky pankreatu α-buňky pankreatu Počet AK / řetězců 51 / 2 29 / 1 Prekurzor (pre)proinzulin proglukagon Poločas v plazmě 3 min 5 min Druhý posel??? camp Inaktivace hormonu játra, ledviny játra 10

Antagonistické vlivy inzulinu a glukagonu na metabolismus Děj Inzulin Glukagon Glukoneogeneze (játra) Glykolýza v játrech Glykolýza ve svalech - Glykogenolýza ve svalech - Glykogenolýza v játrech Glykogeneze v játrech Lipolýza v adipocytech Lipogeneze v adipocytech stimuluje inhibuje 11

Peptidová vazba je rezonanční hybrid dvou mezních struktur C N H C N H čtyři elektrony jsou sdíleny třemi atomy vazba C-N má charakter částečně dvojné vazby peptidový dusík je proto nebazický peptidová vazba je rigidní a planární útvar H atom je v trans poloze vůči (u většiny proteinů) 12

Atomy -C-NH- jsou v rovině H C N C C C C N H 13

Roviny peptidových vazeb mohou rotovat rotací se vytváří různé typy sekundární struktury kombinace torzních úhlů (viz LCH II, str. 13) nejsou neomezené uplatňují se prostorové nároky bočních řetězců aminokyselin na C pro určité typy sekundární struktury existují konkrétní hodnoty obou úhlů -helix = -57 = -47 -struktura = -140 = 150 natažený řetězec = 180 = 180 14

Sekundární struktura se týká pouze určité části polypeptidového řetězce (segmentu) lokální prostorové uspořádání atomů v peptidovém řetězci bez ohledu na uspořádání postranních řetězců R bez ohledu na vztahy segmentu k jiným segmentům peptid. řetězce Typy sekundární struktury: Pravidelná (helixy, -struktura) hybová (stočení skládaného listu, -ohyb) Nepravidelná (deformace vlivem prolinu, plápolající konce) 15

-Helix Jeden úsek peptidového řetězce vytváří pravotočivou šroubovici C= a NH skupiny jsou paralelní s dlouhou osou šroubovice každá C= skupina je vázána H-vazbou s NH o čtyři AK vzdálenější H-vazby jsou souběžné s osou helixu postranní řetězce R jsou na vnější straně helixu 16

H-vazby jsou rovnoběžné s osou helixu C N H postranní řetězec 17

Braggova symbolika -helixu 3,6 13 počet AK na jeden závit C NC 9 13 C 12 11 C C N C C N 10 C C N C C N H NC 4 3 2 1 počet atomů v heteroc vzniklém H-vazbou: 11 + 18

Strmý helix kolagenu N N H prim. strukt. (Gly-X-Pro) a (Gly-X-hyPro) prolin způsobuje ohnutí řetězce C= a NH skupiny vybočené do stran, kolmo na svislou osu helix je levotočivý a natažený H-vazby mezi třemi helixy - triplhelix velmi pevná a rigidní bílkovina 19

-Struktura β-struktura připomíná natažený polypeptidový řetězec H-vazbami se spojují sousedními segmenty do tzv. skládaného listu sousední segmenty mohou být v rámci jednoho řetězce nebo mezi různými řetězci H-vazby mezi NH a C jsou kolmo na řetězce postranní řetězce AK směřují nad a pod myšlenou rovinou 20

Antiparalelní skládaný list (častější) C H H C C N C C N C C N H H N H H H N C C N C C N C C N H H N C 21

Paralelní skládaný list C N H H C C N C C N C C N H H H H C C N C C N C C N C H H C N 22

Deformace pravidelných struktur -struktura -list -list stočený poměrně často nastává stočení nebo ohnutí pravidelných struktur skládaný list stočený list 23

-hyb tetrapeptidový segment, často Gly, Pro umožňuje otočení H 2 HR C C N H N 3 R H řetězce o 180 stabilizován H-vazbou 1 R H C C C C H N C R H 4 mezi 1. a 4. AK 24

Supersekundární struktury kombinace pravidelných sekundárních struktur vyskytují se ve stejné podobě v různých a nepříbuzných bílkovinách 4- -helix -meandr Řecký klíč stočené helixy -barel zinkový prst leucinový zip 25

Terciární struktura prostorové uspořádání všech atomů jednom polypetidovém řetězci je udržována nevazebnými interakcemi postranních řetězců AK (H-vazby, elektrostatické, hydrofobní) a kovalentními vazbami polární postranní řetězce jsou lokalizovány na povrchu hydrofobní zbytky jsou zanořeny dovnitř ve vodném prostředí koloidní roztok bílkovin 26

Vodíkové vazby NH C H C N N H Skupiny v postranních řetězcích AK, které se podílejí na H-vazbách: serin, threonin (alkoholový hydroxyl) tyrosin (fenolový hydroxyl) asparagin, glutamin (skupina -C-NH 2 ) aspartát, glutamát (-C - ) histidin (dusíkový atom neionizovaného imidazolu) H Tyto skupiny vytvářejí H-vazby navzájem, s vodou nebo s peptidovými skupinami -C-NH- hlavního řetězce. 27

Elektrostatické interakce (kation... anion) existují mezi postranními řetězci bazických a kyselých AK dusíkaté kationty lysin (amonium, -NH 3+ ), arginin (guanidinium), histidin (imidazolium), H N C C H 3 N karboxylátové anionty aspartát (-C - ) glutamát (-C - ) solný můstek 28

Ionizující skupiny v postranních řetězcích AK Skupina pk A AK Náboj (ph 7,40) β-karboxyl 3,9 Asp záporný γ-karboxyl 4,3 Glu záporný Imidazolium 6,0 His kladný ε-amonium 10,5 Lys kladný Guanidinium 12,5 Arg kladný 29

Hydrofobní interakce AK Gly Ala Val Leu Ile Phe Pro Trp Met Nepolární skupina H methyl isopropyl (propan-2-yl) isobutyl (2-methylpropyl) isobutyl (1-methylpropyl) fenyl trimethylen (cyklizovaný) indolylmethyl -CH 2 -CH 2 -S-CH 3 H 3 C CH 3 H 3 C CH 3 30

Sekundární a terciární struktura hemoglobinu 31

Hemové proteiny Protein Redoxní stav Fe Funkce Hemoglobin Myoglobin Katalasa Peroxidasa Cytochromy Cytochrom P-450 Fe 2+ Fe 2+ Fe 3+ Fe 3+ Fe 2+ Fe 3+ Fe 2+ Fe 3+ transport 2 v krvi zásoba 2 ve svalu rozklad H 2 2 rozklad peroxidů složky dých. řetězce hydroxylační systém 32

Kovalentní vazby zpevňují terciární strukturu Disulfidové můstky mezi sulfanylovými skupinami cysteinu vznik disulfidových můstků je nespecifický protein-disulfid isomerasa katalyzuje zánik a novotvorbu disulfidových můstků N H C S S C H N oxidační činidla 2, 2-, H 2 2 2 Prot-Cys-SH Prot-Cys-S-S-Cys-Prot redukční činidla glutathion (GSH) 33

Příčné můstky v kolagenu vznikají reakcí koncových skupin Lys + allys C HC(CH 2 ) 4 NH 2 NH lysin C H C (CH 2 ) 3 CH allysin NH 34

Příčné můstky v kolagenu C C H C HC(CH 2 ) 2 C CH (CH 2 ) 3 CH allysin NH NH C HC(CH 2 ) 4 NH 2 NH 2, H 2 C HC(CH 2 ) 3 NH C H - H 2 příčná vazba vzniklá dehydratací aldolu lysin (lysylový zbytek v polypeptidu) NH 3 + H 2 2 allysin lysin + hydrogenace C HC(CH 2 ) 4 NH NH (CH 2 ) 4 C CH NH příčná vazba vzniklá hydrogenací Schiffovy báze 35

Tvorba příčných kovalentních vazeb mezi molekulami fibrinu (srážení krve) FibrinCH 2 CH 2 CH 2 CH 2 NH + 3 H 2 N C CH 2 CH 2 Fibrin lysyl transglutaminasa (faktor XIII A) + NH 4 glutaminyl FibrinCH 2 CH 2 CH 2 CH 2 NH C CH 2 CH 2 Fibrin 36

Domény jsou relativně samostatné kompaktní globulární oblasti oddělené nestrukturovaným polypeptidem Multidoménový protein Pyridinová dehydrogenasa Typy domén (každá má specifickou funkci) doména pro vazbu NAD + doména pro vazbu substrátu Regulační enzym (např. proteinkinasa) Membranový receptor Intracelulární receptor katalytická doména regulační doména (vazebná místa pro druhé posly) doména pro vazbu signální molekuly (ECT) transmembránová doména intracelulární (katalytická) doména (produkce druhého posla) doména pro vazbu ligandu (signální molekuly) doména pro protein-protein interakci doména pro vazbu DNA 37

Sbalování (folding) proteinů komplikovaný, stupňovitý proces začíná tvorbou segmentů sekundární struktury, jejich vzájemným uspořádáním a zanořením hydrofobních úseků do nitra molekuly sbalování je termodynamicky výhodné = výsledná konformace má nízkou energii proteiny jsou konformačně dynamické systémy sbalený prot. rozbalený prot. sbalený protein = nativní, biologicky aktivní konformace rozbalený protein si uchovává řadu kontaktů, které napomáhají opětovnému sbalení sbalování se účastní pomocné proteiny: chaperony (hsp) ochraňují hydrofobní části před vodným prostředím protein-disulfid isomerasa, prolin-cis,trans-isomerasa 38

Chybně sbalené proteiny jsou patologické Nemoc Prionové choroby: CJD (lidé) scrapie (ovce) BSE (šílené krávy) Alzheimerova ch. Chyby při sbalování fyziologický protein PrPc interaguje s prionem a mění svoji konformaci: PrPc (α-helix) PrPsc (β-list) agregace agregáty jsou nerozpustné a rezistentní k proteolýze, způsobují degeneraci mozkové tkáně rozpustný amyloid (protein bohatý na α-helixy) podléhá postupně konformačním změnám na nerozpustnou formu s převahou β-listů ty tvoří agregáty (senilní plaky v mozku) CJD = Creutzfeldt-Jakob disease BSE = bovine spongiform encephalopathy 39

Konformační změny (flexibilita) proteinů změny konformace proteinu jsou hybnou silou biochemických pochodů např. fosforylace proteinu vyvolá změnu konformace enzym se stává aktivním (princip aktivačního působení kinas) hormon se naváže na receptor receptor změní konformaci a stane se např. iontovým kanálem změny konformace se přenášejí z jedné molekuly na druhou (změny podjednotek hemoglobinu vazbou první molekuly 2 ) 40

Kvartérní struktura jen u oligomerních proteinů popisuje počet podjednotek (samostatných polypeptid. řetězců), jejich prostorové uspořádání a interakce mezi nimi stabilizace nevazebnými interakcemi podjednotky mohou být stejné nebo různé 41

Příklady proteinů s kvartérní strukturou Protein Podjednotky Význam α-amylasa Kreatinkinasa Kolagen Laktátdehydrogenasa Hemoglobin Proteinkinasa A Myosin Asp-karbamoyltransferasa Ferritin 2 2 3 4 4 4 6 12 20 štěpí škrob na maltosu fosforylace kreatinu pojivová tkáň glukoneogeneze transport 2 regulační protein svalový protein syntéza pyrimidinových bází zásoba Fe 3+ v játrech 42

Kvartérní struktura hemoglobinu α 1 α 1 2 β 2 β 1 4 2 β 2 2 β 1 2 α 2 deoxyhemoglobin T-forma 4 2 α 2 2 oxyhemoglobin R-forma 43

Úrovně popisu struktury - shrnutí Struktura Popisuje Nevaz. interakce Primární Sekundární Supersekundární Terciární Kvartérní jeden polypeptidový řetězec část jednoho řetězce několik částí řetězce jeden řetězec několik řetězců žádné H-vazby všechny typy všechny typy všechny typy 44

Denaturace proteinů rozvolnění terciární a sekundární struktury přerušení nevazebných interakcí beze změn v primární struktuře ztráta biologické funkce většinou ireverzibilní proces reverzibilní vysolování (viz praktika) Nativní protein je v přirozené, biologicky účinné konformaci 45

Denaturace proteinů (viz Praktická cvičení) Chemická (silné) kyseliny (silné) hydroxidy těžké kovy deproteinační činidla Fyzikální zvýšená teplota mechanické vlivy ultrazvuk ionizující záření tenzidy 46

Příklady denaturace Denaturační faktor Přerušené interakce Příklad Zahřívání nad 50 C Kyseliny rganické sloučeniny Ionty těžkých kovů (Pb 2+, Hg 2+ ) Třepání, šlehání apod. H-vazby, hydrofobní interakce H-vazby, solné můstky H-vazby, hydrofobní interakce disulfidové vazby H-vazby, hydrofobní interakce vaření, pečení jídla, autoklávování chirurgických nástrojů kyselina mléčná z Lactobacillus sp. sráží mléčnou bílkovinu na jogurt ethanol a isopropylalkohol dezinfikují kůži inhibice enzymů, otrava těžkými kovy příprava sněhu z vaječného bílku (viz další snímek) 47

Šlehání bílku z pohledu chemika vaječný bílek je viskózní roztok globulárních bílkovin (ovalbumin, ovotransferrin, ovomukoid, ovomucin, ovoglobuliny, avidin ad.) šlehání (vznik pěny) = uzavírání malých bublinek vzduchu do bílku vysoká viskozita bílku ztěžuje unikání bublinek a stabilizuje pěnu bílkoviny jsou amfoterní tenzidy, orientují se na fázovém rozhraní, tím se rozpletou do volných řetězců a ty se vzájemně propojí = denaturace z pěny se stane tuhý sníh = denaturace dokončena a nevratná denaturaci (vznik sněhu) usnadňují další faktory: zvýšená teplota (šlehání v páře) změna iontové síly (přidat špetku soli) změna ph (přidat několik kapek citronové šťávy) 48

Strukturní typy proteinů vláknité (nerozpustné, větší molekulová hmotnost) globulární (rozpustné, menší molekulová hmotnost) -proteiny - převažuje -helix (hemoglobin, myoglobin) -proteiny - převažuje -list (proteasy, imunoglobuliny) / -proteiny - supersekundární struktury interagujících -helixů a -struktur (kinasy) ( + )-proteiny - -helixy a -struktury oddělené (lysozym) membránové (nerozpustné, struktura uzpůsobena pro interakci s membránou) 49

Vláknité (fibrilární) proteiny keratiny kolagen, elastin (pojivo)* proteiny cytoskeletu svalové proteiny* fibroin * Podrobněji ve 4. semestru 50

Keratiny vlasy, chlupy, nehty, u zvířat kopyta, peří, srst polypeptidové řetězce jsou vzájemně vázány disulfidovýmí a vodíkovými vazbami -helixy svinuty do protofibrily mechanicky a chemicky odolný horkou vodou se H-vazby rozruší - vlas lze natáhnout, -helix -list 51

Keratin a trvalá ondulace vlasový keratin obsahuje mnoho disulfidových můstků působením thioglykolové kyseliny (HS-CH 2 -CH) se disulfidové můstky zredukují na -SH skupiny vlasy jsou pak natočeny do nového tvaru H 2 2 oxiduje -SH skupiny na -S-Smůstky a ty fixují keratin v novém tvaru 52

Kolagen kolagen je hlavní bílkovina pojiva, mechanicky pevná (30 % glycinu, 20 % prolinu, 10 % alaninu) trojšroubovice tropokolagenu asociují do mikrofibril, které jsou zpevněné kovalentními příčnými můstky želatina je produkt denaturace kolagenu, skládá se z volných řetězců bez příčných můstků 53

Fibroin je produkt hmyzu a pavouků bílkovina hedvábí a pavučin struktury -listů jsou vrstevnatě uspořádány mezi postranními řetězci jsou hydrofobní interakce 54

Srovnejte Bavlna (cotton) celulosa rostlinný produkt polysacharid H-vazby dobře saje pot cena: Hedvábí (silk) fibroin živočišný produkt bílkovina hydrofobní interakce špatně saje pot cena: 55

Membránové proteiny periferní - vázány volně integrální - zanořeny nebo procházejí, často tvoří kanály mohou být zanořeny i několikrát (sedmihelixový typ) v oblasti membrány jsou hydrofobní části molekuly do ECT a ICT vyčnívají hydrofilní řetězce funkce přenašečů, kanálů a receptorů 56

Membránové proteiny integrální protein kovalentní vazba k PIP integrální protein zanořený do PL dvojvrstvy integrální transmembránový... integrální protein iontový kanál periferní protein elektrostatické interakce s integrálním proteinem periferní protein elektrostatické interakce s polárními hlavami PL 57

Integrální neprocházející membranový protein (hydrofobní interakce s PL-dvojvrstvou) 58

Posttranslační modifikace proteinů Glykosylace: Ser, Thr, Asn Hydroxylace: 4-hydroxyprolin, 3-hydroxyprolin, 5-hydroxylysin Kovalentní můstky: lysin - allysin Karboxylace: -karboxyglutamová kys. Methylace: Lys, His, Arg Acetylace: Lys, Ser, Arg Prenylace: kovalentní napojení farnesylu (membránové kotvy) Fosforylace: Ser, Thr, Tyr 59

Glykoproteiny Rozlišujte: glykosylace (enzymová) glykace(neenzymová) glykosylované proteiny, obsah sacharidů 1-80 % sacharidy vázané kovalentní vazbou, dvojím způsobem: N-glykosidově (Asn) -glykosidově (Ser, Thr) oba typy se liší způsobem biosyntézy Biosyntéza glykoproteinů glykosylace je nejčastější posttranslační modifikace proteinů probíhá buď v ER v průběhu syntézy proteinu nebo po ukončení syntézy v Golgiho aparátu N-glykoproteiny vyžadují dolichol-p-p-oligosacharid -glykoproteiny syntetizovány z aktivovaných nukleotidů (UDP-GalNAc, UDP-Gal, CMP-NeuAc) 60

Sacharidové složky glykoproteinů hexosy (mannosa, galaktosa) N-acetylhexosaminy (GlcNAc, GalNAc) pentosy (xylosa) 6-deoxyhexosy = methylpentosy (L-fukosa) sialová kyselina glukosa není součástí zralých glykoproteinů 61

N-Glykoproteiny Vazba přes Asn v polypeptidovém řetězci H N H C... H N H N H C C H 3 N-glykosidová vazba 62

-Glykoproteiny Vazba přes serin v polypeptidovém řetězci H H N... H N H C C H 3 -glykosidová vazba 63

Diverzita oligosacharidů spojování monosacharidů -glykosidovou vazbou dva monosacharidy mohou být spojeny několika typy glykosidových vazeb velká možnost větvení 1,2 1,3 1,4 1,6 1,2 1,3 1,4 1,6 srovnejte s možností spojení dvou aminokyselin velká diverzita struktur oligosacharidů strukturní diversita = biologická informace 64

Funkce sacharidové složky glykoproteinů zvyšuje polaritu (rozpustnost) proteinu ve vodě vytváří negativní povrchový náboj (sialové kyseliny) chrání protein před účinkem proteas často určuje biologický poločas proteinu (desializace) ovlivňuje správnou orientaci proteinu v membráně stabilizuje konformaci proteinu kóduje biologickou informaci (viz dále): představuje rozpoznávací signál na povrchu buněk zodpovídá za specifickou interakci buňky s dalšími buňkami vytváří antigenní determinanty pro rozlišení druhů rozhoduje o vazbě bakterií a virů na povrch buňky usnadňuje specifickou vazbu hormon-receptor 65

Hlavní typy glykoproteinů Membránové - integrální, glykokalyx (střevní epitelie) Plazmatické - většina proteinů krevní plazmy Mucinové - součásti sekretů 66

Membránové glykoproteiny proteoglykany fibronektin glykolipid kolagen cholesterol glykoprotein fibrilární protein cytoskeletu spektrin 67

Fuc Gal GalNAc R Typ Sial Krevní skupiny (systém AB) ligosacharidy jako antigeny na membránách většiny buněk vč. erytrocytů glykoproteiny a glykosfingolipidy -glykosidová vazba Fuc Fuc GalNAc Gal Sial Gal Gal Sial Typ A GalNAc R Typ B GalNAc R 68

Vztahy mezi typy A, B, 0 téměř všichni lidé jsou vybaveni enzymovým systémem pro syntézu oligosacharidu typu 0 pouze někteří jedinci mají enzymové vybavení pro připojení galaktosy (typ B) nebo N-acetylgalaktosy (typ A) heterozygoti mohou tvořit oba typy (typ AB) typ 0 je neantigenní, člověk proti němu netvoří protilátky jedinec netvoří protilátky proti vlastnímu typu jedinec typu A však bude tvořit protilátky proti typu B a naopak, jedinec typu 0 bude tvořit protilátky proti A i B tvorba protilátek vyvolává shlukování a precipitaci buněk 69

Význam krevních skupin pro transfuzi Typ Tvoří protilátky proti typu Může dostat krev od jedince Může darovat krev jedinci A, B, A, B, AB A B, A A, AB B A, B B, AB AB žádné, A, B, AB AB Typ je univerzální dárce Typ AB je univerzální příjemce 70

Plazmatické glykoproteiny obsahují N-vázané oligosacharidy Man Man Man G lc N A c G lc N A c A s n společný základ všech N-vázaných oligosacharidů 71

Tři typy N-glykoproteinů Typ Jádro Vnější větve (antény) Komplexní Hybridní všechny mají stejné pentasacharidové jádro (viz předchozí snímek) GlcNAc-Gal-NeuNAc GlcNAc-Gal (Man) n Vysoce mannosový Man 3 GlcNAc 2 Asn (Man) n n = 2-6 GlcNAc = N-acetylglukosamin GlcNAc-Gal = N-acetyllaktosamin 72

Vysoce mannosový typ prekurzor při biosyntéze dalších typů Komplexní typ žlutá oblast zahrnuje pentasacharidové jádro společné u všech N-glykoproteinů 73

Příklady glykoproteinů krevní plazmy Glykoprotein Transferrin Ceruloplazmin Haptoglobin Hemopexin α 1 -Antitrypsin Fibrinogen α 2 -Makroglobulin CRP Význam transport Fe 3+ transport Cu 2+, oxidace Fe 2+ Fe 3+ vazba volného Hb po rozpadu erytrocytů vazba volného hemu po rozpadu erytrocytů inhibice proteas srážení krve indikátor zánětu indikátor zánětu 74

Mucinové glykoproteiny -glykosidově vázané, nejčastěji GalNAc na Ser/Thr, na něj další monosacharidy sacharidový podíl poměrně vysoký (až 75 %) obsaženy ve slizničních sekretech ochranná a lubrikační funkce často kys. sialová a sulfatované cukry zvyšují viskozitu sekretu 75

Rozlišujte Charakteristika Glykoprotein Glykovaný protein Proteoglykan bsah sacharidů 1 80 % (typicky ~15 %) minimální do 95 % Vazba sacharidu -/N-glykosidová Schiffova báze -glykosidová Sacharidové složky Man, Gal, GlcNAc... glukosa GlcUA, GlcNAc Vzniká enzymově ano ne ano Hlavní výskyt krevní plazma, membrány, sekrety erytrocyty (Hb) pojivo LCH II str. 151 str. 40 str. 99 76