EVROPSKÝ FOND PRO REGIONÁLNÍ ROZVOJ Automatizovaný hematologický systém sysmex XE 5000 TM PRAHA & EU INVESTUJEME DO VAŠÍ BUDOUCNOSTI Mgr. Veronika Vášová Centrální hematologické laboratoře ÚLBLD Materiálně technická základna pro výzkum v oblasti diagnostiky a léčby civilizačních a onkologických onemocnění a jejich závažných rizik ve VFN v Praze, reg. č. CZ.2.16/3.1.00/24012
Sysmex XE 5000 TM 2
Technické specifikace Automatizovaný hematologický analyzátor Změří až 150 vzorků/hodinu plné krve a 38 vzorků/hodinu tělních tekutin Potřebný objem vzorku 200μL zavřený mód 130μL otevřený mód 40μL kapilární mód Archivace 10000 vzorků vč. grafických záznamů Dokáže analyzovat 67 parametrů 37 diagnostických 6 v režimu tělních tekutin 24 předem naředěných vzorků 3
Parametry měřené na XE-5000 TM ERYTROCYTY Zkratka Název Jednotky RBC Erytrocyty 10 12 /l HGB Hemoglobin g/l HCT Hematokrit 1 MCV střední objem Ery fl MCH střední množství hemoglobinu v Ery pg WBC leukocyty + 6 populační diferenciál Zkratka Název Jednotky NEUT Neutrofily %,10 9 /l LYMPH Lymfocyty %,10 9 /l MONO Monocyty %,10 9 /l EO Eozinofily %,10 9 /l BASO Bazofily %,10 9 /l IG nezralé granulocyty %,10 9 /l MCHC střední koncentrace hemoglobinu v Ery g/l RDW-SD RDW-CV šíře distribuce Ery směrodatná odchylka šíře distribuce Ery variační koeficient fl % 4
Nové parametry měřené na XN 5000 TM IG (Immature granulocytes) = nezralé granulocyty Zahrnuje promyelocyty, myelocyty, metamyelocyty tyče NE Normálně může být pouze u novorozenců a těhotných žen V ostatních případech poukazuje na možnou infekci či zánět Sledování pacientů na JIP V průběhu a po chemoterapii Pacienti s onemocněním HIV/AIDS 5
Parametry měřené na XE-5000 TM TROMBOCYTY Zkratka Název Jednotky PLT Trombocyty 10 9 /l MPV střední objem trombocytů PCT destičkový hematokrit % PDW P-LCR šíře distribuce trombocytů poměr velkých trombocytů fl fl % RETIKULOCYTY a NORMOBLASTY Zkratka Název Jednotky RET Retikulocyty, 10 12 /l LFR MFR HFR IRF Nejméně fluoreskující retikulocyty Středně fluoreskující retikulocyty Vysoce fluoreskující retikulocyty Nezralá forma retikulocytů (zahrnuje MFR, HFR) RET-He Hemoglobin v retikulocytech pg % % % % IPF mladé frakce trombocytů % NRBC Normoblasty %, 10 9 /l IPF (retikulované destičky) nebo-li frakce nezralých trombocytů Normální rozmezí: 1 6% z celkového počtu PLT IPF vzrůstá se tvorbou PLT v KD Přínos ITP typicky vysoké hodnoty IPF v diagnostice - odlišení nemocí př. TTP od útlumu KD Posouzení trombopoetického zotavení při aplastické chemoterapii Posouzení nutnosti transfuze PLT 6
Stanovení Retikulocytů v RET kanálu Rozdělení RET do 3 zón na základě intenzity fluorescenčního světla Výpočet hodnot mladších forem RET v poměru k celkovému počtu RET https://www.sysmex- europe.com/fileadmin/media/f100/scientific/calender_2015/scattergrams/april/scientificcal2015- Apr_RET-Scattergram.jpg 7
Normální hodnoty KO Parametr MUŽI ŽENY Jednotky WBC 4,00-10,00 4,00-10,00 10 9 /l RBC 4,00-5,80 3,80-5,20 10 12 /l HGB 135-175 120-160 g/l HCT 0,40-0,50 0,350-0,470 PLT 150-400 150-400 10 9 /l Diferenciál strojový Relativní počty NE 45,0-70,0 45,0-70,0 % LY 20,0-45,0 20,0-45,0 % MO 2,0-12,0 2,0-12,0 % EO 0,0-5,0 0,0-5,0 % BA 0,0-2,0 0,0-2,0 % IG 0,0-0,6 0,0-0,6 % 8
Technologie analýzy na XE-5000 TM Měření metodou: RF/DC změna odporu radiofrekvenčního proudu (HPC) a hydrodynamická fokusace (PLT, RBC, HCT) SLS metoda-hgb fluorescenční průtoková cytometrie (WBC-Diff, IG, NRBC, RET, IRF, PLT-O) Kombinace flourescence a hydrodynamické fokusace umožňuje rozlišení normální populace bílých (WBC), červených (RBC) krvinek a destiček (PLT) od populace abnormální snížení počtu manuálních diferenciálů 9
Detekce RF/DC Hydrodynamická fokusace (DC) Metoda detekce k určení počtu červených krvinek (RBC) a destiček (PLT) na základě impedanční metody 10
Hydrodynamická fokusace Do proudu nosné izotonické kapaliny (diluent) je vstřikován vzorek krve Krvinky jsou diluentem usměrňovány a po jedné procházejí aperturou (měřícím kanálem) Apertura obsahuje 2 elektrody jimiž prochází stejnosměrný proud Projde-li částice aperturou, dojde ke změně el. napětí vznik impulsu, který je zaznamenám do histogramu (distribuční křivka) Hustota krvinek je zaznamenána na základě změny odporu radiofrekvenčního proudu (RF) 11
Výstup z impedančního měření RBC a PLT Distribuční křivka velikosti buněk začíná a končí na základní ose mezi hraničními dikriminátory Abnormality: RBC Abn Distribuce příčiny: trombocytóza, fragmenty, mikrocyty, aglutinace, shluky PLT Dimorfní populace Anisocytosa Mikrocytosa Makrocytosa 12
Abnormality v histogramech - příklad RBC PLT Možná interference ERY do PLT Křivka je ovlivněna přítomností abnormálních RBC Dimorfní populace RBC Přítomnost fragmentů? 13
SLS detekční metoda Hemoglobinu (HGB) Stanovení koncentrace HGB v krvi V minulosti HGB měřen cyanmethemoglobinovou metodou a oxyhemoglobinová metoda toxické kyanidové odpady náročné na zpracování vliv na životní prostředí SLS- metoda využívá sodiumlaurylsulfátu (SLS) bezkyanidová metoda: šetření životního prostředí odpadá starost, jak naložit s toxickým odpadem Analýza HGB: lyzační roztok hemolyzuje RBC a WBC hemoglobin zoxiduje na oxyhemoglobin naváže se SLS vznikne stabilní barevný komplex SLS-HGB, který je detekován fotometricky Reakční čas 10s 14
Metoda průtoková cytometrie Analýza fyziologických vlastností krvinek (velikost a struktura buňky) Analýza chemických vlastností krvinek (vnitřní obsah buňky) Krvinky se označí flourescenčním barvivem, které se specificky váže na NK Osvícení vzorku laserovým paprskem dochází k rozdělení krvinek pomocí 3 různých signálů: přední rozptyl FSC (forward scatter light) informace o objemu krvinky boční rozptyl SSC (side scatter light) informace o obsahu buňky boční fluorescence SFL (side flourescent light) informace o množství DNA a RNA v krvince 15
Metoda průtokové cytomerie 16
Rozdíl v intenzitě fluorescence 17
Tělní tekutiny - materiál Mozkomíšní mok Peritoneální výpotky (ascites) Tekutiny z kontinuální ambulantní peritoneální dialýzy (CAPD) Pleurální výpotky Synoviální tekutiny zvýšený objem analyzovaného vzorku vyšší přesnost měření i při nízkých koncentracích analytu Výsledky analýzy během 1 minuty od aspirace vzorku rychlé zjištění případné infekce 18
Měřené parametry v režimu Tělních tekutin WBC-BF Počet bílých krvinek obsažených ve vzorku měřených průtokovou fluorescenční cytometrií MN (%,#) mononukleární buňky = lymfocyty +monocyty PMN (%,#) polymorfonukleární buňky = neutrofilní segmenty + eozinofily + basofily RBC-BF Počet erytrocytů RBC v tělních tekutinách měřený impedanční metodou 19
Scattergram tělních tekutin 20
Reagencie v Sysmex XE-5000 TM Činidlo Objem Počet analýz Použití CELLPACK 20 L 660 Diluent pro DC analýzu při stanovení RBC a PLT CELLSHEATH 20 L 9500 DC analýza při stanovení RBC a PLT STROMATOLYSER-FB 5 L 2750 Analýza bazofilů a WBC metodou PC STROMATOLYSER-4DL 5 L 2750 Roztřídění WBC metodou PC STROMATOLYSER-4DS 42 ml 2000 Roztřídění WBC metodou PC STROMATOLYSER-NR(L), NR(S) 1 L + 12 ml 550 Analýza počtu a poměru NRBR metodou PC SULFOLYSER 5 L 10000 Lyzační činidlo k analýze hemoglobinu SLS- metodou STROMATOLYSER-IM 10 L 3200 Činidlo pro analýzu nezralých buněk metodou RF/DC 1 L + 12 ml 550 Činidla k analýze retikulocytů a opticky analyzovaných trombocytů metodou PC RET SEARCH (II) (diluent) RET SEARCH (II) (barvicí roztok) CELLCLEAN Silný alkalický detergent k odstraňování lyzačních činidel, zbytků buněk a krevních proteinů zůstávajících v hydraulickém systému 21
Hlavní obrazovka 22
Obrazovka Graf 23
Záložka Q-Flags 24
Flagové hlášky pro krevní řady Blasty (Blasts?) Suspektní hlášky Q-Flags WBC RBC/RET PLT Nezralé granulocyty (Immature Gran?) Aglutinace RBC (RBC Agglutination?) Zákal HGB (Turbidity/HGB Interf?) PLT shluky (PLT Clumps?) Posun vlevo (Left Shift?) Nedostatek Fe (Iron Deficiency?) Atypické lymfocyty (Atypical Lympho?) HGB defekt (HGB Defect?) Abnormální lymfocyty/blasty (Abn Lympho/L_Blasts?) Fragmenty RBC (Fragments?) Rezistence k RBC lýze (RBC Lyse Resistance?) 25
Kontrola kvality Obrazovka s pavučinovým grafem Zobrazení hladiny kontroly, čísla šarže, datum a čas měření X-barM analýza 26
Shewhartovy regulační diagramy Používání 3 hladin firemních kontrol Statistické zhodnocení měřených parametrů KO Číselné a grafické zobrazení střední hodnoty, UL a LL regulačních mezí 27
Závěr Změření velkého množství vzorků plné krve včetně vybraných vzorků tělních tekutin v krátkém čase Analýza bez přímého kontaktu s krví pacienta Přehledné výstupy výsledků analýzy jak po stránce číselné tak grafické rychlejší vyhodnocení Upozornění na nesrovnalosti ve vzorku pomocí suspektních Flagových hlášek (Q-Flags) včetně jejich grafického znázornění Kompletní záznamy až o 5000 pacientech, včetně grafických Přehledné záznamy kontrol kvality - jejich vyhodnocení Významný přínos nově měřených parametrů pro potřeby kliniků Technologie analýzy XE 5000 TM poskytuje důkladné vyšetření vzorku plné krve 28
DĚKUJI ZA POZORNOST