Informace pro objednání 04780248 190 (200 testů) 03304671 190 Preciset DAT Plus I CAL 1-6 (6 5 ml) 03304680 190 Preciset DAT Plus II CAL 1-6 (6 5 ml) 03304698 190 C.f.a.s. DAT Qualitative Plus (6 5 ml) 04590856 190 C.f.a.s. DAT Qualitative Plus Clinical (3 5 ml) 03312968 190 04500873 190 03312976 190 03312950 190 Control Set DAT II (pro stanovení 100 ) PreciPos DAT Set II (2 10 ml) PreciNeg DAT Set II (2 10 ml) Control Set DAT Clinical (pro stanovení 100 ) PreciPos DAT Clinical (2 10 ml) PreciNeg DAT Clinical (2 10 ml) Control Set DAT III (pro stanovení 200 ) PreciPos DAT Set III (2 10 ml) PreciNeg DAT Set III (2 10 ml) Control Set DAT I (pro stanovení 300 ) PreciPos DAT Set I (2 10 ml) PreciNeg DAT Set I (2 10 ml) Systémové ID 07 6912 6 Analyzátory, na kterých lze cobas c pack použít COBAS INTEGRA 400 plus COBAS INTEGRA 800 Česky Systémové informace Test BZ1S2, test ID 0 206 pro semikvantitativní stanovení, 100 Test BZ2S2, test ID 0 208 pro semikvantitativní stanovení, 200 Test BZ3S2, test ID 0 210 pro semikvantitativní stanovení, 300 Test BZ1Q2, test ID 0 207 pro kvalitativní stanovení, 100 Test BZ2Q2, test ID 0 209 pro kvalitativní stanovení, 200 Test BZ3Q2, test ID 0 211 pro kvalitativní stanovení, 300 Test BZQ1C, test ID 0 412 pro kvalitativní stanovení, 100 ; použitím C.f.a.s. DAT Qualitative Plus Clinical Použití Benzodiazepines II () je diagnostický in vitro test pro semikvantitativní a kvalitativní detekci benzodiazepinů v lidské moči při koncentraci cut-off 100, 200 a 300 při kalibraci nordiazepamem na systémech COBAS INTEGRA. Získat lze semikvantitativní výsledky testu, které umožňují laboratořím určit využití stanovení jako součást programu kontroly kvality. Semikvantitativní stanovení slouží k měření vhodného naředění potvrzením konfirmační metody jako je plynová chromatografie/hmotnostní spektrometrie (GC/MS) nebo kapalinová chromatografie ve spojení s tandemovou hmotnostní spektrometrií (LC/MS/MS). Benzodiazepines II poskytuje pouze předběžný analytický výsledek. K získání potvrzeného analytického výsledku se musí použít více specifická alternativní chemická metoda. Preferovanou konfirmační metodou je GC/MS nebo LC/MS/MS. 1,2 testů užívání drog, zvláště jsou-li předběžně pozitivní, je třeba hodnotit s klinickým zřetelem a s odborným úsudkem. Souhrn Benzodiazepiny tvoří skupinu univerzálních a běžně předepisovaných léků, tlumících činnost centrální nervové soustavy (CNS) s lékařsky použitelným působením jako anxiolytikum, sedativum, hypnotikum, svalový relaxans a antikonvulzivum. 1,2,3,4,5 Nasákavost, distribuce, rychlost látkové výměny a vylučování se mezi deriváty benzodiazepinu výrazně liší. Kvantitativní rozdíly v jejich účinnosti, farmakodynamickém spektru a farmakokinetických vlastnostech vedly k různým léčebným použitím. Klinické rozdíly lze pozorovat mezi krátko a dlouhotrvajícími benzodiazepiny v jejich účinnosti, vedlejších účincích, abstinenci a potenciál závislosti. 3,6,7 Rozsáhlé a účinné léčebné využití benzodiazepinů vedlo v posledních desetiletích nechtěně k jejich zneužívání. Předávkování benzodiazepiny je často spojeno s požitím léčiv jiných skupin. 8,9 Akutní nebo chronické požívání alkoholu ve spojení s užíváním benzodiazepinu může vést k různým závažným toxikologickým interakcím. Celkový efekt může být ovlivněn vnitřními, vnějšími a farmakokinetickými faktory. Užívání drog probíhá jak s relativně malými dávkami benzodiazepinu, tak i nadužíváním velkých dávek; z tohoto důvodu vyžaduje detekce léčiv/metabolitů v moči vhodný výběr cut-off, která vyhovuje potřebám programu testování na drogy. Po požití jsou benzodiazepiny třídy se substitucí 1,4 (včetně triazolbenzodiazepinových derivátů) absorbovány, metabolizovány a vyloučeny močí různou rychlostí, stejně jako mnoho strukturálně příbuzných metabolitů. Rozličnost metabolitů odráží různost fyziochemických vlastností a metabolických drah jednotlivých léčiv. Celkové metabolické podobnosti zahrnují odstranění substituentů z β kruhu 1,4 substituovaných benzodiazepinů, α hydroxylaci triazolbenzodiazepinů, demethylaci, hydroxylaci třetího uhlíku β kruhu a konjugaci hydroxylovaných metabolitů a následné vyloučení především ve formě glukuronidů. 1,2,3,4,5 Enzymatická hydrolýza glukuronidových benzodiazepinů může zvýšit jejich křížovou reaktivitu s benzodiazepinovým imunostanovením. 10,11,12,13,14 Princip testu Kinetická interakce mikročástic v roztoku (KIMS) 11,15 měřená změnou intenzity procházejícího světla. V případě absence látky ve se volné protilátky váží na látku vázanou na mikročástici, a vytváří agregáty. Jestliže vzorek moči obsahuje dotyčnou látku, probíhá kompetice s částicemi s navázaným derivátem látky o volné protilátky. Protilátka vázaná na léčivo ve není již dostupná pro podporu agregace částic a následný vznik struktury částic je inhibován. S probíhající agregací v případě absence léčiva ve absorbance roste. Naopak, přítomnost drogy ve snižuje nárůst absorbance úměrně koncentraci drogy ve. Obsah léčiva ve se měří poměrem ke známé hodnotě cut-off koncentrace léčiva. Přítomnost enzymu β glukuronidázy zvyšuje křížovou reaktivitu stanovení Benzodiazepines II na některé glukuronidové metabolity. Reagencie - pracovní roztoky R1 SR Reagencie s mikročásticemi Mikročástice konjugované s derivátem benzodiazepinu v pufru a 0.09 azid sodný Reagencie s protilátkou Protilátka proti benzodiazepinům (polyklonální ovčí) v pufru s enzymem β glukuronidázy, bovinný sérový albumin (BSA) a 0.09 azid sodný R1 je v pozici B a SR je v pozici C. Bezpečnostní opatření a varování Věnujte pozornost všem varováním a bezpečnostním opatřením uvedeným v části 1 / Úvod této Příručky metod. 1 / 9
Zacházení s reagenciemi Analyzátor COBAS INTEGRA 400 plus Všechny nové (nepropíchnuté) cobas c packy před použitím v analyzátoru promíchejte po dobu 1 min. v mixéru kazet. Všechny cobas c packy, které jsou již v užívání, musí být na počátku každého týdne (jedenkrát týdně) promíchány stejným způsobem. Analyzátor COBAS INTEGRA 800 Připravena k přímému použití. Analyzátor reagencii automaticky promíchá po dobu 1 minuty po propíchnutí cobas c packu a půl minuty při sekvenci "Begin of Day". Uskladnění a stabilita Doba skladování při 2 8 C: Analyzátor COBAS INTEGRA 400 plus Na palubě při použití při 10 15 C Analyzátor COBAS INTEGRA 800 Na palubě při použití při 8 C Čtěte datum exspirace na štítku balení cobas c pack 12 týdnů 12 týdnů Reagencie nemrazit. Reagencie, které byly zmrazené, se nesmí použít. Odběr vzorků a příprava Pouze níže uvedené vzorky byly testované a jsou přijatelné. Moč: Vzorky moče odebírejte do čistých skleněných či plastových nádobek. Vzorky čerstvé moče nepotřebují zvláštní předúpravu nebo zacházení, ale měly by být ochráněny před kontaminací při pipetování. Vzorky by měly být v běžném fyziologickém rozmezí ph 5 8. Nejsou potřeba žádná aditiva ani konzervans. Doporučujeme uchovávat vzorky při teplotě 2 8 C a zpracovat je do 5 dnů od odběru. 16 Velmi zakalené vzorky před analýzou zcentrifugujte. Příměs či naředění vzorků může způsobit chybný výsledek. Při podezření, že byl vzorek znehodnocen, proveďte nový odběr. Testování validity se požaduje pouze u vzorků odebíraných podle Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs. 17 Varování: Ředění by mělo být použito jen při jejich přípravě pro GC/MS nebo LC/MS/MS ale jinak není vhodné. Postup ředění, je-li použit, by měl být validován. Dodávaný materiál Reagencie jsou uvedeny v části "Reagencie - pracovní roztoky". Stanovení Optimálního využití stanovení dosáhnete, budete-li dodržovat pokyny uvedené v dokumentaci pro příslušný analyzátor. Pokyny ke stanovení specifické pro analyzátor vyhledejte v příslušném návodu k použití. Aplikace pro moč Definice testu COBAS INTEGRA 400 plus Semikvantitativní Kvalitativní Způsob měření Absorbance Absorbance Způsob výpočtu abs. Koncový bod Koncový bod Způsob reakce R1-S-SR R1-S-SR Směr reakce Nárůst Nárůst Start reakce SR SR Vlnová délka A 552 nm 552 nm Rozmezí testu s následným ředěním BZ1S2, BZ2S2 BZ1S2 0-1000 0-5500 BZ1Q2, BZQ1C BZ2S2 0-1000 0-2750 BZ2Q2 BZ3S2 0-3000 0-5750 BZ3Q2 BZ3S2 0-10000 0-30000 Faktor postdiluce Doporučuje se 10* Ne Výpočet první/posl. 34/62 34/62 Jednotka *Pro použití při odhadování koncentrace při přípravě pro analýzu GC/MS nebo LC/MS/MS. Pipetovací parametry BZ1S2, BZ2S2, BZ1Q2, BZ2Q2, BZQ1C Diluent (H 2 O) R1 45 µl 0 µl Vzorek 7 µl 10 µl SR 100 µl 0 µl Celkový objem 162 µl BZ3S2, BZ3Q2 Diluent (H 2 O) R1 45 µl 0 µl Vzorek 2.5 µl 10 µl SR 100 µl 0 µl Celkový objem 157.5 µl Definice testu COBAS INTEGRA 800 Semikvantitativní Kvalitativní Způsob měření Absorbance Absorbance Způsob výpočtu abs. Koncový bod Koncový bod Způsob reakce R1-S-SR R1-S-SR Směr reakce Nárůst Nárůst Start reakce SR SR Vlnová délka A 552 nm 552 nm Rozmezí testu s následným ředěním BZ1S2, BZ2S2 BZ1S2 0-1000 0-5500 BZ1Q2, BZQ1C BZ2S2 0-1000 0-2750 BZ2Q2 BZ3S2 0-3000 0-5750 BZ3Q2 BZ3S2 0-10000 0-30000 Faktor postdiluce Doporučuje se 10* Ne Výpočet první/posl. 45/95 45/95 Jednotka *Pro použití při odhadování koncentrace při přípravě pro analýzu GC/MS nebo LC/MS/MS. Pipetovací parametry BZ1S2, BZ2S2, BZ1Q2, BZ2Q2,BZQ1C Diluent (H 2 O) R1 45 µl 0 µl Vzorek 7 µl 10 µl SR 100 µl 0 µl Celkový objem 162 µl BZ3S2, BZ3Q2 Diluent (H 2 O) R1 45 µl 0 µl Vzorek 2.5 µl 10 µl SR 100 µl 0 µl Celkový objem 157.5 µl Kalibrace Kalibrátory Semikvantitativní aplikace 2 / 9
Mód kalibrace Opakování kalibrace BZ1S2, 0-206; BZ2S2, 0-208 BZ3S2, 0 210 Kalibrátory Preciset DAT Plus II, CAL1-6 0, 50, 100, 200, 400, 1000 (cut-off 100 a 200, DATS8, systémové ID 07 6796 4) Kalibrátory Preciset DAT Plus I, CAL1-6 0, 150, 300, 600, 1000, 3000 (cut-off 300, DATS2, systémové ID 07 6764 6) Kvalitativní aplikace BZ1Q2, 0-207 Kalibrátory Preciset DAT Plus II, CAL 1 0 nebo deionizovaná voda a kalibrátory Preciset DAT Plus II, CAL 3 100 (100 cut-off, DATQ3, systémové ID 07 6770 0) Pro kvalitativní aplikaci má hodnota cut-off 100 přiřazenou hodnotu 1000. BZ2Q2, 0-209 Kalibrátory Preciset DAT Plus II, CAL 1 0 nebo deionizovaná voda a kalibrátory Preciset DAT Plus II, CAL 4 200 (200 cut-off, DATQ4, systémové ID 07 6794 8) Pro kvalitativní aplikaci má hodnota cut-off 200 přiřazenou hodnotu 1000. BZ3Q2, 0-211 Kalibrátory Preciset DAT Plus I, CAL 1 0 nebo deionizovaná voda a C.f.a.s. DAT Qualitative Plus 300 (300 cut-off, DATQ1, systémové ID 07 6744 1) BZQ1C, 0-412 Pro kvalitativní aplikaci má hodnota cut-off 300 přiřazenou hodnotu 1000. Kalibrátory Preciset DAT Plus I nebo II, CAL 1 0 nebo deionizovaná voda a C.f.a.s. DAT Qualitative Plus Clinical 100 (100 cut-off, DATQ5, systémové ID 07 6880 4) Pro kvalitativní aplikaci má hodnota cut-off 100 přiřazenou hodnotu 1000. Semikvantitativní aplikace Logit/Log 4 Kvalitativní aplikace Lineární regrese Doporučen duplikát Kalibrační interval Analyzátor COBAS INTEGRA 400 plus: Každou šarži, každých 28 dní a jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality Analyzátor COBAS INTEGRA 800: Každou šarži, každých 28 dní a jestliže to vyžaduje proces kontroly kvality Kalibrační křivka je vytvářena použitím kalibrátorů. Kalibrátory musí být umístěny podle hodnot koncentrace od nejvyšší po nejnižší do CAL/QC stojánku. Vytvořená křivka je uložena v paměti systému COBAS INTEGRA a podle potřeby znovu vyvolána. Návaznost: Tato metoda byla standardizovaná dle primární referenční metody GC/MS. Kontrola kvality Kontrola kvality Pořadí kontrol 100 cut-off Control Set DAT II PreciPos DAT Set II (DAT2P, systémové ID 07 6771 9) PreciNeg DAT Set II (DAT2N, systémové ID 07 6772 7) nebo Control Set DAT Clinical 200 cut-off Control Set DAT III 300 cut-off Control Set DAT I Kontrola po kalibraci PreciPos DAT Clinical (DATCP, systémové ID 07 6879 0) PreciNeg DAT Clinical (DATCN, systémové ID 07 6878 2) PreciPos DAT Set II (DAT3P, systémové ID 07 6773 5) PreciNeg DAT Set II (DAT3N, systémové ID 07 6774 3) PreciPos DAT Set I (DAT1P, systémové ID 07 6753 0) PreciNeg DAT Set I (DAT1N, systémové ID 07 6754 9) Určeno uživatelem Doporučena Ke kontrole kvality použijte kontrolní materiály uvedené v části "Informace pro objednání". Navíc lze použít i jiný vhodný kontrolní materiál. Koncentrace léčiva v Control Set DAT I, II, III a Clinical byly verifikované GC/MS. Kontrolní intervaly a meze by měly být uzpůsobeny pro každou laboratoř dle individuálních požadavků. Naměřené hodnoty by se měly pohybovat v definovaných mezích. Každá laboratoř by měla mít vypracovaná nápravná opatření pro případ, že hodnoty překročí definované meze. Sledujte příslušná vládní nařízení a lokální směrnice kontroly kvality. Systémy COBAS INTEGRA vykazují výsledky s následujícím označením: Semikvantitativní hodnocení výsledků BZ1S2 (100 cut-off) Bez označení Negativní < 100 <TEST RNG Negativní < 0 >TEST RNG Pozitivní > 1000 POS 100 Pozitivní 100 3 / 9
Výše uvedená rozmezí hodnot jsou založená na hodnotě cut-off 100. BZ2S2 (200 cut-off) Bez označení Negativní < 200 <TEST RNG Negativní < 0 >TEST RNG Pozitivní > 1000 POS 200 Pozitivní 200 Výše uvedená rozmezí hodnot jsou založená na hladině cut-off 200. BZ3S2 (300 cut-off) Bez označení Negativní < 300 <TEST RNG Negativní < 0 >TEST RNG Pozitivní > 3000 POS 300 Pozitivní 300 Výše uvedená rozmezí hodnot jsou založená na hladině cut-off 300. Kvalitativní hodnocení výsledků BZ1Q2, BZQ1C (100 cut-off) Bez označení Negativní < 1000 <TEST RNG Negativní < 0 >TEST RNG Pozitivní > 5500 POS 1000 Pozitivní 1000 Výše uvedená rozmezí jsou založená na přiřazení hodnoty 1000 cut-off hodnotě 100. BZ2Q2 (200 cut-off) Bez označení Negativní < 1000 <TEST RNG Negativní < 0 >TEST RNG Pozitivní > 2750 POS 1000 Pozitivní 1000 Výše uvedená rozmezí jsou založená na přiřazení hodnoty 1000 cut-off hodnotě 200. BZ3Q2 (300 cut-off) Bez označení Negativní < 1000 <TEST RNG Negativní < 0 >TEST RNG Pozitivní > 5750 POS 1000 Pozitivní 1000 Výše uvedená rozmezí jsou založená na přiřazení hodnoty 1000 cut-off hodnotě 300. Semikvantitativní hodnocení výsledků Semikvantifikace předběžně pozitivních výsledků by se měla v laboratořích použít pouze k měření vhodného naředění pro potvrzení konfirmační metodou jako např. GC/MS nebo LC/MS/MS. Laboratoři rovněž umožňuje zřídit postupy kontroly kvality a stanovit využití kontroly. Upozornění: Při použití funkce následného ředění (ředění 1:10) zajistěte, aby nedošlo k přílišnému naředění. Výsledek naředěného musí mít hodnotu alespoň poloviny hodnoty cut-off krát 10. Jestliže je naředěný výsledek menší než polovina hodnoty cut-off x10, zopakujte stanovení s menším ředěním. Ředění, která mají výsledky v blízkosti cutoff, poskytují nejpřesnější stanovení. Chcete-li určit koncentraci předběžně pozitivního, vynásobte výsledek odpovídajícím faktorem ředění. Ředění by mělo být použito jen při přípravě hodnot pro GC/MS nebo LC/MS/MS. Omezení - interference Informace o látkách testovaných tímto stanovením jsou uvedeny v kapitole "Specifické údaje o využití" tohoto dokumentu. Možné však je, že mohou interferovat i jiné komponenty nebo faktory, které mohou negativně ovlivnit výsledek (např. technická chyba nebo chyba postupu). Předběžně pozitivní výsledek dosažený touto metodou indikuje přítomnost benzodiazepinů anebo jejich metabolitů v moči. Nestanovuje však míru intoxikace. Pro diagnostické účely je vždy nezbytné používat výsledky ve spojení s anamnestickými údaji pacienta, klinickým vyšetřením a jinými nálezy. Interferující látky byly přidány do moči obsahující nordiazepam při 25 a +25 hladiny cut-off při koncentraci uvedené níže. Vzorky byly testované a následující výsledky byly získané na analyzátoru COBAS INTEGRA 800: Stejný experiment byl proveden v kvalitativním módu pro každou cut-off. Všechny negativní a předběžně pozitivní vzorky v přítomnosti interferující látky řádně zrekuperovaly. Sloučenina Semikvantitativní () Koncentrace sloučeniny Aceton 1 Kys. askorbová Konjugovaný bilirubin Kreatinin 1.5 0.25 mg/ml 5 mg/ml Etanol 1 Glukóza Hemoglobin Lidský sérový albumin Kys. oxalová Chlorid sodný 20 mg/ml 1 mg/ml 5 mg/ml 2 mg/ml 0.5 M Močovina 6 100 cut-off Neg 77 74 71 78 77 79 76 84 75 80 77 Poz 134 125 113 130 130 130 134 137 122 135 132 200 cut-off Neg 150 149 139 149 143 147 151 154 138 152 148 Poz 251 250 226 249 250 251 250 262 226 251 250 300 cut-off Neg 228 226 216 231 227 227 229 230 205 231 227 Poz 393 386 375 383 379 383 387 395 349 376 387 Byl proveden dodatečný protokol, ve kterém byly testovány vzorky obsahující nordiazepam při hladinách kontroly (± 25 cut-off) s relativní hustotou v rozmezí 1.006 až 1.034. Jako i u ostatních interferencí nedošlo ke cross-over kontroly u žádného ze 3 cut-off stanovení při žádné extrémní hladině relativní hustoty. POTŘEBNÝ KROK Programování speciálního mytí: Při zpracovávání určitých kombinací testů na analyzátorech COBAS INTEGRA je použití speciálních mycích cyklů povinné. Pro další pokyny a pro nejnovější verzi seznamu Extra mycích cyklů čtěte, prosím, metodický list CLEAN. Tam, kde se to vyžaduje, musí být před vykazováním výsledků provedeno programování speciálního mytí/zamezení přenosu mezi vzorky (carry-over). Specifické údaje o využití Reprezentativní údaje o využití pro analyzátory COBAS INTEGRA jsou uvedeny níže. získané v různých laboratořích se mohou lišit. 4 / 9
Preciznost Roztok byl přidán do 4 vzorků získaných z poolované lidské moči, aby byly dosaženy vysoké, nízké a přibližné pozitivní a negativní kontrolní koncentrace látek. Tyto vzorky byly testované na preciznost ve kvalitativních a semikvantitativních režimech. V souladu s protokolem pro preciznost CLSI (EP5 A2) byly vzorky testované ve 2 opakováních na sérii, 2 sériích denně po dobu 21 dní, celkem n = 84. Následující výsledky byly získané analyzátorem COBAS INTEGRA 800. Kvalitativní - 100 cut-off Koncentrace Počet měření # Neg / # Poz Nordiazepam 0 84 84 Neg / 0 Poz Nordiazepam 54 84 84 Neg / 0 Poz Nordiazepam 77 84 84 Neg / 0 Poz Nordiazepam 123 84 0 Neg / 84 Poz Nordiazepam 189 84 0 Neg / 84 Poz Kvalitativní - 200 cut-off Koncentrace Počet měření # Neg / # Poz Nordiazepam 0 84 84 Neg / 0 Poz Nordiazepam 112 84 84 Neg / 0 Poz Nordiazepam 145 84 84 Neg / 0 Poz Nordiazepam 240 84 0 Neg / 84 Poz Nordiazepam 420 84 0 Neg / 84 Poz Kvalitativní - 300 cut-off Koncentrace Počet měření # Neg / # Poz Nordiazepam 0 84 84 Neg / 0 Poz Nordiazepam 161 84 84 Neg / 0 Poz Nordiazepam 236 84 84 Neg / 0 Poz Nordiazepam 375 84 0 Neg / 84 Poz Nordiazepam 608 84 0 Neg / 84 Poz Semikvantitativní - 100 cut-off Konc. # Neg / # Poz Opakovatelnost Mezilehlá preciznost Nordiazepam 54 84 / 0 2.2 4.0 3.4 6.4 Nordiazepam 77 84 / 0 2.1 2.7 3.1 4.1 Nordiazepam 123 0 / 84 1.9 1.5 3.4 2.8 Nordiazepam 189 0 / 84 2.1 1.1 4.1 2.2 Semikvantitativní - 200 cut-off Konc. # Neg / # Poz Opakovatelnost Mezilehlá preciznost Nordiazepam 112 84 / 0 1.8 1.6 3.2 2.8 Nordiazepam 145 84 / 0 2.0 1.4 3.6 2.5 Nordiazepam 240 0 / 84 2.0 0.8 4.8 2.0 Konc. # Neg / # Poz Opakovatelnost Mezilehlá preciznost Nordiazepam 420 0 / 84 2.9 0.7 5.7 1.4 Semikvantitativní - 300 cut-off Konc. # Neg / # Poz Opakovatelnost Mezilehlá preciznost Nordiazepam 161 84 / 0 3.7 2.3 7.2 4.5 Nordiazepam 236 84 / 0 3.8 1.6 6.8 2.9 Nordiazepam 375 0 / 84 3.7 1.0 6.8 1.8 Nordiazepam 608 0 / 84 3.8 0.6 10.4 1.7 Správnost 103 vzorků moči, získaných z klinických laboratoří, kde byly stanoveny jako negativní v panelu látek, bylo vyhodnoceno na benzodiazepiny na analyzátoru COBAS INTEGRA 800. Všech 103 klinických vzorků bylo negativních při cut-off 100, 200 a 300. 55 vzorků získaných klinickou laboratoří, které byly předběžně pozitivní komerčně dostupným imunostanovením a následně potvrzeny kapalinovou chromatografií ve spojení s tandemovou hmotnostní spektrometrií (LC/MS/MS) bylo vyhodnoceno stanovením Benzodiazepines II. 100 těchto vzorků bylo pozitivních vzhledem ke cut-off 100, 200 a 300. Sedm vzorků bylo dále naředěno na koncentraci benzodiazepinu cca 75 100 koncentrace cut-off pro každé cut-off a 7 vzorků bylo naředěno na koncentraci benzodiazepinu cca 100 125 koncentrace cutoff pro každé cut-off. Údaje ze studie správnosti popsané výše, blízké rozmezí hodnot cut-off, byly doplněny o údaje získané u ředěných pozitivních vzorků moči. Následující výsledky byly získané stanovením Benzodiazepines II na analyzátoru COBAS INTEGRA 800 vůči hodnotám LC/MS/MS. Benzodiazepines II klinická korelace (cut-off = 100 ) Analyzátor COBAS INTEGRA 800 Negativní vzorky Hodnoty LC/MS/MS () Blízké cut-off 75 124-126 623-1874 + 0 0 7 55 103 7 0 0 Benzodiazepines II klinická korelace (cut-off = 200 ) Analyzátor COBAS INTEGRA 800 Negativní vzorky Hodnoty LC/MS/MS () Blízké cut-off 148-150 248-253 623-1874 + 0 0 7 55 103 7 0 0 Benzodiazepines II klinická korelace (cut-off = 300 ) Analyzátor COBAS INTEGRA 800 Negativní vzorky Hodnoty LC/MS/MS () Blízké cut-off 223-226 366-382 623-1874 + 0 0 7 55 103 7 0 0 Analytická specifičnost Specifičnost stanovení COBAS INTEGRA Benzodiazepines II pro různé benzodiazepiny a metabolity benzodiazepinu byla měřena vytvořením 5 / 9
inhibiční křivky pro každou uvedenou sloučeninu a měřením přibližného množství každé sloučeniny, která je ekvivalentní reaktivitě stanovení při hodnotě cut-off 100, 200 a 300. Sloučenina a), odpovídající 100 Deschloroetizolam 76 132 Flubromazepam 79 127 3-OH-Flubromazepam 120 83 Pyrazolam 81 123 Clonazolam 86 116 Diclazepam 100 100 Flubromazolam 101 99 Etizolam 121 82 Meclonazepam 160 63 Nifoxipam 184 54 Bentazepam 190 53 Estazolam 92 109 Fenazepam 98 102 Bromazepam 107 93 Alprazolam 108 93 α-hydroxyalprazolam 104 96 4-Hydroxyalprazolam 129 78 Nitrazepam 114 88 7-Aminonitrazepam 84 120 7-Acetamidonitrazepam 26180 0.38 Delorazepam 121 83 Demoxepam 122 82 Clorazepat 123 81 Triazolam 123 81 α-hydroxytriazolam 138 73 Oxazepam 128 78 Oxazepam glukuronid 244 41 Flunitrazepam 136 74 Desmetylflunitrazepam 115 87 7-Aminoflunitrazepam 124 80 Brotiazolam 138 72 Clobazam 139 72 Lormetazepam 141 71 Diazepam 142 71 Nordiazepam 96 105 Temazepam 143 70 Temazepam glukuronid 393 25 Prazepam 152 66 Klonazepam 155 65 7-Aminoklonazepam 130 77 Pinazepam 159 63 Flurazepam 159 63 Sloučenina a), odpovídající 100 Desalkylflurazepam 104 96 Hydroxyetylflurazepam 123 81 Didesetylflurazepam 138 73 Lorazepam 169 59 Lorazepam glukuronid 289 35 Chlordiazepoxid 174 58 Desmetylchlordiazepoxid 146 68 Norchlordiazepoxid 163 62 Halazepam 176 57 Midazolam 181 55 α-hydroxymidazolam 117 85 Desmetylmedazepam 225 45 Nimetazepam 1099 9 Oxaprozin 2773 4 Zolpidem 125000 0.08 a) Odsazená sloučenina je metabolitem předchozí látky. Sloučenina b), odpovídající 200 Pyrazolam 171 117 Deschloroetizolam 172 116 Flubromazepam 177 113 3-OH-Flubromazepam 274 73 Clonazolam 188 106 Diclazepam 215 93 Flubromazolam 210 95 Etizolam 239 84 Meclonazepam 467 43 Nifoxipam 543 37 Bentazepam 508 39 Estazolam 199 100 Fenazepam 219 91 Alprazolam 231 86 α-hydroxyalprazolam 228 88 4-Hydroxyalprazolam 299 67 Bromazepam 239 84 Delorazepam 254 79 Triazolam 266 75 α-hydroxytriazolam 276 72 Clorazepat 271 74 Diazepam 284 70 Nordiazepam 209 96 Oxazepam 290 69 Oxazepam glukuronid 593 34 6 / 9
Sloučenina b), odpovídající 200 Brotiazolam 290 69 Nitrazepam 305 66 7-Aminonitrazepam 186 107 7-Acetamidonitrazepam 87903 0.23 Demoxepam 316 63 Lormetazepam 318 63 Flunitrazepam 320 62 Desmetylflunitrazepam 281 71 7-Aminoflunitrazepam 293 68 Clobazam 324 62 Flurazepam 330 61 Desalkylflurazepam 238 84 Hydroxyetylflurazepam 260 77 Didesetylflurazepam 306 65 Midazolam 347 58 α-hydroxymidazolam 255 78 Temazepam 350 57 Temazepam glukuronid 894 22 Halazepam 355 56 Klonazepam 367 55 7-Aminoklonazepam 303 66 Pinazepam 393 51 Lorazepam 398 50 Lorazepam glukuronid 695 29 Chlordiazepoxid 475 42 Desmetylchlordiazepoxid 393 51 Norchlordiazepoxid 446 45 Prazepam 532 38 Desmetylmedazepam 628 32 Nimetazepam 2431 8 Oxaprozin 10595 2 Zolpidem 250000 0.08 b) Odsazená sloučenina je metabolitem předchozí látky. Sloučenina c), odpovídající 300 Deschloroetizolam 228 132 Flubromazepam 246 122 3-OH-Flubromazepam 386 78 Clonazolam 259 116 Pyrazolam 273 110 Diclazepam 298 101 Flubromazolam 304 99 Etizolam 362 83 Sloučenina c), odpovídající 300 Meclonazepam 509 59 Nifoxipam 601 50 Bentazepam 614 49 Estazolam 306 98 Bromazepam 325 92 Fenazepam 325 92 Alprazolam 354 85 α-hydroxyalprazolam 343 87 4-Hydroxyalprazolam 394 76 Demoxepam 378 79 Delorazepam 382 79 Nitrazepam 386 78 7-Aminonitrazepam 269 111 7-Acetamidonitrazepam 72581 0.41 Triazolam 392 77 α-hydroxytriazolam 405 74 Clorazepat 404 74 Oxazepam 405 74 Oxazepam glukuronid 719 42 Diazepam 405 74 Nordiazepam 304 99 Lormetazepam 429 70 Clobazam 441 68 Flunitrazepam 450 67 Desmetylflunitrazepam 372 81 7-Aminoflunitrazepam 408 74 Brotiazolam 450 67 Temazepam 469 64 Temazepam glukuronid 1186 25 Flurazepam 494 61 Desalkylflurazepam 344 87 Hydroxyetylflurazepam 389 77 Didesetylflurazepam 456 66 Klonazepam 508 59 7-Aminoklonazepam 390 77 Pinazepam 554 54 Halazepam 562 53 Chlordiazepoxid 563 53 Desmetylchlordiazepoxid 494 61 Norchlordiazepoxid 535 56 Midazolam 577 52 α-hydroxymidazolam 405 74 Lorazepam 587 51 Lorazepam glukuronid 874 34 Prazepam 635 47 7 / 9
Sloučenina c), odpovídající 300 Desmetylmedazepam 713 42 Nimetazepam 3435 9 Oxaprozin 8911 3 Zolpidem 200000 0.15 c) Odsazená sloučenina je metabolitem předchozí látky. Mnoho benzodiazepinů se objevuje v moči většinou jako glukuronidy. Glukuronidové metabolity mohou mít větší nebo menší křížovou reaktivitu než původní sloučenina. Přítomnost enzymu β glukuronidázy zvyšuje křížovou reaktivitu stanovení COBAS INTEGRA Benzodiazepines II na některé glukuronidové metabolity. Interference léčiv Následující sloučeniny byly připravené v alikvotech poolované normální lidské moči pro získání konečné koncentrace 100000. Žádná z těchto sloučenin neposkytla ve stanovení hodnoty větší než 0.06 pro cut-off hodnoty 100 a 200 a 0.09 pro cut-off hodnotu 300. Acetaminofen Kys. acetylsalicylová Amitriptylin Amobarbital d-amfetamin l-amfetamin Ampicilin Kys. askorbová Aspartam Atropin Benzokain Benzoylekgonin (metabolit kokainu) Benzfetamin Buspiron Butabarbital Kofein Chlornan vápenatý Kanabidiol Kaptopril Chlorochin Chlorfeniramin Chlorpromazin Kokain Kodein Desipramin HCl Dextrometorfan Dextropropoxyfen Digoxin Difenhydramin Difenylhydantoin Doxepin Imipramin Izoproterenol Ketamin Lidokain L MDA MDMA Melanin Meperidin Metadon d-metamfetamin l-metamfetamin Metaqualon Metylfenidat Metyprylon Morfinsulfát Naloxon Naltrexon Naproxen Niacinamid Nikotin Noretindron l-norpseudoefedrin Omeprazol Penicilin G Pentazocin Pentobarbital Fencyklidin Fenobarbital Fenotiazin Fenylbutazon d,l-fenylpropanolamin Ekgonin Ekgoninmetylester Enalapril d-efedrin l-efedrin Epinefrin Erytromycin Estriol Prokain Prometazin d-pseudoefedrin Chinidin Chinin Sekobarbital Sulindak Tetracyklin Fenoprofen Δ 9 THC-9-karboxylová k. Flumazenil Furosemid Kys. gentisová Glutetimid Guajakol glyceroléter Hydrochlorotiazid Hydroxyindoloctová kys. Hydroxyindolkarboxylová kys. Ibuprofen Tetrahydrozolin Thioridazin Tolmetin Trifluoperazin Trimipramin Tyramin Verapamil Zomepirac Jakákoliv modifikace přístroje, jak je zde uvedeno, vyžaduje validaci laboratoří. Odkazy 1 Karch SB, ed. Drug Abuse Handbook. Boca Raton, FL: CRC Press LLC 1998. 2 Salamone SJ, ed. Benzodiazepines and GHB: Detection and Pharmacology. Totowa, NJ: Humana Press 2001. 3 Hardman JG, Limbird LE, Gilman A, eds. Goodman and Gilman s The Pharmacological Basis of Therapeutics. 10th ed. New York, NY: McGraw Hill Pub Co. 2001. 4 Baselt RC. Disposition of Toxic Drugs and Chemicals in Man. 7th ed. Foster City, CA: Biomedical Publications 2004. 5 Laurijssens BE, Greenblatt DJ. Pharmacokinetic-pharmacodynamic relationships for benzodiazepines. Clin Pharmacokinet 1996;30:52-76. 6 Hallfors DD, Saxe L. The dependence potential of short half-life benzodiazepines: a meta-analysis. Am J Public Health 1993;83:1300-1304. 7 Chouinard G. Issues in the clinical use of benzodiazepines: potency, withdrawal, and rebound. J Clin Psychiatry 2004:65(5);7-12. 8 Abernethy DR, Greenblatt DJ, Ochs HR, et al. Benzodiazepine drugdrug interactions commonly occurring in clinical practice. Curr Med Res Opin 1984;8:80-93. 9 Tanaka E. Toxicological interactions between alcohol and benzodiazepines. J Toxicol Clin Toxicol 2002;40:69-75. 10 Dou C, Bournique JS, Zinda MK, et al. Comparison of the Rates of Hydrolysis of Lorazepam-Glucuronide, Oxazepam-Glucuronide and Temazepam-Glucuronide Catalyzed by E. Coli β-d-glucuronidase Using the OnLine Benzodiazepine Screening Immunoassay on the Roche/Hitachi 917 Analyzer. J of Forensic Science 2001;46(2):335-340. 11 Beck O, Lin Z, Brodin K, et al. The online screening technique for urinary benzodiazepines: comparison with EMIT, FPIA, and GC-MS. J Anal Toxicology 1997;21(7):554-557. 12 Salamone SJ, Honasoge S, Brenner C, et al. Flunitrazepam excretion patterns using the Abuscreen OnTrak and OnLine immunoassays: comparison with GC-MS. J Anal Toxicol 1997;21:341-345. 13 Klette KL, Wiegand RF, Horn CK, et al. Urine benzodiazepine screening using Roche Online KIMS immunoassay with betaglucuronidase hydrolysis and confirmation by gas chromatographymass spectrometry. J Anal Toxicol 2005;29:193-200. 8 / 9
14 Valentine JL, Middleton R, Sparks C. Identification of urinary benzodiazepines and their metabolites: comparison of automated HPLC and GC-MS after immunoassay screening of clinical specimens. J Anal Toxicol 1996;20(6):416-424. 15 Armbruster DA, Schwarzhoff RH, Hubster EC, et al. Enzyme immunoassay, kinetic microparticle immunoassay, radioimmunoassay, and fluorescence polarization immunoassay compared for drugs-ofabuse screening. Clin Chem 1993;39:2137-2146. 16 Toxicology and Drug Testing in the Clinical Laboratory; Approved Guideline. 2nd ed. (C52-A2). Clinical and Laboratory Standards Institute 2007;27:33. 17 Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs. Fed Regist 2008 Nov 25;73:71858-71907. Tečka se v tomto metodickém listu vždy používá jako desetinný oddělovač k označení hranice mezi celými a desetinnými místy desetinného čísla. Oddělení tisíců se nepoužívá. Symboly Roche Diagnostics používá kromě symbolů a znaků uvedených v normě ISO 15223 1 následující znaky: GTIN Obsah soupravy Objem po rekonstituci nebo promíchání Globální číslo obchodní položky Doplnění, odstranění nebo změny textu jsou označeny pruhem podél textu. 2016, Roche Diagnostics Roche Diagnostics GmbH, Sandhofer Strasse 116, D-68305 Mannheim www.roche.com 9 / 9