LABORATORNÍ PŘÍRUČKA Laboratoře Transfuzního oddělení Fakultní nemocnice Hradec Králové

LABORATORNÍ PŘÍRUČKA Laboratoře Transfuzního oddělení Fakultní nemocnice Hradec Králové Sokolská 581, 500 05 Hradec Králové-Nový Hradec Králové, IČO: 00179906 vedoucí lékař Transfuzního oddělení, vedoucí lékař laboratorního úseku MUDr. Vít Řeháček tel. 495833445, e-mail: vit.rehacek@fnhk.cz Verze č.8 platná od 02.02.2015 Vypracoval : Kontroloval : Schválil : Datum: 30.01.2015 Datum: 02.02.2015 Datum: 02.02.2015 Podpis : Podpis : Podpis: Hana Krejčí, vedoucí laborantka MUDr. H. Jiroušová, vedoucí jištění kvality TO MUDr. V. Řeháček, vedoucí laboratorního úseku MUDr. V. Řeháček, vedoucí lékař TO, REVIZE Datum pravidelné roční revize Datum účinnosti verze č. Verze č. 4 od 01.05.2011 Verze č.7 od 01.04.2014 Verze č. 5 od 01.10.2012 Verze č. 6 od 11.03.2013 Rozdělovník: Originál: vedoucí jištění kvality Elektronická forma: intranet/vnitřní předpisy/příručky, www.fnhk.cz: dodavatelé a partneři/laboratorní příručky

Obsah 1. Úvod 2. Základní informace o laboratoři 2.1. Identifikace právního subjektu FN HK 2.2. Identifikace laboratoře a důležité údaje, kontakty 2.3. Základní informace o laboratoři 2.4. Charakteristika pracoviště 2.5. Úroveň a stav akreditace Transfuzního oddělení FN 2.6. Externí hodnocení kvality laboratoří TO (EHK) 3. Služby 3.1. Pracovní náplň laboratoří 3.2. Provozní doba laboratoří transfuzního oddělení 3.3. Přehled jednotlivých laboratorních vyšetření 3.4. Časová odezva jednotlivých laboratorních vyšetření 4. Preanalytická fáze laboratorního vyšetření 4.1. Požadavky na odběrový systém a množství vzorku 4.2. Identifikační údaje 4.3. Transport odebraných vzorků do laboratoře 4.4. Nezbytné operace se vzorkem, stabilita 4.5. Časové a teplotní podmínky pro dopravu vzorků k vyšetření 4.6. Příjem vzorku a jeho další postup v laboratořích TO 4.7. Chyby vedoucí k hemolýze 4.8. Chyby při příjmu vzorků, skladování a transportu 5. Vydávání výsledků a komunikace s laboratoří 5.1. Sdělování a vydávání výsledků 5.2. Telefonické hlášení výsledků vyšetření 5.3. Obecně platná pravidla uvádění výsledků vyšetření ve výjimečných situacích 5.4. Uchovávání kopií výsledků, archivování 5.5. Cesta výsledků na transfuzní oddělení 5.6. Neshody v uvádění výsledků 6. Přílohy 6.1. Žádanka o výdej transfuzního přípravku a krevního derivátu 6.2. Žádanka o laboratorní vyšetření 6.3. Žádanka o vyšetření novorozence 6.4. Seznam laboratorních metod 6.5. Seznam zkratek Strana 2/27

1. Úvod Laboratorní příručka Transfuzního oddělení Fakultní nemocnice v Hradci Králové uvádí přehled laboratorních vyšetření dostupných na tomto pracovišti. Příručka slouží jako nabídka služeb pro kliniky a oddělení v rámci FN a pro externí žadatele. Cílem této příručky je poskytnout zdravotnickým pracovníkům pokyny k provedení správného odběru vzorků, skladování, manipulaci a dopravu vzorků tak, aby nebyl ohrožen výsledek laboratorního vyšetření. Laboratorní příručka je součástí řízené dokumentace transfuzního oddělení dle normy ČSN EN ISO 9001 a ČSN EN ISO 15189, je pravidelně aktualizována a doplňována a žadatelům je dostupná na webových stránkách Fakultní nemocnice HK.: www. fnhk.cz dodavatele a partneři Laboratorní příručky Laboratorní příručka TO/Laboratorní příručka HLA systému a PCR diagnostiky Intranet Informace Vnitřní předpisy Laboratorní příručka 7.64 Laboratorní příručka TO/Laboratorní příručka HLA systému a PCR diagnostiky Transfuzní disk (P) Příručky Strana 3/27

2. Základní informace o laboratoři 2.1. Identifikace právního subjektu FN HK Fakultní nemocnice Hradec Králové je samostatným právním subjektem přímo řízeným Ministerstvem zdravotnictví České republiky. Název Adresa Zřizovatel Zřízení Ředitel nemocnice Fakultní nemocnice Hradec Králové Sokolská 581, 500 05 Hradec Králové Nový Hradec králové Ministerstvo zdravotnictví České republiky na základě zřizovací listiny zde dne 31.12.1999 a Statutu FN HK prof. MUDr. Roman Prymula, CSc., Ph.D. IČO 00179906 DIČ CZ00179906 Telefon 495832350 Fax 495833247 e-mail prymula@fnhk.cz Strana 4/27

2.2. Identifikace laboratoře a důležité údaje, kontakty Název laboratoře Transfuzní oddělení, Fakultní nemocnice Hradec Králové Identifikační údaje IČO 00179906 1. Laboratorní vyšetření v transfuzním lékařství: - vyšetření imunohematologická (KS, screening protilátek, identifikace protilátek, testy kompatibility) - vyšetření hematologická (krevní obraz dárců krve a krevních Předmět činnosti složek) - vyšetření infekčních markerů (HBsAg, AgHCV, anti-hcv, Ag/Ab HIV1,2, syfilis) 2. Laboratorní vyšetření pro transplantační imunologii: (antileukocytové a antitrombocytové protilátky, orgánové transplantace, transplantace kostní dřeně) 3. Laboratorní vyšetření pro PCR diagnostiku (RHD weak/varianta, orgánové transplantace) Adresa Transfuzní oddělení Fakultní nemocnice, Sokolská 581, 500 05 Hradec Králové Umístění laboratoře Okruh působnosti laboratoře Fakultní nemocnice (budova č. 19 a č. 13) akutní péče, standardní lůžková a ambulantní péče Vedoucí lékař oddělení a vedoucí laboratorního úseku: MUDr. Vít Řeháček: tel. 495 833 445, e-mail: rehacekv@lfhk.cuni.cz, vit.rehacek@fnhk.cz asistentka vedoucího lékaře TO: Lenka Košťálová, tel. 495 832 672, e-mail: lenka.kostalova@fnhk.cz Zástupce vedoucího lékaře a vedoucí jištění kvality: MUDr. Hana Jiroušová: tel. 495 833 992, e-mail: hana.jirousova@fnhk.cz Vedoucí laborantka: Hana Krejčí: tel. 495 832 301, e-mail: hana.krejci@fnhk.cz Vedoucí kontrolní laboratoře: PharmDr. Jana Podzimková: tel. 495 832 289, e-mail: jana.podzimkova@fnhk.cz Konzultace pro imunohematologii a problematiku transfuzního lékařství: MUDr. Vít Řeháček MUDr. Hana Jiroušová MUDr. Jitka Černohorská (vedoucí výrobního úseku) tel. 495 832 2445, e-mail: jitka.cernohorska@fnhk.cz Strana 5/27

2.3. Základní informace o laboratoři funkce jméno telefon e-mail vedoucí laboratorního úseku MUDr. Řeháček Vít 495 833 445 rehacekv@lfhk.cuni.cz vit.rehacek@fnhk.cz vedoucí laborantka Krejčí Hana 495 832 301 hana.krejci@fnhk.cz laboratoř expedice TP a testů kompatibility, hematologická laboratoř odběrů plné krve úseková laborantka Bc. Dragúňová Marcela 495 832 448 495 833 393 transfuzni.expedice@fnhk.cz imunohematologická laboratoř, imunohematologická speciální laboratoř a laboratoř infekčních markerů úseková laborantka Vyšvařilová Daniela 495 833 123 daniela.vysvarilova@fnhk.cz laboratoř HLA systému a PCR diaqnostiky, hematologická laboratoř plazmaferetického centra vedoucí laboratoře MUDr. Řeháček Vít 495 833 445 odborný garant RNDr. Jamborová G., Ph.D. rehacekv@lfhk.cuni.cz vit.rehacek@fnhk.cz 495 833 562 gabriela.jamborova@fnhk.cz JOP VŠ Mgr. Synková Kamila 495 833 562 kamila.synkova@fnhk.cz úseková laborantka Nováková Romana 495 833 562 romana.novakova2@fnhk.cz transplantační pohotovost službu mající laborantka 495 832 025 transhla@fnhk.cz Strana 6/27

2.4. Charakteristika pracoviště Laboratoř je součástí komplementu FN HK a provádí vyšetření dárců krve a krevních složek dle platných požadavků legislativy ČR pro zajištění kvality a bezpečnosti transfuzních přípravků vyrobených z lidské krve a dle požadavků SÚKLu. Laboratoř provádí základní a speciální vyšetření pro potřeby lůžkových a ambulantních oddělení FN HK a dalších zdravotnických pracovišť, kterým poskytuje i konzultace v oboru imunohematologie a transfuzního lékařství. Zároveň slouží jako výukové centrum pro potřeby Lékařské fakulty Univerzity Karlovy v Hradci Králové, Farmaceutické fakulty University Karlovi v Hradci Králové, Střední zdravotnické a Vyšší odborné zdravotnické školy Hradec Králové a pro předatestační stáže vysokoškolsky vzdělaným pracovníkům v oboru hematologie a transfuzní služby. 2.5. Úroveň a stav akreditace Transfuzního oddělení FN HK 1. Laboratoř je součástí Fakultní nemocnice v Hradci Králové, která získala Certifikát o Akreditaci FN HK vydaný SAK ČR dne 28.11.2011 2. Od roku 2002 je Transfuzní oddělení držitelem Certifikátu v systému řízení kvality ČSN EN ISO 9001:2000, od roku 2009 ISO ČSN EN 9001:2008 3. Laboratoř získala Osvědčení o úspěšném splnění podmínek AUDIT I. NASKL ČSL JEP (2009, 2011), AUDIT II. NASKL ČSL JEP (25.6.2013). 4. Laboratoř HLA systému a PCR diagnostiky získala osvědčení o akreditaci ČIA pro vybrané PCR laboratorní metody (17.05.2013). 2.6. Externí hodnocení kvality Laboratoř je zařazena do systému externího hodnocení kvality pro: - Imunohematologii - SEKK s.r.o. Pardubice - Lékařskou mikrobiologii SZÚ Centrum laboratorních činností, Praha - Imunogenetiku ETRL Holandsko, CET Vídeň, ÚHKT Praha 3. Služby 3.1. Pracovní náplň laboratoří Laboratoř expedice TP a testů kompatibility Laboratoř slouží jako krevní banka pro skladování a distribuci transfuzních přípravků pro FN HK a zdravotnická zařízení regionu a pro zařízení transfuzní služby ČR. Hlavním úkolem je provádět standardní a statimová vyšetření erytrocytových antigenů AB0 systému, RhD systému, screening protilátek a testy kompatibility před podáním transfuze. Slouží zároveň jako příjem primárních vzorků nejen pro zpracování v laboratoři samé, ale i pro ostatní laboratoře TO. Strana 7/27

laboratoř Slouží k vyšetřování a následnému opakovanému ověřování krevních skupin v systému AB0, RhD a imunogenetických znaků běžně se vyskytujících antigenů u dárců krve a pacientů, krevních složek, přirozených i imunních protilátek. Speciální imunohematologická laboratoř Je určena ke kvalitativnímu a kvatitativnímu vyšetření antierytrocytových protilátek, provádí předtransfuzní vyšetření u pacientů v mimotělním oběhu. Zajišťuje databázi dárců krve s ojedinělým fenotypem. Připravuje kontrolní vzorky pro systém EHK v oboru hematologie a transfuziologie. Laboratoř infekčních markerů Vyšetřuje HBsAg, anti-hcv, Ag HCV, Ab/Ag HIV 1,2 a syfilis u dárců krve a krevních složek, HBsAg a Ab/Ag HIV 1,2 u gravidních žen a u dárkyň mateřského mléka. Hematologická laboratoř pro dárce plné krve a pro plazmaferetické centrum Je určena pro vyšetření kapilárního hemoglobinu, krevního obrazu a tělesné teploty u dárců krve a krevních složek před odběrem. Laboratoř HLA systému a PCR diagnostiky HLA laboratoř provádí stanovení HLA znaků vyšetřovaného jedince neboli HLA typizaci, a to pomocí dvou metod - sérologicky a molekulárně geneticky. Sérologické vyšetření definuje HLA antigeny, tj. molekuly HLA exprimované na buněčných membránách a molekulárně genetické vyšetření určuje HLA alely, tj. sekvence oligonukleotidů kódující HLA antigeny. Principem sérologického vyšetření je mikrolymfocytotoxický test za použití panelu protilátek (soubor diagnostických sér pokrývajících spektrum známých HLA specifit). Sérologicky se stanoví HLA antigeny I. třídy (HLA- A, B, C), včetně samostatného vyšetření antigenu HLA-B27. Molekulárně genetické vyšetření HLA systému se provádí pomocí polymerázové řetězové reakce za použití sekvenčně specifických primerů (PCR SSP). Toto vyšetření interpretuje na úrovni nízkého rozlišení (low resolution). PCR SSP metodika slouží ke zjištění sekvence oligonukleotidů v DNA u konkrétní HLA oblasti (lokus A*, B* DRB1*,DQB1*). Detekce a následné vyhodnocení PCR produktů se provádí elektroforeticky v agarózovém gelu s fluorescenčním barvivem. HLA laboratoř provádí cross-match test, vyšetřuje antileukocytové a antitrombocytové protilátky a vyšetření RHD genotypizace (weak/varianta) metodou PCR SSP. Laboratoř spolupracuje s Českým národním registrem dárců kostní dřeně (ČNRDD) a je jedním z dárcovských center zajišťujících nábor nových dárců pro vstup do registru. Kontrolní laboratoř Kontroluje kvality transfuzních přípravků ve sledovaných parametrech dle doporučení Evropského lékopisu a podle zásad SVP a SLP a SDP daných legislativou ČR. Provádí pravidelné kontroly (dle rozpisu měsíčních kontrol) výrobních prostor, procesní validace, vyšetřuje potransfuzní reakce. Strana 8/27

3.2. Provozní doba laboratoří transfuzního oddělení Laboratoř expedice TP a testů kompatibility laboratoř speciální laboratoř Laboratoř infekčních markerů Hematologická laboratoř odběrů plné krve Hematologická laboratoř aferetického centra Laboratoř HLA systému a PCR diagnostiky nepřetržitý provoz od 22.00-7.00 hod: pouze budova č. 19, přízemí statim vyšetření 7.00-15.30 budova č. 19, 2.patro 7.00-15.30 budova č. 19, 2.patro 7.00-15.30 budova č. 19, 2.patro 7.00 11.00 14.00 17.00 (středa) budova č. 19, přízemí pondělí 7 00-11 00, 13 00 17. 00 středa 7 00-11 00, 13 00-15 00 úterý, čtvrtek a pátek 7 00-13 00 budova č. 13 7.00-15.30 transplantační pohotovostslužba na telefonu Kontrolní laboratoř 7.00-15.30 budova č. 13 budova č. 13 Strana 9/27

3.3. Přehled jednotlivých laboratorních vyšetření 3.3.1. vyšetření Typ laboratorní metody (vyšetření) Stanovení AB0 + RhD Stanovení antigenů ostatních skupinových systémů Screening nepravidelných protilátek Identifikace nepravidelných protilátek Coombsův test přímý (PAT), nepřímý (NAT) Předtransfuzní vyšetření Potransfuzní reakce Vyšetření u novorozence: stanovení AB0,RhD, PAT, VIP (anti-a/anti-b) Výměnná transfuze, neonatální transfuze Vyšetření chladových aglutininů Laboratoř laboratoř Laboratoř expedice TP speciální laboratoř Laboratoř expedice TP speciální laboratoř Laboratoř expedice TP speciální laboratoř Laboratoř expedice TP speciální laboratoř Laboratoř expedice TP Kontrolní laboratoř, mimo pracovní dobu základní vyšetření expedice TP Laboratoř expedice TP Laboratoř expedice TP speciální laboratoř Laboratoř expedice TP Odběr primárního vzorku 5 ml nesrážlivé žilní krve 5 ml nesrážlivé žilní krve 5 ml nesrážlivé žilní krve 5 ml nesrážlivé žilní krve 5 ml nesrážlivé žilní krve 5 ml nesrážlivé žilní krve 5 ml nesrážlivé žilní krve + 5ml srážlivé žilní krve + všechny vaky se zbytkem TP podáných za 24 hod. 5 ml pupečníkové krve nebo 2ml žilní krve (minimálně však 1ml) nesrážlivá krev 2 ml nesrážlivé žilní krve dítěte +5 ml nesrážlivé žilní krve matky 5 ml srážlivé žilní krve Poznámka K 2 EDTA, K 3 EDTA, CPD, ACD dle firemního typu zkumavky K 2 EDTA, K 3 EDTA, CPD, ACD dle firemního typu zkumavky K 2 EDTA, K 3 EDTA, CPD, ACD dle firemního typu zkumavky K 2 EDTA, K 3 EDTA, CPD, ACD dle firemního typu zkumavky K 2 EDTA, K 3 EDTA, CPD, ACD dle firemního typu zkumavky) K 2 EDTA, K 3 EDTA, CPD, ACD dle firemního typu zkumavky K 2 EDTA, K 3 EDTA, CPD, ACD dle firemního typu zkumavky + zkumavka bez protisrážlivého činidla (NE s gelem) K 2 EDTA, K 3 EDTA, CPD, ACD dle firemního typu zkumavky minimálně však 1 ml K 2 EDTA, K 3 EDTA, CPD, ACD dle firemního typu zkumavky ihned na TO při dodržení teploty +37 C (ve vodní lázni a v termosce). Strana 10/27

3.3.2. Vyšetření HLA systému sérologickou a/nebo PCR metodou Typ laboratorní metody (vyšetření) Laboratoř Primární vzorek Poznámka Protilátky antileukocytové, antitrombocytové 5 ml srážlivé žilní krve nebo 2 ml séra HLA systém I.třídy lokus A, B, C sérologicky HLA B27 antigen sérologicky HLA (sérologická laboratoř) 5 ml nesrážlivé žilní krve, nebo lymfocytární suspenze ze sleziny či uzliny 5 ml nesrážlivé žilní krve heparinum natrium dle firemního typu zkumavky heparinum natrium dle firemního typu zkumavky CM test (cross-match) 5 ml nesrážlivé žilní krve 5 ml srážlivé žilní krve heparinum natrium dle firemního typu zkumavky HLA systém I. a II. třídy PCR metodou Typizace RHD weak/varianty HLA (PCR laboratoř) 5 ml nesrážlivé žilní krve 5 ml nesrážlivé žilní krve K 3 EDTA, dle firemního typu zkumavky K 3 EDTA, dle firemního typu zkumavky Celiakie (typizace DQ2, DQ8) 5 ml nesrážlivé žilní krve K 3 EDTA, dle firemního typu zkumavky 3.3.3. Vyšetření infekčních markerů Typ laboratorní metody (vyšetření) HBsAg, Ag/Ab HIV 1,2, anti-hcv, syfilis Laboratoř Primární vzorek Poznámka Laboratoř infekčních markerů 5 ml srážlivé žilní krve zkumavka bez protisrážlivého činidla dle firemního typu včetně gelové Strana 11/27

3.4. Časová odezva jednotlivých laboratorních vyšetření 3.4.1. vyšetření Typ laboratorní metody (vyšetření) Stanovení AB0, RhD Stanovení AB0, RhD + screening protilátek Stanovení antigenů v ostatních skupinových systémech Screening nepravidelných protilátek Identifikace nepravidelných protilátek Coombsův test přímý, nepřímý (PAT, NAT) Vyšetření chladových aglutininů Předtransfuzní vyšetření Stanovení AB0, RhD a PAT u novorozence VIP (anti-a/anti-b) u novorozence Výměnná transfuze, neonatální transfuze Potransfuzní reakce Laboratoř laboratoř Časová odezva Vyšetření mimo pracovní dobu Vyšetření STATIM 6 hod. ne ne Laboratoř expedice TP 20 min ano ano s následným výdejem TP Laboratoř expedice TP 90 min ano ano speciální laboratoř 15 60 min. ne ne Laboratoř expedice TP 15 60 min. ano ne speciální laboratoř 24 hod. pouze pro prenatální vyšetření Laboratoř expedice TP 90 min. ano ano speciální laboratoř ne ne 3 hod. ne ne Laboratoř expedice TP 2 hod. ano ne speciální laboratoř speciální laboratoř Laboratoř expedice TP 3 hod. ne ne s titrem 24 hod. bez titru 60 min. ne ano pouze pro ECC ano pouze pro ECC ano pouze pro ECC STATIM 90 min. ano ano Standard 180 min. ano ano vitální indikace 5 min. ano ano urgentní protokol ERY 5 min. ano ano urgentní protokol TBSDR 5 min. ano ano urgentní protokol P 25 min ano ano Laboratoř expedice TP 60 min. ano Laboratoř expedice TP 60 min. ano ano pouze pro JIP ano pouze pro JIP Laboratoř expedice TP cca 120 min. ano ano Kontrolní laboratoř 10 dnů ne ne Laboratoř expedice TP orientačně 90 min. ano ne Strana 12/27

3.4.2. Vyšetření HLA systému Typ laboratorní metody (vyšetření) Protilátky antileukocytové antitrombocytové HLA systém I. třídy lokus - A, B, C (sérologicky) HLA-B27 (sérologicky) CM test (cross-match) HLA systém I. a II. třídy oblast - A*, B*, DRB1* DQB1* metodou PCR HLA systém I. a II. třídy oblast - A*, B*, DRB1*, DQB1* metodou PCR Typizace RHD variant a slabých D typů metodou PCR Celiakie, typizace DQ2, DQ8 metodou PCR Laboratoř HLA (sérologická laboratoř) HLA (sérologická laboratoř) HLA (sérologická laboratoř) HLA (sérologická laboratoř) HLA (PCR laboratoř) HLA (PCR laboratoř) HLA (PCR laboratoř) HLA (PCR laboratoř) Časová odezva Vyšetření mimo pracovní dobu Vyšetření STATIM 2 týdny ne ne 5 hod. pro transplantační program ne 5 hod. ne ne 4 hod. 6 hod. transplantační program transplantační program transplantační program (aktuální cross match) ano transplantační program kadaverozní dárce 6 hod. ne ne 6 hod. ne ano 4 hod. ne ne 3.4.3. Vyšetření infekčních markerů Typ laboratorní metody (vyšetření) HBsAg, Ag/Ab HIV 1,2, anti-hcv, syfilis HBsAg, Ag/Ab HIV 1,2 Laboratoř Laboratoř infekčních markerů pro dárkyně mateřského mléka Laboratoř infekčních markerů pro prenatální poradny Časová odezva denně 3 hod. denně 3 hodiny Vyšetření mimo pracovní dobu ne ne Vyšetření STATIM ne ne Strana 13/27

4. Preanalytická fáze laboratorního vyšetření 4.1. Požadavky na odběrový systém a množství vzorku Pro odběry vzorků ve FN HK je určen bezpečnostní odběrový systém VACUTAINER. 4.1.1. Odběrové systémy pro vyšetření a množství vzorku Laboratoř HLA/PCR Vyšetření Zkumavka VACUTAINER Množství žilní krve HLA I. třída ZELENÁ / Heparin 5 ml HLA-B27 ZELENÁ / Heparin 5 ml sérologicky PCR Antileukocytové protilátky Antitrombocytové protilátky CM test cross match ČERVENÁ / bez protisrážlivého činidla ČERVENÁ / bez protisrážlivého činidla ZELENÁ / Heparin (od dárce) ČERVENÁ / bez protisrážlivého činidla (od příjemce) 5 ml 5 ml 2x 5 ml HLA I. třída A,B FIALOVÁ / K 3 EDTA 5 ml HLA II. třída DR, DQ FIALOVÁ / K 3 EDTA 5 ml Typizace RHD variant a slabých D typů FIALOVÁ / K 3 EDTA 5 ml Typizace DQ2, DQ8 FIALOVÁ / K 3 EDTA 5 ml Strana 14/27

4.1.2. Odběrové systémy pro vyšetření a množství vzorku Pro imunohematologická vyšetření (transfuzní účely) nepoužívejte zkumavky se separačními gely!! Laboratoř Vyšetření Zkumavka VACUTAINER Množství žilní krve imunohematologická expedice TP a testů kompatibility krevní skupina AB0, RhD předtransfuzní vyšetření (KS, screening protilátek, test kompatibility) screening protilátek výměnná transfuze chladové aglutininy VYŠETŘENÍ NOVOROZENCE RŮŽOVÁ / K 2 EDTA FIALOVÁ / K 3 EDTA RŮŽOVÁ / K 2 EDTA FIALOVÁ /K 3 EDTA RŮŽOVÁ / K 2 EDTA FIALOVÁ / K 3 EDTA RŮŽOVÁ / K 2 EDTA FIALOVÁ / K 3 EDTA ČERVENÁ bez protisrážlivého roztoku 5 ml 5 ml (minimálně 4 ml) 5 ml 2 ml krve dítěte a 5 ml krve matky 5 ml transport ve vodní lázni +37 C v termosce stanovení AB0, RhD, PAT, VIP (anti-a/anti-b) RŮŽOVÁ / K 2 EDTA FIALOVÁ / K 3 EDTA 2-5 ml pupečníkové krve nebo minimálně 1 ml krve dítěte imunohematologická speciální Coombsův test screening protilátek identifikace protilátek Izohemaglutininy (anti-a, anti-b) eluční test RŮŽOVÁ / K 2 EDTA FIALOVÁ / K 3 EDTA RŮŽOVÁ / K 2 EDTA FIALOVÁ / K 3 EDTA RŮŽOVÁ / K 2 EDTA FIALOVÁ / K 3 EDTA RŮŽOVÁ / K 2 EDTA FIALOVÁ / K 3 EDTA ČERVENÁ bez protisrážlivého činidla RŮŽOVÁ / K 2 EDTA FIALOVÁ / K 3 EDTA 3 5 ml 5 ml 5 ml 5 ml 10 ml nutno dodržet množství! infekčních markerů HBsAg, syfilis, anti-hcv, Ab/Ag HIV 1,2 ŽLUTÁ se separačním gelem 3 5 ml kontrolní potransfuzní reakce RŮŽOVÁ / K 2 EDTA nebo FIALOVÁ / K 3 EDTA a ČERVENÁ bez protisrážlivého činidla 2 x 5 ml a vaky se zbytkem transfuzních přípravků za 24 hod.. Strana 15/27

4.2. Identifikační údaje Žádanky se na Transfuzní oddělení v rámci Fakultní nemocnice zasílají v papírové podobě Žádanka o imunohematologické vyšetření musí obsahovat základní identifikační údaje: a) název zdravotního zařízení, jeho identifikační číslo, pokud bylo přiděleno (u externího lékaře IČZ a adresu pracoviště), název oddělení, telefonní kontakt a identifikační číslo zdravotní pojišťovny b) jméno (popřípadě jména), příjmení a číslo pojištěnce, který je plánovaným příjemcem transfuzního přípravku. V případě, že nejsou potřebné údaje známy, uvede se údaj jednoznačně identifikující plánovaného příjemce c) diagnóza pacienta a důvod podání transfuzního přípravku d) krevní skupinu (AB0, RhD), pokud byla vyšetřena e) druh požadovaného vyšetření f) transfuzní anamnézu obsahující předchozí transfuze, porody, těhotenství, potraty a potransfuzní reakce, zjištěné protilátky g) typ transfuzního přípravku, den a hodinu výdeje, požadované množství (TU, TD) h) požadavky na další úpravu transfuzního přípravku (ozáření, proprání) i) razítko žadatele (razítko oddělení, jmenovka a podpis ošetřujícího lékaře) j) jmenovka a podpis zodpovědné osoby za identifikaci odebraného vzorku (sestra, lékař) k) datum a čas odběru vzorku Vzorek k laboratornímu vyšetření se zásadně odebírá do předem označené zkumavky tak, aby nebyla možná jeho záměna. Správnost údajů se ověřuje podpisem osoby, která vzorek odebrala. Identifikaci pacienta a správnost údajů uvedených na vzorku a žádance potvrdí podpisem odebírající osoba. Identifikační označení primárního vzorku Správně zvolená zkumavka pro požadované vyšetření Zkumavka uzavřená uzávěrem (dle typu firemní zkumavky) Zkumavka nepotřísněná biologickým materiálem (krví) Správně označený vzorek Údaje na štítku jednoznačně identifikují vyšetřovaného v souladu s údaji na žádance známá osoba : jméno a příjmení pacienta rodné číslo, datum (rok) narození datum odběru vzorku neznámá osoba : neznámý 1, 2, 3.. datum odběru vzorku Po identifikaci pacienta musí odesílající oddělení okamžitě informovat transfuzní oddělení, aby byla zajištěna nezaměnitelnost materiálu a žádanky. Strana 16/27

4.3. Transport odebraných vzorků do laboratoře Vzorky krve k vyšetření jsou přijímány v laboratoři expedice - příjem materiálu (budova transfuzního oddělení č.19, zvýšené přízemí vpravo) Transport vzorků na transfuzní oddělení se děje: Individuálně - materiál je donesen sanitářem nebo jinou pověřenou osobou vysílajícího oddělení Pravidelným svozem materiálu - 9,00, 12,00, 13,30 hod. Výjimka: pro vzorek sleziny nebo mízní uzliny při transplantační pohotovosti si po výzvě koordinátora dochází laborantka TO osobně na odběrový sál Základní informace k bezpečnosti při manipulaci se vzorky Na základě platné legislativy byly stanoveny tyto zásady pro bezpečnost práce s biologickým materiálem: Každý vzorek krve je nutné považovat za potencionálně infekční - je třeba zabránit možnému kontaktu pacientů a veřejnosti s biologickým materiálem. Biologický materiál musí být přepravován v uzavřených odběrových nádobách, vložených do stojánku nebo přepravního kontejneru tak, aby během transportu do laboratoře nemohlo dojít k jeho rozbití, rozlití nebo jinému znehodnocení, kontaminaci osob nebo dopravních prostředků použitých k přepravě. V případě rozlití vzorku se postupuje podle pokynů o dezinfekci a dekontaminaci. Žádanky ani vnější strana zkumavky nesmí být kontaminovány biologickým materiálem, toto je důvodem k odmítnutí přijetí vzorku laboratoří, viz. kapitola 4.7. 4.4. Nezbytné operace se vzorkem, stabilita Primární vzorky (řádně označené jménem a datem narození nebo rodným číslem pacienta) musí být dopraveny do laboratoře v čase odpovídajícímu povaze požadovaných vyšetření, v rozmezí teplot, které zajistí stabilitu vzorku během dopravy, odebrané do vhodně zvolené zkumavky s příměsí konzervačních látek, které zajistí stabilitu vzorku, rychlou a bezpečnou dopravní cestou, která zajistí neporušenost vzorku a zabezpečí jej před poškozením. Primární vzorky určené k vyšetření STATIM musí být doručeny na transfuzní oddělení ihned po odběru, s přesně označeným časem odběru vzorku na žádance i na zkumavce s primárním vzorkem! Strana 17/27

4.5. Časové a teplotní podmínky pro dopravu vzorků k vyšetření 4.5.1. Primární vzorky k vyšetření AB0, RhD, antierytrocytové protilátky v den odběru do 3 hodin po odběru za předpokladu dodržení podmínek uchovávání vzorku: vzorky krví musí být umístěny na vyhrazeném a zřetelně označeném místě při pokojové teplotě, vždy ochráněné před přímým slunečním svitem nebo před zmrznutím nebo nejpozději do 24 hodin po odběru za předpokladu dodržení podmínek uchování vzorku: v chladnici při teplotě +2 C až + 8 C až do doby odeslání vzorku. 4.5.2. Primární vzorky k vyšetření kompatibility před krevním převodem (test kompatibility) v den odběru do 3 hodin po odběru za předpokladu dodržení podmínek uchovávání vzorku: vzorky krví musí být umístěny na vyhrazeném a zřetelně označeném místě při pokojové teplotě, vždy ochráněné před přímým slunečním svitem nebo před zmrznutím nebo nejpozději do 24 hodin po odběru za předpokladu dodržení podmínek uchování vzorku: v chladnici při teplotě +2 C až + 8 C až do doby odeslání vzorku. Pro každé další předtransfuzní vyšetření požadujeme odběr nového vzorku krve!! Každá převedená jednotka transfuzního přípravku může být zdrojem vzniku nepravidelných aloprotilátek u příjemce! 4.5.3. Primární vzorky určené k vyšetření STATIM musí být doručeny na transfuzní oddělení IHNED po odběru, s přesně označeným časem odběru vzorku na žádance i na zkumavce s primárním vzorkem!!!! 4.5.4. Primární vzorky určené k vyšetření STANDARD (na druhý den) je třeba doručit do laboratoře do 12.30 hodin, vzorky jsou zpracovány v analyzátoru v denním provozu. 4.5.5. Primární vzorky k vyšetření na chladové aglutininy musí být doručeny IHNED za dodržení stálého teplotního optima: teplota vzorků: pro vyšetření chladových aglutininů musí vzorky mít teplotu +37 C (termobox, vodní lázeň + 37 o C). Strana 18/27

4.6. Příjem vzorku a jeho další postup v laboratořích TO Laboratoř expedice TP a testů kompatibility (centrální příjem) Ostatní laboratoře centrální příjem vzorku pro laboratoře TO u příjmového okénka (laborantka, sanitářka), přidělení čísla vyšetření rozdělení vzorků do stojánků pro jednotlivé laboratoře TO podle požadovaného vyšetření jednotlivé laboratoře TO si odnášejí vzorky průběžně centrální příjem vzorku pro laboratoř testů kompatibility a expedice TP kontrola žádanek, primárních vzorků a požadovaného vyšetření přidělení čísla vyšetření, polepení čárovými kódy a zadání dat do počítače zjištěné neshody vzorků z klinik FN HK řeší ihned přijímající osoba záznam je proveden v knize Expedice chyby z oddělení příjem vzorku na laboratoři TO kontrola žádanek, primárních vzorků a požadovaného vyšetření zadání dat do počítače kontrola zadaného materiálu (vzorek a žádanka) NESHODA chybné nebo chybějící IČZ se hlásí ihned odpovědné osobě laboratoře, která zajistí nápravu chybné RČ, diagnóza, pojišťovna se doplní po telefonickém ověření u žadatele (laborantka) chybně odebraný vzorek (sražený, hemolytický) se nevyšetřuje, písemnou formou je informován žadatel, kopie je uložena ve složce Neshody v preanalytické fázi. 4.7. Chyby vedoucí k hemolýze 1. Znečistění jehly nebo pokožky stopami ještě tekutého dezinfekčního roztoku 2. Použití příliš úzké jehly 3. Prudké třepání krve ve zkumavce (padá v úvahu i při nešetrném transportu krve ihned po odběru) 4. Prodloužení doby mezi odběrem a dodáním do laboratoře 4.8. Chyby při příjmu vzorků, skladování a transportu 1. Neoznačený nebo nečitelně označený vzorek 2. Chybějící nebo neúplné požadované údaje na žádance 3. Nesprávně odebraný vzorek (množství, nesprávný typ zkumavky, naředěný vzorek odebraný z kanyly) Strana 19/27

4. Znehodnocený vzorek (hemolýza,sražený, chylózní) 5. Nedostatečné množství vzorku 6. Žádanky nebo zkumavky jsou potřísněny biologickým materiálem 7. Uplynula delší než stanovená doba mezi odběrem vzorku a jeho doručením na pracoviště 8. Vzorek byl transportován při nesprávné teplotě Vzorky nesplňující požadavky na standardní značení a chybně odebrané vzorky nelze vyšetřit Žadatel je telefonicky informován o odmítnutí neshodného vzorku. Žádanka s popisem neshody se archivuje. Chybně zaslaný vzorek se likviduje podle platných vnitřních předpisů FN. Záměnu vzorku identifikace primárního vzorku nesouhlasí s údaji na doprovodné žádance vyšetřená krevní skupina nesouhlasí s údaji v databázi v počítači Při záměně je vyžadován nový odběr vzorku a nově vyplněná žádanka 5. Vydávání výsledků a komunikace s laboratoří 5.1. Sdělování a vydávání výsledků Laboratorní výsledky se vydávají v papírové podobě. Výstup z počítačového systému AMADEUS v podobě výsledkové zprávy obsahuje: 1. Název a adresu oddělení, které výsledek vydalo 2. Jednoznačnou identifikaci pacienta (jméno, rodné číslo) 3. Název oddělení požadující vyšetření, kód oddělení, IČZ, adresu odesílajícího oddělení 4. Datum (čas) zhotovení výsledku vyšetření 5. Identifikační číslo žádanky 6. Diagnózu pacienta 7. Pojišťovnu pacienta 8. Výsledek vyšetření 9. Jméno a podpis osoby zodpovědné za správnost výsledku 10. Identifikace osoby zodpovědné za interpretaci výsledků Všechny výsledky vyšetření lze sdělit pacientovi, dárci, zákonnému zástupci (u dětí) osobně, který se prokáže průkazem totožnosti s fotografií (občanský průkaz, cestovní pas, vojenská knížka, služební průkaz,.). Výsledky vyšetření se odesílají: a) vnitřní poštou v rámci FN b) poštou FN na adresu žadatele (zdravotnické zařízení) Výsledky vyšetření z laboratoře HLA systému a PCR diagnostiky transplantační služby se odesílají pomocí elektronického komunikačního systému TRINIS. V případě selhání systému lze sdělit faxem: Koordinační centrum transplantací Praha (fax. 420 271019356). Zpráva o odeslání obsahuje datum, čas, příjemce výsledků, odesílatel výsledků, počet stran výsledků. Strana 20/27

5.2. Telefonické hlášení výsledků vyšetření: a/ pracovník laboratoře má v odůvodněných případech právo odmítnout telefonickou žádost o sdělení výsledku vyšetření b/ v metodickém pokynu SJ 5.8./15189 jsou uvedeny případy, kdy pracovník laboratoře může výsledek vyšetření sdělit Hlášení výsledků je prováděno podle SM_65 Vedení zdravotnické dokumentace ve FN HK. Hlášení výsledků obsahuje úplnou formu výsledku, případné poznámky či komentáře. Hlášení výsledku je zaznamenáno do katalogu Varovných nebo kritických intervalů (SJ 5.8./15189). 5.2.1. Pravidla pro telefonické sdělování výsledků otázka k ověření totožnosti volající strany nabídka pro volajícího, odeslat OPIS výsledku vyšetření - odeslat e-mailem: transexp@fnhk.cz (uvést: jméno pacienta, datum narození, číslo vyšetření, výsledek vyšetření, jméno odesílající laborantky) 5.2.2. Zodpovědnost za sdělování výsledků vyšetření: vedoucí laboratorního úseku: MUDr. V. Řeháček kvalifikovaná osoba TO: MUDr. V. Řeháček, MUDr. H. Jiroušová MUDr. J. Černohorská, MUDr. Petr Papoušek odbroný garant laboratoře HLA systému a PCR diagnostiky: RNDr. G. Jamborová, Ph.D. pověřená kompetentní osoba laboratoře 5.2.3. Povinné hlášení výsledků telefonicky Laboratoř musí neprodleně upozornit lékaře nebo jiného klinického pracovníka odpovědného za péči o pacienta, jestliže: se výsledky vyšetření ocitnou ve varovných nebo kritických intervalech (pro transfuzní lékařství jde o nálezy nepravidelných protilátek, inkompatibilita, vzácné antigeny, protilátky jiného tepelného optima). dojde ke zpoždění výsledku vyšetření a je ohrožen pacientův život v důsledku dodatečného zpracování vzorku. Pracovník laboratoře informuje ošetřujícího lékaře nebo klinického pracovníka odpovědného za péči o pacienta o přibližném čase prodlevy. Seznam varovných nebo kritických intervalů : nález nepravidelných protilátek nález chladových aglutininů (protilátky jiného tepelného optima) nález autoprotilátek inkompatibilita záměna vzorku Strana 21/27

5.3. Obecně platná pravidla uvádění výsledků vyšetření ve výjimečných situacích STATIM výsledky vyšetření testu kompatibility se nesdělují (následuje požadavek na vydání transfuzního přípravku) STATIM výsledky vyšetření ostatních testů (vyšetření novorozence, Coombsův test, dárci trombocytů) se hlásí ihned po uzavření výsledku vyšetření. Výsledky vyšetření se hlásí na oddělení vždy, když: 1. výsledek vyšetření u STANDARDNÍHO vzorku vykazuje varovné nebo kritické hodnoty 2. jde o záměnu vzorku se hlásí správná nebo ověřená krevní skupina 3. jde o zpoždění výsledku vyšetření (pro transfuzní lékařství jde o nálezy nepravidelných protilátek, inkompatibilita, protilátky jiného tepelného optima). 5.4. Uchovávání kopií výsledků, archivování Výsledky jsou kdykoli dostupné prostřednictvím databáze informačního systému AMADEUS, firmy Steiner, Praha. Denně se provádí tisk primárních protokolů a tisk seznamu vyšetření. Primární protokoly se archivují 30 roků. 5.5. Cesta výsledků na transfuzním oddělení Výsledky vyšetření z laboratoří jsou předány k odeslání: a) kartotéka výsledků na expedici (zařazení podle jednotlivých klinik FN, nebo externích žadatelů) b) odpovědná osoba denně odesílá výsledky vyšetření v zalepených obálkách c) laboratoř HLA systému a PCR diagnostiky předává výsledky vyšetření do kartotéky výsledků vyšetření na expedici v zalepených obálkách. Odpovědná osoba eviduje všechny poštou odeslané výsledky v knize Odeslaná pošta a doporučené zásilky v databázi počítače E-spis. 5.6. Neshody v uvádění výsledků Řeší metodický pokyn 02/12 Změna zprávy. Neshodné výsledky jsou evidovány v protokolu Změna zprávy. Výsledky, které byly propuštěny mimo TO, musí být označeny jako neshoda závažná a musí být zaznamenány do karty neshod, případně nahlášeny jako nežádoucí událost. Strana 22/27

6.1. Žádanka o výdej transfuzního přípravků a krevního derivátu Strana 23/27

6.2. Žádanka o laboratorní vyšetření Strana 24/27

6.3. Žádanka o vyšetření novorozence Strana 25/27

6.4. Seznam laboratorních metod Imunohematologie Vyšetření krevní skupiny AB0, RhD Vyšetření antigenů erytrocytů v ostatních krevně skupinových systémech Vyšetření krevní skupiny AB0, RhD u novorozence Vyšetření kompatibility transfuzního přípravku Vyšetření chladových aglutininů a titrace Přímý antiglobulínový test (Coombsův test) Screening antierytrocytových protilátek Screening imunních protilátek v AB0 systému u novorozence Identifikace antierytrocytových protilátek Titrace antierytrocytových protilátek Titrace přirozených pravidelných protilátek u výrobků (TADR v SSP a TBSDR v SSP) Laboratoř HLA systému Screeningové vyšetření antitrombocytových a antileukocytových protilátek Cross-match nepříbuzných dárců Určování HLA antigenů I. a II. třídy Kompletní vyšetření imunologické kompatibility před orgánovou transplantací Určování HLA-B27 antigenu Laboratoř PCR diagnostiky Typizace genů HLA systému I. a II. třídy Typizace kvalitativních a kvantitativních odchylek RHD erytrocytárního antigenního systému D weak a D varianty Typizace HLA znaků asociovaných s chorobami (celiakie) Laboratoř infekčních markerů Stanovení protilátek proti viru hepatitidy C (anti-hcv) Stanovení protilátky proti Treponema pallium (syfilis) Stanovení povrchového antigenu viru hepatitidy B (HBsAg) Stanovení protilátky proti HIV-1/HIV-2 a antigenu HIV p24 Hematologická laboratoř běžných odběrů a plazmaferetického centra Kompletní krevní obraz se 7 parametry pro dárce krve a krevních složek Strana 26/27

6.5. Seznam zkratek: TO FN HK ČR HLA PCR JOP VŠ ETRL CET ČSN NASKL SAK SSP VIP PAT TU TD TP transfuzní oddělení Fakultní nemocnice Hradec Králové Česká republika Human Leukocyte Antigen (lidský histokompatibilitní antigenní systém) Polymerace Chain Reaction (polymerázová řetězová reakce) jiný odborný vysokoškolsky vzdělaný pracovník Eurotransplant Regerence Laboratory External Proficiency Testing Exercise Česká soustava norem Národní autorizační středisko pro klinické laboratoře Státní akreditační komise Sequence Specific Primers (sekvenčně specifické primery) volné inkompletní protilátky přímý antiglobulínový test transfuzní jednotka terapeutická dávka transfuzní přípravek Strana 27/27