Quantum Blue Infliximab

Quantum Blue Infliximab Kvantitativní laterální průtoková analýza LF-TLIF25 25 testů Poslední revize: 11.1. 2016 BÜHLMANN LABORATORIES AG Zplnomocněný zástupce výrobce v České republice: Baselstrasse 55 BioVendor Laboratorní medicína a.s. CH - 4124 Schönenbuch, Switzerland IČ: 63471507 Tel.: +41 61 487 1212 Tůmova 2265/60, 616 00 Brno, tel: +420 549 124 111, Fax: +41 61 487 1234 fax: +420 549 211 465 info@buhlmannlabs.ch Mail: info@biovendor.cz, www.biovendor.cz

ZAMÝŠLENÉ POUŽITÍ Test BÜHLMANN Quantum Blue Infliximab je souprava pro kvantitativní stanovení infliximab ve vzorcích lidského séra v kombinaci se snímačem BÜHLMANN Quantum Blue PRINCIP ANALÝZY Test je vytvořen pro selektivní měření infliximabu pomocí sendvičové imunoanalýzy. Rekombinantní faktor nádorové nekrózy alfa (TNF ) je konjugovaný na částice koloidního zlata. Jsou naneseny na podložku uvolňující konjugát a uvolní se do reakčního systému po přidání vzorku. Infliximab přítomný ve vzorku se naváže na konjugát. Monoklonální protilátky, vysoce specifické pro analyt, se imobilizují na testovací membráně a vytvoří konjugát / analyt komplex, což vede ke zbarvení testovací linie. Zbývající volný TNF / zlatý konjugát se naváží na kontrolní proužek (C). Intenzita signálu testovací linie a kontrolní linie (C) je kvantitativně změřená pomocí BÜHLMANN Quantum Blue Readeru. DODÁVANÉ REAGENCIE A PŘÍPRAVA Reagencie Množství Kat.č. Komentáře Testovací kazeta 25 ks B-LFTLIF-TC Vakuově zabalená v hliníkové fólii Chase pufr 1 láhev B-LFTLIF-CB Připraven k použití 10 ml RFID čipová karta 1 ks B-LFTLIF-RCC Bílá plastová karta RFID čipová karta 1 ks B-LFTLIF-RCC15 Zelená plastová karta Tabulka 1 DODÁVANÉ REAGENCIE A DOPLŇKOVÝ MATERIÁL Kontroly pro BÜHLMANN Quantum Blue Infliximab (LF-TLIF25) lze objednat zvlášť. Kontroly Low*/High* 2 lahvičky B-LFTLIF- Připraveny k použití 0,5 ml CONSET * Koncentrace Infliximab specifická pro šarži Tabulka 3 UCHOVÁVÁNÍ A SKLADOVATELNOST REAGENCIÍ Všechny součásti soupravy jsou stabilní při 2-8 C do data exspirace vytištěného na štítcích. UPOZORNĚNÍ Bezpečnostní opatření Žádná z reagencií tohoto testu neobsahuje komponenty lidského původu. se vzorky pacientů je nutno pracovat jako s potenciálně infekčním materiálem a měly by být řešeny v souladu se správnou laboratorní praxe (SLP) za použití vhodných opatření. nepoužitý roztok musí být zlikvidovány v souladu s místními státními a federální předpisy TECHNICKÁ OPATŘENÍ Složení testu Všechny reagencie a testované vzorky se musí nechat před začátkem analýzy vytemperovat na pokojovou teplotu (18-28 C). Před použitím reagencie dobře promíchejte (např vortex) Komponenty nesmí být používány po uplynutí doby použitelnosti vytištěné na štítcích 1

Nemíchejte různá šarže reagencií. nerozebírejte testovací kazetu. Testovací kazety nemohou být znovu použity. Manipulujte s testovací kazetou opatrně. Neznečistěte vzorkem vkládací místo nebo čtecí okénko (přes kontakt s kůži, jiné kapaliny, atd.), (obr. 1). Při provádění testu zajistěte plochou, horizontální polohu testovací kazety POSTUP TESTU Před provedením testu si pečlive přečtěte návod. Test může být nepříznivě ovlivněn, pokud reagencie nebudou správně naředena, pokud nejsou dodržovány manipulační a skladovací podmínky uvedené v tomto návodu k použití Quantum Blue Reader musí být zapnutý a naprogramován na BÜHLMANN Quantum BLUE Infliximab test: Vložte metodu testu pomocí RFID čipové karty (B-FETLIFE-RCC nebo B-FETLIFE- RCC 15), před zahájením testu (viz Quantum Blue Reader Manual). Pro změnu specifických parametrů testu použijte RFID čipovou kartu Vzorky pacientů, se kterými není správně zacházeno, mohou způsobit nepřesné výsledky. Naředěné vzorky by měly být zpracovány během několika hodin. (skladujte při 2-8 C), nelze je uchovávat po delší dobu. POTŘEBNÝ, ALE NEDODÁVANÝ MATERIÁL Vortexovací zařízení Stopky (volitelné) Přesné pipety s jednorázovými špičkami: 10-100 μl a 100-1000 μl Zkumavky Eppendorf na ředění vzorků sér Quantum Blue reader od firmy BÜHLMANN (kat.č. BI-POCTR-ABS) Rukavice a laboratorní plášť ODBĚR A SKLADOVÁNÍ Odbírejte krev do obyčejných zkumavek bez jakýchkoli přídavků tak, aby nedošlo k hemolýze, a nechejte vysrážet v pokojové teplotě po dobu nejméně 20 až 60 minut. Odstřeďujte při pokojové teplotě, při ~ 2'000 g po dobu 15 minut. Dekantujte sérum. Vzorky séra lze skladovat v chladničce při teplotě 2-8 C po dobu až 3 dnů. Při delším skladování, uchovávejte vzorky séra při -20 C. Tyto vzorky jsou stabilní po dobu alespoň 3 měsíců při -20 C. POSTUP Postup stanovení se skládá ze dvou kroků: 1. Ředění vzorků séra pomocí Chase pufru. Před měřením zřeďte vzorek séra 1:20 pomocí Chase pufru (B-LFTLIF-CB) (např. smíchejte 10 µl séra s 190 µl Chase pufru) ve zkumavce a promíchejte centrifugací, pipetováním nebo protřepáním. 2. Laterální průtoková analýza testu a odečet lze načíst dvě alternativní metody z příslušné RFID čipové karty: TLIF 0 nebo TLIF 15. Před spuštěním testu vyberte jedenu z RFID čipových karet. Načtěte metodu z RFID čipové karty. 2.1. Metoda <TLIF_15> s vnitřním časovačem Použijte zelenou plastovou kartu. Vložte testovací kazetu do držáku kazety ve snímači. Přidat 70 µl zředěného vzorku séra na vkládací port testovací kazety (obr. 1). Zavřete držák kazety a začněte měřit, stisknutím tlačítka START. Skenování se automaticky spustí po 15 minutách (900 sekund). 2

2.2. Metoda <TLIF 0> bez vnitřního časovače Použijte bílou plastovou kartu. Přidejte 70 µl zředěného vzorku séra na na vkládací port testovací kazety (obr. 1). Inkubujte po dobu 15 +/- 1 minut (nastavte časovač ručně). Vložte testovací kazetu do držáku kazety ve snímači Skenování kazety na Quantum BLUE Reader spustíte stisknutím tlačítka start (<ENTER>). Poznámka: Prostudujte si prosím manuál Quantum BLUE Reader,kde se dozvíte více o základních funkcích a jak inicializovat a provozovat reader, a to zejména, jak vybrat testovací metody, a jak načíst specifické parametry z RFID čipové karty s cílem změření vzroků. Ujistěte se, že jste vložili do readru správnou Testovací kazetu, tj. nejdříve ve čtecím okně. KONTROLA KVALITY Pokud shodnost analýzy nekoreluje s ustanovenými limity a opakování vyloučí technické chyby, zkontrolujte následující záležitosti: i) pomůcky pro pipetování, kontrolu teploty a měření času, ii) datum exspirace reagencií a iii) podmínky skladování a inkubace Výsledek self-testu Quantum BLUE Readeru, který se provádí při spuštění přístroje musí být platný. VALIDACE VÝSLEDKŮ U platného výsledku musí být v jakémkoliv případě viditelná kontrolní linie (C). (viz obrázky 1A a 1B). Používá se pouze jako kontrola funkčnosti testu a nelze ji používat pro interpretaci testovací linie (T). Pokud testovací linie (T) není detekovatelná ani po 15 minutách inkubace (obrázek 1A), je koncentrace infliximab přítomného ve vzorku séra pod detekčním limitem. Pokud je testovací linie (T) detekovatelná po 15 minutách inkubace (obrázek 1B), je koncentrace infliximab přítomného ve vzorku séra e vypočítaná Quantum Blue readerem. Pokud je po 15 minutách inkubace detekovatelná pouze testovací linie (T) (obrázek 1C), výsledek testu je neplatný a analýzu infliximab je třeba opakovat s použitím jiné testovací kazety. Pokud po 12 minutách inkubace není detekovatelná ani kontrolní linie (C) ani testovací linie (T) (obrázek 1D), výsledek testu je neplatný a analýzu infliximab je třeba opakovat s použitím jiné testovací kazety. Jelikož Quantum Blue reader umožňuje kvantitativní hodnocení testovací (T) a kontrolní (C) linie, je zaručena další kontrola validity kontrolní linie (C). Pokud je intenzita signálu kontrolní linie (C) po 15 minutách inkubace pod prahem specifickým pro danou šarži, výsledek testu je také neplatný a analýzu infliximab je třeba opakovat s použitím jiné testovací kazety STANDARDIZACE Laterální průtoková analýza je kalibrována Infliximab pomocí testu s CE značkou Immunoglobulin G. BÜHLMANN Quantum Blue reader používá pro výpočet koncentrace infliximab u šarže-specifickou standardní křivku. Rozmezí analýzy je mezi 0.4 a 20 µg/ml. Neznámé vzorky s hodnotami nad 300 μg/g, je třeba pro kvantitativní změření znovu testovat pomocí BÜHLMANN Quantum Blue High Range Calprotectin (kat.č.: LF-CHR20). Neznámé vzorky s hodnotami nad detekčním limitem, je třeba pro kvatitativní změření zovu otestovat s naředěním 1:40 namísto ředění 1:20. Pro získání konečného výsledku se výsledek musí vynásobit dvěma. 3

LIMITACE Reagencie dodávané se soupravou jsou optimalizovány pro měření Infliximab v naředěných vzorcích séra. Hodnoty Infliximab by měly pro lékaře používány jako doplňkové údaje pro úspěšnou léčbu. Výsledky testu BÜHLMANN Quantum Blue Infliximab monou být doplněny měřením jiných biomarkerů (například C-reaktivního proteinu nebo kalprotektinu (Kat. čísla testů: LF-CRP a LF-CALE). PO DODÁNÍ ZKONTROLUJTE TESTOVACÍ SOUPRAVU Produkty firmy BÜHLMANN byly vyrobeny s největší péčí a veškerým úsilím, aby zajistili úplnost a výkon tohoto testu. Nicméně, doporučujeme zkontrolovat dodaný test, aby splňoval následující podmínky: platnost exspirační doby. Neporušený stav obalu (fólie), (např absence jakékoliv perforace, které mohou být způsobeny nesprávnými podmínkami) Neporušený stav testovací kazety (např absence škrábanců na analytické membráně) Pokud jedna z testovaných kazet nesplňuje tato kritéria, prosím použijte jinou testovací kazetu. OČEKÁVANÉ HODNOTY Stanovení hladiny infliximab ze vzorku séra pacienta může podpořit monitorování léčby zánětu u pacienta. Obecně platí, že průměrné hladiny v séru, které dosahují hodnoty 3 µg / ml a především dobře korelují s remise, endoskopické hojení střevní sliznice a nízkými hodnotami CRP (1, 2), jakož i predikce trvalé odpověď na léčbu infliximabem (3). Hodnoty pod 1-3 µg / ml Nízké hladiny infliximab v séru by měly být použity při rozhodování o změně dávkování léku, buď zvýšení dávky nebo zkrácení infuzních intervalů, a o změně léčiv. (4). Hodnoty mezi 3-7 µg / ml Hladiny v tomto rozmezí mohou znamenat důkaz o účinné léčbě infliximabem, kdy pacienti jsou bez příznaků (1, 4). Hodnoty nad 7-8 µg / ml Bylo prokázáno, že deeskalace dávky pro dosažení optimálního rozmezí (3-7 µg / ml), nemá žádný vliv na hodnoty CRP ani Harvey Bradshaw, nebo Mayo skóre při Crohnově a nebo ulcerózní kolitidě (4). Optimální rozmezí hodnot mohou být individuální. Hodnoty mezi 3-7 µg / ml, byly zjištěny jako příznivé (4). CHARAKTERISTIKA PROVEDENÍ Limit blanku (LoB): <0,10 mg / ml infliximabu. LoB byla stanoven v souladu s CLSI protokolem EP17-A se čtyřmi vzorky séra. Vzorky byly měřeny s použitím dvou různých šarží testovacích kazet ve třech nezávislých běžících testech s pěti kopiemi, jejímž výsledkem je 120 (blank) prázdných hodnot. Limit detekce (LoD): 0.15 µg / ml infliximabu. LoD byl stanoven pomocí čtyř vzorků séra v koncentracích 0,3, 0,2, 0,10, a 0,05 µg / ml. Vzorky byly měřeny s použitím dvou různých šarží testovacích kazet ve třech nezávislých běžících 4

testech s pěti kopiemi, jejímž výsledkem je 120 hodnot. Byly stanoveny průměrné hodnoty SD a LoD byl odtud vypočten v souladu s CLSI protokolem EP17-A. Limit kvantifikace (LoQ): Spodní LoQ: 0.4 µg / ml infliximab Horní LoQ: 20.0 µg / ml infliximab LoQ byl stanoven pomocí 13 vzorků séra v koncentracíche mezi 0,3 a 26,5 µg / ml. Vzorky byly měřeny třemi různými šaržemi testovacích kazet ve třech nezávislých běžících testech s 20-ti kopiemi. Výsledný profil přesnosti je znázorněn na obr. 2. Mez kvantifikace odpovídá koncentraci infliximabu s nepřesností pod 25% CV umožňující kvantitativní Měření v rozmezí od 0,4 (nizká LoQ) do 20,0 µg / ml (horní LoQ). Hook efekt: Nebyl pozorován žádný do koncentrace 1000 µg/ml infliximabu Specifita: Souprava BÜHLMANN Quantum Blue Infliximab specificky rozpoznává infliximab v séru. Linearita: Odebráno šest vzorků séra se zvýšenou koncentrací infliximabu (po infuzi). Vzorky byly měřeny dvěma různými šaržemi testovacích kazet ve dvou nezávislých běžících testech, jeho pool se zředí v negativním lidském séru pro získání koncentrace na celý měřicí rozsah. Každý z těchto vzorků byl naředen Chase pufrem a testovány v 10 opakováních podle postupu testu. Výsledky ukázaly linearity v uvedeném měřicím rozsahu od 0,4 do 20,0 µg / ml v testu BÜHLMANN Quantum BLUE Infliximab pro dvě série s průměrnou výtěžností 100% (83,5-113,3%) a 99,4% (85,8 až 108,5%). Jeden z příkladů je znázorněn na obr. 3. Srovnání metody: R2 = 0,88; y = 1.09x-0,54 93 vzorků séra s koncentrací infliximabu v uvedeném měřicím rozsahu testu BÜHLMANN Quantum Blue Infliximab bylo analyzováno podle postupu stanovení a porovnáno s hodnotami získané soupravy infliximab ELISA kit M2920 (Sanquin, Nizozemí). Korelační údaje jsou znázorněny na Obr. 4. INTERFERUJÍCÍ LÁTKY Within-Class Switch: žádná interference, testováno při minimálně dvou koncentracích infliximabu, bylo zjištěno až do 10 µg / ml pro adalimumab (Humira ), etanercept (Enbrel ), golimumab (Simponi ), a až do 1,7 µg / ml pro certolizumab (Cimzia ). Sérum Indexy: Interference nebyla detekována s těmito látkami až do uvedených koncentrací: Triglyceridy (Intralipid 1320 mg / dl, což odpovídá 37 mmol / L triglyceridu), konjugovaný bilirubin (342 µmol / L; 29 mg / dl), nekonjugovaný bilirubin (342 µmol / L; 20 mg / dl), hemoglobin (2 g / l (= 200 mg / dl), TNF (2,6 ng / ml) a Revmatoidní faktory (497,3 IU / ml), Immunsuppressiva / Co-Léky: Interference nebyla detekována s immunsupresivy / co-léky, jako je azathioprin (60 µmol / l), 6-merkaptopurin (37 µmol / l),a methotrexát (1.363 µmol / L). Všechny charakteristiky byly provedeny pomocí infliximabem (Remicade, MSD). 5

Příloha 1 Tabulky Výsledky testu Graf linearity Obr.1A Obr. 1B Obr. 1C Obr. 1D Inter-Lot Přesnost - Opakovatelnost Obrázek 3 Srovnání metody Přesnost Obrázek 2 Uvedení readeru do pohotovostního stavu: (viz Příloha I nebo nahlédněte do manuálu přístroje). - Stiskněte tlačítko ENTER na dobu 1 sekundy a tím reader zapněte. - Počkejte na autotest a kalibrační kontrolu, které se provádějí automaticky. - Vyberte <SCAN> a stiskněte ENTER. - Vyberte <Test Type> <CAL_720>* a stiskněte ENTER. - Vyberte <User ID> a stiskněte ENTER. - Vyberte <SAMPLE ID> a stiskněte ENTER. - Vyberte <Next> a stiskněte ENTER. - Potvrďte <Lot> ID a <Product> ID> výběrem <Yes> a stiskněte Obrázek ENTER. 4 <Product> ID musí být <LF-CAL>. Změna šarže-specifických parametrů testu s použitím RFID čipové karty: (povinné pokud <Lot> ID zobrazené na readeru není shodné s <Lot> ID vytištěným na štítku testovací kazety nebo na šaržespecifickém QC listu dodávaném s testovací soupravou). Změňte <Lot> ID a <Product> ID> pomocí výběru <No> a stiskněte ENTER. 6

REFERENCE REFERENCE 1. Imadea, H. et al.: Clinical utility of newly developed immunoassays for serum concentrations of adalimumab and anti-adalimumab antibodies in patients with Crohn s disease. Journal of Gastroenterology, 49(1), 100 109 (2014) 2. Maser, E.A. et al.: Association of Trough Serum Infliximab to Clinical Outcome After Scheduled Maintenance Treatment for Crohn s Disease. Clinical Gastroenterology and Hepatology, 4(10), 1248 1254 (2006) 3. Cornillie, F. et al.: Postinduction serum infliximab trough level and decrease of C-reactive protein level are associated with durable sustained response to infliximab: a retrospective analysis of the ACCENT I trial. Gut, 63(11), 1721 1727 (2014) 4. Vande Casteele, N.: Trough Concentration of Infliximab Guide Dosing for Patients With Inflammatory Bowel Disease. Journal of Gastroenterology, 148, 1320 1329 (2015) SYMBOLY Spotřebujte do Kat. číslo Šarže Dostatečné pro <n> testů Diagnostický prostředek in vitro Viz návod k použití Testovací kazeta Chase pufr RFID čipová karta Teplotní limit 7