Praktickézkušenosti s diagnostikou pertuse Ivana Stiborová, Josef Richter, Eva Jílková, Romana Mikešová, Vlastimil Král Centrum imunologie a mikrobiologie Zdravotníústav se sídlem v Ústínad Labem Aktuality v diagnostice virových a bakteriálních infekcí odborný seminář firmy VIDIA, SZÚ Praha, 26.5.2014
Osnova sdělení Pertuse v ZU UL Historie Metody používané v diagnostice pertuse Interpretace výsledků, mezinárodní standardy Vakcinace proti B. pertussis Příklady z laboratoře
Alergie Supplementum 1/2012
Metody používanév diagnostice pertuse CIM ZU UL Celkové(polyvalentní) protilátky proti celobuněčnému antigenu aglutinace (Test-Line), titr Protilátky proti toxinu B. pertussis IgG, IgA, IgM ELISA (Sekisui Virotech), jednotky VE/ml Protilátky proti PT, FHA, ACT IgG, IgA Imunoblot (Euroimmun) Přímý průkaz PCR (Cepheid) B. pertussis(103 bp IS481), B. parapertussis(101 bp IS1001) Odběr nasofaryngeálního aspirátu (vykloktánícca 15-20 ml sterilního fyziologického roztoku po dobu cca 10 s, odběr do sterilní zkumavky, centrifugace 5 000 rpm, odsát supernatant, ponechat cca 0,5 ml, sediment resuspendovat, kolonková izolace soupravou fy QIAGEN )
Mezinárodnístandardy WHO Reference Reagent Pertussis Antiserum (Human) 1st RR NIBSC code: 06/142 Mezinárodníporovnávacístudie -zpráva WHO (Expert commitee on Biological standardization 10/2008) Postup přípravy standard (anti-pt, anti-fha, anti-prn) a ověřeníjejich možnosti využitípři stanovenípostvakcinačních i postinfekčních hladin protilátek proti B. pertussis na ákladěnověstanovených standardůlidského antiséra proti antigenům B. pertussis byly porovnány výsledky ELISA stanovení 22 laboratoří z 15 zemí světa Podle dokumentu ECDC Guidance and protocol for the serological diagnosis of human infection with Bordetella pertussis (2012) odpovídajíiu/ml dříve používaným jednotkám EU/ml (ELISA units/ml), ve kterých jsou také uvedené výsledky mezinárodních studií ESEN.
Interpretace sérologických výsledků postinfekční hladiny protilátek ECDC TECHNICAL DOCUMENT Guidance and protocol for the serological diagnosis of human infection with Bordetella pertussis As part of the EUpert-Labnet surveillance network Stockholm, October 2012, ISBN 978-92-9193-394-5, doi 10.2900/64470 Produkce protilátek 1 4 týdny po infekci Anti-PT IgG < 40 IU/ml 40 100 IU/ml > 100 IU/ml Žádnéznámky akutní infekce B. pertussis Nejasný sérologický nález Akutní infekce B. pertussis Stanovení anti-pt IgA (anti-fha IgG, IgA)
Sérologickémetody vs. přímý průkaz Senzitivita testu Katarální stadium Paroxysm. stádium Rekonvalescence Kultivace ++ -/+ - PCR ++ ++ - Sérologie -/+ ++ ++
Epidemiol. Mikrobiol. Imunol., 62, 2013, č. 3, s. 106 111 Iniciály pacienta Věk Pohlaví Doba trvání příznaků Vzestup titru Výsledky ELISA PCR Rodinné vztahy AP 9 M 3 týdny 8x (P) N P bratři MP 9 M 3 týdny 4x (P) N P (dvojčata) BJ 29 Ž 3 týdny 2x (N) IgM i IgG N dcera, JJ 52 Ž 4 týdny 4x (P) N P matka, otec TJ 56 M 4 týdny 2x (N) IgG P DP 32 Ž 5 týdnů 2x (N) IgM P matka a syn TP 13 M 10 týdnů 0x (N) IgG N JŽ 22 M 3 týdny 2x (N) N P bratři VŽ 20 M 3 týdny 4x (P) N P AP 8 Ž 5 týdnů 8x (P) N N sestřenice AP 18 Ž 5 týdnů 32x (P) IgG N a bratranec ML 10 M 5 týdnů 4x (P) N N
Interpretace sérologických výsledků postvakcinační hladiny protilátek Séronegativní jedinci <5 EU/mL U séronegativních osob postvakcinačníhladiny anti-pt IgG >20 EU/mL. U séropozitivních jedinců(>5 EU/mL a <20 EU/mL) čtyřnásobný vzestup původní hladiny anti-pt IgG U séropozitivních jedinců>20 EU/mLnejménědvojnásobný vzestup původní hladiny anti-pt IgG Není znám m korelát t séroprotekce! s
Název vakcíny Složení vakcíny Poznámka ADACEL toxoid DTP, FHA, pertaktin, fimbrie typ 2,3 Dospělí a děti >4 roky ADACEL POLIO toxoid DTP, FHA, pertaktin, fimbrie 2,3, PV1,2,3 >3 roky BOOSTRIX toxoid DTP, FHA, pertaktin >4 roky BOOSTRIX POLIO toxoid DTP, FHA, pertaktin, PV 1,2,3 >4 roky INFANRIX INFANRIX HEXA INFANRIX HiB INFANRIX POLIO INFANRIX IPV+HiB Registrovanéočkovacílátky proti pertusi v ČR toxoid DTP, FHA, pertaktin, HiB, VHB, PV toxoid DTP, FHA, pertaktin HiB, PV zdroj: www.vakciny.net, 2012
Muž, *1959 4.7.2013 22.7.2013 7.8.2013 18.10.2013 B. pertussis [titr] > 4069 512 512 1024 B. parapertussis [titr] 4069 > 4069 2048 1024 BP toxin IgM [VE/ml] 3,0 6,3 2,0 2,9 BP toxin IgA [VE/ml] 39,0 22,8 17,4 15,5 BP toxin IgG [VE/ml] 11,0 33,8 26,9 19,0 Infekce B. pertussis, B. parapertussis (?)
Žena, *1973 24.1.2014 B. pertussis [titr] 64 B. parapertussis [titr] 32 BP toxin IgM [VE/ml] 6,1 BP toxin IgA [VE/ml] 43,1 BP toxin IgG [VE/ml] 24,5 20.2.2014 128 32 3,0 18,8 27,3 28.3.2014 128 32 3,8 6,6 21,3 Infekce B. pertussis
Žena, *1994 18.12.2013 24.1.2014 28.2.2014 13.5.2014 B. pertussis [titr] 64 512 256 256 B. parapertussis [titr] 32 BP toxin IgM [VE/ml] 7,7 BP toxin IgA [VE/ml] 11,9 BP toxin IgG [VE/ml] 23,0 2 6,2 39,9 28,3 2 3,7 22,6 43,2 4,1 23,8 36,4 Infekce B. pertussis
Žena, AS *1953 17.3.2014 B. pertussis [titr] 32 BP toxin IgM [VE/ml] BP toxin IgA [VE/ml] BP toxin IgG [VE/ml] 4,0 14.4.2014 64 5,0 3,0 12,9 BOOSTRIX toxoid DTP, FHA, pertaktin
Muž, ZS *1951 17.3.2014 B. pertussis [titr] 16 BP toxin IgM [VE/ml] BP toxin IgA [VE/ml] BP toxin IgG [VE/ml] 0,9 B. pertussis IgG blot B. pertussis IgA blot 14.4.2014 128 7,5 3,5 5,6 PT, FHA FHA BOOSTRIX toxoid DTP, FHA, pertaktin
Muž, OCh *1945 4.10.2010 B. pertussis [titr] 2 B. parapertussis [titr] 4 BP toxin IgM [VE/ml] 0,6 BP toxin IgA [VE/ml] 1,3 BP toxin IgG [VE/ml] 4,6 17.3.2014 32 2,5 14.4.2014 16 3,0 25,8 10,1 BOOSTRIX toxoid DTP, FHA, pertaktin
Žena, VCh, *1951 17.3.2014 B. pertussis [titr] 32 BP toxin IgM [VE/ml] BP toxin IgA [VE/ml] BP toxin IgG [VE/ml] 3,4 B. pertussis IgG blot B. pertussis IgA blot 14.4.2014 32 3,2 15,2 25,6 ACT, PT, FHA FHA BOOSTRIX toxoid DTP, FHA, pertaktin
Muž, *1952 23.11.2013 B. pertussis [titr] 2 B. parapertussis [titr] 32 BP toxin IgM [VE/ml] BP toxin IgA [VE/ml] BP toxin IgG [VE/ml] 0,9 20.12.2013 B. pertussis [titr] 256 B. parapertussis [titr] 32 BP toxin IgM [VE/ml] BP toxin IgA [VE/ml] BP toxin IgG [VE/ml] 8,5 B. pertussis IgG blot B. pertussis IgA blot 18.6.2013 4 32 4.4.2014 16 32 2,6 0,6 3,8 ACT, FHA ACT 18.10.2013 32 16 2,8 5,6 0,9 ADACEL toxoid DTP, FHA, pertaktin, fimbrie typ 2,3 25.11.2013 16 4 3,8 10,0 8,7 Anti-FHA IgG poz. OA: pertuse v dětství
Pertussis: Challenges Today and for the Future James D. Cherry Pediatric Infectious Diseases, Mattel Children s Hospital, Los Angeles, California, USA The Department of Pediatrics, David Geffen School of Medicine at the University of California Los Angeles, Los Angeles, California, USA PLOS Pathogens www.plospathogens.org July 2013 Volume 9 Issue 7 e1003418 The Future Recently, much attention has been devoted to the resurgence of pertussis and solutions to the problem. On the table are newacellular pertussis vaccines and live attenuated vaccines. However,as I have stated previously, from the data presented above, thedevelopment of DTaP vaccines that are better than DTwPvaccines would seem unlikely. And, although not discussed here, it is my opinion that live vaccines will not provide as good protection as good DTwP vaccines. Therefore, I believe a high priority should be given to the development of less reactogenic whole-cell vaccines.
Děkuji za pozornost a kolegům (Josef Richter, Eva JílkovJ lková,, Romana Mikešov ová,, Vlastimil Král) za spolupráci