Interpretace výsledků měření základních lymfocytárních subpopulací očima (průtokového J ) cytometristy a klinického imunologa

Interpretace výsledků měření základních lymfocytárních subpopulací očima (průtokového J ) cytometristy a klinického imunologa Marcela Vlková, Zdeňka Pikulová Fakultní nemocnice u sv. Anny v Brně Ústav Klinické imunologie a alergologie

Ústav klinické imunologie a alergologie o Založen v roce 1981 o Hlavní referenční centrum pro imunodeficitní pacienty na jižní Moravě (2,2 mil. obyvatel) o Zaměstnanci 11 MUDr, 2 vědci, 2 PhD studenti, 9 sester, 11 laborantů o Ročně vyšetříme okolo 42 500 pacientů o Počet léčených pacientů 8 258

Rutinní vyšetření v laboratoři buněčné imunologie Počet leukocytů Počet lymfocytů T lymfocyty CD3+ Pomocné CD3+4+ T lymfocyty Cytotoxické CD3+8+ T lymfocyty B-lymfocyty CD19+ NK-buňky CD16,56+

Rutinní vyšetření v laboratoři buněčné imunologie

Srovnání zastoupení základních lymfocytárních populací v závislosti na věku 110 100 90 13 8 7,5 10 9,5 13,5 15 16,5 19 80 70 15 21,5 24 27 29 30 20,5 16 12,5 60 NK buňky 50 B lymfocyty 40 30 72.5 61.5 63.5 65 60 59.5 66.5 65 69 T lymfoccyty 20 10 0 0-2 měsíce 2-5 měsíců 5-9 měsíců 9-15 měsíců 15-24 měsíců 2-5 let 5-10 let 10-16 let 16 150 let

Normální hodnoty CD3+ T-lymfocytárních subpopulací v závislosti na věku Věk % Absolutní počty 0-2 měsíce 60-85 2,3-7,0 2-5 měsíců 48-75 2,3-6,5 5-9 měsíců 50-77 2,4-6,9 9-15 měsíců 54-76 1,6-6,7 15-24 měsíců 39-73 1,4-8,0 2-5 let 43-76 0,9-4,5 5-10 let 55-78 0,8-3,5 10-16 let 52-78 0,7-4,2 16 150 let 55-83 0,7 2,1

Pohled klinického imunologa o Ideální úzká spolupráce klinika s pracovníkem, který hodnotí nález v laboratoři o Podle aktuálního klinického stavu a anamnézy není většinou možné předpovědět výsledek imunologického vyšetření o Avšak některé nálezy v oblasti buněčné imunity vedou přímo ke stanovení diagnosy

Pacienta č.1 SK 1. vyšetření o Věk: 5 let o dg. astma bronchiale, recidivující respirační infekty o 1. imunologické vyšetření: snížení hladiny IgA, buněčná imunita v normě

CD3-CD16,56+ abs.počty 0,36 Pacient č.1: SK Výsledky základních lymfocytárních subpopulací Věk 5 let Leukocyty abs.počty 8,7 Lymfocyty % 41 T lymfocyty CD3+ % 69 CD3+ abs.počty 1,55 CD3+4+ % 35 CD3+4+ abs.počty 0,78 CD3+8+ % 24 CD3+8+ abs.počty 0,54 Poměr CD3+4+/CD3+8+ B lymfocyty CD19+ 1,46 % 14 CD19+ abs.počty 0,31 NK buňky CD3-CD16,56+ % 16

Pacienta č.1 SK 2. vyšetření o Věk: 7 let o 2. imunologické vyšetření s odstupem po protrahovaném infektu: klinicky v pořádku o buněčná imunita: vzestup cytotoxických T lymfocytů, vzestup pozitivity CD38+ na CD3+8+ T lymfocytech

Pacient č.1: Výsledky základních lymfocytárních subpopulací Věk 7 let 5 let Leukocyty abs.počty 13,8 8,7 Lymfocyty % 57 41 T lymfocyty CD3+ % 89 69 CD3+ abs.počty 7,00 1,55 CD3+4+ % 19 35 CD3+4+ abs.počty 1,49 0,78 CD3+8+ % 68 24 CD3+8+ abs.počty 5,35 0,54 Poměr CD3+4+/CD3+8+ 0,28 1,46 B lymfocyty CD19+ % 3 14 CD19+ abs.počty 0,24 0,31 NK buňky CD3-CD16,56+ % 8 16 CD3-CD16,56+ abs.počty 0,63 0,36

Kontrola Pacient č.1 SK

Pacient č.1 SK 2. vyšetření

Výsledky dalších vyšetření pacienta č.1 SK o 3. imunologické vyšetření klinicky v pořádku o Buněčná imunita v normě o Jaterní testy v normě o Krevní obraz a diferenciál v normě o CMV negativní o EBV: IgG i IgM pozitivní o EBNA: IgG negativní

Pacient č.1: SK Výsledky základních lymfocytárních subpopulací Věk 7 let 7 let 5 let Leukocyty abs.počty 8 13,8 8,7 Lymfocyty % 28 57 41 T lymfocyty CD3+ % 69 89 69 CD3+ abs.počty 2,46 7,00 1,55 CD3+4+ % 40 19 35 CD3+4+ abs.počty 1,43 1,49 0,78 CD3+8+ % 19 68 24 CD3+8+ abs.počty 0,68 5,35 0,54 Poměr CD3+4+/CD3+8+ 2,11 0,28 1,46 B lymfocyty CD19+ % 15 3 14 CD19+ abs.počty 0,54 0,24 0,31 Aktivované Tc %CD38+ z CD3+8+ % 45,6 91,9 x

Pacient č.2 PS 1. vyšetření o Věk: 15 let o dg. astma bronchiale, občasné respirační infekty o 1. imunologické vyšetření: buněčná imunita v normě

CD3-CD16,56+ abs.počty 0,33 Pacient č.2: PS Výsledky základních lymfocytárních subpopulací Věk 15 let Leukocyty abs.počty 4,4 Lymfocyty % 47 T lymfocyty CD3+ % 72 CD3+ abs.počty 1,49 CD3+4+ % 44 CD3+4+ abs.počty 0,91 CD3+8+ % 23 CD3+8+ abs.počty 0,48 Poměr CD3+4+/CD3+8+ 1,91 B lymfocyty CD19+ % 10 CD19+ abs.počty 0,21 NK buňky CD3-CD16,56+ % 16

Pacienta č.2 PS 2. vyšetření o 2. imunologické vyšetření v 17 letech o Těžký klinický stav o Paul-Bunnelova reakce: silně pozitivní o CMV negativní o EBV: Elisa: IgG i IgM pozitivní o EBNA IgG pozitivní o ALT, AST zvýšeno o buněčná imunita: vzestup cytotoxických T lymfocytů, vzestup % CD38+

Kontrola Pacient č.2 PS

Pacient č.2: Výsledky základních lymfocytárních subpopulací Věk 17 let 15 let Leukocyty abs.počty 12,3 4,4 Lymfocyty % 54 47 T lymfocyty CD3+ % 77 72 CD3+ abs.počty 5,11 1,49 CD3+4+ % 11 44 CD3+4+ abs.počty 0,73 0,91 CD3+8+ % 55 23 CD3+8+ abs.počty 3,65 0,48 Poměr CD3+4+/CD3+8+ 0,20 1,91 B lymfocyty CD19+ % 3 10 CD19+ abs.počty 0,20 0,21 NK buňky CD3-CD16,56+ % 8 16 CD3-CD16,56+ abs.počty 0,53 0,33

Pacienta č.2 PS 3. vyšetření o 3. imunologické vyšetření ve 26 letech o Klinický v pořádku o buněčná imunita: přetrvává zvýšení pozitivity CD38+ na CD3+8+ T lymfocytech

Pacient č.2: Výsledky základních lymfocytárních subpopulací Věk 26 let 17 let 15 let Leukocyty abs.počty 4,8 12,3 4,4 Lymfocyty % 42 54 47 T lymfocyty CD3+ % 72 77 72 CD3+ abs.počty 1,45 5,11 1,49 CD3+4+ % 36 11 44 CD3+4+ abs.počty 0,73 0,73 0,91 CD3+8+ % 31 55 23 CD3+8+ abs.počty 0,62 3,65 0,48 Poměr CD3+4+/CD3+8+ 1,16 0,20 1,91 B lymfocyty CD19+ % 5 3 10 CD19+ abs.počty 0,10 0,20 0,21 Aktivované Tc %CD38+ z CD3+8+ % 27,9 92,0 x

Pacienta č.3 DM 1. vyšetření o 1. imunologické vyšetření ve 2 letech o dg. Recidivující resp. infekty, narozen předčasně ve 33. týdnu o V době vyšetření bez klinických známek infektu o buněčná imunita: nález zvýšených CD3+8+ T lymfocytů

Pacient č.3:dm Výsledky základních lymfocytárních subpopulací Věk 2roky Leukocyty abs.počty 17,1 Lymfocyty % 62 T lymfocyty CD3+ % 77 CD3+ abs.počty 8,16 CD3+4+ % 25 CD3+4+ abs.počty 2,65 CD3+8+ % 45 CD3+8+ abs.počty 4,77 Poměr CD3+4+/CD3+8+ 0,56 B lymfocyty CD19+ % 9 CD19+ abs.počty 0,95 NK buňky CD3-CD16,56+ % 12 CD3-CD16,56+ abs.počty 1,27

Pacienta č.3 DM 2. vyšetření o 2. imunologické vyšetření ve 3 letech pro recidivující resp. infekty o CMV: IgG pozitivní, IgM negativní o EBV: IgG pozitivní, IgM negativní o EBNA IgG pozitivní

Pacient č.3: DM Výsledky základních lymfocytárních subpopulací Věk 3 roky 2roky Leukocyty abs.počty 12,7 17,1 Lymfocyty % 50 62 T lymfocyty CD3+ % 54 77 CD3+ abs.počty 3,43 8,16 CD3+4+ % 34 25 CD3+4+ abs.počty 2,16 2,65 CD3+8+ % 17 45 CD3+8+ abs.počty 1.08 4,77 Poměr CD3+4+/CD3+8+ 2,0 0,56 B lymfocyty CD19+ % 22 9 CD19+ abs.počty 1,40 0,95 NK buňky CD3-CD16,56+ % 24 12 CD3-CD16,56+ abs.počty 1,52 1,27 Aktivované Tc %CD38+ z CD3+8+ % 30,9 91,0

Pacienta č. 4 KB 1. vyšetření o 1. imunologické vyšetření v 31 letech o dg. Popálení, atypicky ztížené hojení o Buněčná imunita: nález zvýšených CD3+8+ T lymfocytů o Telefonická konzultace

Pacient č.4: KB Výsledky základních lymfocytárních subpopulací Věk 31 let (5.10.2011) 31 let (29.8.2011) Leukocyty abs.počty 8,0 11,3 Lymfocyty % 36 10 T lymfocyty CD3+ % 95 95 CD3+ abs.počty 2,74 1,07 CD3+4+ % 41 41 CD3+4+ abs.počty 1,18 0,46 CD3+8+ % 54 54 CD3+8+ abs.počty 1,56 0,61 Poměr CD3+4+/CD3+8+ 0,76 0,76 B lymfocyty CD19+ % 2 2 CD19+ abs.počty 0,06 0,02 NK buňky CD3-CD16,56+ % 3 3 CD3-CD16,56+ abs.počty 0,09 0,03 Aktivované Tc %CD38+ z CD3+8+ % 12,0 77,0

Pacienta č. 5 ČL 1. vyšetření o 1. imunologické vyšetření v 21 letech o dg. Leyellův syndrom (toxická epidermální nekrolýza) o buněčná imunita: nález zvýšených CD3+8+ T lymfocytů, snížení exprese HLA-DR na monocytech

Pacient č.5: ČL Výsledky základních lymfocytárních subpopulací Věk 21let 1.vyšetření Leukocyty abs.počty 4,5 Lymfocyty % 14 T lymfocyty CD3+ % 35 CD3+ abs.počty 0,22 CD3+4+ % 16 CD3+4+ abs.počty 0,10 CD3+8+ % 16 CD3+8+ abs.počty 0,10 Poměr CD3+4+/CD3+8+ 1,0 B lymfocyty CD19+ % 28 CD19+ abs.počty 0,18 NK buňky CD3-CD16,56+ % 38

Pacient č.5: ČL Výsledky základních lymfocytárních subpopulací Věk 21let 1.vyšetření Leukocyty abs.počty 4,5 Lymfocyty % 14 T lymfocyty CD3+ % 35 CD3+ abs.počty 0,22 CD3+4+ % 16 CD3+4+ abs.počty 0,10 CD3+8+ % 16 CD3+8+ abs.počty 0,10 Poměr CD3+4+/CD3+8+ 1,0 B lymfocyty CD19+ % 28 CD19+ abs.počty 0,18 NK buňky CD3-16,56+ % 38 CD3-CD16,56+ abs.počty 0,24 Aktivované Tc % CD38+z CD3+8+ % 67 Monocyty % 6 % HLA DR z monocytů % 66,6

Stanovení exprese HLA-DR na monocytech Kontrola

Pacient č.5: ČL Výsledky základních lymfocytárních subpopulací Věk 21let 2.vyš. (10.5.2013) 1.vyš.(7.5.2013) Leukocyty abs.počty 5,8 4,5 Lymfocyty % 7 14 T lymfocyty CD3+ % 43 35 CD3+ abs.počty 0,17 0,22 CD3+4+ % 26 16 CD3+4+ abs.počty 0,11 0,10 CD3+8+ % 16 16 CD3+8+ abs.počty 0,06 0,10 Poměr CD3+4+/CD3+8+ 1,63 1,0 B lymfocyty CD19+ % 37 28 CD19+ abs.počty 0,15 0,18 NK buňky CD3-16,56+ % 21 38 CD3-CD16,56+ abs.počty 0,09 0,24 Aktivované Tc % CD38+z CD3+8+ % 36 67 Monocyty % 2 6 % HLA DR z monocytů % 37,4 66,6

Pacient č.5: ČL Výsledky základních lymfocytárních subpopulací Věk 21let 4.vyš.(27.5.2013) 3.vyš.(13.5.2013) 2.vyš.(10.5.2013) 1.vyš.(7.5.2013) Leukocyty abs.počty 10,2 2,8 5,8 4,5 Lymfocyty % 10 7 7 14 T lymfocyty CD3+ % 58 51 43 35 CD3+ abs.počty 0,59 0,10 0,17 0,22 CD3+4+ % 37 33 26 16 CD3+4+ abs.počty 0,38 0,06 0,11 0,10 CD3+8+ % 19 17 16 16 CD3+8+ abs.počty 0,19 0,03 0,06 0,10 Poměr CD3+4+/CD3+8+ 1,95 1,94 1,63 1,0 B lymfocyty CD19+ % 31 43 37 28 CD19+ abs.počty 0,32 0,08 0,15 0,18 NK buňky CD3-16,56+ % 11 4 21 38 CD3-CD16,56+ abs.počty 0,11 0,01 0,09 0,24 Aktivované Tc % CD38+z CD3+8+ % 20,4 7,4 36 67 Monocyty % 7 5 2 6 % HLA DR z monocytů % 90,7 30,3 37,4 66,6

Stanovení exprese HLA-DR na monocytech Pacient

Pacienti s CLL o Pacient HE (roč.1941): únava kloubní bolesti o Pacientka RM (roč.1932): recidivující respirační infekty s febriliemi, bolesti kloubů; léčena pro osteoporózu, hypertenzi, hyperchlesterolémii o Pacient VH (roč.1941): ulcerózní změny rohovky s protrahovaným hojením Před 4 lety náhodně objeven změny v KO hematologicky sledován po půl roce Léčba zatím nenasazena

Pacienti: HE, RM, VH Výsledky základních lymfocytárních subpopulací Věk 71 let 81 let 72 let Leukocyty abs.počty 16,2 12,2 142 Lymfocyty % 58 54 97 T lymfocyty CD3+ % 26 17 1 CD3+ abs.počty 2,44 1,10 1,39 CD3+4+ % 17 11 0,6 CD3+4+ abs.počty 1,6 0,71 0,83 CD3+8+ % 8,0 5 0,4 CD3+8+ abs.počty 0,75 0,32 0,55 Poměr CD3+4+/CD3+8+ 2,13 2,20 1,50 B lymfocyty CD19+ % 68 73,0 98,0 CD19+ abs.počty 6,39 4,73 135,75 CD5+19+ % 66,8 71,5 95,9 NK buňky CD3-CD16,56+ % 5 10,0 1,0 CD3-CD16,56+ abs.počty 0,47 0,65 1,39

Pacient CLL Kontrolní osoba

CD3+4+8+ pozitivní T lymfocyty

CD3+4-8- T lymfocyty

CD16,56+ pozitivní T lymfocyty

Stanovení % eozinofilů

Děkujeme za pozornost