LABORATORNÍ PŘÍRUČKA

LABORATOŘ ALERGOLOGIE A KLINICKÉ IMUNOLOGIE LABORATORNÍ PŘÍRUČKA LABORATOŘ ALERGOLOGIE A KLINICKÉ IMUNOLOGIE KNTB LABORATORNÍ PŘÍRUČKA Verze: 6 Vlastník procesu: Laboratoř alergologie a klinické imunologie Účinnost od: 10. 2. 2017 Jméno Funkce Datum Podpis Zpracoval: Mgr. Martina Ščuglíková JOP VŠ 10. 2. 2017 Zpracoval: Mgr. Michaela Zapletalová JOP VŠ 10. 2. 2017 Přezkoumal: MUDr. Vladimír Řihák, Ph.D. Vedoucí LAKI 10. 2. 2017 Uvolnil do systému řízení kvality: MUDr. Jozef Macko, Ph.D. Představitel vedení pro kvalitu 10. 2. 2017 Schválil: Ing. Pavel Calábek Předseda představenstva 10. 2. 2017 Schválil: MUDr. Marcel Guřan, Ph.D. Člen představenstva 10. 2. 2017

Obsah: 1. ÚVOD... 3 2. INFORMACE O LABORATOŘI... 3 2.1 Identifikace laboratoře... 3 2.2 Základní informace o laboratoři... 3 2.3 Základní členění laboratoře... 4 2.4. Provozní doba laboratoře... 4 2.5 Zaměření laboratoře... 4 2.6 Spektrum služeb laboratoře... 4 2.7 Úroveň a stav akreditace pracoviště... 4 3. MANUÁL PRO ODBĚRY PRIMÁRNÍCH VZORKŮ... 4 3.1 Základní informace... 4 3.2 Žádanky (požadavkové listy)... 5 3.3 Požadavky na urgentní vyšetření... 5 3.4 Dodatečné požadavky na vyšetření... 5 3.5 Používaný odběrový systém... 6 3.6 Vydávání odběrového materiálu laboratoří... 6 3.7 Příprava pacienta před odběrem... 6 3.8 Množství vzorku... 7 3.9 Identifikace pacienta na žádance a na vzorku... 7 3.10 Stabilita vyšetřovaných vzorků... 7 3.11 Transport a svoz biologického materiálu, nezbytné operace se vzorkem... 8 4. PREANALYTICKÁ FÁZE V LABORATOŘI... 8 4.1 Příjem materiálu... 8 4.2 Důvody pro odmítnutí vzorku laboratoří... 8 4.3 Vyšetřování jinými laboratořemi... 8 4.4 Vyšetřování ve smluvních laboratořích... 8 4.5 Základní informace k bezpečnosti při práci se vzorky... 9 5. VYDÁVANÍ VÝSLEDKŮ A KOMUNIKACE S LABORATOŘÍ... 9 5.1 Hlášení výsledků v kritických intervalech... 9 5.2 Vydávání výsledků laboratoří... 10 5.3 Intervaly od dodání vzorku k vydání výsledku... 10 5.4 Konzultační činnost... 10 5.5 Řešení stížností... 10 5.6 Změny výsledků a nálezů... 11 5.7 Archivace výsledků vyšetření... 11 6. POKYNY PRO PACIENTY A ZDRAVOTNICKÁ ZAŘÍZENÍ... 11 7. PŘÍLOHY... 11 8. SEZNAM POUŽITÝCH DOKUMENTŮ... 11 Příloha č. 1 Žádanky... 13 ŽÁDANKA NA IMUNOLOGICKÁ VYŠETŘENÍ... 13 Žádost o vyšetření krve testem QuantiFERON -TB Gold (Plus)... 14 ŽÁDANKA NA IMUNOFENOTYPOVÉ VYŠETŘENÍ... 15 Příloha č. 2 Seznam vyšetření... 15 Stránka 2 z 28

1. ÚVOD Vážené kolegyně, vážení kolegové, vážení pacienti, dovolujeme si Vám předložit tuto laboratorní příručku, která má za úkol představit a informovat Vás o činnosti a spektru nabízených služeb naší laboratoře, která nabízí svým zákazníkům vyšetření z oblasti klinické imunologie a alergologie. Věříme, že tato laboratorní příručka Vám bude nápomocna v lepší orientaci a naleznete v ní vše, co potřebujete pro naši vzájemnou spolupráci. MUDr. Vladimír Řihák, Ph.D., primář plicního oddělení 2. INFORMACE O LABORATOŘI 2.1 Identifikace laboratoře Laboratoř alergologie a klinické imunologie (LAKI) je součástí zdravotnického zařízení Krajská nemocnice T. Bati, a. s. Zlín (dále jen KNTB). Název organizace: Krajská nemocnice T. Bati, a. s. Identifikační údaje: IČO: 27661989, IČP 82001841, nákladové středisko 9951 Typ organizace: Statutární zástupce organizace: Sídlo společnosti: akciová společnost Ing. Pavel Calábek, předseda představenstva MUDr. Marcel Guřan, Ph.D., člen představenstva doc. MUDr. Tomáš Gabrhelík, Ph.D., člen představenstva Havlíčkovo nábřeží 600, 762 75 Zlín Umístění: Plicní oddělení, pavilon č. 20 Vedoucí laboratoře: MUDr. Vladimír Řihák, Ph.D. 2.2 Základní informace o laboratoři Umístění laboratoře: LAKI se nachází v areálu KNTB v plicním oddělení budova č. 20. Základní kontakty a spojení: Kontakt Jméno Telefon E-mail Vedoucí laboratoře MUDr. Vladimír Řihák, Ph.D. 577 552 620 rihak@bnzlin.cz Vedoucí administrativy Kateřina Paličková 577 552 628 Laboratoř 577 552 633 577 552 649 Stránka 3 z 28

2.3 Základní členění laboratoře Laboratoř je členěna na tyto úseky: Průtoková cytometrie, diagnostika alergií, vyšetření autoprotilátek, pneumologická cytodiagnostika. 2.4. Provozní doba laboratoře Provozní doba: Po Pá 6.00 h 15.00 h Příjem biologického materiálu: Po Pá 6.30 h - 14.30 h QuantiFERON: Po Čt 6.30 h 15.00 h Neodebírat den před st. svátkem nebo volným dnem! Odběrové místo: Odběry biologického materiálu laboratoř neprovádí, odběrové místo pro pacienty mimo nemocnici se nachází v hematologické ambulanci KNTB budova číslo 13. 2.5 Zaměření laboratoře Laboratoř pracuje pro všechna oddělení KNTB i jiné nemocnice, pro privátní lékaře i ambulantní specialisty. LAKI je zaměřena zejména na primární diagnostiku v oblasti alergologie, klinické imunologie a primární pneumologické péče. Pokrývá také požadavky na dořešení hematologických diagnóz do rozhodnutí o určení místa léčby. Poskytuje laboratorní vyšetření v oboru 813. 2.6 Spektrum služeb laboratoře Laboratoř alergologie a klinické imunologie poskytuje laboratorní a konzultační služby v oblasti alergologie a klinické imunologie. Komplexní spektrum laboratorních vyšetření viz Seznam vyšetření (příloha č. 2). 2.7 Úroveň a stav akreditace pracoviště Každoročně se laboratoř účastní systému externího hodnocení kvality prováděné firmou SEKK spol. s.r.o. O úspěšném absolvování svědčí udělené certifikáty. Tato externí kontrola je prováděna u všech našich vyšetření, která SEKK nabízí a zprostředkovává. Alternativou pro vyšetření, která nejsou v nabídce SEKK je využití služeb zahraniční společnosti Referenzinstitut für Bioanalytik. Laboratoř je součástí nemocnice, která splnila požadavky certifikace podle normy ISO 9001. Laboratoř respektuje požadavky normy ISO 15189, v roce 2011 absolvovala audit NASKL I a v roce 2013 uděleno osvědčení audit NASKL II. V roce 2015 prošla Dozorovým auditem IIa. Dokumentace podléhá směrnici Směrnice pro řízení dokumentace IS-7. 3. MANUÁL PRO ODBĚRY PRIMÁRNÍCH VZORKŮ 3.1 Základní informace V této kapitole uvádíme obecné informace o preanalytické fázi laboratorních vyšetření, která předchází dodání vzorků do laboratoře. Jedná se především o přípravu pacientů před odběrem materiálu v ordinaci ošetřujícího lékaře, o vlastní odběr, možné typy interferencí, o typ odběrového materiálu, o žádanku a její správné vyplnění a další obecně platné záležitosti. Pokud některá vyšetření, včetně funkčních testů, vyžadují speciální přípravu pacienta, speciální odběr, případně splnění dalších požadavků, je to uvedeno u konkrétních vyšetření viz Seznam vyšetření (příloha č. 2). Stránka 4 z 28

3.2 Žádanky (požadavkové listy) Požadovaná vyšetření klinickými odděleními jsou laboratoři předávána ve formě žádanek. V současné době je preferována elektronická žádanka, ale laboratoř přijímá tištěné žádanky laboratoře a i jiné typy žádanek, pokud splňují potřebné požadavky. Elektronická žádanka: Elektronické zadávání požadavků na vyšetření se provádí v softwaru AKORD (součást NIS), jde o rychlé zadávání požadavků s minimálním množstvím chyb. Laboratoř žádá oddělení o přednostní používání elektronické žádanky. Písemné žádanky LAKI (pro klienty mimo KNTB): Žádanka pro imunologická vyšetření Žádost o vyšetření krve testem QuantiFERON TB Gold Plus Žádanka pro imunofenotypizaci (průtoková cytometrie) Dostupné na webu nemocnice: http://www.kntb.cz/zadanky-imunologie Minimální požadavky žádanky (průvodního listu): příjmení a jméno pacienta kód pojišťovny pojištěnce (pacienta) číslo pojištěnce - pacienta (rodné číslo, číslo pojistky u cizinců) základní a další diagnózy pacienta věk v letech a pohlaví pacienta datum a čas odběru, datum a čas přijetí vzorku laboratoří je automaticky evidován laboratorním informačním systémem po přijetí žádanky identifikace objednavatele (podpis a razítko, které musí obsahovat údaje - ústav, oddělení, jméno lékaře, IČP, IČZ, odbornost, včetně kontaktu na něj), nejsou-li tyto údaje vyplněny v horní části žádanky urgentnost dodání, pokud je vyšetřování požadováno ve statimovém režimu (požadavek se vyznačí slovem STATIM ) požadovaná vyšetření (vázaná k dodanému vzorku nebo k dodaným vzorkům) Poznámky V rubrice Sdělení je možné uvést klinické informace týkající se pacienta a vyžadovaného zaměření vyšetření (pro interpretační účely), tento údaj není povinný. V případě samoplátce nemusí žádanka (průvodní list) obsahovat: kód pojišťovny jméno lékaře nebo jiné osoby legálně oprávněné požadovat vyšetření 3.3 Požadavky na urgentní vyšetření Pokud ordinující lékař požaduje některá vyšetření urgentně, vyznačí tento požadavek viditelně na žádance slovem STATIM. Laboratoř pak provede tato vyšetření přednostně a výsledek nahlásí ordinujícímu lékaři telefonicky a následně písemně. Tento postup se uplatňuje v případech závažných diagnóz. 3.4 Dodatečné požadavky na vyšetření Na základě dodatečného požadavku (ústní nebo telefonický) ordinujícího lékaře provede laboratoř další vyšetření z již dodaného vzorku materiálu. Tyto požadavky musí být zadány ordinujícím lékařem, který je současně povinen sdělit zaměstnanci laboratoře identifikační údaje o pacientovi (jméno a rodné číslo). Zaměstnanec laboratoře tento dodatečný požadavek zaznamená jako dohlášený požadavek do LIS, dále se zaznamená jméno dohlašující osoby. Ordinující lékař je Stránka 5 z 28

povinen neprodleně dodat papírovou žádanku. Vyšetření budou provedena až po zaslání dodatečné žádanky (v urgentních případech i bez žádanky). Provedení dodatečného vyšetření závisí na dostatečném množství vzorku a časovém odstupu od odběru. O nemožnosti provést dodatečné vyšetření je žadatel informován. Primární vzorky na serologii uchováváme 3 dny v při teplotě 2-8 C. Vzorky na průtokovou cytometrii jsou v laboratoři uchovávány 2 dny od odběru. Vzorky na serologii jsou v laboratoři uchovávány zamražené 3 týdny od poslední analýzy vzorku. 3.5 Používaný odběrový systém V laboratoři je akceptován jakýkoli odběrový materiál, který je v souladu s požadavky na odběrový materiál. Rozhodující je použití správného typu aditiva ve zkumavce. Srážlivá žilní krev (bez aditiv) Typ odběrového materiálu Plastová zkumavka se separačním gelem Příklad použití Autoprotilátky, celkové IgE, sp. IgE Nesrážlivá žilní krev (K 3 EDTA) Nesrážlivá žilní krev (heparin) Typ odběrového materiálu Plastová zkumavka + kalium + EDTA Plastová zkumavka + heparin lithný Příklad použití Průtoková cytometrie Test aktivace bazofilů Kostní dřeň Výpotek (K 3 EDTA nebo heparin) BAL, likvor Speciální Quantiferon TB Gold Typ odběrového materiálu Plastová zkumavka s médiem RPMI 11640 s heparinem Typ odběrového materiálu Plastová zkumavka + kalium + EDTA nebo +heparin lithný Typ odběrového materiálu Plastová zkumavka bez úpravy Typ odběrového materiálu 3 nebo 4 speciální odběrové zkumavky s antigeny v lyofilizované podobě na stěnách zkumavky Příklad použití Průtoková cytometrie Příklad použití Průtoková cytometrie Příklad použití Průtoková cytometrie Příklad použití Quantiferon 3.6 Vydávání odběrového materiálu laboratoří Spolupracujícím pracovištím vydává laboratoř zkumavky na Quantiferon a zkumavky s mediem na kostní dřeň. 3.7 Příprava pacienta před odběrem Při odběru vzorku k vyšetření imunofenotypizace leukocytů, IgE, specifických IgE, autoprotilátek nejsou nutná žádná režimová opatření. Před plánovaným testem aktivace bazofilů je nutná úprava léčebné terapie - pacient musí 48 hod před odběrem vysadit léky typu antagonistů leukotrienů a 2 týdny před odběrem systémové kortikosteroidy. Stránka 6 z 28

3.8 Množství vzorku Doporučené minimální množství materiálu při primárním odběru: Základní alergologické a sérologické vyšetření 2-3 ml sražené krve Alergologické soubory (inhalační, potravinový) Stanovení specifického IgE (alergeny) Buněčná imunita - krev Buněčná imunita kostní dřeň Buněčná imunita - BAL Quantiferon 5ml sražené krve/1soubor vždy 1 ml krve pro každé 3 až 4 stanovované analyty 3 ml nesrážlivé krve (EDTA nebo heparin) 1 ml kostní dřeně v 4 ml RPMI-11640 médiu 40 ml laváže Přesně 1 ml krve do tří/čtyř speciálních odběrových zkumavek Při použití vakuových systémů je správný objem zajištěn, při odběru pístovým způsobem je nutné dodržet pokyn výrobce o množství vzorku na zkumavce je ryska, po kterou má být naplněna. 3.9 Identifikace pacienta na žádance a na vzorku Do laboratoře se přijímají vzorky s jednoznačnou identifikací pacienta, která musí být shodná s údaji na žádance. Po kontrole materiálu a žádanky jsou identifikační znaky pacienta zadány do LIS. Každá žádanka o vyšetření musí obsahovat všechny údaje nezbytné pro jednoznačnou identifikaci pacienta, tj. jméno, příjmení a číslo pojištěnce, číslo zdravotní pojišťovny, u níž je pacient pojištěn, pohlaví, razítko ordinujícího lékaře, datum a čas odběru vzorku, diagnózu základní nebo sledovanou, případně další informace nezbytné pro spolehlivé provedení vyšetření nebo interpretaci výsledku. Požadovaná vyšetření se u elektronické žádanky automaticky načtou pomocí čtečky čárového kódu do laboratorního informačního systému LIS. Každému vzorku je automaticky přiřazeno laboratorní číslo. Je vytištěn identifikační štítek pro žádanku a pro primární zkumavku, (popř. štítky pro alikvoty). Tak je zajištěna návaznost identifikovaného jedince na žádance a označení primární zkumavky. Vyšetřované vzorky biologického materiálu musí mít na štítku jednoznačnou identifikaci pacienta, minimálně jméno, příjmení a rok narození nebo číslo pojištěnce pacienta, vše musí souhlasit se žádankou. Pokud žádanka a biologický materiál jsou v rozporu s jednoznačnou identifikací pacienta, jsou vyřazeny z dalšího zpracování. Ordinující lékař je o tomto kroku zaměstnance laboratoře informován telefonicky. 3.10 Stabilita vyšetřovaných vzorků Odebraný materiál by měl být co nejdříve odeslán do laboratoře. Pokud nelze, je nutno uchovávat materiál podle doporučení pro jednotlivý biologický materiál. Srážlivou žilní krev nechat srážet 1-2 hod při pokojové teplotě, vzorek je stabilní 48 hod při 4-8 C Nesrážlivá krev na imunofenotypizaci stabilita 24 hod při pokojové teplotě Nesrážlivá krev na test aktivace basofilů (BAT) nutno doručit do laboratoře do 2 hod po odběru Speciální biologický materiál: kostní dřeň, punktát stabilita 24 hod při laboratorní teplotě, BAL stabilita 2-4 hod při pokojové teplotě Odběr na Quantiferon se doručuje do laboratoře co nejdříve, nejdéle však do 16 hod po odběru. Do doby transportu se vzorky skladují při pokojové teplotě ve svislé poloze. Následně se vzorek inkubuje při 37 C 16-24 hod.. Stránka 7 z 28

3.11 Transport a svoz biologického materiálu, nezbytné operace se vzorkem Transport vzorků do laboratoře v areálu nemocnice je zajištěn potrubní poštou, donáškovou službou nebo osobním předáním v místě příjmu materiálu. Během transportu musí být odběrové nádoby umístěny v pevné a nepropustné nádobě nebo stojánku odděleně od žádanek. Vzorky pro průtokovou cytometrii se skladují při laboratorní teplotě, ostatní vyšetření při teplotě 2-8 C. Při extrémních vnějších teplotách je nutné zajistit ochranu a transport vzorku v boxech zamezujících znehodnocení vzorku mrazem nebo horkem (chladicí vložka v létě, vytemperování boxu na laboratorní pokojovou teplotu v zimě). Vzorky určené k odeslání do smluvní laboratoře jsou po centrifugaci odděleny od séra a spolu se žádankou uloženy do lednice, odkud jsou vydávány svozové službě smluvní laboratoře. Likvidace probíhá podle směrnice KNTB. 4. PREANALYTICKÁ FÁZE V LABORATOŘI 4.1 Příjem materiálu Materiál je doručován do laboratoře pracovníky nemocnice, potrubní poštou nebo dopravou nezávislou na laboratoři. Pracovník přejímající vzorky přezkoumá fyzicky úplnost žádanky, označení vzorku, stav vzorku a elektronicky zapíše do LIS Po provedení vyšetření je odběrový materiál likvidován dle směrnice SM-041 Nakládání s odpady. V případě nečitelných nebo chybějících údajů na žádance, se pracovník na příjmu spojí se zadavatelem vyšetření a zajistí chybějící informace, popřípadě požádá o vyplnění nové žádanky. Pokud je dodán materiál bez žádanky a jedná se o nenahraditelný vzorek, laboratoř tento vzorek vyšetří, ale výsledek bude uvolněn, až zadavatel doplní identifikační údaje, tedy žádanku. Pokud je dodán neoznačený vzorek a jedná se o nenahraditelný vzorek (likvor, laváž apod.) se žádankou, tak laboratoř tento vzorek vyšetří, ale výsledky uvolní, až zadavatel převezme odpovědnost za identifikaci a přijetí vzorku nebo za poskytnutí informace, nebo za všechno současně. 4.2 Důvody pro odmítnutí vzorku laboratoří Důvody k odmítnutí: Nesouhlasí identifikace pacienta na žádance s identifikací na vzorku nebo materiál není označen vůbec Žádanka nebo zkumavka je znečištěná, je poškozený odběrový materiál Chybný odběr (zjevné nedodržení postupu při odběru). Jestliže nastane výše uvedený případ, vzorky jsou označené jako neshodné a jsou evidovány v LIS, blok NESHODY. O této situaci je informováno zasílající oddělení (telefonicky, následně i písemně). 4.3 Vyšetřování jinými laboratořemi Laboratorní vyšetření, určená pro jiné laboratoře v rámci nemocnice, která se nedopatřením dostanou na naše pracoviště, automaticky odesíláme do příslušné laboratoře. 4.4 Vyšetřování ve smluvních laboratořích Laboratoř využívá smluvní laboratoř IFCOR 99 pro raritní stanovení, které je vysoce neekonomické provádět v KNTB a nejsou urgentní. Vzorky určené k odeslání do spolupracující laboratoře jsou po centrifugaci odděleny od séra a spolu se žádankou uloženy do lednice, odkud Stránka 8 z 28

jsou vydávány svozové službě smluvní laboratoře. Stanovení, jeho kvalita a dodání výsledku jsou v gesci smluvní laboratoře. Kontakt: IFCOR-99, s.r.o. Stojanova 1336, 686 01 Uherské Hradiště Volejte zdarma na zelenou linku 800 190 195, nebo Tel.: 518 326 864 (imunologie), 518 326 865 (mikrobiologie) E-mail: laborator.veseli@ifcor.cz http://www.ifcor.cz/uherske-hradiste 4.5 Základní informace k bezpečnosti při práci se vzorky Obecné zásady strategie bezpečnosti práce s biologickým materiálem jsou obsaženy ve Vyhlášce Ministerstva zdravotnictví č. 306/2012 Sb., o podmínkách předcházení vzniku a šíření infekčních onemocnění a o hygienických požadavcích na provoz zdravotnických zařízení a ústavů sociální péče. Na základě této vyhlášky byly stanoveny tyto zásady pro bezpečnost práce s biologickým materiálem: Každý vzorek biologického materiálu je nutné považovat za potenciálně infekční. Žádanky ani vnější strana zkumavky nesmí být kontaminovány biologickým materiálem toto je důvodem k odmítnutí vzorku. Vzorky od pacientů s přenosným virovým onemocněním či multirezistentní nosokomiální nákazou musí být viditelně označeny. Vzorky jsou přepravovány v uzavřených zkumavkách, které jsou vloženy do stojánku nebo přepravního kontejneru tak, aby během přepravy vzorku do laboratoře nemohlo dojít k rozlití, potřísnění biologickým materiálem nebo jinému znehodnocení vzorku. Detailní problematika bezpečnosti práce je řešena interními směrnicemi nemocnice, směrnice: SM-041 Nakládání s odpady SM-016 Organizace požární ochrany SM-013 Zajištění školení a výcviku zaměstnanců KNTB v oblasti BOZP SM-047 Pracovní úrazy SM-029 Nakládání s nebezpečnými chemickými látkami a směsmi 5. VYDÁVANÍ VÝSLEDKŮ A KOMUNIKACE S LABORATOŘÍ 5.1 Hlášení výsledků v kritických intervalech Výsledky analýz, které se výrazně liší od fyziologických hodnot, jsou telefonicky hlášeny ordinujícímu lékaři a to bez ohledu na to, zda bylo vyšetření provedeno ve statimovém nebo rutinním režimu. Seznam metod a podmínky, kdy je nutno výsledek hlásit telefonicky jsou uvedeny níže v tabulce. Za nálezy v kritických intervalech považujeme podezřelé nálezy krevních malignit či imunodeficity. Informace o hlášení zaznamená pracovník do informačního systému LIS (viz. nahlášený výsledek, kde se uvede jméno osoby, které byly výsledky nahlášeny). Tabulka kritických hodnot Metoda Kritická hodnota Povinné hlášení Anti-ANA > 1:100 titr >1:1280 Anti-dsDNA >1:10 titr >1:640 ANCA >1:20 titr Ano Anti-PR3+anti-MPO Pozitivita Ano ANA/ENA Pozitivita Ne Stránka 9 z 28

CD19+ >23% >50% CD34+ - blasty periferie Nález Ano CD34+-blasty kost. dřeně >2% >5% 5.2 Vydávání výsledků laboratoří Výsledkové zprávy, jejich obsah, formát a náležitosti vydávání musí splňovat náležitosti ČSN EN ISO 15 189. Výsledková zpráva laboratoře obsahuje: Identifikaci a adresu zdravotnického zařízení název vyšetření, výsledek vyšetření, jednotky vyšetření, biologický referenční interval, kde to připadá v úvahu jednoznačnou identifikaci pacienta (jméno, příjmení, číslo pojištěnce, pojišťovna), diagnózu pacienta jméno a další jednoznačné identifikační označení žadatele a jeho adresu pracoviště datum a čas odběru primárního vzorku, pokud jsou dostupné, a datum a čas přijetí vzorku laboratoří datum a čas aktuálního vytištění zprávy typ primárního vzorku další poznámky (např. nesplněné vstupní parametry např. málo materiálu, chybný odběr) identifikaci oprávněného pracovníka uvolnit zprávu Laboratoř vydává výsledky vyšetření v tištěné formě a současně jsou výsledky uvolňovány do nemocničního informačního systému. Zadávání výsledků je v kompetenci laboranta, VŠ pracovníka, výsledky uvolňuje VŠ pracovník s atestací v oboru Telefonicky se hlásí výsledky s kritickými hodnotami. Pacientovi (mimo samoplátce) a nezdravotnickým pracovníkům se výsledky nesdělují! Telefonicky předané výsledky se vždy vydávají také v písemné podobě 5.3 Intervaly od dodání vzorku k vydání výsledku Dobou odezvy laboratoře se rozumí časový interval od převzetí vzorku laboratoří do uvolnění výsledku.laboratoř garantuje jeho dodržení pro 90% dodaných vzorků. Zbývajících 10% je vyhrazeno pro situace, kdy je nutno vzorek ředit, roztestovat, konfirmovat, start analýzy je nutno odložit z důvodu technické poruchy, údržby, opravy apod. (Doba odezvy se udává v počtu pracovních dní). Tato doba vyhovuje klinickým potřebám. Laboratoř má stanoveny doby odezvy laboratoře (turn around times) pro každé vyšetření viz Příloha č. 2 Abecední seznam vyšetření. 5.4 Konzultační činnost Konzultační činnost provádí MUDr. Vladimír Řihák, Ph.D. 5.5 Řešení stížností Telefonické a písemné stížnosti může podat kterýkoli z žadatelů a jsou vždy řešeny vedením laboratoře, případně osobami pověřenými vedením. Záznam je veden v Knize stížností. O výsledku šetření je žadatel vždy informován písemně. Problematika stížností klientů laboratoře je řešena interní pracovní instrukcí Postup pro řešení stížností a podnětů. Stížnosti veřejnosti či pacientů jsou řešeny směrnicí SM-003 Postup při vyřizování stížností a podnětů veřejnosti, směrnicí SM-064 Řízení neshod. Stránka 10 z 28

5.6 Změny výsledků a nálezů Opravy výsledkových listů pořízených laboratorním informačním systémem se provádí pro: identifikaci pacienta výsledkovou část Oprava identifikace pacienta Opravou identifikace pacienta se rozumí oprava rodného čísla a změna nebo významná oprava příjmení a jména pacientů před odesláním protokolu (výsledkového listu). Vzhledem k tomu, že laboratorní informační systém nepořizuje údaj o rodném příjmení, týká se oprava také všech změn příjmení (vdané ženy, osvojené děti, změna příjmení po rozvodu a podobně). Pod pojem oprava identifikace nepatří změna generovaného rodného čísla na korektní, oprava titulu, spojení záznamů korektního rodného čísla a nekorektního rodného čísla po verifikaci, oprava interpunkce. Oprava identifikace (rodného čísla nebo příjmení a jména) se provádí buď při zadávání požadavků, nebo v rámci oprav databáze na základě sdělení klienta. Oprava výsledkové části Byl-li klientovi vydán výsledek, který byl na základě jeho upozornění nebo na základě vnitřního podnětu v laboratoři znovu analyzován a byl-li odhalen rozpor mezi již vydaným výsledkem a novým stanovením, je vždy proveden záznam o neshodě. Postup pro odstranění neshody je následující:k záznamu o neshodě je připojen výtisk s původním výsledkem, záznam o neshodě musí obsahovat zdroj odhalení neshody, původní výsledek, nový výsledek a osobu zodpovídající za opravu výsledku. Výsledek je vydán znovu se správnou hodnotou a do komentáře výsledku je uvedeno, že se jedná o opravu výsledku číslo/datum/čas a jméno osoby, zodpovědné za změnu. Veškeré kroky týkající se opravy výsledku koná pouze jedna osoba, záznam o neshodě pořizuje manažer kvality, kontrolu opatření vždy jiná osoba než ta, která provedla opravu. Při distribuci opraveného výsledku obdrží klient vždy související výtisky výsledků. Je-li nutné zjistit původní hodnotu před opravou, poskytne takovouto informaci laboratoř na základě odpovídajícího záznamu o neshodě. Dojde-li ke změně výsledku, je o ní vždy lékař resp. klient informován. Souběžně s informací, která probíhá ústně, je vždy klientovi doručen opravený výsledek. 5.7 Archivace výsledků vyšetření Výsledky vyšetření jsou automaticky archivovány na příslušných serverech KNTB. V papírové podobě jsou uchovávána výstupní data zpracovaných vzorků z analyzátoru. Tato data jsou uchovávána po dobu pěti let. Výsledky externích a interních kontrol jsou uchovávány v papírové podobě. Tato data jsou uchovávána po dobu deseti let. 6. POKYNY PRO PACIENTY A ZDRAVOTNICKÁ ZAŘÍZENÍ Laboratoř nemá pro pacienty ani zdravotnická zařízení žádné zvláštní pokyny. 7. PŘÍLOHY Příloha č. 1 Žádanky Příloha č. 2 Seznam vyšetření 8. SEZNAM POUŽITÝCH DOKUMENTŮ SM-041 Nakládání s odpady SM-064 Řízení neshod Stránka 11 z 28

SM-016 Organizace požární ochrany SM-013 Zajištění školení a výcviku zaměstnanců KNTB v oblasti BOZP SM-047 Pracovní úrazy SM-029 Nakládání s nebezpečnými chemickými látkami a směsmi SM-003 Postup při vyřizování stížností a podnětů veřejnosti IS-07 Směrnice pro řízení dokumentů Stránka 12 z 28

Příloha č. 1 Žádanky ŽÁDANKA NA IMUNOLOGICKÁ VYŠETŘENÍ Pacient: Datum narození: Adresa/ umístění pacienta: Č. pojištěnce: Pojišťovna: Pohlaví: Muž /Žena Diagnóza: Oddělení: IČP: Odbornost: Datum a čas odběru: Primární vzorek: periferní krev, kostní dřeň, BAL, mozkomíšní mok, výpotek, uzlina, jiné Odběr: - periferní krev: nesrážlivá (EDTA): cytoflow, zároveň odběr na KO s dif srážlivá: autoimunita, alergologie, CIK, MBL - kostní dřeň, uzlina: zkumavka s RPMI mediem (vydává laboratoř), výpotek: zkumavka s EDTA nebo heparili CYTOMETRIE Základní panel Aktivace buněk CD14 CD45 CD3 T-ly CD4 T-ly CD8 T-ly CD19 B-ly CD16+56 NK buňky HLA DR CD38 jiné Funkční testy aktivace basofilů (CD203c/CD63) s alergeny (léky nutno dodat s odběrem) (s heparinem po domluvě). Jiné: Leukoproliferace AUTOIMUNITA exprese HLA DR na monocytech (sepse) HLA B27 septické markery CD64 na neutrofilech Vyloučení klonálního hematologického onemocnění ANA ANA+konfirmace ds DNA ENA screen CIK - PEG ANCA ANCA (MPO, PR3) ASCA IgA, IgG EMA IgA a-ttg IgA a-ttg IgG a-dgp IgG AIH blot (AMA M2, LKM1, LC1, F-aktin) + ANA ACLA a-beta-2-glykoprotein IgG, IgM a-pariet. bb.žaludku + a- vnitřní faktor IgE IgE specifické IgE Soubory: Inhalační Pediatrický inhalační Potravinový Jednotlivé specif. IgE:.. Mannan binding lectin MBL Informace, důvod vyšetření: Razítko, podpis lékaře Aktualizováno: 1.1.2017 Stránka 13 z 28

Žádost o vyšetření krve testem QuantiFERON -TB Gold (Plus) Pacient: Jméno a příjmení: Diagnosa: Číslo pojištěnce: Pohlaví: Muž /Žena Důvod provedení testu: kontakt s aktivní TBC: rodinný pracovní jiný: biologická léčba suspektní TBC (podle rtg nálezu): ANO NE suspektní TBC (podle symptomů): ANO NE TBC v osobní anamnéze: ne bakteriologicky ověřená: jen mikroskopicky kultivačně (M. tuberculosis, M. bovis) mykobakterióza (M. kansasii, M. marinum, M. szulgai) průkaz DNA/RNA komplexu M. tuberculosis bakteriologicky neověřená histologicky ověřená Terapie základními antituberkulotiky: ANO NE Pokud ano, od kdy (datum): její trvání: Imunodeficience, terapie léky s imunodef. účinkem: ne Pojišťovna: Primární vzorek: Periferní krev Přípravek: od do BCG vakcinace: ANO NE Pokud šlo o mimořádnou vakcinaci (mimo pravidelné očkování): Datum: Důvod: Test Mantoux II: ANO NE V minulosti (není myšleno provedení testu v rámci pravidelného očkování podle očkovacího kalendáře) Datum: V posledním roce datum:.. hodnota:.. Další informace důležité pro hodnocení výsledku testu: (např. jiná onemocnění, pracovní anamnéza riziko TBC, TBC v rodinné anamnéze atp.) Žadatel: Lékař: IČP: Pracoviště: Odběr provedl: Odbornost: Razítko a podpis: Datum a čas odběru: NELZE ODEBÍRAT V PÁTEK A DEN PŘED STÁTNÍM SVÁTKEM Aktualizováno: 1.1.2017 Stránka 14 z 28

Pacient: Datum narození: Adresa/ umístění pacienta: Č. pojištěnce: ŽÁDANKA NA IMUNOFENOTYPOVÉ VYŠETŘENÍ Pohlaví: Muž /Žena Oddělení: Pojišťovna: Diagnóza: Datum a čas odběru: Primární vzorek: periferní krev, kostní dřeň, BAL, mozkomíšní mok, výpotek, uzlina, jiné Primární vzorek: periferní krev, kostní dřeň, BAL, mozkomíšní mok, výpotek, uzlina, jiné Odběr: - periferní krev: nesrážlivá (EDTA): cytoflow, zároveň odběr na KO s dif - kostní dřeň, uzlina: zkumavka s RPMI mediem (vydává laboratoř) - výpotek: zkumavka s EDTA nebo heparili IČP: Odbornost: Základní panel Aktivace buněk Funkční testy (odběr pouze do zkumavky s heparinem po domluvě s laboratoří!) Jiné: Leukoproliferace B-linie T-linie Myeloidní linie Jiné CD14 CD45 CD3 T-ly CD4 T-ly CD8 T-ly CD19 B-ly CD16+56 NK buňky HLA DR CD38 jiné aktivace basofilů (CD203c/CD63) s těmito alergeny: (léky nutno dodat s odběrem) exprese HLA DR na monocytech (sepse) HLA B27 septické markery CD64 na neutrofilech Vyloučení klonálního hematologického onemocnění CD14 CD45 CD19 CD20 CD10 CD23 CD5 CD43 CD79b CD103 CD11c CD38 s kappa s lambda HLA DR CD14 CD45 CD3 CD5 CD7 CD4 CD8 CD(16+56) HLA DR CD45 CD14 CD13 CD16 HLA DR CD11b plasmatické buňky CD38, CD56 blasty CD34 Klinické informace, důvod vyšetření: Razítko, podpis lékaře: Příloha č. 2 Seznam vyšetření Aktualizováno: 1.1.2017 Stránka 15 z 28

Autoimunita ANA IgG protilátky proti jádru buňky Antinukleární protilátky jsou autoprotilátky proti orgánově nespecifickým buněčným antigenům, zahrnují protilátky proti antigenům jádra (DNA, RNA, histony, nukleoproteiny) rozpoznáváme i protilátky proti organelám cytoplasmy (mitochondrie, mikrozomy, lysozomy, peroxizomy, Golgiho aparát). Diagnostika systémových a orgánově specifických autoimunitních onemocnění. Vyšetřovaný materiál: srážlivá krev (sérum), plazma Stabilita vzorku: 2 8 C 14 dní Metoda: nepřímá imunofluorescence Ředění: 1:100 Titrace: 1:80,1:160,1:320, 1:640, 1:280, 1:2560 Substrát: Hep 2 buňky Doba odezvy při negativním výsledku: 7 dní Doba odezvy při pozitivním výsledku: 14 dní Druh veličiny: bez rozměru Hodnocení: kvalitativní s popisem fluorescenčního obrazu, negativní, hraniční, slabě pozitivní, pozitivní, silně pozitivní ANA imunoblot Konfirmační test pro diagnostiku sporných, hraničních a nejasných výsledků ANA (ENA, ds DNA). Testem potvrdíme tyto konkrétní autoprotilátky: Mi-2, Ku, nrnp, Sm, SS-A, Ro-52, SS-B, Scl-70, PM-Scl 100, Jo-1, CENP B, PCNA, ds DNA, nukleozomy, histony, ribozomální P-protein, AMA M2. Vyšetřovaný materiál: srážlivá krev (sérum), plazma Stabilita vzorku: 2 8 C 14 dní Metoda: westernblot Druh veličiny: bez rozměru Hodnocení: kvalitativní, negativní, hraniční, slabě pozitivní, pozitivní, silně pozitivní ANA detect Kvalitativní stanovení IgG protilátek proti SS-A-52 (Ro-52), SS-A-60 (Ro-60), SS-B, RNP/sm, RNP- 70, RNP-A, RNP-C, Sm-BB, Sm-D, Sm-E, Sm-F,, Sm-G, Scl-70, Jo-1, dsdna, ssdna, polynukleosomům, mononukleosomům, histonům H1, histonům H2A, histonům H2B, histonům 3, histonům 4, Pm-Scl-100, centromeře B v lidském séru nebo plazmě na principu ELISA metody. Vyšetřovaný materiál: srážlivá krev (sérum), plazma Stabilita vzorku: 2 8 C 14 dní Metoda: EIA Druh veličiny: Hodnocení: dle indexu pozitivity : < 1,0 negativní 1,0-1,2 hraniční > 1,2 pozitivní ENA screen IgG protilátky proti extrahovatelným antigenům jádra buňky (nrnp, Sm, SS-A, SS-B, Scl-70, Jo-1) Stránka 16 z 28

Extrahovatelné nukleární antigeny jsou rozpustné jaderné a cytoplazmatické komponenty, které jsou namířeny proti ribonukleoproteinům a enzymům. Vyšetření se provádí při podezření na systémové autoimunitní onemocnění (Sharpův syndrom,sle, Sjögrenův syndrom, progresivní systémová skleróza, polymyositis, dermatomyositis, CREST syndrom). Vyšetřovaný materiál: srážlivá krev (sérum) Stabilita vzorku: 2 8 C 14 dní Metoda: ELISA Druh veličiny: ku/l Hodnocení: < 20,0 negativní 20,0 pozitivní a-ds DNA IgG protilátky proti dvouvláknové DNA Kvalitativní stanovení anti - dsdna proti nativní dvouvláknové DNA. Jsou přítomny asi u 60% pacientů se SLE. Silně pozitivní nález je typický pro neléčený SLE. Vyšetřovaný materiál: srážlivá krev (sérum), plazma Stabilita vzorku: 2 8 C 14 dní Metoda: nepřímá imunofluorescence ředění: 1:10 titrace: 1:20, 1:40, 1:80, 1:160, 1:320 substrát: Crithidia luciliae Minimální požadované množství materiálu: 5 ml krve Druh veličiny: bez rozměru Hodnocení: kvalitativní, negativní, hraniční, slabě pozitivní, pozitivní, silně pozitivní a-ds DNA IgG protilátky proti dvouvláknové DNA Kvantitativní stanovení anti - dsdna proti nativní dvouvláknové DNA. Jsou přítomny asi u 60% pacientů se SLE. Silně pozitivní nález je typický pro neléčený SLE. Vyšetřovaný materiál: srážlivá krev (sérum), plazma Stabilita vzorku: 2 8 C 14 dní Metoda: EIA Druh veličiny: ku/l Hodnocení: < 20,0 negativní 20,0 pozitivní ANCA IgG protilátky proti antigenům cytoplasmy lidských granulocytů ANCA jsou autoprotilátky namířeny proti antigenům v cytoplasmě neutrofilních granulocytů, fluorescenčně rozlišujeme 3 typy obrazů: tzv. c-anca, p-anca a atypická ANCA, jejich přítomnost je spojena s autoimunitními onemocněními např. Wegenerova granulomatóza, Churg-Strauss syndrom, vaskulitida malých cév. Vyšetřovaný materiál: srážlivá krev (sérum), plazma Stabilita vzorku: 2 8 C 14 dní Metoda: nepřímá imunofluorescence ředění: 1:20 substrát: lidské granulocyty fixované etanolem a formaldehydem, Hep-2 buňky a opičí játra Minimální požadované množství materiálu: 5 ml krve Stránka 17 z 28

Druh veličiny: bez rozměru Hodnocení: kvalitativní, negativní, hraniční, slabě pozitivní, pozitivní, silně pozitivní Kritická hodnota: viz. tabulka kritických hodnot MPO (p-anca) IgG protilátky proti myeloperoxidáze Kvalitativní stanovení IgG autoprotilátek proti myeloperoxidáze je konfirmační metoda pro pozitivní fluorescenční obraz typu p-anca. Tyto protilátky jsou spojeny s onemocněními jako non-wg vaskulitidam a Goodpasteurovým syndromem a u dalších autoimunit Stabilita vzorku: 2 8 C 14 dní Metoda: ELISA Druh veličiny: bez rozměru Hodnocení: kvalitativní, negativní, hraniční, slabě pozitivní, pozitivní, silně pozitivní PR3 (c-anca) IgG protilátky proti proteináze 3 Kvalitativní stanovení IgG autoprotilátek proti proteináze3 metodou je onfirmační metoda pro pozitivní fluorescenční obraz typu c-anca. Tyto protilátky jsou diagnostické pro Wegenerovu granulomatózu. Stabilita vzorku: 2 8 C 14 dní Metoda: ELISA Druh veličiny: bez rozměru Hodnocení: kvalitativní, negativní, hraniční, slabě pozitivní, pozitivní, silně pozitivní ANCA profil Konfirmační test pro pozitivní fluorescenční obraz tzv. atypická ANCA. Testem lze prokázat 6 typů protilátek MPO, PR3, laktoferin, neutrofilní elastáza, katepsin G a BPI. Stabilita vzorku: 2 8 C 7 dní Metoda: ELISA Druh veličiny: bez rozměru Hodnocení: kvalitativní, negativní, hraniční, slabě pozitivní, pozitivní, silně pozitivní AMA M2 protilátky proti mitochondriím Protilátky proti mitochondriím jsou namířeny proti antigenům mitochondriální membrány. Protilátky bývají přítomny u 85-98% pacientů s primární biliární cirhózou (PBC) Stabilita vzorku: 2 8 C 7 dní Metoda: ELISA Druh veličiny: ku/ml Hodnocení: kvalitativní <10kU/ml negativní >10kU/ml pozitivní AIH imunoblot Stanovení IgG protilátek proti M2, LKM1, LC1, SLA a F-aktinu Stránka 18 z 28

Test se používá ke stanovení konkrétního typu autoprotilátek pro diferenciaci diagnostiky autoimunitních onemocnění jater, jako jsou autoimunitní hepatitida (AIH), primární biliární cirhóza (PBC) a primární sklerotizující cholangitida (PSC). Asi 15% všech případů chronického jaterního onemocnění ukazuje na autoimunitní patogenezi, tudíž je po vyloučení virového původu doporučeno stanovení různých autoprotilátek. Vyšetřovaný materiál: srážlivá krev (sérum) Stabilita vzorku: 2 8 C 7 dní Metoda: imunodot Minimální požadované množství materiálu: 5 ml krve Druh veličiny: bez rozměru Hodnocení: kvalitativní, negativní, pozitivní EMA IgA IgA protilátky proti endomyziu Stanovení protilátek proti endomysiu (EMA) ve třídě IgA je pro svou vysokou senzitivitu a specifitu vhodný marker pro diagnózu celiakie (gluten-senzitivní enteropatie). Protilátky rychle reagují na dietu a jsou vhodné pro monitorování úspěšnosti a dodržování dietního režimu. Toto vyšetření se indikuje při celiakii, u dif. diagnostiky enteropatií, Duhringovy dermatitis herpetiformis, malnutrice apd. Stabilita vzorku: 2 8 C 7 dní Metoda: nepřímá imunofluorescence ředění: 1:10 substrát: opičí játra Druh veličiny: bez rozměru Hodnocení: kvalitativní, negativní, hraniční, slabě pozitivní, pozitivní, silně pozitivní a-ttg IgA protilátky proti tkáňové transglutamináze Tkáňová transglutamináza je enzym, který je hlavním autoantigenem endomysia. Hraje hlavní roli v patogenezi celiakie. Stanovení protilátek proti tkáňové transglutamináze ve třídě IgA je moderní dignostický marker celiakie. Stabilita vzorku: 2 8 C 14 dní Metoda: ELISA Druh veličiny: ku/l Hodnocení: < 20,0 negativní 20,0 pozitivní a-ttg IgG protilátky proti tkáňové transglutamináze Vyšetření protilátek proti tkáňové transglutamináze ve třídě IgG má diagnostický význam u pacientů s celiakií, kteří zároveň trpí selektivním deficitem IgA. Stránka 19 z 28

Stabilita vzorku: 2 8 C 14 dní Metoda: ELISA Druh veličiny: bez rozměru Hodnocení: kvalitativní, < 10 U/ml negativní 10 U/ml pozitivní a-dgp IgG protilátky proti deamidovanému gliadinu Stabilita vzorku: 2 8 C 14 dní Metoda: ELISA Druh veličiny: ku/l Hodnocení: < 10 ku/l negativní 10 ku/l pozitivní ASCA IgA, IgG protilátky proti Saccharomyces cerevisiae Protilátky proti fosfopeptidomannanu kvasinek Saccharomyces cerevisiae se využívají v diferenciální diagnostice nespecifických střevních zánětů (IBD). Přítomnost protilátek je asociována s Crohnovou chorobou. Stabilita vzorku: 2 8 C 7 dní Metoda: nepřímá imunofluorescence ředění: 1:100, 1:1000 substrát: kvasinka Saccharomyces cerevisiae Druh veličiny: bez rozměru Hodnocení: kvalitativní, negativní, hraniční, slabě pozitivní, pozitivní, silně pozitivní APCA protilátky proti parietálním buňkám Stanovení se využívá se při diagnostice perniciózní anémie, vyznačuje se vysokou citlivostí. V okamžiku stanovení diagnózy má tyto protilátky 80-90% pacientů. Vyšetření je indikováno také při karcinomu žaludku, vředové chorobě a chronické atrofické gastritidě, protilátky se rovněž vyskytují u pacientů s autoimunitními endokrinními poruchami. Stabilita vzorku: 2 8 C 7 dní Metoda: ELISA Druh veličiny: ku/ml Hodnocení: kvalitativní < 10 ku/l negativní 10 ku/l pozitivní AIFA protilátky proti intrinsic faktoru (vnitřnímu faktoru) Intrinsic faktor je glykoprotein, který se podílí na transportu vitaminu B12 přes střevní sliznici, umožňuje absorpci vitaminu B12 do krevního řečiště. A při jeho deficitu se rozvíjí anémie. Stránka 20 z 28

Stanovení přítomnosti protilátek pomáhá rozlišit mezi autoimunitní perniciózní anémií, nonautoimunitní pern. anémií. Stabilita vzorku: 2 8 C 7 dní Metoda: ELISA Druh veličiny: ku/ml Hodnocení: kvalitativní < 6 ku/l negativní 6 ku/l pozitivní ACLA screen IgA/G/M protilátky proti kardiolipinu Vyšetření protilátek proti kardiolipinu, v komplexu s kofaktory (beta-2-glykoprotein I) jsou charakteristické pro antifosofolipidový syndrom, systémový lupus, často se vyskytují u pacientů s trombózami, trombocytopeniemi či opakovaných potratech. Stabilita vzorku: 2 8 C 7 dní Metoda: ELISA Doba odezvy: 14 dní Druh veličiny: ku/l Hodnocení: < 10 negativní 10 pozitivní a-beta2-glykoprotein I IgG, IgM Pro protilátky proti beta-2-glykoproteinu platí totéž co pro ACLA, detekujeme je u antifosfofolipidového syndromu, u trombocytopenií,u opakovaných abortů plodu a u systémových autoimunitních onemocnění, často se vykytují současně s ACLA. Stabilita vzorku: 2 8 C 7 dní Metoda: ELISA Doba odezvy: 14 dní Druh veličiny: ku/l Hodnocení: < 5 negativní 5-8 hraniční > 8 pozitivní CIK metoda s PEG cirkulující imunokomplexy Stanovuje se hladina cirkulujících imunokomplexů, které se tvoří v přítomnosti nadbytku protilátky. CIK mohou být přítomny u různých infekčních (především bakteriálních) onemocnění. Vyšší hodnoty jsou u onemocnění doprovázející poškození tkání v důsledku ukládání imunokomplexů (SLE, systémová onemocnění, revmatoidní artritida, glomerulonefritida, vaskulitida). Metoda je nespecifická a kromě cirkulujících imunokomplexů může detekovat také přítomnost dalších patologických proteinů, např. paraproteiny, kryoglobuliny atd.). Stanovení CIK má v klinice podpůrný význam. Vyšetřovaný materiál: srážlivá krev (sérum), plazma Stabilita vzorku: 2 8 C 24h Metoda: precipitace polyethylenglykolem a turbidimetrie Minimální požadované množství materiálu 1 ml krve Doba odezvy: 14 dní Stránka 21 z 28

Druh veličiny: bezrozměrné Hodnocení: arbitrární jednotky negativní < 50j. pozitivní 50j. MBL Stanovení oligomerizovaného mannan-vázajícího lektinu Stanovení MBL pomáhá při určování náchylnosti k infekcím, a tedy zjištění potřeby agresivní preventivní antibiotické intervence v následujících případech: Pacienti podstupující (nebo u nichž je zahajována) chemoterapii nebo imunosupresivní léčbu, pacienti s cystickou fibrózou, děti s rekurentními infekcemi. Vyšetřovaný materiál: srážlivá krev (sérum), plazma Stabilita vzorku: 2 8 C 24h Metoda: ELISA Minimální požadované množství materiálu 1 ml krve Doba odezvy: 1měsíc Druh veličiny: mg/l Hodnocení: < 0,100 mg/l deficit Alergologie Celkové IgE IgE U zdravých lidí se v séru vyskytuje v nepatrných koncentracích. Uplatňuje se v patogenezi přecitlivělosti 1. typu a v obraně proti parazitárním infekcím. Zvýšené hladiny jsou nalézány u atopických onemocnění (alergická rýma, astma, urtukárie, ekzém), některých imunodeficiencí a parazitárních infekcích. Hodnoty celkového a specifického IgE nemusí korelovat, normální hodnoty IgE nevylučují alergii. Stabilita vzorku: 2 8 C Metoda: FEIA Druh veličiny: ku/l Hodnocení: věk IgE ku/l 0-1 rok 1-30 1-5 let 1-50 5-10 let 1-100 10 let a více 1-150 Specifické IgE proti potravinovým alergenům Semikvantitativní stanovení souboru specifických IgE protilátek proti potravinovým alergenům metodou imunoblot. Kód alergenu Název alergenu Stránka 22 z 28

f1 f75 f2 f45 f4 f5 f9 f14 f13 f17 f20 f49 f84 f237 f25 f31 f35 f85 f3 f23 Vaječný bílek Vaječný žloutek Kravské mléko Kvasnice Pšeničná mouka Žitná mouka Rýže Sojové boby Podzemnice olejná Líska Mandle Jablko Kiwi Meruňka Rajče Mrkev Brambora Celer Treska Krab Stabilita vzorku: při 2-8 C 14 dní Metoda: imunoblot Minimální požadované množství materiálu: 5 ml krve pro panel alergenů Druh veličiny: třída pozitivity Hodnocení: výsledky se vydávají v RAST třídách Třída pozitivity (RAST) Výsledek vyšetření v ku/l 0 < 0,35 Negativní 1 0,5-0,7 Hraniční 2 0,7-3,5 Slabě pozitivní 3 3,5-17,5 Pozitivní 4 17,5-50 Silně pozitivní 5 50-100 Velmi silně pozitivní 6 > 100 Velmi silně pozitivní Specifické IgE proti inhalačním alergenům Semikvantitativní stanovení souboru specifických IgE protilátek proti inhalačním alergenům. Alternativou u dětských pacientů je pediatrický inhalační soubor, kterým nelze vyšetřit specifické IgE proti g1, g3, t7 a w1, ty jsou nahrazeny w8, e6, e82 a e84. Stránka 23 z 28

Inhalační soubor Kód alergenu g1 g3 g6 g12 t2 t3 t4 t7 w1 w6 w9 d1 d2 e1 e2 e3 m1 m2 m3 m6 Název alergenu Tomka vonná Srha Bojínek luční Šlechtěné žito Olše Bříza Líska Dub Ambrosie Pelyněk černobýl Jitrocel Dermatophagoides pteronyssinus Dermatophagoides farinae Kočka Pes Kůň Penicillium notatum Cladosporium herbarum Asperillus fumigatus Alternaria alternata Pediatrický inhalační soubor Kód alergenu Název alergenu g1 Tomka vonná g12 Šlechtěné žito t2 Olše t3 Bříza t4 Líska w6 Pelyněk černobýl w8 Pampeliška w9 Jitrocel d1 Dermatophagoides pteronyssinus d2 Dermatophagoides farinae e1 Kočka e2 Pes e3 Kůň e6 Morče e82 Králík e84 Křeček m1 Penicillium notatum m2 Cladosporium herbarum m3 Asperillus fumigatus m6 Alternaria alternata Stabilita vzorku: při 2-8 C 14 dní Metoda: imunoblot Minimální požadované množství materiálu: 5 ml krve pro panel alergenů Stránka 24 z 28

Druh veličiny: třída pozitivity Hodnocení: výsledky se vydávají v RAST třídách Třída pozitivity (RAST) Výsledek vyšetření v ku/l 0 < 0,35 Negativní 1 0,5-0,7 Hraniční 2 0,7-3,5 Slabě pozitivní 3 3,5-17,5 Pozitivní 4 17,5-50 Silně pozitivní 5 50-100 Velmi silně pozitivní 6 > 100 Velmi silně pozitivní Specifické IgE proti směsným alergenům a jejich komponentům (CAP) Stanovení koncentrace specifických IgE protilátek v periferní krvi je nejpoužívanějším in vitro testem pro diagnostiku alergií zprostředkovaných IgE. Molekulární diagnostika pomocí rekombinantních alergenů(pomocí alergenových složek). Interpretace výsledků je vždy nutno provést společně s posouzením klinického stavu pacienta, případně i s posouzením výsledků kožních testů. Seznam alergenů, které lze vyšetřit je k dispozici v aktuální elektronické žádance. O možnosti diagnostiky dalších komponent je možné se domluvit v laboratoři. Vyšetřovaný materiál: srážlivá krev (sérum) nebo plazma. Stabilita vzorku: při 2 8 C 7 dní, pro dlouhodobé skladování zamrazit Metoda: FEIA Minimální požadované množství materiálu: 50 µl séra pro jeden alergen Doba odezvy: 1 měsíc Druh veličiny: třída pozitivity Hodnocení: výsledky se vydávají v RAST třídách Třída pozitivity (RAST) Výsledek vyšetření v ku/l 0 < 0,35 Negativní 1 0,5-0,7 Hraniční 2 0,7-3,5 Slabě pozitivní 3 3,5-17,5 Pozitivní 4 17,5-50 Silně pozitivní 5 50-100 Velmi silně pozitivní 6 > 100 Velmi silně pozitivní Specifické IgE proti jednotlivým alergenům FOOKE Tato metoda je využívána ke stanovení sporadicky se vyskytujících alergenů, které není ekonomické v laboratoři stanovovat kontinuálně. Klientům je na požádání vydáván katalog Stanovení specifického IgE, který obsahuje kompletní spektrum alergenů, které je možno vyšetřit. Tento katalog je k v elektronické verzi k dispozici na http://www.kntb.cz/zadanky-imunologie. Seznam alergenů, které lze vyšetřit je také v elektronické žádance, avšak zde se nachází alergeny, které již byly někdy požadovány. Alergeny, které nikdy vyšetřovány nebyly, se nachází v dodávaném katalogu. Vyšetřovaný materiál: srážlivá krev (sérum) nebo plazma. Stabilita vzorku: při 2 8 C 7 dní, pro dlouhodobé skladování zamrazit Metoda: ELISA Minimální požadované množství materiálu: 50 µl séra pro jeden alergen Doba odezvy: 1 měsíc Druh veličiny: třída pozitivity Hodnocení: výsledky se vydávají v RAST třídách Třída pozitivity (RAST) Výsledek vyšetření v ku/l Stránka 25 z 28

0 < 0,35 Negativní 1 0,5-0,7 Hraniční 2 0,7-3,5 Slabě pozitivní 3 3,5-17,5 Pozitivní 4 17,5-50 Silně pozitivní 5 50-100 Velmi silně pozitivní 6 > 100 Velmi silně pozitivní QUANTIFERON Genetickou analýzou byly identifikovány proteiny ESAT 6, CFP 10, a TB7.7., které jsou specifické pro patogenní druhy komplexu Mycobacterium tuberculosis a nevyskytují se ve vakcinačních kmenech BCG a ani v netuberkulózních mykobakteriích (s výjimkou M. kansassi, M. szulgai a M. marinum). V případě infekce M. tuberculosis má pacient v krvi efektorové Th 1 T lymfocyty, které po stimulaci těmito antigeny in vitro produkují interferon γ. Test je založený na vyšetření specifické buněčné odpovědi, kde se imunochemicky měří hladina INFγ. Vyšetřovaný materiál: nesrážlivá krev, odběr do 3 nebo 4 speciálních odběrových zkumavek, které laboratoř zasílá na vyžádání Stabilita vzorku: naplněné zkumavky skladovat při pokojové teplotě, do laboratoře zaslat nejpozději do 6 hod po odběru, následně zkumavky umístit do 37 C inkubátoru na 24 hod, stažená plazma při 2-8 C 3 měsíce Minimální požadované množství materiálu: 3 x 1 ml heparinizované krve ve spec. zkumavkách Doba odezvy: 14 dní Hodnocení: pozitivní, negativní, neurčeno negativní < 0,35 index, negativní, nepravděpodobná infekce M. tuberculosis pozitivní > 0,35 index, pozitivní, pravděpodobná infekce M. tuberculosis Buněčná imunita HLA B27 Test je určen pro kvantifikaci buněčných populací exprimující antigen HLA-B27, který je přítomen až u 90% pacientů postižených ankylózující spondylartritidou (AS). Vyšetřovaný materiál: nesrážlivá krev (EDTA). Stabilita vzorku: 20 25 C 6 hodin Metoda: průtoková cytometrie Minimální požadované množství materiálu: 2 ml Druh veličiny: bezrozměrné Hodnocení: kvalitativní, negativní, pozitivní IMUNOFENOTYPIZACE buněčných subpopulací lymfocytů Základní fenotypizace periferní krve: metoda slouží ke stanovení relativního zastoupení leukocytárních populací v periferní krvi na základě exprese povrchových markerů metodou průtokové cytometrie s využitím fluorescenčně značených monoklonálních protilátek proti povrchovým znakům leukocytů (CD3, CD4, CD8, CD14, CD16/56, CD19). Imunofenotypizace krevních malignit: lze stanovit přítomnost, liniovou příslušnost a případně i diferenciační stupěň nádorových buněk hematopoetického původu. Stránka 26 z 28

Fenotypizace bronchoalveolární laváže: metoda doplňuje diagnostiku intersticiálních plicních onemocnění (CD 45, CD14, CD3, CD4, CD8) Vyšetřovaný materiál: nesrážlivá krev (heparin,edta), kostní dřeň, BAL, punktát, mozkomíšní mok Stabilita vzorku: 20 25 C 6 hodin Kritická hodnota: viz. tabulka kritických hodnot Doba odezvy: 5 dní Druh veličiny: relativní počty v % Hodnocení: Normální hodnoty periferní krve: věk % abs. počet (x 10 3 ) WBC 0-1 6,5-12,0 1-3 5,0-10,0 3-5 4,5-10,0 7-17 4,0-10,0 dospělí 4,0-10,0 CD3 + 0-1 55,0-75,0 1,70-5,00 1-7 57.0-80,0 1,50-4,00 7-17 60,0-80,0 1,20-3,50 dospělí 60,0-80,0 0,90-2,50 CD4 + 0-1 35,0-60,0 1,60-4,00 1-7 35,0-55,0 0,9-2,80 7-17 35,0-55,0 0,65-2,50 dospělí 30,0-55,0 0,40-1,60 CD8 + 0-1 12,0-35,0 0,70-3,00 1-7 16,0-38,0 0,55-1,80 7-17 18,0-35,0 0,35-1,30 dospělí 15,0-35,0 0,25-1,00 CD19 + 0-1 15,0-39,0 0,60-3,00 1-7 12,0-35,0 0,40-2,20 7-17 10,0-25,0 0,25-0,60 dospělí 7,0-18,0 0,10-0,35 CD56 + 16 + 0-1 6,0-25,0 0,30-1,00 1-7 6,0-20,0 0,10-0,70 7-17 6,0-20,0 0,10-0,50 dospělí 6,0-20,0 0,10-0,40 Test aktivace basofilů CD63 Test aktivace basofilů (BAT) je metoda in vitro diagnostiky IgE zprostředkované alergické reakce (reakce I. typu). Detekce basofilů z plné krve pomocí průtokové cytometrie využívá značení CD203c a aktivačního znaku CD63 pomocí monoklonální protilátky. Bylo prokázáno, že lidské bastily aktivované in vitro (alergenem nebo anti IgE protilátkami) prostřednictvím jejich vysokoafinitního receptoru pro IgE exprimují znak CD63 na své membráně. Exprese CD63 na povrchu basofilů dobře koreluje s jejich degranulací. Vyšetřovaný materiál: nesrážlivá krev (heparin) Stabilita vzorku: materiál dopraven do laboratoře nejpozději do 2 hod od odběru, pacient by měl 48 hod před odběrem vysadit léky typu antagonistů leukotrienů a 2 týdny před odběrem systémové kortikosteroidy. Doba odezvy: 2 dny Druh veličiny: relativní počty v % Stránka 27 z 28