Laboratorní příručka IP-2/A-01 Pracoviště Oddělení lékařské mikrobiologie Centra imunologie a mikrobiologie Na kabátě 229 400 11 Ústí nad Labem

Laboratorní příručka IP-2/A-01 Pracoviště Oddělení lékařské mikrobiologie Centra imunologie a mikrobiologie Na kabátě 229 400 11 Ústí nad Labem Vedoucí CIM: RNDr.Vlastimil Král, CSc. Tel: 477751800 Vedoucí OLM: MUDr.Miriam Králová Tel: 477751831 1

Mikrobiologická Mykobakteriologická Mykologická Parazitologická vyšetření provádí: Laboratoř lékařské mikrobiologie tel.477751830 Laboratoř diagnostiky TBC tel.477751836 2

OBSAH 1. Úvod 2. Použité zkratky 3. Příjem vzorků 4. Dostupnost služeb 5. Zvláštní požadavky ( statim, ústní, opakovaná vyšetření) 6. Vyřizování stížností Nabídkový list laboratoře bakteriologie 7. Technika a náležitosti vyšetření primárních biologických vzorků na kultivaci a citlivost 7.1 HCD, DCD, liquor 7.2 Sputum 7.3 Dutiny orgánů 7.4 Liquor latexovou aglutinací 7.5 Stěry z kůže, spojivkový vak, zvukovod 7.6 Stolice 7.7 Stolice na průkaz virových antigenů 7.8 Moč a moč na SGA 7.9 Moč na průkaz antigenu Strep.pn. a Legionella pn. 01 7.10 Stěr z GUT 7.11 Stěr na průkaz mykoplasmat 8 Odborná literatura k odběrům na K+C Nabídkový list laboratoře průkazu mykobakterií v primárních biologických vzorcích 9 Technika a náležitosti odběru na BK 9.1 Sputum na BK 3

9.2 Aspirát z bronchu, BAL, 9.3 Lymfatická uzlina 9.4 Mozkomíšní mok 9.5 Menstruační krev 9.6 Stolice 9.7 Moč 9.8 Laryngeální výtěr 9.9 Stěr z píštěle, z rány 10 Poznámky k vyšetřením na BK, doplňková vyšetření 11. Odborná literatura k vyšetřením na BK Nabídkový list laboratoře mykologie 12. Technika odběru primárních biologických vzorků na mykologické vyšetření 12.1 HCD 12.2 DCD 12.3 Kožní povrch as detritu kožních adnexa 12.4 Oko, ucho 12.5 Tkáň, biopsie 12.6 Tekutý hnis, exsudáty 12.7 Sekret z UGT a ženy 12.8 Moč 13. Odborná literatura k mykologickým vyšetřením Nabídka úseku parazitologie 14 Technika a náležitosti k odběru na parazitologická vyšetření 14.1 Stolice na průkaz střevních parazitů 14.2 Stolice na přítomnost měňavek 14.3 Průkaz vajíček ektoparazitů 4

14.4 Průkaz vývojových stádií krevních parazitů tlustá kapka 14.5 MOP mikroskopický obraz poševní 14.6 Kultivace bičíkovců 15. Odborná literatura k vyšetření na parazity Literatura: Přecechtěl, F.: Lékařská mikrobiologie praktikum. SPN 1976 Jabor,A, Bébrová, E.: Laboratorní příručka OHS Kladno 1999 Miller, J.,M.: Specimen management in Clinical Mikrobiology. ASM Press USA 1999 1. Úvod Vážení klienti, kolegyně a kolegové, předkládáme Vám nabídku mikrobiologických (M), mykologických (My), parazitologických (P) vyšetření a služeb oddělení lékařské mikrobiologie (OLM) Centra imunologie a mikrobiologie Zdravotního ústavu se sídlem v Ústí nad Labem. Spektrem vyšetření a snahou o rozvoj oboru, které jsou založeny na aktuálních potřebách klinických oborů splňujeme požadavky na moderní laboratorní diagnostiku přenosných onemocnění. Laboratoře OLM se pravidelně účastní systémů externího hodnocení kvality na úrovni ČR. Kvalitní a včasný diagnostický postup však není jediným cílem týmu OLM CIM ZÚ Ústí nad Labem. Nedílnou součástí naší práce je účast na interpretaci výsledků pro vlastní klinickou diagnózu a konzultace. OLM spolupracuje s ostatními odděleními CIM ZÚ. Poskytujeme informace týkající se: 5

správného odběru biologického materiálu výběru vhodných transportních souprav konzultace nových metod moderní bakteriologické diagnostiky sledujeme výskyt rezistence k antimikrobiálním a antimykobakteriálním látkám účastníme se akreditovaných programů dalšího vzdělávání v IPVZ Praha a NCO NZO Brno úzce spolupracujeme s orgány ochrany veřejného zdraví (KHS) a pomáháme spoluvytvářet podklady pro práci epidemiologů KHS Ústeckého kraje Cílem našeho přístupu je snaha o kvalitní vyšetření biologického materiálu, snížení nákladů na vyšetření a úsilí o minimální zatížení vyšetřovaného člověka. Předkládaná nabídka vyšetření je periodicky aktualizována. Za veškeré připomínky a podněty týkající se naší práce předem děkujeme. Zveme rovněž na www.zuusti.cz. V Ústí nad Labem, srpen 2010 ing.pavel Kutil ředitel pověřený řízením ZÚ se sídlem v Ústí nad Labem Kontakty: MUDr.Miriam Králová tel.: 477751831 MUDr.Dagmar Šrejberová tel.: 477751841 Mgr. Romana Chrudimská tel.: 477751808 Lenka Bednaříková tel.: 477751830 6

2. Použité zkratky AP Akreditační pracoviště Centra epidemiologie a mikrobiologie CEM AT antituberkulotikum ATB antibiotikum BAL bronchoalveolární laváž BK bacil Kochův = průkaz Mycobacterium tuberculosis CIM Centrum imunologie a mikrobiologie DCD dolní cesty dýchací DDD dezinfekce, dezinsekce, deratizace DG diagnóza GBS streptokoky ze skupiny B HCD horní cesty dýchací CHT chemoterapeutikum KHS Krajská hygienická stanice LIS laboratorní informační systém LV laryngeální výtěr M mikrobiologie MAC komplex M.avium-intracellulare MOP mikrobiální obraz poševní MOTT Mykobakteria jiná než tuberkulózní = podmíněně patogenní OLM ěle Oddělení lékařské mikrobiologie OPP Oddělení přípravných provozů NRL národní referenční laboratoř OOVZ Orgán ochrany veřejného zdraví 7

P PCR SOP STD SZÚ ZP ZÚ parazitologie polymerázová řetězcová reakce standardní operační postup sexuálně přenosná infekce Státní zdravotní ústav zdravotní pojišťovna Zdravotní ústav Svoz primárních biologických vzorků pro OLM CIM je zajišťován vlastní svozovou službou, jejíž provoz je povolen OOVZ, a která dodržuje pravidla Evropské dohody o mezinárodní silniční přepravě nebezpečných věcí (ADR). Optimální trasa svozu je zajišťována pracovníky svozové služby. Je aktuálně upravována na základě požadavků zákazníků, kteří dostávají vizitky s kontaktem na oba řidiče svozu. Klienti mohou telefonicky přímo u řidičů objednat přepravu urgentního vzorku. Na pokyn indukujícího lékaře si nemocní zajišťují transport vzorků do laboratoře sami. 3. Příjem vzorků Příjem vzorků ze svozu a individuálně doručených vzorků probíhá v budově Zdravotního ústavu se sídlem v Ústí nad Labem v přízemí vpravo v místnosti označené jako Centrální příjem biologického materiálu nebo ve 2. patře vpravo přímo na OLM. Za správné provedení odběru, řádné vyplnění žádanky a zabezpečení materiálu pro transport odpovídá odesílatel vzorku. Za zabezpečení materiálu během transportu odpovídá přepravce. Důvody pro odmítnutí biologického materiálu nebo požadavku o vyšetření v laboratoři: žádanka s biologickým materiálem, na které chybí nebo jsou nečitelné základní údaje pro podklady k účtování se ZP (číslo pojištěnce, příjmení a jméno, kód zdravotní pojišťovny, ICZ odesílajícího lékaře nebo pracoviště, základní diagnóza) a tyto údaje není možné ihned doplnit na základě dotazu u klienta či 8

odesílajícího lékaře nebo obsahuje požadavky na vyšetření, které laboratoře OLM CIM ZÚ Ústí nad Labem neprovádějí žádanka nebo odběrová nádobka jsou viditelně kontaminovány odebraným biologickým materiálem (nedokonale uzavřená nádobka, materiál vylitý) biologický materiál, který nelze věrohodně identifikovat biologický materiál doručen bez žádanky odběrová souprava s biologickým materiálem, kde zjevně došlo k nedodržení časového faktoru k doručení, vzorek neodpovídá objemem požadovanému vyšetření, vzorek bez zajištění odpovídajících podmínek transportu apod. biologický materiál v nesterilní odběrové soupravě D:06 4. Dostupnost služeb laboratoří OLM CIM provozní doba pondělí až pátek 7:00 15:30 Oddělení lékařské mikrobiologie CIM sobota 7:00 09:00 Laboratoř bakteriologie OLM jindy: statimy aj. urgentní stavy dle epidemiologické situace v regionu na služ.telefon: 477751830 Příjem vzorků k laboratornímu vyšetření je prováděn do ukončení uvedené pracovní doby. Provoz OLM CIM je zajištěn také ve svátečních dnech obdobně jako o sobotách od 07:00 09:00, popř. na uvedeném služebním telefonu. 9

5. Zvláštní požadavky na vyšetření (statimové vzorky, ústní požadavky, dodatečná a opakovaná vyšetření) 5.1 Statimové vzorky Indikace akutních vyšetření je omezena pro případy hospitalizovaných nemocných v těžkém stavu, když by výsledek akutního vyšetření mohl bezprostředně ovlivnit péči o nemocného. Netýká se bakteriologických vyšetření, u nichž je materiál vždy zpracováván ihned po doručení do laboratoře. Kultivační nálezy podléhající hlášení, nálezy u vybraných diagnóz jsou telefonicky sdělovány odesílateli jako předběžný výsledek. Biologický materiál na akutní vyšetření musí být dodán s příslušnou dokumentací a označením urgentní nebo statim neprodleně po odběru do laboratoře, kde odborný pracovník provede vyšetření. Výsledky urgentních vyšetření se sdělují telefonicky a vydávají se v podobě výsledkového listu ihned po kontrole a podepsání odpovědným pracovníkem. 5.2 Ústní (např. telefonické) požadavky na vyšetření, dodatečná vyšetření Ze vzorků dodaných do laboratoře lze dodatečně, např. na základě telefonické konzultace a po následném objednání indukujícím lékařem, provádět další požadovaná vyšetření jen při dodržení následujících pravidel: Dodatečná vyšetření požadovaná akutně budou provedena neprodleně po telefonickém doobjednání. Jméno žadatele se zapíše do záznamového listu telefonického hlášení nebo do příslušné žádanky o předchozí vyšetření. Pracovník, přijímající takový požadavek, stvrzuje písemně podpisem doobjednání vyšetření. Dodatečná vyšetření nepožadovaná akutně se provedou až po doručení dodatečné žádanky do laboratoře. 10

Možnost dodatečného vyšetření závisí na množství uchovaného vzorku a specificitě požadovaného vyšetření. O stanovení citlivosti na ATB je možno požádat v průběhu kultivace vzorku. 5.3 Opakovaná vyšetření Pokud při transportu nebo manipulaci se vzorkem dojde ke znehodnocení vzorku, odpovědní pracovníci laboratoře informují indukujícího lékaře, případně telefonicky dohodnou nový odběr biologického vzorku. Pokud se vyskytnou v preanalytické fázi vyšetřením vzorku nějaké důvody, které by mohly limitovat výsledek, indukující lékař o tom obdrží informaci telefonicky popř. písemně ve formě komentáře k výsledku vyšetření. D:11 6. Vyřizování stížností Pokud se vyskytnou výhrady k odborné činnosti laboratoří CIM OLM ZÚ nebo vzniknou-li neshody, zda laboratoř pracuje v souladu s uváděnou politikou jakosti, může oprávněný klient podat písemnou stížnost (do14 dnů od obdržení výsledku): příjemcem je vždy vedoucí CIM OLM je proveden písemný záznam o stížnosti a nápravná doporučená opatření stěžovatel je do 30 dnů písemně informován vedoucím centra o vyřízení stížnosti spolu s návrhy na řešení. E:03 Literatura: Přecechtěl, F.: Lékařská mikrobiologie praktikum. SPN 1976 Jabor,A, Bébrová, E.: Laboratorní příručka OHS Kladno 1999 Miller, J.,M.: Specimen management in Clinical Mikrobiology. ASM Press USA 1999 Murray, P.R. et al.: Manual of Clinical Mikrobiology 8 th Edition, ASM USA, 2004, ISBN 1-56581-265-4, Str. 55-64 Votava, M.: Lékařská mikrobiologie obecná, Neptun Brno, 2001, ISBN 80-902896-2-2, Str. 215-232 11

Nabídkový list laboratoř bakteriologie Mikroskopická a kultivační vyšetření Typ vzorku Doporučená odběrová souprava Teplota úschovy do transportu Max. doba transportu do lab. Předběžný výsledek/ doba odezvy Poznámka Provádí se výtěr z horních tampon cest dýchacích v Amiesově (krk, nos, tonzily) transportním médiu sputum, BAL sterilní nádobka se širokým hrdlem likvor sterilní zkumavka pokojová T 24 hod. 24 hod./ v závislosti na nálezu 48-72 hod. 2-8 C Pokojová T 2 hod. 24 hod. co nejrychleji (2 hod.) 24 hod./ v závislosti na nálezu 48-72 hod. mikroskopie za 2 hod., kultivace za 24 hod./ v závislosti na nálezu 48-72 hod. podezření na záškrt, černý kašel konzultovat telefonicky po so po so denně likvor na průkaz bakteriálních antigenů latexovou aglutinací sterilní zkumavka 2 ml Pokojová T co nejrychleji (2 hod.) výsledek přijetí laboratoře v den do cílené vyšetření dle klinického stavu (rozhoduje odebrané množství) po so 12

Typ vzorku hnisy punktáty aspiráty plodová voda, stěry z oka, ucha, ran, kůže výtěry sekční materiál aj. na aerobní vyšetření Nabídkový list laboratoř bakteriologie Mikroskopická a kultivační vyšetření Doporučená odběrová souprava tekutý sterilní stříkačka, sterilní zkumavka stěr tampon v Amiesově event.stuartově transportním médiu Teplota úschovy do transportu materiál, 2-8 C pokojová T Max. doba transportu do lab. co nejrychleji (2 hod.) Předběžný výsledek/ doba odezvy mikroskopie v den přijetí do laboratoře, aerobní kultivace za 24 hod./ v závislosti na nálezu 48-72 hod. 72 hodin Poznámka nutno zabránit přístupu vzduchu (jednorázová stříkačka s chráněným konusem) Provádí se denně stolice aerobní vyšetření a průkaz Campylobacter jejuni Stolice Průkaz adenovirů a rotavirů tampon v Amiesově transportním médiu Suchý vatový tampon Příp.odběrová souprava na parazitologii pokojová T 24 hod. 48 hod./ v závislosti podezření na po so na nálezu 72 hod., choleru pozitivní nález konzultovat sdělen ihned telefonicky, telefonicky návraty z ciziny vyznačte na žádance Pokojová T Ihned 20 minut od po so Chladnicová doručení biol. T 48 hod. materiálu 13

Typ vzorku stolice anaerobní vyšetření Nabídkový list laboratoř bakteriologie Mikroskopická a kultivační vyšetření Doporučená odběrová souprava tampon v Amiesově transportním médiu, stolice v odběrové nádobce s lopatičkou (na parazity), min. 5 g Teplota úschovy do transportu pokojová T ihned do 24 h.4 C Max. doba transportu do lab. Do 24 hod -20 C. Předběžný výsledek/ doba odezvy v závislosti na nálezu 48-96 hod. Poznámka cílené vyšetření dle klinického stavu Provádí se po so kultivace výtěru z genitourinárního traktu (vagina, vulva, cervix, mužská a ženská uretra) výtěr z orofaryngu nebo rekta na kultivaci N. gonorrhoeae tampon v Amiesově transportním médiu, podložní sklo se zábrusem tampon v Amiesově transportním médiu pokojová T 3 h. 24 hod. pokojová T 3 h. 24 hod. 24 /dle nálezu 72 hod GO 24-72 hod. ihned telefonicky 24 / 72 hod., GO ihned telefonicky včetně N.gonorrhoeae, anaerobů, sklo na požádání dodáme po so po so 14

Typ vzorku moč kvantitativní vyšetření Nabídkový list laboratoř bakteriologie Mikroskopická a kultivační vyšetření Doporučená odběrová souprava sterilní nádobka se širokým hrdlem, sterilní zkumavka Teplota úschovy do transportu Max. doba transportu do lab. 2-8 C co nejrychleji (2 hod.) Předběžný výsledek/ doba odezvy 24 hod., v závislosti na nálezu 48-72 hod. Poznámka pro kvantitativní vyšetření moče nejsou vhodné komerční odběrové soupravy (Uricult aj.) Provádí se po so moč novorozenců na průkaz antigenu Streptococcus agalactiae Moč: průkaz přítomnosti antigenu Legiolella pneum. Streptococcus pneumoniae jiné tělní tekutiny dialyzační roztoky sterilní nádobka se širokým hrdlem, sterilní zkumavka sterilní nádobka se širokým hrdlem, sterilní zkumavka 2-8 C co nejrychleji (2 hod.) 2-8 C aerobní kultivace pokojová T anaerobní kultivace aerobní kultivace po podání ATB anaerobní co nejrychleji co nejrychleji (max. 24 hod.) výsledek 24-48 hod. výsledek v den přijetí do laboratoře aerobní kultivace v závislosti na nálezu za 24 72 hod. anaerobní 5 dní žádost o vyšetření vyznačte na žádance žádost o vyšetření vyznačte na žádance po so po pá denně 15

OS: odběrová souprava TS: transportní souprava PT: pokojová teplota = + 20 C + 25 C CHT: chladnicová teplota = obvykle +4 C - +8 C Užívané zkratky výkonů a postupů: 7.Technika a náležitosti odběru biologických materiálů pro vyšetření na kultivaci a citlivost Biologické materiály ke kultivačnímu průkazu mikroorganismů na kultivaci a citlivost (= K+C) se odbírají : do sterilních odběrových souprav v dostatečném množství z místa předpokládaného výskytu biologického původce obvykle před zahájením antibiotické terapie v případě kontrolního bakteriologického vyšetření se druh terapie a její délka vyznačí v příslušné kolonce na průvodním listu k požadovanému vyšetření odebrané vzorky se označí identifikačními štítky vyplní se průvodní list = žádanka o vyšetření zajistí se rychlý transport do laboratoře 16

Typ vyšetření: 7.1 Stěr z horních cest dýchacích = nos, krk Nemocný je odebírající osobou poučen o smyslu odběru, jeho technice a délce laboratorního vyšetření. Vzorek: stěr, výtěr OS/TS: sterilní vatový tampón na špejli/ Amiesovo transportní médium Odběr: setřít tampónem postižené místo a tento zasunout do plastového sáčku popř. do PVC pouzdra s transportním médiem Transport: teplota / čas = PT/max. 24 hodin 7.2 Sputum, bronchoalveolární laváž Nemocný je odebírající osobou poučen o smyslu odběru, jeho technice a délce laboratorního vyšetření. Vzorek: ranní sputum před provedením osobní hygieny, aspirát biol. materiálu při bronchoskopii OS/TS: sterilní sputovka z plastu, sterilní zkumavka Odběr: sám nemocný po instrukci nebo instrumentálně při výkonu lékařem Transport: ChT/ihned popř. max. do 24 hodin 7.3 Biologické materiály z dutin orgánů exsudáty, sekrety, tekuté hnisy, mozkomíšní mok (kultivačně) 17

Lékař odebere biologický materiál do sterilní nádoby z plastu nebo do sterilní zkumavky a vyplní ji celou biologickým materiálem příp. do injekční stříkačky a nasadí na jehlu kónus jehly popř.sterilní gumovou zátku Pozn: laboratoř na vyžádání odběrovou soupravu dodá přes svozovou službu. Na průvodním listě vyznačí, zda požaduje i kultivaci na průkaz anaerobních mikroorganismů. Vzorek: tekutý biologický materiál OS/TS: sterilní zkumavka, jednorázová stříkačka s konusem Odběr: lékař specialista sterilním instrumentariem Transport: PT/ ihned popř. max. do 24 hod. 7.4 Mozkomíšní mok (přímý průkaz bakteriálních antigenů) latexovou aglutinací Pro vlastní odběr mozkomíšního moku platí stejné podmínky jako pro kultivaci moku. Vzorek: tekutý biologický materiál OS/TS: sterilní zkumavka, jednorázová stříkačka s konusem Odběr: lékař specialista sterilním instrumentariem Transport: PT/ ihned popř. max. do 2 hod. po odběru 7.5 Stěry z kůže, spojivkového vaku, ze zevního zvukovodu, Vzorek: stěr z místa výskytu původce zánětu, afektu OS/TS: sterilní vatový tampón na špejli/ Amiesovo transportní médium Odběr: setřít tampónem postižené místo a tento zasunout do PVC pouzdra s transportním médiem 18

Transport: PT/ do 24 hod. 7.6 Stolice aerobní a mikroaerofilní kultivace (Campylobacter spp.) Vzorek: stolice OS/TS: sterilní odběrový tampon/ Amiesovo transportní medium Odběr: komerční sterilní tampon na plastové tyčince; odebírající zavede tampon do rekta max. 2 cm hluboko a odebraný vzorek zasune do transportního media v PVC pouzdře Transport: PT/ChT / do 24 hod. Pozn: kultivace prokáže bakteriální původce průjmů, případnou serotypizaci poddruhů EPEC apod. Při návratu z exotických destinací prosíme o sdělení na průvodním listě místo, trvání a charakter obtíží kvůli možnosti průkazu zde neobvyklých původců 7.7 Stolice přímý průkaz antigenu adenovirů a rotavirů Vzorek: stolice velikosti hrášku OS/TS: sterilní odběrový tampon/ odběrovka z plastu na parazitologii Odběr: komerční sterilní tampon na plastové tyčince; odebírající zavede tampon do rekta max. 2 cm hluboko a lopatičkou odebraný vzorek zasune do transportního PVC pouzdra Transport: PT/ChT / ihned popř. v ChT do 48 hod. 7.8 Moč kultivace + cílený průkaz Streptococcus agalactiae ( GBS) 19

Vzorek: 1) ranní střední proud moči 2) cévkovaná moč OS/TS: sterilní širokohrdlá odběrová nádoba z plastu; sterilní zkumavka Odběr: ad 1) po předchozím omytí zevního ústí uretry proudem pitné vody a za použití mýdla vymočit do sterilní odběrové nádoby min. 5-10 ml ad) 2) aseptické zavedení sterilní cévky; odstříknutí první porce do odpadu a odběr středního proudu do sterilní odběrové nádoby min. 5-10 ml Transport: ChT/ do 2 hod. od odběru Pozn.: způsob odběru určí lékař dle diagnózy nemocného 7.9 Moč cílený průkaz solubilního antigenu Streptococcus pneumoniae a Legionella pneumophilla O1 Vzorek: 1) ranní střední proud moči 2) cévkovaná moč OS/TS: sterilní širokohrdlá odběrová nádoba z plastu; sterilní zkumavka Odběr: ad 1) po předchozím omytí zevního ústí uretry proudem pitné vody a za použití mýdla vymočit do sterilní odběrové nádoby min. 5-10 ml ad) 2) aseptické zavedení sterilní cévky; odstříknutí první porce do odpadu a odběr středního proudu do sterilní odběrové nádoby min. 5-10 ml Transport: ChT/ do 2 hod. od odběru Pozn.: způsob odběru určí lékař dle diagnózy nemocného 20

7.10 Stěry z genitoureterálního traktu + na K+C Vzorek: výtěr sterilním vatovým tampónem z místa předpokládané infekce OS/TS: sterilní odběrový tampon/ Amiesovo transportní medium Odběr: provádí lékař specialista po lehkém stlačení vyšetřované oblasti GUT. Setře vytékající sekret sterilním tampónem (1-2 ks) Transport: PT/ ihned max. 24 hod. Pozn.: jeden tampón pro standardní kultivační vyšetření jeden tampón pro mikroskopické vyšetření sekretu u mužů ranní odběr sekretu před vymočením min. 3 hodiny u obou pohlaví z rekta po zasunutí tampónu do oblasti max. 3 cm 7.11 Stěry z genitoureterálního traktu + pro stanovení přitomnosti Mykoplazmat Vzorek: výtěr = seškrab z uretry ( ) nebo cervixu ( ) provede ošetřující lékař OS/TS: brush tampón/ transportní médium R 1 Odběr: seškrab sliznice s detritem buněk a vytřepání biologického materiálu do média R1 Transport: PT/ do 5 hod. ChT/ 48 hod. Pozn.: odběrové brush tampóny a médium R1 dodá na požádání OLM CIM ZÚ 21

8. Odborná literatura k odběrům biologických materiálů K+C Burkhardt, F. et al.: Mikrobiologische diagnostik, Gerg Thieme, Stuttgart SRN, 1992, ISBN 3-13-743601-X Str. 15-47 Duben, J. a kol.: Vyšetření při bakteriálních onemocněních, Avicenum Praha, 1986, 08-078-86 Miller, J.M.: Specimen Management in Clinical Mikrobiology, ASM USA, 1999, ISBN 1-55581-138-8, Str. 33-167 Murray, P.R. et al.: Manual of Clinical Mikrobiology 8 th Edition, ASM USA, 2004, ISBN 1-56581-265-4, Str. 55-64 Votava, M.: Lékařská mikrobiologie obecná, Neptun Brno, 2001, ISBN 80-902896-2-2, Str. 215-232 22

Nabídkový list laboratoř mykobakteriologie - Mikroskopická a kultivační vyšetření Typ vzorku Doporučená odběrová souprava Teplota úschovy do transportu Max. doba transportu do laborat. Předběžný výsledek/ doba odezvy Poznámka Provádí se Aspirát Punktát Hnis Sputum BAL sterilní nádobka se širokým hrdlem sterilní nádobka se širokým hrdlem 2-8 C 2 hod. - 48 hod. 2-8 C 2 hod. - 48 hod. Mikroskopie Kultivaci 24h v Bactec Kultivace až 9 vyznačte týdnů Mikroskopie Kultivaci 24h v Bactec Kultivace až 9 vyznačte týdnů Likvor sterilní zkumavka Pokojová teplota ihned Mikroskopie Kultivaci 24h v Bactec Kultivace až 9 vyznačte týdnů Tkáň Sterilní nádobka 2-8 C Do 48 hod. Mikroskopie Kultivaci 24h v Bactec Kultivace až 9 vyznačte týdnů Moč Sterilní nádobka 2-8 C Do 48 hod. Mikroskopie se neprovádí Vzorek 30 ml Kultivace až 9 týdnů po pá 23

Laryngeální výtěr Stěr z píštěle 3 sondy na drátě= 2-8 C Do 48 hod. Mikroskopie 1 vyš.=dodá ZÚ na se neprování vyžádání Kultivace až 9 t. Stolice Odběrovka pro parazitol.vyš. 2-8 C Do 48 hod. Mikroskopie se neprování Kultivace až 9 t. Kultivaci v Bactec vyznačte Kultivaci v Bactec vyznačte Vzorek fazole vel. 9. Technika a náležitosti k odběru biologických materiálů pro vyšetření na mykobakteria (=BK) K odběrům biologických materiálů se používají doporučené sterilní odběrové komerční soupravy. Případně OLM CIM ZÚ dodá speciální odběrovou soupravu na telefonické vyžádání (= LV) 47 7751836. Transport vzorků k vyšetření zabezpečuje svozová služba ZÚ Ústí nad Labem tel:724 325 038; 602 215 986, a to dle pokynu a po schválení OOVZ. Induktor (= odesilatel) odebraného materiálu zajistí dokumentaci vzorku na průvodním listě k vyšetření. Doporučené odběrové soupravy jsou uvedeny v tabulce nabídky na mykobakteriologická vyšetření.. 9.1 Sputum na BK Se odebírá po instrukci a pod dohledem zdravotnického pracovníka, a to v množství min. 2 ml až max. 5 ml do plastikového sterilního kontejneru se zevně vyznačeným graduováním odebraného množství. Odběrové kontejnery dodá na vyžádání laboratoř dg. TBC OLM CIM ZÚ. 24

9.2 Aspirát, BAL, tekutý hnis, punktáty, výpotky, žaludeční šťávy, tkáně Uvedené biologické materiály odebírá lékař při instrumentálních popř. sekčních výkonech. Nepoužívají se žádné fixační ani transportní tekutiny vyjma sterilního fyziologického roztoku při odběru aspirátu z bronchu případně odběru tkáně. Odebrané biologické materiály se ihned transportují do laboratoře. V případě nutnosti je lze do transportu uchovat v chladničce max. 48 hodin a kontaktuje se svozová služba ZÚ. 9.3 Lymfatické uzliny Odebírá odborný lékař při instrumentálním výkonu, a to po dezinfekci odběrového místa 70% aethanolem. Jiný použitý dezinfekční roztok se vyznačí do průvodního listru k požadovanému vyšetření. 9.4 Mozkomíšní mok Odebírá odborný lékař do sterilní Wassermannovy zkumavky nebo do sterilního kontejneru z plastu, a to minimálně v množství 1 ml. Odebraný materiál se ihned transportuje k vyšetření do laboratoře. V případě nutnosti jej lze do transportu uchovat při pokojové T max. 48 hodin a kontaktuje se svozová služba ZÚ. 9.5 Menstruační krev Odebírá se menstruační krev na sterilní menstruační tampón ze stlačené gázy, a to při pravidelné menstruaci třikrát po sobě. Tampón se zavede do pochvy na noc po omytí zevních genitálií. Ráno odebírající zdravotník vyjme ženě tampón a umístí do sterilního PVC kontejneru na objem až 100 ml. Vhodnější je odběr živé tkáně při curretage. 25

9.6 Stolice Odebírá se do sterilní odběrové soupravy s lopatičkou určenou pro parazitologická vyšetření, a to cca v množství velikosti lískového ořechu. 9.7 Moč Odebírá si pacient sám po instrukci personálem. První ranní moč střední proud v množství minimálně 30 ml. Odběrový sterilní kontejner dodá OLM CIM ZÚ. 9.8 Laryngální výtěr = LV Odebírá se výjimečně u nespolupracujících pacientů: děti, klienti psychiatrických léčeben apod. Jeden odběr tj. jedno vyšetření = 3 LV vatové sondy z chrómmolybdenového drátu. Před vlastním odběrem se zvlhčí ve sterilním fyziologickém roztoku event. ve sterilní destilované vodě. Drát se ohýbá o stěnu odběrové soupravy tak, aby jej bylo možno zavést za kořen jazyka nad epiglottis. Poté pacient vydatně zakašle. Pacient je předem instruován o postupu odběru. Odebírající personál dodržuje zásady bezpečnosti a ochrany zdraví při rizikové práci tj. chrání se respirátorem a osobními ochrannými prostředky jako jsou pryžové rukavice, empír, štít. U LV se neprování přímá mikroskopie biologického materiálu. 9.9 Stěry z píštělí a hnisavých nehojících se ran a ložisek K jednomu vyšetření se použijí 3 sterilní vatové sondy z chrómmolybdenového drátu. Zásadně neužívat detoxikované tampóny na špejli s aktivním uhlím. Nepoužívat odběrové tampóny s transportním médiem dle Amiese či Stuarta! 26

10. Poznámky k požadovaným vyšetřením na BK Speciality jako požadavky o rychlé kultivační tj. metabolické metody popř. o molekulárně genetické metody (= PCR) vyznačí induktor výkonu sám na průvodní list k vyšetření. V případě chybění přesného požadavku na typ vyšetření je lékařem laboratoře TBC osobně určeno, jak bude biologický materiál zpracován. Rychlou metabolickou kultivační metodou se obvykle zpracovávají vzácné biologické materiály ( např. mozkomíšní mok a punktáty) a všechny primární biologické vzorky s diagnózami A: 15 až A:19; A:31 a Z: 03.0. Molekulárně genetické metody průkazu původce TBC provádí Oddělení molekulární biologie CIM vedoucí: ing. I.Stiborová Tel.: 47 7751804 Test buněčné imunity Quantiferon TB Gold provádí Oddělení buněčné imunity CIM ZÚ RNDr. J..Pohořská; Tel.: 47 7751806 11. Odborná literatura k odběrům biologických materiálů na BK Aziz, M.A. et al.: Guidelines for Surveillance of Drug Resistence in Tuberculosis. WHO /TB/2003.320, Geneva 2003 Burkhardt, F. et al.: Mikrobiologische diagnostik, Georg Thieme, Stuttgart SRN, 1992, ISBN 3-13-743601-X, Str. 15-47 Kent, P.T. et al.: Public Health Mycobacteriology. A Guide for the Level III Laboratory. CDC Atlanta USA 1985 Kolektiv autorů pod vedením SZÚ NRL pro mykobakteria: Doporučené standardní metody v mikrobiologii mykobakteriálních infekcí, TRIOS Praha 1993 Miller, J.M.: Specimen Management in Clinical Mikrobiology, ASM USA, 1999, ISBN 1-55581-138-8, Str. 33-167 Murray, P.R. et al.: Manual of Clinical Mikrobiology 8 th Edition, ASM USA, 2004, ISBN 1-56581-265-4, Str. 55-64 Narvaiz de Kantor, I. Et al.: Laboratory Services in Tuberculosis Kontrol Part I III. WHO/TB/98.258, Geneva 1998 Pio,A., Chaulet, P.: Tuberculosis Handbook. WHO / TB/98.253, Geneva 1998 27

Typ vzorku Orofaryngeální oblast=krk+nos+mandle Sputum, BAL, aspirát z bronchu Nabídkový list mykologie - Mikroskopická a kultivační vyšetření Odběrová souprava Sterilní odběrový vatový tampón v transport.médiu Amies Sterilní širokohrdlá sputovka Teplota Doba od uchování odběru do vzorku transportu Pokojová T Ihned až 24 hodin 2-8 C Ihned až 24 hodin Trvání vyšetření 48 hod. až 2 týdny Mikroskopie 24 h. Kultivace až 2 týdny 2-8 C ihned Mikroskopie ihned; kultivace 48 h. až 2 tý Vyšetření Sterilní vatový pohlavních tampón orgánů v transp.médiu Amies Likvor Sterilní zkumavka Pokojová T Ihned jinak max. 24 h. v chladu Moč Sterilní nádobka, zkumavka Mikroskopie ihned; kultivace 48 h. až 2 tý Poznámka Uvádějte přesnou Dg. Provádí se 2-8 C ihned 48 h. až 2 tý 28

12. Technika a náležitosti odběru biologických materiálů pro mykologická vyšetření 12.1 Horní cesty dýchací Odběry na mykologická vyšetření odebírá ošetřující odborný lékař Na sterilní vatový tampón Nalačno Pacient předem neprovádí hygienu dutiny ústní Stírají se viditelné mléčné povlaky či pablány v dutině ústní Výtěr z nosohltanu se provede sterilním tampónem na drátě Diagnóza a předchozí léčba ATB popř. steroidy aj. se zaznamenají do průvodního listu 12.2 Dolní cesty dýchací Sputum se odebírá do sterilního širokohrdlého kontejneru z plastu Při první ranní expektoraci Materiál uchovat do transportu v chladničce Při instrumentálních výkonech se odebírá BAL 29

12.3 Stěry z kožního povrchu a detritus kožních adnex Odběr sterilním vatovým tampónem do transportního Amiesova média Sterilním skalpelem seškrábnout ložisko s povrchu do sterilní Petriho misky či do sterilní Wassermannovy zkumavky-dodá OLM Sterilními nůžkami nebo skalpelem odstřihnout či seškrábnout postižená adnexa tj. vousy, vlasy, ochlupení, a to nejlépe i s vlasovým folikulem U akutních procesů sejmout krusty do sterilní zkumavky Obsah puchýřků nabodnout sterilní jehlou a poté setřít sterilním vatovým tampónem U onychomykóz odstřihnout vnitřní část nehtového lůžka Před odběrem dezinfikovat plochu 70% alkoholem 12.4 Stěry z oka, ucha Provádí odborný lékař specialista sterilním vatovým tampónem Krouživým pohybem po ložisku Lze provést současně stěr druhým sterilním tampónem na podložní sklíčko k mikroskopickému vyšetření Lze provést seškrab sterilním skalpelem 12.5 Tkáň, biopsie Odběr se provede do sterilní zkumavky se sterilním fyziologickým roztokem 30

12.6 Tekutý hnis, punktát, aspirát, exudát, Tekutý materiál se odebere sterilní stříkačkou a opatří kónusem Obsah lze vstříknout do sterilní zkumavky Neužívá se žádná fixační tekutina 12.7 Sekret z urogenitálního ústrojí ženy a muže Provádí lékař specialista za použití sterilního vyšetřovacího instrumentaria U dětí a těhotných se zavede vatový tampón za ústí močové trubice a sekret se nechá nasáknout vyšetřovanou tekutinou U cervixu se odstraní hlenová zátka; poté se vatový tampón zanoří do cervikálního kanálu a rotačním pohybem se provede odběr sekretu U mužů odebíráme ejakulát po vícedenní sexuální abstinenci Prostatický exprimát se nabere až po zevní masáži prostaty do sterilní zkumavky 12.8 Moč Pacienta poučíme předem o náležitostech odběru Odebíráme do sterilní širokohrdlé nádoby Odebírá se střední proud moči Zabráníme kontaminaci ze zevního genitálu Muži i ženy si před odběrem omyjí zevní genitál mýdlovou vodou U novorozenců se očistí zevní genitál a nalepí se plastikový adhezivní sáček V indikovaných případech provede lékař specialista suprapubickou punkci močového měchýře Přednost se dává cévkované moči 31

13. Odborná literatura k mykologickým vyšetřením Burkhardt, F. et al.: Mikrobiologische diagnostik, Georg Thieme, Stuttgart SRN, 1992, ISBN 3-13-743601-X Frágner, P.: Parazitické houby u člověka, Nakl.čs.akademie věd 1958 Miller, J.M.: Specimen Management in Clinical Mikrobiology, ASM USA, 1999, ISBN 1-55581-138-8, Str. 33-167 Murray, P.R. et al.: Manual of Clinical Mikrobiology 8 th Edition, ASM USA, 2004, ISBN 1-56581-265-4, Str. 55-64 Otčenášek,M. et al.: Vyšetřovací metody při mykotických onemocněních. Avicenum Praha 1990. ISBN 80-201-0059-8 32

Typ vzorku Nabídka úseku parazitologie Mikroskopická a kultivační vyšetření Stolice na průkaz střevních parazitů Průkaz měňavek=trofozoity+cysty Odběrová souprava Odběrovka pro paraz.vyšetření Odběrovka objem 30 ml na Teplota Doba od Trvání uchování odběru do vyšetření vzorku transportu 2-8 C ihned Do 48 hod. Pokojová T Ihned defekaci po Poznámka 3 odběry po sobě s odstupem 2 dnů Provádí se 24 hod. 10 ml stolice Vyšetření vajíček Enterobius a Taenia Průkaz trofozoitů Giardia intest. v žaludeční šťávě Vydá indukující lékař nebo ZÚ Zkumavka zátkou se Pokojová T Nemá čas.omezení 37 C ihned Tentýž den 24 hod. Odběr ráno po instrukci lékařem Min. 5 ml 33

Typ vzorku Kultivační vyšetření na Trichomonas vaginalis Stolice na průkaz vývojových stádií střevních parazitů Čerstvá stolice na průkaz živých měňavek Vajíčka Enterobius vermicularis Nabídka úseku parazitologie Mikroskopická a kultivační vyšetření Odběrová souprava Sterilní zkumavka s Diamondovým mediem + odběrovým tampónem (vydá ZÚ) Širokohrdlý odběrový kontejner z plastu Širokohrdlý odběrový kontejner z plastu Průsvitná lepicí folie na podložním skle Teplota Doba od uchování odběru do vzorku transportu Pokojová T V den odběru Chladnicová T V odběru 37 C Doručit ihned odběru Nemá omezení Nemá omezení den po Trvání vyšetření Poznámka 72 hodin Odběrovou soupravu skladovat 4 C; odběrem temperovat ve před na 25 C 48 hodin Stolice vel. Ořechu 3 odběry po sobě á 3 dny Max. do 24 hod. a temperovat na 37 C 10 minut od doručení vzorku 10 ml čerstvé stolice Odběr ráno před hygienou GUT Pásku přiložit na anální řasy a nalepit zpět na sklíčko Provádí se po pá 34

Typ vzorku Mnohobuněční nebo jejich části Nabídka úseku parazitologie Mikroskopická a kultivační vyšetření červi Krevní roztěr Nebo tlustá kapka na malárii vaginální nátěr 1x Giemsa 1x Gram k průkazu bičíkovců, kvasinek aj.mikroflóry kultivační vyšetření na bičíkovce=trichomonas a rod Candida Odběrová souprava Širokohrdlý PVC kontejner odmaštěná 2 podložní skla se zábrusem na popis sterilní podložní skla transportní Diamondovo medium s odběrovým tampónem Teplota uchování vzorku Chladnicová T pokojová T Doba od odběru do transportu Doručit ihned po odběru Doručit ihned odběru po pokojová T Doručit o ochranném pouzdře v den odběru pokojová T v den odběru Trvání vyšetření Max. do 24 hod. ihned po doručení a obarvení v laboratoři Poznámka Nepřidávat fixační činidla Části červů lze vložit do fyziol. roztoku roztěr nechat dobře zaschnout dopravit v transportním pouzdře 24-48 hodin roztěr nechat dobře zaschnout dopravit v transportním pouzdře 72 hodin transp. media skladovat v CHT max. 4 týdny před odběrem předehřát na PT Provádí se 35

Pozn.: serologická, imunochemická, molekulárně genetická vyšetření provádí CIM OLI. Dotazy na tel. 47 7751800, -802, 804. Přehled metod uveden na Intranetu ZÚ v laboratorní příručce Po telefonické domluvě je možné provést i specializovaná vyšetření jako krevní roztěr a tlustá kapka na malárii aj. 14.Technika a náležitosti k odběru biologických materiálů na parazitologická vyšetření 14.1 Stolice na střevní parazity a jejich vývojová stádia Nejlépe čerstvou a poté zchlazenou stolici objemu 5 cm 3 tj. velikosti vlašského ořechu odebereme do kontejneru z plastu s lopatičkou k parazitologickému vyšetření. Do průvodního listu zaznamenáme makroskopický vzhled tj. viditelné příměsi: parazity příp. jejich části, krev, hlen. Vzorek označíme, zchladíme a do hodiny necháme dopravit k vyšetření do laboratoře. 14.2 Stolice k průkazu přítomnosti měňavek a živých stádií ostatních prvoků Čerstvá a temperovaná (=37 C) stolice v množství 10 cm 3 se odebere do kontejneru z plastu. Do průvodního listu zaznamenáme makroskopický vzhled tj. viditelné příměsi: krev, hlen. barvu. Vzorek označíme a do hodiny necháme dopravit při PT k vyšetření do laboratoře. 36

14.3 Průkaz vajíček ektoparazitů pomocí lepící průhledné pásky Před ranní hygienou perianální oblasti přiložíme proužek lepící pásky (Isolepa) na perianální slizniční řasy a otisk přilepíme na odmaštěné čisté podložní sklíčko, které na okraji označíme. Vzorek bez časového omezení transportujeme v ochranném obalu do laboratoře k vyšetření. 14.4 Krevní roztěr k vyšetření krevních parazitů tlustá kapka Standardním způsobem odebíráme venózní nebo kapilární krev opakovaně na začátku vzestupu tělesné. Vždy odebereme krev na 2 roztěry současně. K vyšetření tlustou kapkou přikládáme sklíčko k prstu vyšetřovaného shora. Odebíráme až 4. a další kapky. K odběru na vyšetření tlusté kapky vytvoříme na sklíčku 3 kapky do trojúhelníku a rohem dalšího sklíčka je rozetřeme po ploše sklíčka max. 1-1,5 cm 2 po povrchu. Kromě tlusté kapky provedeme hranou sklíčka na další sklíčko krevní roztěr. 14.5 Roztěr vaginálního výtěru k barvení MOP Gram, Giemsa Na 2 sterilní podložní skla provedeme odběrovým vatovým tampónem homogenní tenký roztěr. Necháme zaschnout při PT. Odběry na sklech popíšeme na okraj číslem či příjmením.. Vložíme do transportního pouzdra z plastu na sklíčka. Odešleme k vyšetření do laboratoře. 14.6 Kultivace bičíkovců (Trichomonas) a kvasinek Zkumavky s transportním médiem temperujeme na 25 C a sekret odebraný sterilním vatovým tampónem ze zadní klenby poševní zalomíme o okraj zkumavky do média ve zkumavce. Co nejdříve transportujeme při PT do laboratoře k vyšetření. 15. Odborná literatura k vyšetřením na parazitologii Jírovec,O. a kol.: Parazitologie pro lékaře. Avicenum 1977 Murray,P.: Manual of Clinical Mikrobiology 8 th Edition.Section X. AMS Press Washington DC 2003 37

38